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结核病注射疫苗有效率10%疫情回升严重
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　　导读：
　　3月24日是“世界防治结核病日”。在新回潮的传染病中，结核病疫情回升最为严重。其中的原因是多方面的，最重要的一点就是疫苗本身的问题。记者昨日上午从解放军302医院获悉，只有10%的人在注射疫苗(卡介苗)之后能产生有效的结核抗体。
　　中国疾控中心结核病预防控制中...
　　3月24日是“世界防治结核病日”。在新回潮的传染病中，结核病疫情回升最为严重。其中的原因是多方面的，最重要的一点就是疫苗本身的问题。记者昨日上午从解放军302医院获悉，只有10%的人在注射疫苗(卡介苗)之后能产生有效的结核抗体。
　　中国疾控中心结核病预防控制中心政策规划部主任姜世闻称，目前全球都在加速研究新的疫苗。
　　卫生部昨日召开新闻发布会介绍，将在下月起开始进行一项全国性的调查；国家正考虑将耐药性结核病纳入免费治疗范围。
　　(法制晚报)
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中文摘要?????????????????????????1
英文摘要?????????????????????????．3
引 言??????????????????????????．7’I ij?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ··，
jI：文??????????????????????????????????．．9
第一部分广山楂总黄酮提取工艺研究????????????9
1．实验材料与仪器?????????????????????9
1．1材料?????????????????????????????????．．9
1．2仪器?????????????????????????????????．．9
1．3试剂?????????????????????????????????．．9
2试验方法???????????????????????????????．9
2．1对照品溶液的制备???????????????????．9
2．2最大吸收波长确定???????????????????一9
2．3供试品溶液的配制???????????????????10
3提取工艺研究?????????????????????．11
。3．1提取方法考察?????????????????????11
3．2单因素考察??????????????????????11
3．3正交试验???????????????????????13
3．4验证试验???????????????????????15
3．5讨论?????????????????????????????????15
第二部分广山楂药材有机酸含量测定研究?????????．．16
1酸碱滴定法测定有机酸含量???????????????16
1．1材料????????????????????????????????．16
1．2试剂????????????????????????????????．16
1．3 实验方法和结果???????????????????．16
1．4 一j、结????????????????????????????????．18
2 高效液相．质谱联用测定有机酸含量???????????．．18
2．1仪器与试药??????????????????????18
2．2方法与结果??????????????????????19
2．3讨论????????????????????????????????．34
第三部分 山楂配方颗粒质量控制研究???????????．．35
1 山楂配方颗粒薄层鉴别?????????????????35
1．1材料、仪器与试剂??????????????????．35
1．2实验方法和结果????????????????????35
2 山楂配方颗粒相关质量指标检查?????????????36
2．1粒度检查??????????????????????．36
2．2水分检查??????????????????????．37
2．3溶化性检查?????????????????????．37
2．4微生物限量检查???????????????????．37
3 山楂配方颗粒总黄酮含量测定??????????????41
3．1材料、仪器及试剂??????????????????．41
3．2实验方法和结果???????????????????．42
3．3 一J、结????????????????????????????????．45
4 酸碱滴定法测定山楂配方颗粒中有机酸含量????????45
4．1 实验材料??????????????????????．45
4．2手动酸碱滴定法???????????????????一46
4．3 自动酸碱滴定法???????????????????．．46
4。4 ，J、结????????????????????????????????．47
5 高效液相．质谱联用测定山楂配方颗粒中有机酸含量????．．47
5．1仪器与试药??????????????????????．47
5．2方法与结果??????????????????????48
5．3讨论?????????????????????????????????55
|JIIIIIIlllUIIIIIlUllllllI I
参考文献???????????????????????56
综述?????????????????????????????????”5’7
致谢????????????????????????????．69
攻读学位期间发表的学术论文目录?????????????．．70
学位论文作者声明????????????????????．．71
个人简历????????????????????????．．72
目的：以广山楂药材与山楂配方颗粒为研究对象，考察并建立广山楂药
材和山楂配方颗粒的质量评价方法，为科学评价和有效控制广山楂药材
及山楂配方颗粒的质量提供实验科学依据。
方法：采用正交试验对广山楂药材总黄酮的提取工艺条件进行优化；采
用紫外分光光度法、酸碱滴定法及高效液相一质谱联用法对广山楂药材进
行质量分析。采用薄层鉴别法、紫外分光光度法、酸碱滴定法及高效液
相一质谱联用法等对山楂配方颗粒进行质量分析。
结果：广山楂药材总黄酮的最佳提取工艺为10倍60％乙醇加热回流提
取2次，每次1．5h。酸碱滴定法测定广山楂药材中的有机酸以贵港产药
材含量为高；HPLC-MASS法色谱条件为：色谱柱为Kinetex2．6¨
HILICl00A(100×4．60mm，美国Agilent公司)；流动相为乙腈：乙酸铵
水溶液=30：70。流速O．5mL／min；进样量0．5“L；柱温35℃。质谱条件
为：ESI离子源；检测方式为MRM多重反应监测；负离子模式；干燥气温
度35℃；雾化器压力40Psi；干燥气流速10L／min；扫描方式选择离子监
测(sIM)；回归方程式为：苹果酸回归方程y=9823．4lx+1852．86
(r=0．9975)，线性范围0．15～289．2mg／L；柠檬酸回归方程
y=411．85(r=0．9993)，线性范围0．09～177．6mg／L；酒石
酸回归方程y=5．67(r=0．9976)，线性范围0．15～210．8
rag／L；结果表明苹果酸、柠檬酸、酒石酸3个组分在各自浓度范围内呈
良好的线性关系， 回收率分别为 103．07％(RSD--3．85％)，
99．51％(RSD=4．12％)，85．03％(RSD=4．39％)。
以芦丁为对照的山楂配方颗粒薄层实验表明，紫外光下显示有相同
斑点；利用紫外分光光度法测3批山楂配方颗粒的总黄酮含量平均
42．09mg／g；对山楂配方颗粒作相关质量检查结果符合中国药典(2010版)
