电化学综合讨论
主题：【求助】如何镀好铋膜电极
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swimming2345
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ID：swimming2345
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发表于： 11:53:47
看看发表的文章，都没有提及如何镀好铋膜电极？怎样验证镀好铋膜电极？如何镀好铋膜电极？所以恳请高人指点。本人用的电化学工作站是天津兰立科的2005A型，说明书上说用玻碳电极镀汞膜选择“线性扫描溶出伏安法”，我想镀铋膜能用相同方法吗？参数应该如何设置？主要包括灵敏度、滤波参数、初始电位、电沉积电位、终止电位等。最后镀好的电极出来的曲线应该是什么样的图形最佳呢？
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ID：xiaobu16
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你想用来干什么？
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ID：chenfu1010
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请教一下哦，我现在要用电化学工作站将玻碳电极镀汞膜，选什么方法丫？参数应该如何设置？怎么判断有没有镀上去哦？谢谢
liuzaiqing2004
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ID：liuzaiqing2004
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那台仪器我也用过，直接用I-T就可以啊，设置个电位，-1V肯定可以啊
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ID：xiaoyi888
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你那个是比较简单的，镀不镀上肉眼观察玻碳电极的表面，非常明显，镀上的表面有一层灰白色的膜。
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ID：lei_zhang
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预镀铋膜& 在1 mol/L KNO3 +1% HNO3+5×10-4 mol/L Bi3+沉积液中，选择铋的沉积电位－0.3 V，沉积时间为240 s, 搅拌，电极表面沉积一层黑色均匀的铋膜 试试看，效果好的话 请告诉我一下 lei4.
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ID：v2829083
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1 mol/L KNO3 +1% HNO3+5×10-4 mol/L Bi3+这三个的比例是要多少啊，是配好先再混合吗？
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原文由 2013buyao(v2829083) 发表:1 mol/L KNO3 +1% HNO3+5×10-4 mol/L Bi3+这三个的比例是要多少啊，是配好先再混合吗？求回答，是每个先配好再混和吗？一种低致死率的叶蝉微量注射方法
申请号：.9 申请日：
摘要：本发明提供一种低致死率的叶蝉微量注射方法，属于昆虫生理生化研究领域。本方法提高注射效率和叶蝉存活率，减少人力和时间的消耗。昆虫的微量注射会造成昆虫躯体的机械损伤，严重时会导致虫体死亡，因此对仪器和技术的要求较高，注射针口径、材质，昆虫的龄期和注射位点，注射试剂和剂量，以及注射角度、时间和液体流速等因素都可影响昆虫的存活率。而经过本申请的注射方法，叶蝉存活率可达到55-100%。
地址： 350002 福建省福州市仓山区建新镇金山学区
发明(设计)人：
主分类号：
&发明专利申请公布后的驳回 IPC(主分类):A61D 7/00申请公布日:
&实质审查的生效IPC(主分类):A61D
7/00申请日:
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
&一种低致死率的叶蝉微量注射方法，其特征在于：包括以下步骤：1）使用垂直拉针仪拉制毛细管玻璃注射针，并在显微镜下检查针头，保证烧熔的玻璃不堵塞针头；2）将叶蝉收集在试管内，冰上麻痹5?7分钟，将微量上样针前端的细管剪下，用于挑取注射后的叶蝉；同时压扁剩余的小段细管头部，用于入针时顶住叶蝉；3）给玻璃注射针上样，保证针头接触液体后可立刻出液，而后，调整注射针管角度为30?40°；4）将麻痹后的叶蝉移至显微镜下，腹部朝上，移动针头，将针尖对准后胸与第一腹节之间的节间膜正中位置；用压扁后的微量上样针细管头顶住叶蝉头部，防止入针时推动虫体，然后小心入针，待针尖刺入虫体后，调整显微操作仪的油压泵以控制注射剂量，最小注射剂量为2纳升，最大注射剂量为0.2微升，然后把叶蝉轻轻拨离针头，并蘸水粘附叶蝉，小心移入小型饲养笼；5）待叶蝉苏醒后，移入养虫室常规饲养。
