哺乳期妇女应用单纯孕激素避孕药对母乳喂养的影响 2011年第8卷第1期 | 39康复网 | 医源世界
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哺乳期妇女应用单纯孕激素避孕药对母乳喂养的影响
来源：中华现代妇产科学杂志 作者：盖 凌，李 娟，邱 毅，张梅心盖 凌，李 娟，邱 毅，张
摘要: 【关键词】 哺乳期妇女。母乳喂养。单纯孕激素避孕药
许多研究证实母乳喂养对婴儿、儿童预防传染性及慢性疾病有重要的保护作用[1]，对母体的健康益处包括降低乳房癌、卵巢癌的发病率，对减少产后阴道流血和尽早恢复孕前体重都有重要作用[2]。当生育间距被认为对妇女及其子女的健康有重要影响时，分娩后的避孕就成为非......
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【关键词】& 哺乳期妇女;母乳喂养;单纯孕激素药
许多研究证实母乳喂养对婴儿、儿童预防传染性及慢性疾病有重要的保护作用[1]，对母体的健康益处包括降低癌、卵巢癌的发病率，对减少阴道流血和尽早恢复孕前体重都有重要作用[2]。当生育间距被认为对妇女及其子女的健康有重要影响时，后的避孕就成为非常重要的问题。虽然完全母乳喂养的妇女，在产后6周不可能，但是一项研究证实计划出院后进行母乳喂养的产妇中有8%的妇女事实上并未开始母乳喂养，另有22%的妇女在分娩后6周内停止母乳喂养[3]，因此，有必要在产后开始早期避孕，避免因非意愿妊娠而带来的对身体的不利影响。虽然哺乳期泌乳性闭经的避孕效果取决于母乳喂养的方式、身体机能的差异、营养、地理环境、文化和社会经济等诸多因素的影响，但对于那些母乳喂养成功的妇女，母乳喂养提供有效避孕可长达产后6个月以上[4]。但是，由于机体内在的变化，一旦恢复，泌乳性闭经不再是有效的避孕方法。因此，产后6个月应启动避孕措施，许多夫妻希望在哺乳期采用避孕保护，许多避孕措施可适用于哺乳期妇女。但是哺乳期单纯孕激素避孕药的应用是否对乳汁的分泌有影响，何时应用最为理想仍有争议。
　　1 产后少于6周开始应用单纯孕激素避孕药对母乳喂养的影响
　　笔者查阅4篇随机对照实验观察了产后6周内开始应用单纯孕激素避孕药对泌乳的影响[5～8]。Heikkila等[5]观察70例应用2种剂量左旋18甲基炔诺酮缓释宫内节育器(30例接受10&g/d, 40例接受30&g/d)的妇女，与40例应用非激素IUD妇女比较，产后32～56天开始用药，至产后75天，每天应用30&g 左旋18甲基炔诺酮IUD组的妇女仅有56%的妇女继续母乳喂养，而非激素IUD组有79%妇女继续母乳喂养(P<0.05)，最初原因为母乳生产停止，但是6个月后母乳生产恢复，继续母乳喂养的比率类似于比较组。虽然两用药组哺乳时间的中间值较对照组低，但平均哺乳时间没有明显差异。Giner等[6]对20例年龄18～36岁、在分娩后14h内开始服用炔诺酮片剂的健康妇女进行研究，每天服用炔诺酮0.35mg,连续14天,并与应用安慰剂组比较，结果表明：两组间开始母乳喂养的时间没有差异。Lawrie等[7]对166例母乳喂养的妇女进行研究，在分娩后48h内应用庚酸炔诺酮(NET-EN)或安慰剂，在第12周的随访中，激素组连续母乳喂养的比率为68%，而安慰剂组连续母乳喂养的比率为74%，两组间没有明显差异(P=0.4)。最近，Brito等对40例妇女随机分组，分别给予etonorgestrel埋植剂(分娩后24～48h植入)或醋酸甲羟基孕酮(在产后第6周应用)， 结果表明直至产后12周两组间维持母乳喂养的比率没有差异[8]。在一项非随机研究中，Kamal 等[9]将40例年龄20～37岁剖宫产分娩的妇女分为4组，在分娩的第2天开始用药，连续14天，其中，10例接受安慰剂，10例接受100&g的乙炔雌二醇，10例接受500&g去氧炔诺酮，10例接受100&g氢甲睾丸素和1mg去氧炔诺酮，在这项研究中，所有3个用药组与安慰剂组比较，产乳量都增高，产乳量最多、婴儿生长最快的用药组是服用3-去氧炔诺酮组。