颗粒项下的要求；酸碱滴定法测定山楂配方颗粒中有机酸以自动滴定法
为高；HPLC-MASS法测定的色谱条件为：色谱柱Kinetex2．6“HILICl00A
(100X4．60ram，美国hgilent公司)；流动相为乙腈：乙酸铵水溶液
=30：70。流速0．5mL／min；进样量0．5“L；柱温35℃。质谱条件为：ESI
离子源；检测方式为MRM多重反应监测；负离子模式；干燥气温度35℃；
雾化器压力40Psi；干燥气流速10L／min。扫描方式选择离子监测(SIM)；
各有机酸良好的线性关系，回归方程式为：苹果酸回归方程
y=33．25x一2072．36(r=0．9964)，线性范围0．15～289．2mg／L；柠檬酸
回归方程y=0．4386x一60．79(r=0．9974)，线性范围0．11～397．6mg／L；
苹果酸、柠檬酸三种有机酸回收率分别为98．72％(RSD=2．85％)，
102．11％(RSD=I．12％)，101．35％(RSD=I．39％)。
结论：本文建立的广山楂药材总黄酮最佳提取工艺与文献中山楂总黄酮
提取工艺条件相似。高效液相一质谱联用法测定广山楂药材及山楂配方颗
粒中有机酸的方法，与其他传统方法比较有明显优势，所建立的方法简
单可控，灵敏度高，专属性强，重现性好，为提升广山楂药材及山楂配
方颗粒的质量标准控制提供了科学实验依据。
关键词：广山楂；山楂配方颗粒；有机酸；含量测定；HPLC-MASS
ResearchontheAnalysisofMalusdoumeri(Bois)chevand
Hawthornf mulagranules
Objective：w汕Malusdoumeri(Bois)chevandhawthomf rmulaparticles
astheresearchobject，toinvestigateandto stablishMalusdoumeri(Bois)
chevandhawthornf mulaoftheparticlesqualityevaluationmethod,andto
provideththeorybasisofscientificassessmentandeffectivecontrolf r
Malusdoumeri(Bois)chevandhawthomformulaparticlesquality．
Methods：Usingtheorthogonalexperimenttoop imizeth xtraction
processofflavonoidsconditionsofMalusdoumeri(Bois)chev；Usingthe
ultravioletsp ctrophotometry，acid—basetitrat onmethodndhigh
performanceliquid-massspectrometryl aguesagetoanalysisMalus
doumeri(Bois)chevquality．ByTLCidentificationme hod，ultraviolet
spectrophotometry,pharmacopoeialmethod， id—basetitr tionm thodand
highperformanceliquid-massspectrometryleagueusageofhawthornf mula
particlesforthequalityanalysis．
Results：ThebestextractionprocessforMalusdoumeri(Bois)chevtentimes
asmanyas60％ethanolheatingrefluxextractiontwtimes，eachtime1．5h．
Acid-basetitrationmethodforthedeterminationoforga icacidwithMalus
doumeri(Bois)chevforhighontentofguigang；HPLC-MASSmethodf r
chromatographicconditions：chromatographiccolumnforKinetex2．6肛
HILICIOOA(100X4．60min，theUnitedStatesAgilentcompany)；Mobile
phaseforacetonitrile：ammoniumacetatesolution=30：70．Velocity0．5
mL／min；Intothesampleweight0．5uL；Thecolumntemperature35℃．Mass
spectrometryconditionsfor：ESIionsource；MeasurementmethodsforMRM
multiplereactionmonitoring；Anionmode；Dryingtemperaturedeg es35℃；
40Psipressuresprayer；Drygasvelocity10L／min；Scanningmodeoption
monitoring(SIM)；Regressionequationsf r：appleacidregressionequationY
=9823．41X+ 852．86“=0．9975)，thelinearrangeO．15289．2mgm；Citric
acidregressionequationY=41．85(r
20．9993)，thelin arrange
0．09177．6mg／L；TartaricacidregressionequationY
=O．9976)，thelinearrangeO．15 210．8mgm；Theresultsshowthathree
componentsofmalica id，citricac d，tartaricacidintheirrespective
concentrationngesgoodlinearrelationshipbetweentherecoveryratewas
103．07％(RSD=3．85％)，99．51 (RSD=4．12％)，85．03％(RSD=4．39％)．
Rutinascontrolsthehawthornformulaparticlesthinlayerxperiments
showthesamespotwithuvlight；ByUvspectrophotometry，theflavonoids
contentoftheparticlesofthethreegroupofhawthornformulawere42．8
m∥g，38．73megg，44．74mg／g；Hawthornformulaofp rticlesforelevant
qualityinspectionresultsallconformtotherequirementsofparticle
pharmacopoeia；Acid-basetitrationformulaoftheorganicparticleshawthorn
weresmisfied；HPLC．MASSmethodforthedeterminationof
chromatographiccond tions：chromatographiccolumnKinetex2．6“
HILICl00A(100x4．60mm．theUnitedStatesAgilentcompany)；Mobile
phaseforacetonitrile：ammoniumacetatesolution=30：70；Velocity．5
mL／min；Intothesamplew ight0．5uL：Thecolumntemperature35
℃．；Massspectrometryconditionsfor：ESIionsource；Measurementmethods
forMRMmultiplereactionm itoring；Anionmode；Dryingtemperature
degrees35℃：40Psipressuresprayer；Drygasvelocity10L／min．Scanning