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进入国家日期大众医药网 - 文献资料 - 通过膜片钳玻璃微电极内插管进行胞内透析
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通过膜片钳玻璃微电极内插管进行胞内透析
生理学报 2002年第2期第54卷
1华中科技大学同济医学院神经生物学系；武汉 郧阳医学院生理教研室；十堰 武汉大学医学院生理教研室；武汉 430071　李国华2；李之望1*；王士端1；魏劲波3；郑先科2
关键词：膜片钳；微插管；微电极夹持器；电极内液置换；胞内透析
　　摘要：本文介绍了一种膜片钳微电极内插管进行胞内透析的方法。利用通用的微电极夹持器在其抽吸负压的侧管上方钻一斜孔直通夹持器中央管腔。插入由微量移液管头拉制成的细管（外径约0.1 mm）, 后者与Ag-AgCl电极一起伸出夹持器口端。通过相连的注射器,可以很方便地进行电极内液置换及胞内药物透析。此法和二次钳压技术及国外介绍的微插管电极内液置换法相比, 更加简便易行, 结果更可靠。膜片钳技术创建于20世纪70年代末, 经过改进后至80年代初技术乃逐渐趋于成熟和完善[1]。此项技术使人们得以从分子水平对膜离子通道及受体进行深入的研究,因而很快得到普遍的应用和推广。尽管用膜片钳技术对膜蛋白（如离子通道、受体）的性质和功能等能作深入的分析,但此项技术也受到了一定的限制。如膜片钳难以分析细胞之间的联系和回路, 而且就一个细胞而言, 在单通道记录时膜片与细胞的其它部分往往完全脱离,而在全细胞膜片钳情况下, 胞内信号转导途径和机制以及有关功能调制也难以研究。 针对这一情况, 人们在膜片钳技术的基础上,发展出两种胞内灌流或透析(intracellular perfusion or dialysis)的方法：一是玻璃微电极内插管法[2, 3];二是二次钳压技术(repatch technique)[4～6]。本文主要介绍我室发展的简易玻璃微电极内插管对胞内进行透析的方法和应用此方法进行实验的结果,并对此项技术的优点和实用性进行讨论。
　　1. 膜片钳微电极夹持器的改装 取通常所用膜片钳微电极夹持器(patch clamp pipette holder),在抽吸负压的侧管（与夹持器纵轴呈90°角）的上方, 用2 mm钻头呈45°角钻通夹持器管壁直通中央管腔。插入一外径为2 mm的细钢管（可利用一段20号注射针头,长约2 cm）, 周围密封、固定, 以备插入微插管(microcatheter)用。
　　2. 微插管的拉制 插入玻璃微电极内的微插管, 外径约100 μm, 内径约50 μm。本实验利用微量移液管(或称取液器, adjustable pipetter)通用的20 μl移液管头(universal pipetter tip),在酒精灯火焰上加热手工拉制而成。选用移液管头是由于：(1)其延展性很强, 可以很容易拉出长达1 m以上通畅的微插管（50 cm长就能满足要求）; (2)20μl的移液管头的大头口端可直接与注射器嘴连接配套, 便于抽吸玻璃微电极内液及药物灌注; (3)移液管头价格低廉, 且属实验室常备耗材,因而是一种很理想的材料。拉好后可用装有蒸馏水的注射器注水检查是否通畅。
　　3. 用塑料导管加固微插管拉制好的微插管细长而柔软, 为了便于微插管插入电极夹持器和固定起见,应在45°侧管内先插入一塑料导管（此塑料导管外径等于或略小于20号注射针头的内径, 可用硬脊膜外麻醉导管）, 具体操作如下：(1)将塑料导管轻轻插入侧管内,拐过135°角后继续送入3~5 mm。在侧管的细钢管外, 再套上一段约1.5 cm长的细硅胶管（如小儿头皮针管）将细钢管和塑料导管之间密封;(2)在塑料导管的另一端也套上一段约1.5 cm长的硅胶管, 将拉制好的微插管顺着塑料导管腔缓慢送入, 微插管前端经过135°侧管转角而与Ag-AgCl电极丝平行由夹持器出口端伸出;(3)将微插管前端多余的部分剪去, 使微插管末端比Ag-AgCl电极末端约长出5 mm。
　　4. 从玻璃微电极内抽出内液及灌注药液微插管插入玻璃微电极内时, 应注意尽可能地插到微电极的最尖端, 从而能尽量完全地抽吸电极内液,以减少对所灌注药物的稀释。需注意的是：(1)在将玻璃微电极固定在电极夹持器之前, 应先将微插管注满内液; (2)细胞封接后注药时,须先将负压吸管的三通慢慢打开与大气相通, 以免在抽出内液及灌注药液时玻璃微电极腔内压急剧变化, 从而导致已建立的细胞封接遭到破坏;(3)抽出内液及灌注药液时应缓慢而匀速, 切忌过快过猛。
　　5. 实验结果举例(1)应用本方法我们研究了多巴胺D2受体的选择性激动剂R(-)-NPA HCl对 aTP-激活电流抑制作用的胞内转导途径及机制。图3所示为电极内充灌正常内液时观察到的R(-)-NPA对ATP-激活电流的抑制作用作为对照,将玻璃微电极内正常内液抽出, 灌注含有0.5 mmol/L的GDP-β-s的内液, 20 min后观察到R(-)-NPA对ATP激活电流的抑制作用明显被消除。(2) 所示为应用本法观察药物经胞内透析后的作用时程。可以看出GDP-β-s透入胞内5 min时即开始起作用, 20 min后发挥最大作用。这与文献报道应用二次钳压所得结果基本一致[7]。
