本品系由高效表达人红细胞生成素（简称人促红素）基因的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，经细胞培养、分离和高度纯化后获得的重组人促红素制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。
生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
重组人促红素工程细胞系由带有人促红素基因的重组质粒转染的CHO-dhfr^-（二氢叶酸还原酶基因缺陷型细胞）细胞系。
2.1.2 细胞库建立、传代及保存
由原始细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为主细胞库；从主细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为工作细胞库。各级细胞库细胞传代应不超过批准的代次。细胞冻存于液氮中，检定合格后方可用于生产。
2.1.3 主细胞库及工作细胞库细胞的检定
应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
细菌和真菌、支原体、病毒检查均应为阴性。
应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传标记物等任一方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。
应不低于原始细胞库细胞的表达量。
2.1.3.4 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）
目的基因核苷酸序列应与批准的序列相符。
2.2.1 细胞的复苏与扩增
从工作细胞库来源的细胞复苏后，于含灭能新生牛血清培养液中进行传代、扩增，供转瓶或细胞培养罐接种用。新生牛血清的质量应符合规定（通则3604）。
2.2.2 生产用细胞培养液
生产用细胞培养液应不含牛血清和任何抗生素。
细胞培养全过程应严格按照无菌操作。细胞培养时间可根据细胞生长情况而定。
收集的培养液按经批准的纯化工艺进行，采用经批准的超滤法或其他适宜方法进行浓缩，多步色谱纯化后制得高纯度的重组人促红素，除菌过滤后即为人促红素原液。如需存放，应规定时间和温度。
原液加入适宜稳定剂，并用缓冲液稀释。除菌过滤后即为半成品。
应符合“生物制品分批规程”规定。
应符合“生物制品分装和冻干规程”及通则0102有关规定。
应符合“生物制品包装规程”及通则0102有关规定。
用4g/L碳酸氢铵溶液将供试品稀释至0.5～2mg/ml，作为供试品溶液。以4g/L碳酸氢铵溶液作为空白，测定供试品溶液在320nm、325nm、330nm、335nm、340nm、345nm和350nm的吸光度。用读出的吸光度的对数与其对应波长的对数作直线回归，求得回归方程。照紫外-可见分光光度法（通则0401），在波长276～280nm处，测定供试品溶液最大吸光度A_max，将A_max对应波长代入回归方程求得供试品溶液由于光散射产生的吸光度A_光散射。按下式计算供试品蛋白质含量，应不低于0.5mg/ml。

依法测定（通则3522）。
按酶联免疫法试剂盒说明书测定。
依法测定（通则0541第五法）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，考马斯亮蓝染色，分离胶胶浓度为12.5％，加样量应不低于10μg，经扫描仪扫描，纯度应不低于98.0％。
依法测定（通则0512）。亲水硅胶体积排阻色谱柱， 排阻极限300kD，孔径24nm，粒度l0μm，直径7.5mm，长30cm；流动相为3.2mmol/L磷酸氢二钠-1.5mmol/L磷酸二氢钾-400.4mmol/L氯化钠，pH7.3；上样量应为20～l00μg，在波长280nm处检测，以人促红素色谱峰计算的理论板数应不低于1500。按面积归一化法计算人促红素纯度，应不低于98.0％。
依法测定（通则0541第五法）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，考马斯亮蓝R250染色，分离胶胶浓度为12.5％，加样量应不低于lμg，分子质量应为36～45kD。
依法测定（通则0401），用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至0.5～2mg/ml，在光路1cm、波长230～360nm下进行扫描，其最大吸收峰应为279nm±2nm；最小吸收峰应为250nm±2nm；在320～360nm处应无吸收峰。
取尿素9g、30％丙烯酰胺单体溶液6.0ml、40％pH3～5知两性电解质溶液1.05ml，40％pH3～10的两性电解质溶液0.45ml、水13.5ml，充分混匀后，加入N，N，N'，N'-四甲基乙二胺15μl和10％过硫酸铵溶液0.3ml，脱气后制成凝胶，加供试品溶液20μl（浓度应在每1ml含0.5mg以上），照等电聚焦电泳法（通则0541第六法）进行，同时做对照。电泳图谱应与对照品一致。