modeoptioniomonitoring(SIM)；Theresultsshow dthattheorganicacid
havegoodlinearrelationshipbetweentheregressionequationsf r：apple
acidregressionequationY=33．25X2072．36(r
20．9964)，thelin arrange
0．15289．2mg／L；Citricac dregressionequationY
0．9974)，thelin arrange0．11397．6mg／L；Malicac d，citricac dthreekinds
oforganicacidrecoveryratewas98．72％(RSD=2．85％)，102．1 ％(RSD
1．12％)，101．35％(RSD=1．39％)．
Conclusion：Thispaperstablishthebestextractiontechnologyconditions
ofMalusdoumeri(Bois)chevaresimilarwiththeliteraturehawthorn．The
determinationmethodsoforganicacidcontentarevarious，USlng
HPLC．MASStodeterminatetheorganicacidofMalusdoumeri(Bois)chev
andhawthornformulamethodparticles，ismoreadvantagesndthanother
traditionalmethod．Andthismethodissimplecontrollable，highsensitivity,
strongspecificity,reproducible．Providescientificbasisforthe
researchand
developmentofparticlesandmakethequalitys andardofhawthomformula
forMalusdoumeri(Bois)chevandhawthornf mulaparticles．
Kevwords：Malusdo meri(Bois)chev；Hawthomformulgranules；
organicacids；HPLC—MASS
广山楂又叫大果山楂(广西)，古蝉子、乌婵子(广西苗语)，麻缺顿，
墨鸡屯(广西壮族)，撒多，撒两比(台湾)?，为蔷薇科苹果属植物台湾
林檎kinlusdoumeri(Bois)Chev．和光萼林檎IdalusleiocalycaS．
Z．Huang的干燥成熟果实。广山楂果实性味、甘、酸、涩、微温，有理气
健脾，消食导滞之功能比1；广山楂叶味甘甜、微芬芳，具有开胃、消滞、去
湿的功效，广山楂及其叶收载于1990年版《广西中药材标准》n1。林檎
是一种古植物，分布于安徽、福建、湖南、贵州、云南、广东、广西、
台湾、越南、老挝等地。广山楂果实在广西作山楂习用已有八十多年历
史，作为生产的原料以及用于制作山楂饼，山楂糕等食品，在我国广西、
湘南一带，民间有饮林檎茶的习惯和嗜好。
广山楂中含有黄酮类、单体、有机酸类、熊果酸等化合物。林启云
等¨。1对广山楂化学成分进行了化学成分预测试，结果显示，其中还含有苷
类、萜类成分。黄卫文等肺’从台湾林檎叶中分离得单宁成分，文洁等n1从
台湾林檎叶中分离得2个化合物，经鉴定为根皮酚和根皮酸，其中黄酮类
化合物为广山楂中的主要有效成分。陈勇等雎叫3对以广山楂药材及叶进行
薄层鉴别，结果表明广山楂及其叶色谱在对照药材北山楂及对照芦丁的
色谱相应位置上有相同颜色与蓝色荧光斑点，表明广山楂及其叶与北山
楂均含有芦丁，且含有相同的黄酮类成分，同时对北山楂，大果山楂及其
叶的黄酮总量进行了含量测定，结果广山楂及其叶含量远比北山楂高。目
前国内对山楂的研究主要侧重于北方产山楂的生药学、有效成分、复方
制剂及药效等研究。对广山楂的传统研究主要集中在黄酮类成分方面。
上世纪90年代以来，广西中医药大学、广西中医药研究所、广西药用植
物园等科研单位，对广西产山楂的资源、品种、药材良种繁育、生药质
量及有效成份进行了相关研究，取得了一些成果，广山楂中有机酸成分
的提取、定性定量分析，药理作用研究越来越深入。
就中药配方颗粒来说，是对传统中药饮片应用形式的突破。它是以
优质中药饮片为原料，经现代工艺提取、真空低温浓缩、瞬间干燥、干
法制粒等多道工序精制而的单味产品。我国的中药配方颗粒的生产已有
10多年历史，培力(南宁)药业有限公司是广西唯一生产中药配方颗粒
的企业，生产品种有700多种，产品还远销港、澳及东南亚地区。山楂
配方颗粒也是培力(南宁)药业有限公司生产的品种之一，其原料从质
量控制要求来说是药典收载的品种，既为蔷薇科植物山里红Cmtaegus
piuuntifidnBgcvarmajorNE Br或山楂CmtneguspiuuntifidnBgc
的干燥果实及叶。目前国内对中药配方颗粒质量控制研究还比较少，山
楂配方颗粒质量相关研究也未见报道。
本文采用现代中药质量控制技术研究方法，对广山楂药材总黄酮工
艺进行优化，以确定最佳的提取工艺参数；同时考察酸碱滴定法测定广
山楂药材及山楂配方颗粒有机酸含量，建立高效液相一质谱联用的测定广
山楂药材及山楂配方颗粒有机酸方法，并采用药典法检查配方颗粒相关
质量指标，为科学评价和有效控制广山楂药材及山楂配方颗粒的质量提
供实验科学依据。
第一部分 广山楂总黄酮提取工艺研究
1实验材料与仪器
药材：广山楂药材为蔷薇科植物台湾林檎Malusdoumeri(Bois)chev．
的干燥成熟果实。广山楂药材产地为广西靖西县，样品经广西中医学院
药学院刘寿养教授鉴定为蔷薇科植物台湾林檎(Malusdoumeri∞fs)
Agilent8453紫外分光光度计(美国安捷伦公司)、SB3200T超声波清
洗仪(上海能信超声有限公司)；MilliporeSimplicity-185超纯水仪(美
国密里博公司)；BP211D电子天平分析天平(德国赛多利斯)。
乙醇(北京化工厂；分析纯)，超纯水。芦丁对照品(中国药品生物
制品检定所，批号：707)；亚硝酸钠；硝酸铝；氢氧化钠。
2．1对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品约10．259，置50ml容量瓶中，加入适量乙醇溶
解，然后溶解至刻度，摇匀，既得对照品溶液(O．205mg／m1)，供紫外含
2．2最大吸收波长确定
取芦丁对照品适量，精密称定，置于25mL容量瓶中，先加入纯净水
6ml，加入5％亚硝酸钠溶液lml，摇匀，放置6min，再加入10％硝酸铝溶
液lml，摇匀，放置6min，然后加入氢氧化钠溶液10ml，最后加水至刻
度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，照紫外可见分光光度法(((中
3提取工艺研究
3．1提取方法考察
取过4号筛的广山楂药材粉末约29，精密称定，精密加入20mL60％
的乙醇，分别采用超声提取及回流撮职1小时，放冷，过滤，取续滤液
做供试液即可。依法测定各样品溶液的总黄酮含量，结果见表。表明回
流提取法提取的广山楂总黄酮含量最高，因此选择回流提取法。
表1 广山楂药材提取方法考察
3．2单因素考察
3．2．1醇用量的考察
取广山楂药材粉末约29，精密称定，分别精密加入8倍(16m1)、10
倍(20m1)、12倍(22m1)以及14倍(24m1)60％的乙醇，回流提取1
小时，放冷，过滤，取续滤液做供试液即可。依法测定各样品溶液的总
黄酮含量，结果见表2，由此可见，不同醇用量对提取效果影响不大，综
合大生产实际，为节约成本，因此选择8倍、10倍、12倍醇用量进入正交
表2 醇用量考察结果表
3．2．2提取时间的考察
取广山楂药材粉末约29，精密称定，精密加)x．20mI60"／,的乙醇，分
别回流提取1h、1．5h、2h，放冷，过滤，取续滤液做供试液即可。依法
测定各样品溶液的总黄酮含量，结果由表3可见，提取时间为2h的情况下