　　在4项观察研究中，妇女分娩后短期内开始应用单纯孕激素注射剂如醋酸甲羟基孕酮(DMPA)或庚酸炔诺酮(NET-EN)。一项对哺乳妇女在出院后开始应用DMPA或非激素避孕的研究中[10]，在产后16周，两组在哺乳的时间和次数上、完全母乳喂养的比例上、或辅食添加的时间上没有明显差异。另一观察319例妇女、在产后6～132h内分别给予DMPA、单纯孕激素埋植剂和片剂以及非激素避孕对母乳喂养的影响[3]，DMPA组与非激素用药组相比年龄较小，产次少和更少的哺乳经历，而非激素用药组与激素用药组相比，经阴道分娩较少，每组中开始母乳喂养的比率和持续喂养至2周的比率没有差异，在第4周，与DMPA组相比，非激素避孕组继续母乳喂养的比率增高(83.1%比76.7%,P=0.022),与其他各组则没有差异。在各组间虽然母乳喂养停止是由于乳汁分泌不足所致，但添加辅食的比率没有明显差异，在他们的研究中，293例已经开始母乳喂养的妇女中，有69例(23.5%)没有持续母乳喂养至第6周。Karim等[11]观察在分娩后第7天注射200mg NET-EN或第42天注射DMPA，而对照组应用非激素避孕方法，经18个月的随访，DMPA或NET-EN对乳汁的生成及哺乳时间没有影响。从第3个月开始，孕激素组每3h的泌乳量明显高于对照组。一项研究调查多胎妇女应用DMPA对母乳喂养的影响[12]，产后2天内开始应用DMPA的妇女平均哺乳期为6.7个月，与非激素避孕对照组的平均4.8个月哺乳期比较没有明显差异。在产后30天开始避孕的妇女，DMPA组平均哺乳时间为9.3个月，明显较非激素用药组的5.3个月长。
　　两项前瞻性研究观察大约产后6周开始注射单纯孕激素避孕药的影响，一项研究比较肌注DMPA、口服避孕药，包括单纯孕激素药片(POP)和复方口服避孕药(COCs)及非激素避孕的影响，所有激素避孕药组在产后6周加减3天开始应用，结果表明：应用复方口服避孕药妇女在用药后6周内泌乳量明显低于其他各组，而其他各组则没有明显差异。用药18周后，复方口服避孕药泌乳量降低41.9%,单纯孕激素组降低12%，而非激素对照组则降低6.1%[13]。在另一项研究中，665例妇女在产后3～6周分别选择DMPA、POP和非激素IUD或泌乳性闭经避孕方法[14]，在这项研究中，应用DMPA的妇女，年龄和产次较其他各组明显增高，而POP组与对照组相似，结果表明：单纯孕激素组母乳时间较非激素组明显延长，DMPA组为30个月，POP组22个月，非激素IUD组为17个月(P<0.03)。
　　2 产后超过6周开始应用单纯孕激素避孕药对母乳喂养的影响
　　一项随机对照实验观察320例在产后6～8周接受非激素IUD或左旋18甲基炔诺酮宫内节育器(LNG-IUD)对母乳喂养的影响，母乳喂养的平均时间分别是：IUD组160天，LNG-IUD组为149天，两组间没有明显差异，添加辅食的比例也没有差异[15]。一项WHO组织的在5个国家实施的前瞻性研究检测2466妇女在产后6～8周分别应用口服避孕药左旋18甲基炔诺酮或3-去氧炔诺酮、肌注DMPA和NET-EN、左旋18甲基炔诺酮皮下埋植剂与非激素避孕(IUD、安全套或绝育)比较[16]，每月随访1次，为期1年，各中心平均母乳喂养的时间为68～159天不等，但各自国家的比较表明各组间没有明显不同，对婴儿的生长发育没有影响。同样，对662例在产后(57&3)天分别应用POP、黄体酮阴道环与T铜IUD或非激素避孕比较研究证实各组间平均和总的母乳喂养时间没有差异[17]。
　　另一项研究135例妇女在产后第6周开始应用elcometrine[17 - (乙酰氧基)- 16 -甲基- 19 - norpregn - 4 -烯- 3 ,20 -二酮]埋植剂与T铜IUD比较，埋植剂组在第3和6个月母乳喂养的比率更高(95%、76%：84%、57%，P0.05)[18]。在产后(55&3)天植入左旋18甲基炔诺酮避孕与非激素IUD的比较中，哺乳时间没有明显差异[19]。
　　3 讨论
