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ALR对大鼠急性肾衰竭中肾小管上皮细胞的生物活性作用研究
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官方公共微信糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶的表达及氯沙坦钾的干预作用--《山西医科大学》2014年硕士论文
糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶的表达及氯沙坦钾的干预作用
【摘要】：目的：本课题拟使用链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立1型糖尿病大鼠模型，观察空腹血糖（FBG）、血肌酐（CREA）、血浆尿素氮（BUN）、24小时尿蛋白定量及整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的表达，同时给予血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦钾进行干预治疗，探讨ILK与糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）发病的关系，研究氯沙坦钾对DN的保护作用，为DN的发病机制及治疗提供新的理论依据。
方法：清洁级雄性Wistar大鼠36只，体重200-240g，均购于山西医科大学动物实验中心。适应性喂养1周后，随机分为3组：对照组(A组n=12)；糖尿病组(B组n=12)；治疗组(C组n=12)。糖尿病组及治疗组给予1%链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）60mg/kg1次性腹腔注射，72小时后尾静脉采血测血糖，血糖值大于16.7mmol/L为造模成功。对照组注射等剂量的浓度为0.1mmol/L的枸橼酸缓冲液。治疗组给予50mg·kg-1·d-1氯沙坦钾生理盐水混悬液灌胃，对照组及糖尿病组给予等剂量生理盐水灌胃。于实验第8周、12周每组各取6只大鼠处死，测定空腹血糖、血肌酐、血浆尿素氮、24小时尿蛋白定量。免疫组化法测定肾小管上皮细胞ILK的表达，实时荧光定量PCR（RT-PCR）法测定ILK mRNA在肾脏的表达，肾脏组织行HE染色，光镜下观察各组病理改变。
1、一般情况：糖尿病组及治疗组大鼠腹腔注射STZ约1周后开始出现多尿、多饮、多食症状，正常对照组无明显变化，2周时症状加重，测体重糖尿病组及治疗组大鼠较之前明显减轻。
2、观察指标情况：8周时糖尿病组、治疗组较对照组大鼠空腹血糖、24小时尿蛋白定量均升高（P＜0.05）；治疗组与糖尿病组比较24小时尿蛋白定量下降（P＜0.05）。12周时糖尿病组、治疗组较对照组大鼠空腹血糖、24小时尿蛋白定量亦升高（P＜0.05）；血肌酐、血浆尿素氮较对照组均升高（P＜0.05）；治疗组与糖尿病组比较24小时尿蛋白定量降低（P＜0.05），血肌酐及尿素氮未见明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。
3、HE染色肾脏病理特征：8周时：正常对照组大鼠肾小球形态规则、肾小管上皮细胞排列整齐，结构未见异常。糖尿病组大鼠出现肾小球轻度增大、系膜细胞增生、系膜区基质沉积、毛细血管壁增厚、肾小球基底膜增厚；肾小管上皮细胞出现轻度水肿，轻度间质水肿、炎性细胞浸润及间质纤维化。12周时：正常对照组肾小管结构未见异常，糖尿病组大鼠较8周时病理改变加重，肾小球部分硬化萎缩，肾小管上皮细胞水肿加重，部分萎缩、坏死脱落，局灶性炎性细胞浸润，间质纤维化加重。同期氯沙坦钾治疗后肾脏病理改变明显缓解。
4、免疫组化测定肾小管上皮细胞ILK表达：8周时：对照组大鼠肾远曲小管上皮细胞胞质内可见ILK表达，呈棕黄色颗粒着色。糖尿病组及治疗组大鼠近曲小管胞质中出现ILK表达，远曲小管棕黄色表达较对照组增强，治疗组肾小管上皮细胞ILK表达较糖尿病组减弱，较正常对照组增强。12周时：对照组ILK在肾小管表达较8周未见明显变化，糖尿病组及治疗组肾小管上皮细胞ILK表达较对照组表达增强。
5、实时荧光聚合酶链式反应（real time polymerase chain reactionRT-PCR）测定肾脏ILK mRNA表达结果：同期与对照组比较，糖尿病组和治疗组ILK mRNA的相对表达明显升高（P0.05）；同期与糖尿病组比较，治疗组ILKmRNA的相对表达降低（P0.05）。
1、糖尿病大鼠出现系膜细胞增生、系膜基质沉积、肾小球基底膜增厚、肾小管上皮细胞水肿、小管细胞部分萎缩及坏死脱落、肾小管间质纤维化等病理改变，随着时间的推移病理改变加重。说明在糖尿病肾病的进展过程中肾小管病变占据很大作用。
2、24小时尿蛋白定量、血肌酐、血浆尿素氮水平随着病情的进展升高，氯沙坦钾可减少24小时尿蛋白定量，提示氯沙坦钾可起到除降压外的肾脏保护作用。
3、糖尿病大鼠肾小管上皮细胞ILK表达增多，肾脏ILK mRNA表达增多，氯沙坦钾干预后肾小管病理改变减轻，由此推断氯沙坦钾可能是通过下调肾小管上皮细胞ILK的表达来保护肾脏。
【关键词】：
【学位授予单位】：山西医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：R587.2;R692【目录】：
摘要5-7Abstract7-11英文缩略词11-12前言12-15材料与方法15-22实验结果22-23讨论23-26结论26参考文献26-31附图31-36综述36-48 参考文献42-48攻读学位期间发表论文情况48-49致谢49-50个人简历50
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