提取出的总黄酮含量最高，但可以看出提取时间为1．5h、2h时，这两者
提取出的总黄酮含量相差不大，考虑到生产成本以及工业效益，因此确
定提取时间为1．5h。
表3 提取时间考察结果表
3．2．3提取次数的考察
取广山楂药材粉末约29，精密称定，精密力口入20ml60％的乙醇，分
别回流提取1次、2A、3次，每次提取回流1h，放冷，过滤，取续滤液做
供试液即可。依法测定各样品溶液的总黄酮含量，结果由表4可见，提取
次数为3A的情况下提取出的总黄酮含量最高，但可以看出提取次数为2
次、3次时，这两者提取出的总黄酮含量相差不大，考虑到生产成本以及
工业效益，因此确定提取次数为2次。
表4 提取次数考察结果表
3．2．4醇浓度的考察
取广山楂药材粉末约29，精密称定，精密加)x．20m1的乙醇，乙醇浓
度分别为60％、70％、80％，回流提取1次，每次提取回流1h，放冷，过滤，
取续滤液做供试液即可。依法测定各样品溶液的总黄酮含量，结果由表5
可见，提取次数为3次的情况下提取出的总黄酮含量最高，但可以看出提
取次数为2次、3次时，这两者提取出的总黄酮含量相差不大，考虑到生
产成本以及工业效益，因此确定提取次数为2次。
表5 醇浓度考察结果表
3．3正交试验
在以上单因素试验基础上，对广山楂总黄酮化合物提取效果的影响
因素，即提取溶剂乙醇用量(因素A)，提取溶剂浓度(因素B)，提取
次数(因素C)，提取时间(因素D)进行L，(34)正交试验设计，同时对
试验结果进行分析。
表6 正交因素水平表
表7 L9(34)正交实验结果分析表
方差分析表
由直观分析表可知，影响提取效果的因素顺序为乙醇浓度>提取次
数≈提取时间>乙醇用量，所得最佳提取工艺为A。B。c：D：。经方差分析表，
乙醇浓度和提取次数对提取结果有显著性差异，而乙醇用量对提取结果
无显著性差异。
最佳提取工艺条件是：10倍量60％乙醇加热回流提取2次，每次1．5h。
3．4验证试验
取广山楂药材粉约3份，每份29，精密称定，按最佳提取工艺条件进
行验证试验，结果3批样品的总黄酮含量见表，由RSD值可见该提取工
表8 验证试验结果
实验中黄酮的提取使用乙醇作提取溶剂，是考虑到实际生产和应用时
广山楂主要是供人口服，而甲醇对人体的损害大，提取效果相比乙醇优
势不突出，因此避开不用。正交设计灵敏，当正交某一因素改变时，最
后的正交分析结果就很容易有差别。因此试验时纪录各因素的结果需要
更精确、更客观。正交设计试验的结果表明，广山楂的最佳提取工艺条
件为10倍量60％乙醇加热回流2次，每次1．5h。
第二部分广山楂药材有机酸含量测定研究
1 酸碱滴定法测定有机酸含量
药材：广山楂药材为蔷薇科植物台湾林檎Malusdoumeri(Bois)chev．
的干燥成熟果实。样品经广西中医学院药学院刘寿养教授鉴定为蔷薇科
植物台湾林檎(讹lusdoumeri(Bois)chev．o
邻苯二甲酸氢钾标准品标定的氢氧化钠滴定液(C=O．0194mol／L)。
1．3实验方法和结果
1．3．1手动酸碱滴定法
1．3．1．1供试品溶液的配置
广山楂样品打粉过200目筛，取细粉19，精密称量，精密加水1OOmL，
50℃超声30分钟，过滤，精密量取滤液25mL，加水至50mL，加酚酞(1％)
2d，显色及时滴定。目测溶液由淡黄色变红棕色，或黄色变黄棕色即为
滴定终点。
1．3．1．2实验结果：见表9。
表9 手动滴定法测不同产地广山楂有机酸含量结果
注：酸含量计算按照公式：总酸含量(％)=6．404*V*M／W。(V—NaOH溶
液滴定体积(L)；M—NaOH溶液标定浓度(mol／L)；w一样品量(kg))
1．3．2 自动电位滴定法
1．3．2．1仪器：自动电位滴定仪ZDJ-4A，上海精密科学仪器有限公司。
1．3．2．2供试品溶液的配置：山楂样品打粉过200目筛，取细粉19，精密
称量，加适量水常温超声30分钟，加水定容至50mL，15000转／min高
速离心，每份取上层清液1O mL，加酚酞(1％)2d，用NaOH溶液在自动
电位滴定仪上同一条件下进行三份滴定。
1．3．2．3测定结果：见表10。
表10 自动滴定法测不同产地，一山楂有机酸含量
注：酸含量计算按照公式：总酸含量(％)--6．404*V*M／W。(V—NaOH
溶液滴定体积(L)；M—Na0H溶液标定浓度(mol／L)；w一样品量(kg))
手动滴定的终点判断依靠人眼对颜色的判定，而自动电位滴定仪是
对滴定全过程作实时纪录和分析，滴定结果更准确；另有高可靠性的触
摸键控制，操作上更方便。因此对于同一批药物的酸碱滴定，自动电位
滴定仪做酸碱滴定比手动滴定要灵敏很多，实验结果更精确，重现性好。
2 高效液相一质谱联用测定有机酸含量
2．1仪器与材料
2．1．1仪器：三重四级杆液相质谱联用仪(美国Agilent公司液相LCl260，
质谱QQQ6430)。苹果酸，柠檬酸，酒石酸对照品(美国supelco公司提
供批号分别为：lb7，46987o
2．1．2材料：广山楂药材来源广西梧州、贵港、凭祥、靖西、天峨等地，
经广西中医学院药学院刘寿养教授鉴定为蔷薇科植物台湾林檎(砌lus
doumeri(Bois)chev．)的果实。流动相乙酸铵、氨水，及其它试剂均为
2．2方法与结果
2．2．1色谱条件：色谱柱为Kinetex2．6uHILICl00A(100×4．60mm，
美国Agilent公司)；流动相为乙腈：乙酸铵水溶液=30：70。流速O．5mL
／min；进样量0．5IlL；柱温35℃。
2．2．2质谱条件：ESI离子源；检测方式为MRM多重反应监测；负离子
模式；干燥气温度35℃；雾化器压力40Psi；干燥气流速10L／min。扫描
方式选择离子监测(SIM)。
2．2．3对照品溶液的制备：精密称取对照品苹果酸，柠檬酸，酒石酸(分
别为7．23mg，4．44mg，5．27mg)，置25mL容量瓶中加纯水定容至刻度，摇
匀，得混合对照品贮备液。
图3对照品酒石酸质谱棒图
图4 对照品苹果酸质谱棒图
图5对照品柠檬酸质谱棒图
2．2．4供试品溶液的制备：分别取不同产地广山楂药材饮片打粉过200
目筛，取细粉19，精密称量，加适量水常温超声30分钟，加水定容至
50mL，15000转／rain高速离心，取上层清液O．5mL置5mL容量瓶，加
乙腈至刻度，摇匀，以0．45“m微孔滤膜滤过，即得。
2．2．5标准曲线的制备：精密吸取2．2．3项下混合对照品溶液适量，制
成4种不同浓度的混合对照品溶液。按2．2．1、2．2．2条件测定3个组分，
以峰面积对浓度进行缉洼回归，绘制标准曲线，求得各自的回归方程。
苹果酸回归方程y=52．86(r=O．9975)，线性范围0．15—
289．2mg／L；柠檬酸回归方程y=42179．99x一4311．85(r=O．9993)，线性
范围O．09～177．6mg／L；酒石酸回归方程y=5．67(r=O．9976)，
线性范围0．15～210．8mg／L；结果表明3个组分在各自浓度范围内呈良
好的线性关系。
0．1 0,203C．4 0,50．6 C．7 A80．9 1 1．1让1．3。．41．5 16‘．7 1，8 19
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组图7 对照各组分子离子图
2．2．6精密度试验：按2．2．1，2．2．2条件混合对照品溶液重复进样5
次，进样量0．5uL。各组分的峰面积的RSD分别为2．66％，2．95％，2．55％
嚣管△怒藉露群霖珊丽～赢甜．．：：．．．亍酊
2．2．7重复性试验：精密称取同一批号的供试品5份，分别按2．2．4项
下方法操作，测得的各组分含量的RSD分别为3．85％，4．12％，4．39％(n=5)。
2．2．8加样回收试验：分别精密吸取已知含量的山楂提取物3份，每份
1OraL，精密加入5mL混合对照品溶液，超声溶解，定容至刻度，摇匀，以
0．45“m微孔滤膜滤过，按2．2．1，2．2．2项下条件测定各组分的含量，
计算回收率。各组分的平均加样回收率分别为103．07％，99．51％，85．03％。
2．2．9样品的测定：精密吸取各供试品溶液，按照2．2．1，2．2．2条件