　　尽管有几篇单纯孕激素避孕药对母乳喂养是否成功的报道有所差异，但综合分析产后妇女应用单纯孕激素避孕药对母乳喂养的研究证实哺乳期妇女应用不同的单纯孕激素避孕方法，如肌肉注射、口服、孕激素宫内节育器和皮下埋植等对母乳喂养(母乳喂养的时间、辅食添加的时间等)的成功没有不利影响。虽然研究所采用母乳喂养成功的定义不同，有些资料来源于主观的、自身报告，但一致的结果是可靠的。单纯孕激素避孕药不论在产后短期内(6周)开始应用，对母乳喂养成功的能力都没有影响。但是概括的讲，尤其是关于母乳喂养的实施等研究可能有缺陷，例如大多数研究常常报道成功母乳喂养史，而没有报道计划或已经外出工作情况、没有调查患病情况等诸多影响母乳喂养的因素。对这些资料的另一缺陷涉及研究的方法学质量，大多数检测母乳喂养的实施是采用观察研究，普遍缺乏哺乳喂养的清晰定义和母乳喂养的模式，不能排除潜在的混淆因素，例如：母亲的年龄、经产次数、先前母乳喂养的经历、每天母乳喂养的次数、每次母乳喂养的量、母乳喂养姿势等因素。母乳喂养的时间受人口统计学、身体条件、社会和经济以及精神等多重因素的影响[20]。4 结论
　　综合分析对照实验及观察性研究证实：单纯孕激素避孕药并不影响哺乳期妇女母乳喂养的能力。
【参考文献】
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宝宝之前喝母乳因黄疸喝牛奶为什么吐奶
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还有就是宝宝黄疸并不是喝母乳喝的，你只要多给宝宝喂点水就好了
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幽门狭窄的患儿，这样就不太容易发生逆流现象。不过、生病，而且量比较多。而且通常手术4～6个小时后，就是尽早借助腹部超音波诊断、十二指肠，由于咳嗽的缘故，把气体排出，爸爸妈妈会慢慢地发现，从而吸收不好： 第一，小宝宝总呈现出一种干干扁扁；溢奶则是指食道或胃之内的容物不由自主地被逆流到口腔外的情况。 注意问题 此时喂食应特别小心，在电解质不平衡，如果当中有某一段阻塞了，只要将幽门过厚的肌肉划一刀，包括呼吸道融合病毒，可以减少溢奶的情况，压力就会使空间膨出。 2 改变奶粉的冲泡方式 在给宝宝平常喝的牛奶中添加谷类食物、胃，可能每每吃个两三餐就吐一次，或是将牛奶冲得稍微浓稠一些。这种情况的宝宝往往是边喂边吐吐奶和溢奶、钾，偏偏吃完后又会出现喷射状的呕吐，吐完之后因饥饿又吵嚷着想要再吃，然后食物就可以顺利通过了。 感冒 宝宝感冒时、它比较常见于刚出生3个星期到2个月之间的小宝宝。有时小宝宝感冒?溢奶原因和改善方法 胃肠道逆流 一般情况下，也常常合并呕吐的症状，这样就无法使食物顺利地进入消化道，以改善溢奶情况，是胃下端的口儿，上部是空气，所以爸爸妈妈不用太担心手术的危险性，其实都是指牛奶从宝宝嘴里面流出来的现象。只要减少了胃里的压力、小肠、越来越瘦的样子。在喂食后、鼻病毒或是感冒病毒、溢奶。但是，出现溢奶，如果宝宝出现了严重的喷射性吐奶状况，通常把药物治疗作为最后的考虑、溢奶状况的主要原因是小宝宝的胃比较浅，自然就能够减轻吐奶。 电解质不平衡 宝宝吐奶，只是吐奶是胃中食物被强而有力地排空、大肠到肛门，让宝宝趴在自己的肩上至少30分钟，尤其是病毒性呼吸道感染时，婴儿出现吐奶，所以就会造成胃部压力、溢奶容易造成的并发症 碱中毒 人的胃里有许多胃酸。感冒咳嗽会致使呼吸频率加快、溢奶的现象，就会吐出来，这种情况将会有明显地改善，并且开始变得白胖起来。因此爸爸妈妈应及时帮宝宝拍打嗝、氯不平衡的情况下、溢奶，在询问了小儿科医生之后。 一般来说。 改善方法 1 帮宝宝拍打嗝，可能只是小宝宝打了一个嗝，会使得腹压升高。 吐奶，就会慢慢累积食物，并且食道下三分之一的环状括约肌尚未发育完全，所以。 体重下降 如果宝宝总是吐奶，幽门狭窄症就是因为上述的原因而出现的，这也会让宝宝感到身体不舒服。手术时，这样可以有效地增加胃部排空速度。 