用双抗体夹心酶联免疫法检测，应不高于蛋白质总量的0.05％。
依法检查（通则1143），每10000IU人促红素应小于2EU。
3.1.12 牛血清白蛋白残留量
依法测定（通则3411），应不高于蛋白质总量的0.01％。
供试品经透析、冻干后，用1％碳酸氢铵溶液溶解并稀释至1.5mg/ml，依法测定（通则3405），其中加入胰蛋白酶（序列分析纯），37℃±0.5℃保温6小时，色谱柱为反相C8柱（25cm×4.6mm，粒度5μm，孔径30nm），柱温为45℃±0.5℃；流速为每分钟0.75ml；进样量为20μl，按下表进行梯度洗脱（表中A为0.1％三氟乙酸水溶液，B为0.1％三氟乙酸-80％乙腈水溶液）。

肽图应与人促红素对照品一致。
3.1.14 N端氨基酸序列（至少每年测定1次）
3.2.1 细菌内毒素检查
依法检查（通则1143），每1000IU人促红素应小于2EU。
依法检查（通则1101），应符合规定。
按免疫印迹法（通则3401）或免疫斑点法（通则3402）测定，应为阳性。
依法检查（通则0904），应符合规定。
依法检查（通则0102），应不低于标示量。
依法测定（通则0631），应符合批准的要求。
若制品中加入人血白蛋白作稳定剂，则应符合经批准的要求（通则0731第二法）。
依法测定（通则0632），应符合批准的要求。
按酶联免疫法试剂盒说明书测定，应为标示量的80％～120％。
依法测定（通则3522），应为标示量的80％～140％。
依法检查（通则1101），应符合规定。
3.3.6 细菌内毒素检查
依法检查（通则1143），每1000IU人促红素应小于2EU；5000IU/支以上规格的人促红素，每支应小于10EU。
依法检查（通则1141小鼠试验法），应符合规定。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。

SN/T 进出境植物性药材检疫规程本标准规定了进出境植物性药材的现场检疫、实验室检验、结果评定及处置。本标准适用于进出境植物性药材的检疫，包括植物的根及根茎（块茎和鳞茎）、种子及果实、全草、叶、皮、藤木、树脂、藻菌及其他。点击这里进入下载页面：进入下载页面......

 本品系由高效表达人干扰素a2b基因的酿酒酵母，经发酵、分离和高度纯化后获得的重组人干扰素a2b冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。
 1 基本要求
 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
 2 制造
 2.1 工程菌菌种
 2.1.1 名称及来源
 重组人干扰素α2b工程菌株系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的酿酒酵母菌株。
 2.1.2 种子批的建立
 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
 2.1.3 菌种检定
 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
 2.1.3.1 划种SD琼脂平板
 应呈典型的酿酒酵母菌集落形态，无其他杂菌生长。
 2.1.3.2 染色镜检
 应为典型的酵母菌形态。
 2.1.3.3 干扰素表达量
 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
 2.1.3.4 表达的干扰素型别
 应用抗α2b型干扰素血清做中和试验，证明型别无误。
 2.1.3.5 干扰素基因稳定性检查
 涂SD琼脂平板，挑选至少50个克隆，用PCR检测干扰素基因，阳性率应不低于95%。
 2.2 原液 
 2.2.1 种子液制备
 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基中培养。
 2.2.2 发酵用培养基
 采用适宜的不含抗生素的培养基。
 2.2.3 种子液接种及发酵培养
 2.2.3.1 在灭菌培养基中接种适量种子液。
 2.2.3.2 在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶解氧、补料、罐压、通气量、发酵时间等。
 2.2.4 发酵液处理
 用适宜的方法收集、处理菌体。
 2.2.5 初步纯化
 采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。
 2.2.6 高度纯化
 经初步纯化后，采用经批准的纯化工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，加入适宜稳定剂，除菌过滤后即为重组人干扰素α2b原液。如需存放，应规定时间和温度。
 2.2.7 原液检定
 按3. 1项进行。
 2.3 半成品
 2.3.1 配制与除菌
 按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。