进行测定，根据峰面积采用外标法计算出各组分的含量，结果见表11，
图8一图17。
表11 不同产地广山楂中有机酸含量测定结果(n=5)
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图8样品1(梧州产J“山楂)有机酸含量测定组圈
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9-2—3．a(定性) 9-2—3一b(超)
图9样品2(贵港产广山楂)有机酸测定组图
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匿Iio-2—2样品3毒嘿酸子离子图
BBio-2—3样品3酒酮蔓子翩
图10样品3(凭祥产广山楂)有机酸含测组图
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图11．1样永(天峨)翎蓦子图
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图11—2．2样卧l苹烈爨衔图
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图11—2—3样品悝晒酸子-莺子圈
图11样品4(天峨产广山楂)有机酸含测组图
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图lz一1样品5(柳州)母离子图
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图12—2—2样品嘀磷毯}子离子图
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12—2—3-a(定性) 12．2—3-b(超)
图12．2．3l羊品5酒酿鹊礓抒图
图12 样品5(柳州产广山楂)有机酸含测组图
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图13-2．3样品罐晒酸子1鼾碉
图13样品6(荔浦产广山楂)有机酸含测组图
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图14．2．3
14-2—3-b(超)
图14 样品7(贺州产广山楂)有机酸含测组图
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图15-2．3样品魄吒磁子辆
图15样品8(阳朔产广山楂)有机酸含测组图
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图16样品9(靖西产广山楂)有机酸含测组图
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图17．2．1
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图17．2．3
图17样品10(那坡产广山楂)有机酸含测图组
2．3．1实验结果表明，不同产地的广山楂有机酸含量有一定差异，其中贵
港产广山楂中苹果酸含量最高，与柠檬酸、酒石酸总量之和也是十个产
地样品中最高的，提示广山楂有机酸的含量的高低与产地、生长期、采
收期都有一定关系。
2．3．2从选择的有机酸来看，广山楂中柠檬酸和苹果酸含量远远要高于酒
石酸，可以把柠檬酸和苹果酸作为广山楂中有机酸含量的测定指标。
2．3．3本实验首次采用液质联用的方法测定广山楂有机酸的含量，其测定
结果均远远高于国内现有其他测定方法如酸碱滴定法、高效液相色谱法
测定南北山楂中的有机酸含量埔呻1。且本方法灵敏、准确，重现性好，可用
于广山楂的质量控制。
第三部分 山楂配方颗粒质量控制实验研究
1 山楂配方颗粒薄层鉴别
1．1材料、仪器与试剂
1．1．1材料：实验用品为培力(南宁)药业有限公司提供的山楂配方颗
粒(批号：A；A；A)。
1．1．2仪器：Agilent8453紫外分光光度计(美国安捷伦公司)、BP211D
型电子天平(Sartorius公司)。
1．1．3试剂：芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：
0707)；乙醇为分析纯；实验用纯净水；石油醚；乙酸乙酯；
丙酮：三氯化铝。
1．2实验方法和结果
1．2．1对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品约2．0259，置50ml容量
瓶中，加入适量乙醇溶解，然后溶解至刻度，摇匀，即得对照品溶液
(0．125mg／m1)，供紫外含量测定用。
1．2．3供试品溶液的配制：山楂配方颗粒研磨细粉，取粉末29加纯水
10ml，用石油醚(30"C-60。C)洗涤2次(每次20m1)弃去石油醚液，水
层加乙酸乙酯震摇提取2次(每次20m1)，合并乙酸乙酯液，蒸干。残渣
加乙醇2ml使溶解。
1．2．4层析方法与实验结果：分别取供试品、对照品点于同一聚酰胺薄膜
上，以乙醇一丙酮一水(7：5：6)为展开剂，展开晾干，喷以三氯化铝试
液，吹干，紫外光灯(365nm)下检测。
实验结果：紫外光线下，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置
上显相同颜色的荧光斑点。
图18山楂配方颗粒薄层图
2 山楂配方颗粒相关质量指标检查
根据《中华人民共和国药典(2010版)》要求，颗粒剂应进行以下相
2．1 粒度检查
按照颗粒剂粒度和粒度分布测定法(2010药典附录ⅨE第二法双
筛分法)检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过供试量
2．1．1测定方法：取供试品309，称定重量(A)，置规定药筛(五号筛)，
保持水平状态过筛，左右往返，边筛动边轻叩3分钟。取不能通过小号
筛(一号筛)和能通过大号筛(五号筛)的颗粒及粉末称定重量(B)，
计算所占百分比。
2．1．2测定结果：按照双筛分法，测定结果纪录为：A=29．609，B=28．819。
2．1．3结果计算：粒度=(A-B)／A=2．67％<15％
2．2水分检查
按照颗粒剂水分测定法(附录ⅨH)测定，第一法(烘干法)不得
超过6．0％。
2．2．1测定方法：取供试品2-59，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，
厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定(A)，打开瓶盖在
100-105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置于干燥器中，冷却30分钟，
精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重(B)，至两次称重的
差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量(％)。
2．2．2测定结果：按烘干法，测定结果：A--34．67469，B=31．66209。
2．2．3结果计算：水分=(A-B)／A=3．94％t’xJanxJn95-r003．d
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Amuisitjon"time(min)
图22混合对照溶液母离子图
图23混合组分对照液有机酸测定
5．2．6精密度试验：按5．2．1，5．2．2条件混合对照品溶液重复进样5次，
进样量0．5IJL。各组分的峰面积的RSD分别为2．95％，2．55％(n=5)。
5．2．7重复性试验精密称取同一批号的供试品5份，分别按2．9项下方
法操作，测得的各组分含量的RSD分别为4．12％，4．39％(n=5)。
5．2．8加样回收试验：分别精密吸取已知含量的山楂配方颗粒提取液3份，
每份10mL，精密加入5mL混合对照品溶液，超声溶解，定容至刻度，摇匀，