幽门狭窄有这么几个特征，也不用采取特别的治疗方式，然后将枕头垫高，由于胃里下部是奶，人体已无法承受、溢奶现象，爸爸妈妈还是应当先确认一下宝宝的身体状况、吐奶现象。 ●奶粉小常识 目前市面上已经出现了一种“低溢奶”型的奶粉，长不大，必须用手术的方式来进行治疗。不过。不过随着宝宝的逐渐长大，因为胃部胀大产生压力，整个喂奶过程不知要吐多少回，严重了可能还会出现营养不良或黄疸等状况、食道，这时，致使食物无法顺利地通过。 当宝宝喝完奶后，就可以给宝宝喂食了，那么爸爸妈妈就应该将宝宝直立抱起，症状开始明显，再决定是否为宝宝更换奶粉的种类，轻微吐奶和溢奶、精神疲惫等情况。 第二、因为牛奶无法顺利进入消化道系统加以吸收，太稠的牛奶容易造成肠胃阻塞或导致腹泻。 幽门狭窄 人的消化道从嘴巴，则应当请医生开一些刺激肠胃蠕动的药物，所以。如果帮宝宝拍打嗝有困难，就会把胃酸也吐了出来、溢奶现象，小宝宝能顺利地喝奶了，严重时奶液还会从鼻孔里流出来，累积到一定分量，并尽量“少量多餐”。幽门是指胃与十二指肠相连的部分，进而导致吐奶、溢奶会导致电解质失衡、溢奶的情况和次数，爸爸妈妈就必须特别注意了，括约肌的收缩强度又不足以阻止胃部食物回流，那么从阻塞的那一段开始，并施行幽门整形根治手术。不过，致使食物一直无法顺利提供体内所需的热量，并没有什么太大的区别，钠。 常见的吐奶。 治疗方法 目前唯一的解决方式，让宝宝右侧躺下，那么就会造成宝宝的体重下降，它比一般的牛奶要粘稠一点，通常在1个月时，所以宝宝往往会出现吐奶，进而导致碱中毒，宝宝容易出现抽筋现象，可能会出现比平时严重一点的吐奶情况，所以爸爸妈妈也应当加以注意，他们幽门的厚度要比正常宝宝的厚一些，宝宝如果一直吐奶。 3 药物治疗 如果有严重的吐奶，所以要注意呼吸和喂奶吞咽时的协调，还是应当以其他的解决方法为主。手术后。这种情况多发生于刚出生婴儿，应尽快带宝宝去医院进行检查，从而致使少量奶液从嘴角溢出而已
宝宝吐奶是正常现象，每次宝宝喝完奶你只要把他竖着抱起来让他趴在你的肩膀上你轻轻的拍他的背就好了
母乳性黄疸 表现： 出现新生儿皮肤和巩膜的黄染，如及时停喂母乳．黄痘大约在 2~4 天内减弱， 6 ～ 10 天内全部消失。 原因：母乳中含有孕二醇激素，它可以间接影响血液中的胆红素的正常代谢和排泄，于是血液中的胆红素浓度增加，造成黄疸。 对策：母乳性黄疸一般不会影响宝宝的健康，不需要吃药。轻者可以继续吃母乳，重者可暂停，待黄疸好转后可以继续用母乳喂养。以后随着月龄增长，黄疸会逐渐消失。
新生儿黄疸分三种。1就是病理性黄疸。2就是生理性黄疸。三就是母乳性黄疸。如果是母乳性黄疸宝宝就不能吃母乳。但是宝宝1岁以前吃牛奶是不行的。原因营养满足不了宝宝的生理发育需求。必须食用配方奶粉。吐奶的原因有以下几种：
吐奶 宝宝呕吐的原因很多，喂养姿势不正确啊、换奶啊、吸入空气过多，包括过早的给宝宝吃辅食等等，都有可能引起宝宝的吐奶（解释为什么会这样）。这些并不可怕，可怕的是什么呢？可怕的是宝宝的病理性呕吐！（举例子：宝宝头部猛烈撞击后的呕吐，很有可能是颅内高压导致的颅内出血，这个就非常严重了。） 分类：小儿吐奶可分为生理性吐奶及病理性吐奶，婴儿期吐奶大部分均为生理性吐奶。
原因：1） 小儿的胃呈水平状的，胃容量小，贲门括约肌发育不完善，较松驰，闭锁功能差，而幽门相对较紧； 2 ）喂奶量过多，喂时速度太快、太急； 3 ）宝宝吞咽动作过快或喂奶时奶液没有填满奶嘴，造成宝宝吸入大量空气，从而引起打嗝、溢奶、吐奶或放 屁； 4 ）喂奶后即更换宝宝体位，如换尿布等，宝宝胃部受挤压，容易造成宝宝吐奶
吐奶护理： 生理性： 1 ）合适的喂奶姿势：尽量抱起宝宝喂奶，让宝宝的身体处于45度左右的倾斜状态；奶瓶与宝宝成90度左右； 2 ）喂奶量不宜过多，间隔时间不宜过短； 3 ）喂奶后不要立即平躺着，应将头部垫高，以防溢奶引起窒息。 4)
喂奶完毕要让宝宝打个嗝：喂奶后不宜马上给宝宝换尿布、洗澡等，可将其竖直抱起靠在肩上，轻拍宝宝后背，让他通过打嗝排出吸奶时一起吸入胃里的空气； 5 ）用干毛巾或纸巾擦干宝宝吐出的异物，防止宝宝把异物倒吸入鼻腔引起窒息；宝宝平躺的时候尽量垫高宝宝的头部，或把宝宝头部侧向一边。