　　本文介绍的玻璃微电极插管法与二次钳压技术以及其它类似方法进行比较, 可以看出：
　　1. 应用二次钳压技术时, 虽然也可在同一细胞上进行前后对照, 比较胞内加药前后对通道或受体功能调制的影响。例如,我室以往实验证明[8]：在海马大锥体细胞SP对GABA-激活电流(IGABA)的抑制作用是由于NK1受体激活后经胞内信号转导, 而使GABAA受体磷酸化所致。实验应用二次钳压胞内透析H-7（一种PKC抑制剂）后,明显阻断了SP对IGABA的抑制作用, 但前后二次封接IGABA的幅值往往不一致。在多数情况下第二次封接时IGABA的幅值较第一次为小。膜片钳玻璃微电极内微插管进行胞内灌流技术,早在20世纪90年代初就已被提出[2], 此后, 这一方法进一步得到改进[3]并已商品化。但这一方法或者因为微电极夹持器设计复杂,或者因为抽液和注药的附加控制装置操作不便, 而未能得到推广和被普遍接受。
　　2. 本文介绍的玻璃微电极内微插管技术, 至少有以下一些优越之处：（1）无需专门的微电极夹持器。在普通的微电极夹持器上仅增加一侧管即可;（2）微插管制作容易。通用移液管头取材方便, 且易于拉成细长而柔软的微插管; （3）微插管的安装、固定及插入玻璃微电极内的操作方便易行，微插管通过侧管135°角时, 很容易转弯而与Ag-AgCl电极一起从微电极夹持器伸出, 由于微插管极细（0.1 mm）, 很容易插入玻璃微电极,可直达电极尖端处; （4）抽液和注药易于操作。 无需特殊装置, 仅用注射器抽注即可, 抽注过程用力要均匀, 2~3 min即可完成操作,与二次钳压相比稳定性及成功率大大提高; （5）胞内给药透析时前后对照基本一致。不像二次钳压技术需更换微电极, 重新封接,因而前后对照往往不相同。本法胞内透析前后对照仅受电流反应衰减(rundown)的影响; （6）可进一步扩展膜片钳技术的应用。除胞内透析外,尚可用于其它方面如可控制性的进行膜穿孔(perforation)的操作等。
　　***本文承关兵才副教授仔细审阅, 并提出一些宝贵意见, 特此致谢。
　　参考文献
　　[1]Hamill OP, Marty A, Neher E, Sakmann B, Sigworth FJ. Improved patch clamp techniques for high resolution current recordings from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Arch, ：85~100.
　　[２]Tang JM, Wang J, Quandt FN, Eisenberg RS. Perfusing pipettes. Pflugers Arch,：85~100．
　　[３]Heschelar J, Kameyama M, Speicher R. Intracellular perfusion by patch electrodes．In：Practical Electrophysiological Methods. Kettenmann H, Grantyn R ed. New York: Wiley-Liss Press, 5.
　　[4]Hu HZ, Li ZW．Substance P potentiates ATP-activated currents in rat primary sensory neurons．Brain Res, ：163~168．
　　[5]Hu HZ, Li ZW．Modulation by adenosine of GABA-activated current in rat dorsal root ganglion neurons. J Physiol, ：67~75．
　　[6]Li Q（李 琴）, Wang QW（王钦文）, Li ZW（李之望）．Inhibition by SKF38393 of GABA-activated currents in rat DRG neurons． Acta Physiol Sin （生理学报）, )：280~288（Chinese, English abstract）．
　　[7]Yamada K, Akasu T．Substance P suppresses GABAA receptor function via protein kinase in primary sensory neurons of bullfrogs．　J Physiol, ：439~449．
　　[８]Xiong SH （熊顺华）, Li ZW （李之望）, Fan YZ （樊友珍）, Wang MJ （王明江）, Wei JB （魏劲波). substance P depresses GABA-activated currents in cultured hippocampal pyrmidal neurons of rats. Acta Physiol Sin （生理学报）, )：103~107 (Chinese, English abstract)．
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