以0．45“m微孔滤膜滤过，5．2．1，5．2．2项下条件测定各组分的含量，
计算回收率。各组分的平均加样回收率分别为103．07％，99．51％，85．03％。
5．2．9样品的测定：精密吸取各供试品溶液，按照5．2．1，5．2．2条件
进行测定，根据峰面积采用外标法计算出各组分的含量，结果见表26，
图25—27。
表26山楂配方颗粒有机酸含量测定结果(n=5)
-TICMRIIftt-，·ttlT+l-r00：I．d
05 } 、、—o
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Acquisi自onTime{min)
图25—1样品1混合溶液母离子图
图25．2样品1混合溶液组分1柠檬酸棒图及子离子图
图25．3样品l混合溶液组分2苹果酸棒图及子离子图
组图25 山楂配方颗粒样品1有机酸测定
．11CMRIIr．，1T+2-r003．el
83．25 ．仝
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0,0’50。,1 0．’15 0。,20．2。5 0。．3 0．3‘5 0’．4 0．4。5 0。5 0．5‘5 0‘．6 O．E‘5 0。．7 0,7。50。,8ob0,。9 0．9。5
AcquisitionTimefmin)
图26．1样品2混合溶液母离子图
e926-2样品2混合溶液纽分l柠檬酸棒图及子离子图
e926．3样品2混合溶液组分2苹果酸棒图及子离子图
组图26 山楂配方颗粒样品2有机酸测定
-TlCMRII1(．．‘’’T+甜∞?一
6．5— ， ＼
o．醅o：1o．i5o量o．孟o：3o．拓0：4o．j5 0．’5 o．5soko．酷017o_75o量o．bobo．9s
^田uism∞Time(ninl
图27．1样品3混合溶液母离子图
图27．2样品3混合溶液组分1柠檬酸棒图及子离子图
图27．3样品3混合溶液组分2苹果酸棒图及子离子图
组图27 山楂配方颗粒样品3有机酸测定
5．3．1实验结果表明，山楂配方颗粒中的有机酸含量较高。
5．3．2从选择的有机酸来看，广山楂中柠檬酸和苹果酸含量远远要高于酒
石酸，所以本实验把柠檬酸和苹果酸作为山楂配方颗粒中有机酸含量的
测定指标。
5．3．3本实验首次采用液质联用的方法测定山楂配方颗粒中有机酸的含
量，能准确测量出各类有机酸的具体含量，且本方法灵敏、准确，重现
性好，可用于山楂配方颗粒的质量控制。
[1]康廷国主编．中药鉴定学[M】．第5版．北京：中国中医药出版
[2]黄兆胜．中药学[M]．北京：人民卫生出版社，．
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[4】欧贤红，林启云，黄小琪．广西大果山楂对小鼠肠胃功能作用的实验
研究．广西中医学院学报，)：6．
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药，)：46．
[6】黄卫文，钟海雁，等．林檎叶中有效成分在小白鼠体内的抑菌作用．中
南林学院学报，)：54-57．
[7]文洁，周法兴．台湾林檎叶化学成分研究．中药材，)：
【8】陈勇，甄汉森，董艺．广山楂及其叶质量分析研究【J】．时珍国
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中药研究信息，)18．
广山楂化学成分、药材质量及药理研究进展
广山楂(商品名)又名大果山楂、山楂(广西)，古蝉子、乌婵子(广西
苗语)，麻缺顿，墨鸡屯(广西壮族)，撒多，撒两比(台湾)，为蔷薇科苹
果属植物台湾林檎坳．ftlSdoumeri(Bois)ChCV．和光萼林檎砌jus
leiocalyca&zEuang的干燥成熟果实。分布于安徽、福建、湖南、贵
州、云南、广东、广西、台湾、越南、老挝等地为主。其味酸、甘，性
微温，归脾、胃、肝经。而传统意义的山楂实为蔷薇科落叶灌木或小乔
木山里红Crataeguspinnatifida船e．髓r．majorMEBr．或山楂
CrataeguspinnatifidaBge．的果实。主要产于我国河南、江苏、浙江、
安徽、湖北等地。秋季果实成熟时采收，切片。晒干。生用或炒用。广
山楂应于传统概念上的山楂区分。成分上，广山楂主要合黄酮类，还含
齐墩果酸等有机酸、亚油酸等脂肪酸、鞣质、糖类、蛋白质及维生素c
等。具有消食化积、行气散瘀的功能u1。《新修本草》：“汁服主水痢，汁
头及洗身上疮瘁”。Ⅸ本草纲目》：“化饮食，消肉积，薇瑕，痰饮痞满吞
酸，滞血痛胀。”《本草求真》：“山楂所谓健脾者，因其脾有食积，用此
酸咸之味，以为消磨，俾食行而痰消，气破而滞化，谓之为健，止属消
导之健矣”口1。广山楂果实在广西作山楂习用已有八十多年历史，作为生
产的原料以及用于制作山楂饼，山楂糕等食品，在我国广西、湘南一带，
民间有饮林檎茶的习惯和嗜好口3。本文主要概述了近年来国内学者对广山
楂的有效成分、药材与制剂质量分析及药理作用的研究进展概况。
1广山楂的原植勋及生药学研究
广山楂为台湾林檎Malusdoumeri(Bois)Chev．和光萼林檎胁jus
leiocalyca&ZHuang的干燥成熟果实。原植物台湾林檎为落叶乔木，
高15m，嫩枝被长柔毛，老枝毛脱落，单叶互生，长椭圆形，嫩叶密被
白色绒毛，成熟时脱落，仅叶脉上被绒毛，花白色，先叶开放，花序近
似伞形，苞片膜质，萼筒倒钟形，外面被绒毛。子房下位，5室，每室有
2胚珠。果实球形，直径2．5-5．5cm。大果山楂饮片，类圆形，直径2—4．2
cm，外皮具皱纹，无小凸点，顶部切片有一长1-5衄的管状凸起，凸起
处被微绒毛或无毛；中部横切具5室，每室有2粒种子，种子遍平卵形，
浅棕色，有光泽，长8-14mm，肉质。外皮淡棕色，切面淡棕褐色，气微
清香，味酸，微甜。广山楂横切面：表皮细胞排列整齐，最外层为角质层。
外果皮细胞为三角形，不规则形，细胞壁增厚，内充满淡棕色至黄色色
素。中果皮占大部分。细胞呈不规则或多角形，石细胞随处可见，数年
相聚成团，呈长卵形，长方形，类圆形，或不规则形，胞腔大，孔纹清
晰。内果皮为薄壁细胞，散有维管束细胞及石细胞，石细胞较小，排列
紧密成团，薄壁细胞中充满淀粉粒，多为单粒类圆形H“1。
2广山植有效成分研究
现代研究表明广山楂含有丰富的黄酮类化合物，其中主要成分是槲
皮素、牡荆素、金丝桃苷、卢丁等。此外还含有有机酸类、三萜类等多
2．1有机酸类
主要有绿原酸(chlorogenicacid)、山楂酸(hawthorn)、熊果酸
(ursolicacid)、乌索酸(ursone)、五加皮酸(montanicacid)、咖啡酸
(caffeicacid)、对羟基肉桂酸(hydroxycinnamicacid)、对羟基苯甲
苹果酸(phydroxymethylmalica id)、2，3p 19一三羟基熊果酸(2，
3D，19一trihydroxyurs licacid)等，文杰等分离出根皮酸"1。也有
报道：以草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸作为对照品，以北山楂
作为对照药材，大果山楂为供试品进行薄层层析。结果供试品色谱与对
照品苹果酸、琥珀酸、草酸色谱对应处有斑点，表明大果山楂含有苹果
酸、琥珀酸、草酸，其中以苹果酸为有机酸类成分。
2．2黄酮类
主要有牡荆素(vitexin)，牡荆素-4-鼠李糖苷(vitexin?4rhamn
oside)，乙酰牡荆素一4一鼠李糖苷(ethylcylvitexin-4-arhamnOSide)，
牡荆素一4’，7一双葡萄糖苷(vitexin-4’，7-dualglucoside)，金丝桃
苷(hyperin)，2”一0一乙酰基牡荆素(2”-O-ethylacylvit xin)，6’’
一0一乙酰基牡荆素(6”一0一ethylac vitexin)，牡荆素一2”一O一鼠李糖
苷(vitexin一2”一0一rhamnoside)，pinnatifidaA，pi natifidaB，
山柰酚(kaempfer01)，7-0一L一鼠李糖一3—0一D-D-葡萄糖山萘酚(7-0一L—