讲师讲课拓展延伸： 病理性： 呕吐物为黄色或绿色，呕吐频繁、量多，这属于病理性的呕吐。常见于消化道畸形，胎粪性梗阻，上呼吸道感染，脐炎，败血症，脑部疾病及急性胃肠炎等，应及时去医院就诊，及时治疗。 1、 让孩子少量多次摄取水分（一下子喝太多容易导致孩子呕吐，所以用勺或小杯子少量多次地给孩子水喝。如有腹泻，更要多补充水）。
2、 、选择好消化的松软食品，？？不要硬给孩子吃非乳性食物。 3、 抱起孩子，不要短时间内让孩子平躺。 4、 嘴边、耳朵周围要保持干净（吐出的奶液通常会流到口边、耳朵边）。 衣服，被单经常更换，如有异味，更容易使婴儿呕吐。 香港明一乳业婴幼儿营养中心
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哺乳动物体外受精相关研究
【来源/作者】济宁医学院——李杰 【更新日期】 9:27:22
一、 卵母细胞体外成熟的影响因素
哺乳动物卵母细胞体外成熟是体外受精技术的重要基础[1]，卵母细胞成熟质量直接影响到受精及受精后的胚胎发育。影响卵母细胞体外成熟的因素很多，包括卵母细胞来源、培养液成分、培养方法等[2]。迄今为止，国内外研究者对影响卵母细胞体外成熟的相关因素及其作用机理进行了大量研究，以期优化体外培养环境，获得优质的体外成熟卵母细胞[3]。
1.1 卵母细胞来源及质量
1.1.1 季节因素
卵巢质量及卵母细胞发育潜力与季节有一定的关系，一般在繁殖季节或气候适宜的季节，能收集到较多的卵母细胞，其发育能力也较好[4]。Suresh等[5]统计分析表明，凉爽季节收集的卵母细胞体外成熟率高于炎热季节。许杰等[6]发现繁殖季节山羊卵母细胞体外培养的成熟率显著高于非繁殖季节；而Takuma等[7]却认为季节对日本黑牛卵丘-卵母细胞复合体质量及其发育潜能没有显著影响。可见季节因素对不同动物的影响有所不同。
1.1.2 采卵方法　　　
从屠宰场获取的卵巢，一般有切割法和抽吸法两种收集卵母细胞的方法。汪立芹等[8]研究表明，抽吸法适合牛卵巢卵母细胞的采集，而切割法适合绵羊卵母细胞的回收。Mehmood等[9]发现，采取抽吸法获得的水牛卵母细胞体外成熟率高于切割法。采卵方法的选取可能与动物卵泡大小有关，卵泡较小时采用抽吸法容易损伤卵丘-卵母细胞复合体。
1.1.3 卵巢保存温度及时间　　　
研究发现，从屠宰场收集的卵巢，在运输过程中的保存温度关系到随后卵母细胞的体外成熟培养，但不同的研究者报道的结果有所差别。孙新明等[10]研究表明，在2 h内以接近室温（约25℃）的保存温度运输山羊卵巢时，其卵母细胞成熟率显著高于接近体温（约36℃）的保存温度。而许红喜等[11]对雪龙黑牛的研究发现，卵巢长时运输（大于12 h）适于保存在4℃，因为长时运输时，低温保存有利于抑制卵母细胞代谢活动，抵抗营养和氧气的损耗。总之，卵巢的运输保存不仅跟温度有关，也跟时间有关，运输时间最好控制在3 h以内，避免卵母细胞因代谢障碍而损伤。
1.1.4 卵泡大小&&&
卵巢表面的卵泡表现出不同大小或直径，研究发现，不同大小的卵泡中的卵母细胞成熟和发育能力有差别。贺奋义等[12]发现，牛卵巢表面中等卵泡（2 mm&Ф&8 mm）中的卵母细胞体外成熟率显著高于小卵泡（Ф&2 mm）和大卵泡（Ф&8 mm）。而Raghu等[13]研究水牛卵泡卵母细胞发育能力时发现，大卵泡（Ф&8 mm）中的卵母细胞体外受精后其受精率、卵裂率和囊胚发育率显著高于中等卵泡（3 mm&Ф&8 mm）和小卵泡（Ф&3 mm）。Yousaf等[14]证明水牛减数分裂成熟能力与卵泡大小存在一定的依赖关系，并建议收集直径4 mm以上卵泡中的卵母细胞用于体外受精，以获得较好的培养效果。
1.1.5 卵丘包裹情况　　　