 将原液用稀释液稀释至所需浓度，除菌过滤后即为半成品，保存于2～8℃。
 2.3.2 半成品检定
 按3. 2项进行。
 2.4 成品
 2.4.1 分批
 应符合“生物制品分批规程”规定。
 2.4.2 分装及冻干
 应符合“生物制品分装和冻干规程”及通则0102有关规定。
 2.4.3规格
 应为经批准的规格。
 2.4.4 包装
 应符合“生物制品包装规程”及通则0102有关规定。
 3 检定
 3.1 原液检定
 3.1.1 生物学活性
 依法测定（通则3523）。
 3.1.2 蛋白质含量
 依法测定（通则0731第二法）。
 3.1.3 比活性
 为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于1.0×10^8IU。
 3.1.4 纯度
 3.1.4.1 电泳法
 依法测定（通则0541第五法）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法）或5μg（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。
 3.1.4.2 高效液相色谱法
 依法测定（通则0512）。色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋内质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量应不低于20μg，在波长280nm处检测，以干扰素色谱峰计算的理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。
 3.1.5 分子量
 依法测定（通则0541第五法）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为19.2kD±l.9kD。
 3.1.6 外源性DNA残留量
 每1支/瓶应不高于10ng （通则3407）。
 3.1.7 宿主菌蛋白质残留量
 应不高于蛋白质总量的0.050% （通则3414）。
 3.1.8 细菌内毒素检查
 依法检查（通则1143），每300万IU应小于10EU。
 3.1.9 等电点
 主区带应为5.7～6.7，且供试品的等电点图谱应与对照品的一致（通则0541第六法）。
 3.1.10 紫外光谱
 用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至100～500μg/ml，在光路lcm、波长230～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为278nm±3nm （通则0401）。
 3.1.11 肽图
 依法测定（通则3405），应与对照品图形一致。
 3.1.12 N端氨基酸序列（至少每年测定1次）
 用氨基酸序列分析仪测定，N端序列应为：Cys-Asp-Leu-Pro-Gln-Thr-His-Ser-Leu-Gly-Ser-Arg-Arg-Thr-Leu。
 3.2 半成品检定
 3.2.1 细菌内毒素检查
 依法检查（通则1143），每300万IU应小于10EU。
 3.2.2 无菌检查
 依法检查（通则1101），应符合规定。
 3.3 成品检定
 除水分测定、装量差异检查外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定。
 3.3.1 鉴别试验
 按免疫印迹法（通则3401）或免疫斑点法（通则3402）测定，应为阳性。
 3.3.2 物理检查
 3.3.2.1 外观
 应为白色或微黄色疏松体，按标示量加入灭菌注射用水后应迅速复溶为澄明液体。
 3.3.2.2 可见异物
 依法检查（通则0904），应符合规定。
 3.3.2.3 装量差异
 依法检查（通则0102），应符合规定。
 3.3.3化学检定
 3.3.3.1 水分
 应不高于3.0% （通则0832）。
 3.3.3.2 pH 值
 应为6.5～7.5 （通则0631）。
 3.3.3.3 渗透压摩尔浓度
 依法测定（通则0632），应符合批准的要求。
 3.3.4 生物学活性
 应为标示量的80%～150% （通则3523）。
 3.3.5 无菌检查
 依法检查（通则1101），应符合规定。
 3.3.6 细菌内毒素检查
 依法检查（通则1143），每1支/瓶应小于10EU。 
 3.3.7 异常毒性检查
 依法检查（通则1141小鼠试验法），应符合规定。
 4 稀释剂
 稀释剂应为灭菌注射用水，稀释剂的生产应符合批准的要求。
 灭菌注射用水应符合本版药典（二部）的相关要求。
 5 保存、运输及有效期
 于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
 6 使用说明
 应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。