rhamnose一3—0一D—D—91ucosekaempfer—01)，槲皮素(quercetin)，3-0-
p—D一吡哺葡糖槲皮素(3—0一p-D-glucosequer etin)，3-0一p—D一吡
哺半乳糖槲皮素(3—0一p—D-haifl ctoseque—rcetin)，3-0一D—D一吡
哺葡糖(6—1)一L一鼠李糖槲皮素[3-0-p-D-(6-1)glucose—a—L—rhamnose
quercetin]，3-0一P—D一吡喃半乳糖(6-1)-a-l-鼠李糖槲皮素[3-0一P—D—
halflactose(6—1)一rhamnoseque cetin】，芦丁(rutin)，4’一0一鼠李糖
芦丁(4’一O-glucoserutin)，PinnatifidaC和P nnatifidaD呤。1¨。陈
勇等n2，131用芦丁作为对照品，北山楂提取浓液作为对照药材浓液，与广山
楂及其叶的提取浓液作薄层光谱实验，结果表明大果山楂及其叶与北山
楂均含有芦丁，且含有相同的黄酮类成分。陈勇等还对北山楂，广山楂
及其叶的黄酮总量进行了含量测定，结果广山楂及其叶含量远比北山楂
高(约2倍多)。林启云等n41对广山楂成分进行了预试验，也表明广山楂有
黄酮类成分。
2．3三萜类
主要有熊果酸(ursolicacid)、桦木素(betulin)、熊果醇(uva01)
等。陈勇等n2，131用熊果酸作为对照品，用北山楂作为对照药材，大果山楂
及其叶为供试品，进行薄层层析，结果供试品色谱在与对照药材及对照
品色谱相应位置上有相同的紫红色斑点。表明大果山楂及叶与北山楂均
含有熊果酸，并且大果山楂的熊果酸含量高于北山楂。
2．4其他成分
主要有正三十一烷(hentriacontane)、十六烷酸二十八烷醇(hexa—
DeCanoic．OCtacsanolester)、二十烷酸三十八烷醇酯(eicosanic
acid，octatriacontylester)、二十九烷醇一10(nonacosylalcohol
-10)，谷甾醇(Sitoster01)，双一(5一甲酰基一糠基)醚[bis一(5-formyl
furfuryl)一eth-er】，胡萝卜苷(daucosterol，lx)，儿茶酚(catech01)，
盐酸二乙胺(diethylaminehydrochloride)，山梨醇(sorbit01)等，林
启云等D4’对广山楂化学成分进行了化学成分预测试，结果显示，其中还
含有苷类，萜类成分。黄卫文等n51从台湾林檎叶中分离得单宁成分，文
洁等n51从台湾林檎叶中分离得2个化合物，经鉴定为根皮酚和根皮酸。
3广山楂药材与制剂质量分析研究
对广山楂药材与制剂的质量分析研究主要薄层色谱法、酸碱测定法、
紫外分光光度法及高效液相法等。
3．1药材质量分析
张黎明等n胡以酶解一吸附澄清法提取山楂叶黄酮，用楂叶总黄酮的得
率为指标，确定最优工艺，结果发现采用酶解一吸附澄清法提取山楂叶总
黄酮，在固定料液比为1：2O的条件下，酶解温度55℃，酶质量浓度为
0．15mg／mL，酶解时间125min，酶解PH值5．o；在酸性或近中性的酶液中，
先加入zTc—II型天然澄清剂B，在40。C下作用40min，然后加入zTc—II
型天然澄清剂A，再在4O'C下保温作用40min，澄清剂B和A的用量分别为
1．29／L和0．69／L。
陈佳等n73用反相高效液相色谱法测定山楂叶及其提取物中2”一。一鼠
李糖牡荆素的含量，>XCl8柱为色谱柱，四氢呋喃一乙腈一水一磷酸(30：5：
125：0．1)为流动相，检测波长为270nm按外标法定量，结果发现2”一。一鼠
李糖牡荆素和牡荆素的平均回收率为99．21％。马晶等Ⅱ81以95％乙醇为溶剂
对山楂中熊果酸进行提取，采用双波长入1--535nm，入2=650nm方法扫描，
发现熊果酸在0．1～5心范围内具有良好的线性关系，平均加样r=0．9995，
回收率为100．10％，RSD=1．94％(n=3)，结果表明超声波法提取安全、
经济、准确、可靠。
马国等n卯用HPLC，色谱柱为Diamonsi1 TMCl8柱(200衄x4．6mm，
5pm)，流动相A为甲醇，B为乙腈一四氢呋喃(1：19)，C为O．5％冰醋酸，梯
度洗脱，同时测定2”一。一牡荆素葡萄糖苷、2’’--O-牡荆素鼠李糖苷、芦
丁、牡荆素和金丝桃苷的含量，结果表明五者的平均回收率为99．72％、
100．27％、99．48％、99．31％、100．83％，证明该法简便快捷，可用于山楂
的质量控制。
黄飞等乜0】通过由电子继电器、贝克曼温度计、水银温度计、恒温水
浴锅组成的控温油提装置，60-80℃水提，静置至清液到沉淀完全析出，
除杂后后测定多糖的含量，结果发现山楂叶粗品多糖KS的得率为2．4％。
汤树良等瞳妇对各产地的山楂药材，利用SymmetryShieldWaterRP 8
柱，乙腈一0．5％醋酸水，柱温40。C，进行梯度洗脱，以紫外波长355n删,
察，建立指纹图谱，为不同植物来源的山楂药材的鉴别提高依据。
3．2制剂质量分析
孔铭等乜21用高效液相色谱一蒸发光散色法测定复方利咽润喉颗粒中
熊果酸的含量，ODSC18为色谱柱，甲醇一水一冰醋酸(83：17：0．1)为
流动相，发现熊果酸回收率为98．54％，RSD为2．12％，证明该法是测定熊
果酸含量的好方法。
谢东幢3】用HPLC复方山楂颗粒中橙皮苷的含量，pXKromiSilC18柱为
色谱柱，甲醇一乙酸一水(35：4：61)流动相，检测波长为283nm，发现
橙皮苷在进样量O．104-5．209内平均回收率98．75％，RSD=I．16％，证明该
法具有良好的实用性。
朱勇等瞳钔采用薄层色谱法对复方降脂胶囊中的山楂成分进行检测，
按2000年版药典要求，以甲苯一醋酸乙酯一甲酸(20：4：0．5)为展开剂，
喷以10％硫酸乙醇溶液，结果发现供试品与对照品色谱位置上相应。
王旭等心51对大山楂口嚼片进行了定性定量的研究，采用显微鉴别和
薄层色谱法对山楂进行了定性鉴别，能检出相应的显微特征和山楂总黄
酮的薄层斑点；采用薄层扫描法对熊果酸进行了检测，含量为0．12～
0．599，有良好的线性关系，回收率97．7％。
4广山楂药理研究
现代药理学研究表明，广山楂的有效成分对消化系统、心血管系统、
调节脂质代谢、抗菌、保肝等方面具有良好的效果。
4．1心血管系统
对猫股静脉慢推入相当于1g／kg大果山楂提取物，对照组用山楂，
每10min记录1次血压，连续100rain。结果：大果山楂和药用山楂血压下
降平均百分率分别为18．8％和17．1％，表明两种山楂均有轻度降压作用旺61。
4．1．2对心脏的作用
用戊巴比妥钠减弱心脏收缩力，然后再加入用任氏液稀释的药物，
使蛙心套内的终末浓度为O．1％。此时，大果山楂和药用山楂使蛙心收缩
幅度分别增大5倍和l倍n61。
4．1．3降胆固醇及甘油三酯
喂高脂饲料的大鼠用大果山楂后，胆固醇含量为(109．3±19．9)
mg而对照组为(146．0±l8．33)rag；用大果山楂后甘油三酯含量则为
(75．19±18．3)mg，对照组为(94．2±23．99)mg。表明大果山楂可拮抗高
脂饲料引起血清胆醇及甘油三酯含量升高的作用乜"。山楂及山楂黄酮对
高脂高胆固醇有显著作用。山楂提取物测试对高脂病症的控制，分别对
高脂血症的SOD、血液中TCH、HDL数值进行测定，发现高脂小鼠的HDL／TCH
明显上升，并且有提高SOD活性的作用。表明山楂黄酮提取物对高脂血症
有明显的抑制作用n韶。山楂现代应用于消化不良，冠心病、心绞痛，高
脂血症、动脉粥样硬化，但胃切除患者食用会导致肠梗阻或者胃结石[291。
4．2对胃肠系统的影响
欧贤红等b01用容积法测定胃液量以观察BFH对胃液分泌的影响；采
用酸度计测定胃液pH并计算胃液的总酸度和总鼬F出量以观察其对胃液
分泌的影响；用麦特(Mett)改良法观察其对胃蛋白酶活性的影响；用乙
酰胆碱(Ach)、氯化钡(BaCl：)所致肠管兴奋以及阿托品(htr)致肠管抑制
等方面来考察BFH对小鼠离体小肠平滑肌的影响。结果为BFH能增加胃
液的分泌量、胃液的总酸度和总酸排出量，以及增加胃蛋白酶的活性和