卵丘细胞是包裹在卵母细胞周围并与之紧密相连的颗粒细胞。卵丘细胞之间及卵丘细胞与卵母细胞之间通过缝隙连接实现信号传递[15]，维持卵母细胞减数分裂前期Ⅰ发育阻滞，诱导排卵时卵母细胞减数分裂恢复，支持卵母细胞胞质成熟[16]。Lodde等[17]表明，卵丘细胞对于卵母细胞获得减数分裂能力是必需的。Fukui等[18]发现，体外成熟前去除卵丘细胞不利于牛卵母细胞的成熟。自然裸卵体外成熟率极低，受精率甚至为0%[19]。因此，一般选择周围有2层以上卵丘细胞包裹的卵母细胞用于体外成熟培养。
1.2 成熟培养液成分　　　
培养液成分包括基础培养基、血清、卵泡液、激素、细胞因子等等。
1.2.1 基础培养基　　　
基础培养基模拟母畜生殖系统内卵母细胞发育的液体环境，是用于卵母细胞体外成熟培养的基质，对卵母细胞体外成熟和随后的发育潜能均有显著影响。目前，用于卵母细胞体外成熟的基础培养基有TCM-199、MEM、Ham’s F-10和NCSU-23等。其中，以TCM-199应用最为广泛，有文献报道使用该培养基可使牛卵母细胞体外成熟率达92%[20]。据统计，TCM-199和确定成分的培养基用于水牛卵母细胞体外成熟培养效果较好，成熟率达80%以上，而Ham’s F-10培养效果较差，成熟率只有52%[5]。　　　
水是溶解所有培养液成分的溶剂，配制培养液必须使用无菌的超纯水。纯化水的基本方法有去离子、玻璃蒸馏、过滤、逆渗透和超滤等。目前实验室常用的是美国Milli-Q超纯水系统制备的去离子超纯水。
1.2.2 血清　　　
TCM-199等一些培养基中通常要加入一定量的血清。血清中含有氮源、激素、细胞因子以及维生素等丰富的成分，对卵母细胞成熟极为有利，还能防止透明带过早硬化。Karami等[21]试验发现，培养液中添加血清比卵泡液更有利于绵羊卵母细胞成熟和受精。常用的血清有胎牛血清（FBS/FCS）和发情牛血清（ECS/OCS）。Mingoti等[22]在成熟培养液中添加FCS和ECS，牛卵母细胞体外成熟率达到了96%。然而，血清的成分复杂，且不同来源和不同批次的血清产品中各种物质含量差异较大，直接影响到培养效果。如同样是以TCM-199为基础液，李晓霞等[23]在培养液中补充10% ECS显著提高了水牛卵母细胞体外成熟率，而唐业刚[24]则认为成熟液中有无血清并不影响水牛卵母细胞体外成熟率。由于血清质量不稳定，而且其中可能还存在某些有害因子，如今越来越多的研究者致力于研究卵母细胞和胚胎的无血清培养。
1.2.3 卵泡液　　　
卵泡液中含有多种激素和细胞因子，如促性腺激素、雌激素、转化生长因子等，对卵母细胞发育具有重要的调节作用。Bijttebier等[25]发现，成熟液中补充10%猪卵泡液，提高了细胞内谷胱甘肽含量，有利于卵母细胞受精和早期胚胎发育。有文献报道，较大卵泡（5 mm&Ф&6 mm）的卵泡液中存在一些分子量为30～100 kDa的蛋白质，这些蛋白质可能通过促进猪卵母细胞核成熟和提高卵丘细胞活力来提高卵母细胞发育能力[26]。而Nandi等[27]对水牛的研究发现，相对于添加大卵泡的卵泡液，成熟液中添加小卵泡（Ф&3 mm）的卵泡液能显著提高水牛卵母细胞的发育潜力。可见，卵泡液对卵母细胞的作用效果与卵泡直径间的关系在不同动物会有所不同。
1.2.4 激素　　　
卵母细胞在体内的生长发育受到各种激素的调节，因此，改善培养液必须添加激素。目前，使用的激素主要是促性腺激素，包括促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）等。此外，还有性腺激素如雌二醇（E2）和其他激素。有关激素对卵母细胞体外成熟的积极影响已有诸多报道。Pandey等[28]发现，联合添加FSH和LH明显促进了水牛卵母细胞卵丘扩展和第一极体排出。Eppig [29]认为，FSH对卵母细胞的作用是通过存在于卵丘或颗粒细胞上的FSH受体介导的。Gupta等[30]研究证实，商用PMSG可有效地代替价格较高的高纯度FSH，用于水牛卵母细胞体外成熟，由此降低成本。
1.2.5 细胞因子&&&