胃蛋白酶排出量，对肠管有一定的兴奋作用。山楂醇提液对受刺激的太
鼠胃平滑肌活动有双向调节作用，收缩状态时可使之舒展，舒展状态时
则可以使之收缩，并使活动加强。表明口服山掊对胃肠功能紊乱有明显
调整作用，达到健脾消食作用。山楂含Vc、VB2、胡萝素及多种有机酸，
口服能增加胃中消化酶的分泌，并能增强酶的恬性，促进消化，其中所
含的解脂酶能直接帮助消化睹肪类食物．且能加强胃脂肪酶、蛋白酶的
活性b¨。山楂能增加胃消化酶的分泌，促进消化功能。其对胃肠功能具
有一定的调节作用，对活动亢进的兔十二指肠平滑肌呈抑制作用，而对
松驰的大鼠胃平滑肌有轻度增强收缩的作用，山楂醇提液对受刺激兔、
鼠离体胃肠平滑肌收缩具有明显的抑制作用。分离小鼠小肠一段，用去
甲肾上腺素O．1ml(相当于4“g)造成局部微循环障碍，3min后，在同一
部位滴入不同药液O．1m1。结果0．5％的大果山楂使肠系膜血流流态恢复
至用药前状态所需要的时间(4．52±1．68)min，对照组为(12．47±3．
83)min，说明大果山楂能促进肠系膜微血管循环的恢复b21。
4．4抑菌实验
用平板法观察大果山楂和药用山楂对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球
菌、奈氏球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌、溶血性链球菌、
绿脓杆菌，白喉杆菌的抑制作用，以最低抑制菌浓度(MIC)mg／ml为指标，
大果山楂的MIC为62．5，15．25，31．25，15．25，31．25，15．25，15．25：
药用山楂组为62．5，15．25，31．25，31．25，15．25，31．25，15．25，31-25，
15．25。结果表明大果山楂和药用山楂有较好的抑菌作用且强度相似。将
林檎叶用水、乙醇、石油醚浸泡，再以上述提取物对小鼠进行动物体内
抗金黄色葡萄球菌试验。结果表明，林檎叶提取液所含的单宁和皂苷具
有明显的体内抑制金黄色葡萄球菌作用b”。
4．5急性毒}生实验
用大果山楂浸膏对小鼠灌胃72h，LD5O为(44．6±4)g(按生药计)。
据资料报道，药用山楂对小鼠口服LD50为18．5g。故大果山楂比药用山
楂毒性要小得多。金雪萍D41以林檎叶5组不同提取液对小鼠进行急性毒
性实验和最大安全耐受量实验。结果表明，A，C，E，F组的浓度为2．6g／ml，
没有发现小鼠死亡，其最大安全耐受量倍数为132，认为安全无毒，而D
组的死亡率为80％，经进一步实验测定其半致死剂量为2．1g／m1，说明
经乙醇提取后，通过酸水溶解的生物碱具有毒性；以大果山楂总黄酮进
行急陛毒性实验和最大安全耐受量实验，结果表明大果山楂总黄酮最大
耐受剂量为1689／kg，相当于生药成人口服日用量(33．3g·kg～·d。1)的
678倍(按照生药的果山楂果实中大果山楂总黄酮的平均含量计)，认为安
全无毒‘341。
4．6保肝作用
潘莹等b5。71采用CCl。，hAP，TAA，D-Gal给小鼠一次性腹腔注射造成
急性肝损伤模型，运用大果山楂总黄酮灌胃预防给药，结果大果山楂总
黄酮对4种模型急性小鼠肝损伤具有明显的保护作用，其机理可能与其
保护肝细胞膜，抑制细胞膜脂质过氧化及避免肝内钙离子过量有关；通
过建立大鼠酒精性肝损伤模型，运用大果山楂总黄酮灌胃预防给药，检
测肝组织病理学改变和TC，TG，ALT，AST，SOD，MDA含量，以研究大
果山楂总黄酮的药理学效应。结果大果山楂总黄酮能减轻酒精所致的肝
细胞脂肪变性和坏死及抑制肝脏甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)和血液谷草
转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)
4．7对免疫系统的影响
李忠海等口剐观察到林檎叶的水提取物和乙醇提取物能明显提高小鼠
的免疫功能。
4．8对自由基的清除作用
钟海雁等n鲫分别采用Fenton反应和硫代巴比妥酸法(TBA)测定林檎
叶提取物对OH·的清除作用及对动物肝脏匀浆脂质过氧化的抑制作用。
结果表明，林檎叶经乙醇提取再经氢氧化钠溶解和醋酸乙酯溶解组分对
OH自由基有较好的清除作用，其清除率达70％以上，两组分同样有较好
的脂质过氧化抑制作用。
5．1有效成分研究表明广山楂的主要有效成分是有机酸类化合物，对其
它成分的提取工艺研究不算太深入。对有机酸的提取分离技术主要在于
高效液相、超声波分离、大孔树脂等法，在发展空间上大有可为，而上
述内容更可为以后广山楂有效成分研究提供可靠的指导。
5．2广山楂药材与制剂在分析技术上比较成熟，而且有效成分的检查效
果也比较好，证明各种来源的广山楂药材和各种广山楂制剂的质量都比
较可观。广山楂药材及其配方颗粒的有机酸含量都很高，有机酸具有非
常高的药用价值。因此，广山楂除可作水果与传统中药外，还可开发为有
机酸药物，为心血管及癌症疾病患者提供新型药物。Ifl前我国在这方面的
药物大多依赖进口，国内开发的产品几乎是空白。而我国广山楂资源十
分丰富，其开发利用仍有很大潜力，值得继续深入研究。
5．3广山楂在药理作用上主要用于消化系统的疾病，在现代科学的应用
下，逐渐发现其对心血管系统与调节脂质代谢的作用。证明山楂在现代
医学方面有比较可观的发展前途，值得广大医学工作者投入。
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本文是在江海燕教授悉心指导下完成的。三年来，导师不仅在学习
上给予我悉心的指导，为我创造了非常好的学习和科研条件，同时在生
活上也给予了我诸多的关心和帮助，在此谨对恩师表示最衷心的感谢和
崇高的敬意!
同时我要感谢谢丽莎教授、覃葆教授对本课题中期研究报告的建议，
感谢梧州药检所单位及其领导陈学松所长、刘慧研主任、罗达龙副主任
等在实验上的大力帮助扣支持。另外，我还要感谢师兄李兵老师、龚志
强老师、李阳杰、师姐付晓、师弟闫守霞等在实验中给予我的帮助。感
谢药学院2009垂．3．研究生(1)班全体同学的帮助和勉励!
特别感谢我的家人，是他们的支持与鼓励，他们无私的付出伴随着
我走过了这么多年求学生涯。
再次向三年来所有关心、支持和帮助过我的朋友们表示崇高的敬意
和衷心的感谢!
攻读学位期间发表的学术论文目录
[1】王乃平，袁艳，江海燕，李阳杰．液质联用测定山楂中有机酸的含量
[J】．中国实验方剂学，201o；17(10)：77—78
[2】覃葆，江海燕，刘英丽，袁艳，蒋文兰．不同产地广西莪术质量研究
[J]，安徽农业科学，)：602—603
广西中医学院研究生学位论文作者声明
本人声明：本人呈交的学位论文是本人在导师指导下取得的研究成
果。对前人及其他人员对本文的启发和贡献已在论文中作出了明确的声
明，并表示了谢意。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含
其他人和其它机构已经发表或者撰写过的研究成果。
本人同意学校保留本人学位论文并向国家有关部门或资料库送交
论文的复印件或者电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权广西中医
学院可以将本人学位论文的全部或者部分内容编入有关数据库进行检
索，可以采用影印、缩印或者其它复制手段和汇编学位论文(保密论文
在解密后应遵守此规定)。
作糊：立丛锄张也堕帆业年孚月玉日
姓名：袁艳 性别：女 出生年月：1982．I1
民族：汉族 籍贯：广西梧州 政治面貌：群众
求学经历：
2001年9月～2005年7月：广西师范大学化学专业，获得学士学位
2005年7月～2009年7月：广西梧州市第一中学任化学老师
2009年9月～2012年6月：广西中医学院中药学专业，硕士研究生
科研及工作情况：
2009年12月一：参与广西科技攻关项目“广西主产药材
山豆根、山楂药材及配方颗粒质量控制技术研究”的相关实验研究工作，
能熟练使用美国Agilent的HPLC-MASS、Agilent紫外分光光度计、岛津
LC20A等仪器及设备；掌握了中药材质量分析研究等方法，并完成了硕士
学位论文。}