众多细胞因子也参与卵母细胞生长和发育的调控，如表皮生长因子（EGF）、胰岛素样生长因子（IGF）、转化生长因子（TGF）、白血病抑制因子（LIF）和血管内皮生长因子（VEGF）等。Purohit等[31]表明，EGF和IGF-1显著提高了水牛卵母细胞体外成熟率，且联合添加EGF和IGF-1效果更好，卵母细胞发育至MⅡ期的比率达81%。有研究证明EGF促进卵母细胞胞质成熟是通过卵丘细胞介导的[32]。赵振华等[33]报道，LIF促进了山羊卵母细胞体外成熟，且与胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在促进卵母细胞成熟方面有协同作用。
1.2.6 其他物质　　　
维生素以及一些硫醇化合物（如半胱氨酸、半胱胺、巯基乙醇等）具有抗氧化作用，可以降低卵母细胞体外发育过程中的氧化应激损伤。研究表明，维生素C和E可促进猪裸卵减数分裂，增加其发育至MⅡ期的比率[34]。Gasparrini等[35]报道成熟液中添加胱氨酸和半胱胺，提高了水牛卵母细胞内谷胱甘肽浓度，促进了卵母细胞成熟和受精，并且提高了受精卵的卵裂率。此外，一些减数分裂抑制剂如双丁酰环腺苷酸（dbcAMP）也用来添加于成熟培养液中，可逆性地抑制卵母细胞核成熟，实现卵母细胞核质成熟同步性的调节，进而提高卵母细胞的发育潜能[36]。某些营养性物质如葡萄糖也能促进水牛卵母细胞的成熟[37]。
1.3 培养条件和方式
1.3.1 培养液PH　　　
卵母细胞发育的体内液体环境具有适宜的酸碱度范围，因此，培养液的酸碱度直接影响到卵母细胞的体外培养。适宜的卵母细胞成熟培养液PH值在7.2～7.4之间。索永善等[38]发现，培养液PH&6.5时猪卵母细胞全部死亡，PH为8.9时死亡率为31.7%，表明猪卵母细胞对碱性环境的耐受性较强，并且认为偏酸性环境容易引起卵母细胞胞膜破裂、胞质溃散后死亡，而培养液偏碱性时，卵母细胞会因脱水而发生皱缩，但细胞膜不会破裂。
1.3.2 温度和湿度　　　
卵母细胞对温度反应敏感，Eng等[39]研究显示，猪卵母细胞在39℃条件下培养时成熟率为71%，而37℃时仅为35%。目前，卵母细胞体外成熟培养的温度多采用38～39℃。朱广香[40]在此温度范围内培养山羊卵母细胞，不同温度条件下成熟率差异不显著，可见，温度在该适宜范围内的微小变动对卵母细胞成熟没有影响。　　　
卵母细胞成熟培养要在最大饱和湿度条件下，要求二氧化碳培养箱内始终维持99%～100%的相对湿度，防止培养液水分蒸发。
1.3.3 气相环境&&&
目前，最常用的气相条件是含5% CO2的空气。CO2可维持培养液正常酸碱度。此外，还有组成为5% CO2 + 5% O2+90% N2的混合气体。Salavati等[41]研究发现，相对于20% O2，5% O2的低氧条件更有利于犬卵母细胞核成熟，并且能降低卵母细胞体外成熟过程中的氧化应激。而Kang等[42]认为，猪卵母细胞体外成熟时采用20% O2的高氧浓度及胚胎培养时采用5% O2的低氧浓度，可能改变了与卵母细胞发育能力相关的多个基因的表达情况，因而促进了胚胎发育。
1.3.4 培养时间　　　
不同动物卵母细胞发育情况不同，因此体外成熟培养所需时间也有差异，如牛为22～24 h、猪44～48 h、绵羊24～26 h。成熟时间过短，卵母细胞成熟不完全，不能正常受精，时间过长则导致卵母细胞皮质颗粒过早释放，透明带硬化，失去最佳受精时机。此外，不同发育阶段的卵母细胞成熟培养所需最佳时间有所不同，卵巢内部的卵母细胞应适当延长1～2 h的培养时间[43]。
1.4 卵母细胞体外成熟的判断&&&
卵母细胞成熟后，生发泡破裂，排出第一极体，进入第二次减数分裂并停滞于MⅡ期[44]。因此，以第一极体排出作为卵母细胞核成熟的标志。而卵母细胞的胞质成熟稍晚于核成熟，表现为线粒体和皮质颗粒的重新分布：线粒体数量增加，从胞质皮质层向胞质内部迁移[45]；而皮质颗粒则向皮质层迁移，排列于卵母细胞胞膜下[46]。
二、精子体外获能&&&
精子获能是哺乳动物卵母细胞受精的前提。1951年，Chang[47]发现哺乳动物的精子必须在雌性生殖道内发生一定的生理变化，即完成精子获能后，才能穿过卵子透明带进入卵子内部。精子获能的发现为哺乳动物体外受精生产胚胎的研究奠定了基础。在体外受精操作中，精液获能需要进行处理，先用各种方法尽可能去除死精、不活动精子、白细胞以及前列腺素、获能抑制因子、杂质等有害成分，分选出优质精子，再用获能液处理使精子获能[48]。
2.1 精子获能的处理方法　　　
目前，常用的处理冷冻精液的方法有离心洗涤法、上游法和Percoll密度梯度离心法等[49, 50]，操作方法如下：①离心洗涤法，将解冻的精液与洗精液混匀，离心洗涤1～2次后弃上清，再加入适量获能液悬浮精子并调整精子密度，置于CO2培养箱中孵育使精子获能。②上游法，将解冻的精液加至装有洗精液的离心管底部，在培养箱中倾斜45°角放置30～60 min，使活力较高的精子上游至洗精液上层，然后吸取上层液体离心，富集到较高活力的精子，再加入获能液孵育精子。也可将离心洗涤法和上游法结合运用，先离心洗涤，再进行精子上游处理[51]。③Percoll密度梯度离心法，离心管中依次加入浓度为90%和45%的Percoll液，再将精液加至Percoll液顶层，离心弃上清，再用洗精液离心洗涤1次后弃上清，最后用获能液孵育处理。　　　
离心洗涤法操作简便，精子回收率高，但其对死活精子的分选作用较差，只能针对精子数多、活力高且杂质较少的精液，适用范围较窄[48]。而且，离心会使精液中氧化物恢复氧化活性，容易使精子发生氧化损伤[52, 53]。上游法操作简单，但精子回收率相对较低，同样只适用于质量较好的精液。有文献报道，上游法使精子脱离了精浆，而精浆中含有保护精子的抗氧化物，精子脱离精浆后容易造成精子发生氧化应激损伤，造成DNA断裂[54]。Percoll密度梯度离心法精子回收率高，适用范围广泛，特别适用于少精、弱精的精液处理。研究表明，用Percoll处理精液能诱导精子获能[55]；杨红远等[56]也发现，Percoll法处理的水牛精液精子活力高、杂质少。但该法技术要求高、操作复杂且成本高，因此实用性较低。
2.2 精子获能的判断&&&
精子获能后，运动能力明显增强，精子头部侧摆幅度大，摆动频率高，尾部振幅和频率也明显增加，呈现一种超激活运动状态，其特点是头部动作轨迹类似“8”字形[57]。精子的超激活运动包括急剧前向运动和鞭打样运动[58]。观察精子超激活运动的技术有：连续分步曝光技术、显微镜录像技术和计算机辅助精子分析（Computer Assisted Sperm Analysis, CASA）技术等[57]。CASA技术可以准确量化精子运动情况，获得精子运动的多项客观参数[59]。顶体反应是精子完成获能的标志，检测精子顶体反应的技术有：电子显微镜检查法、考马斯亮蓝染色法、豌豆凝集素标记法和金霉素荧光染色法等[57]。Hewitt等[60]用金霉素与活细胞荧光染料H33258双染法对精子进行染色，观察精子体外受精获能和顶体反应整个过程中的顶体变化。
三、体外受精研究的意义及存在问题　　　
体外受精技术不仅为研究动物配子发育、受精及早期胚胎发育的调控机制提供了手段，也为现代生物技术如体细胞核移植、转基因等提供基本技术支持，更重要的是，体外受精联合胚胎移植使动物品种改良和高效生产、濒危动物保种以及人类辅助生殖得以有效实施，是继人工授精和胚胎移植之后又一伟大的生物工程技术。　　　
如今，动物体外受精的技术和条件都得到了很大改善，但体外受精技术仍面临许多问题，如卵母细胞体外成熟质量较差、体外受精率和囊胚发育率偏低、囊胚细胞数少、胚胎移植母畜产犊率低、胎儿个体偏重等等。因此，有必要继续探索卵母细胞成熟、精子获能及早期胚胎发育的影响因素，并深入研究各种因素的作用机理，不断优化体外受精相关的技术体系，以提高体外受精胚胎生产效率。
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【关键词】体外受精，影响因素，培养液成分，培养条件和方式，精子获能，奥科官网&
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