大鼠肝再生中脂肪滴蛋白质组的差异分析--《复旦大学》2010年硕士论文
大鼠肝再生中脂肪滴蛋白质组的差异分析
【摘要】：
肝脏的再生机制是肝脏研究中一个关键而复杂的问题。对于这一涉及复杂调控网络的多阶段生理过程,全面系统的展示其分子基础至关重要。近几年,比较蛋白质组学技术的发展为研究肝再生分子机制提供了技术平台,迅速推进了肝再生相关效应因子、信号通路的数据积累。而针对亚细胞蛋白质组的研究策略能提供蛋白质的亚细胞定位信息,从而有助于研究者阐释其作用机理,更进一步理解其在肝再生整体调控网络中所处的位置。
脂肪滴(Lipid Droplets)作为脂质代谢调控的中心细胞器,广泛参与多种生理过程。研究显示脂肪滴与其他细胞器存在普遍的相互作用和分子交流,并能通过调节细胞内的脂质平衡,辅助细胞应对特定时期和状况下的细胞环境。近年有研究报道肝脏细胞内的脂肪滴在肝再生早、中期大量积累,与肝再生进程密切关联,但其中机制尚未明确,有待探讨。
本研究以2/3肝切除的大鼠为肝再生模型,首次应用八标iTRAQ (8-plex isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)技术结合2D LC-MS/MS以正常大鼠肝组织和假手术大鼠肝组织为对照,全面分析了再生早期(6h,12h)、中期(24h,48h)和晚期(72h,120h)肝脏细胞内脂肪滴蛋白质的表达差异,以期为深入探讨脂肪滴调控肝再生的机制做好铺垫。目前,课题主要获得如下结果。
第一、大鼠肝再生各时间点的脂肪滴蛋白质的质谱鉴定结果通过IPI数据库检索共得到248种蛋白质,对应到200个基因,与以往的脂肪滴蛋白质组研究结果比较,其中158个为本研究首次鉴定。利用GO(Gene Ontology)对这些基因的分子功能、生物过程和细胞组分的注释进行分类分析,结果提示脂肪滴蛋白质可能与细胞增殖状态相关,参与调节肝再生进程中脂肪合成、积累和分解代谢,以保持细胞能量供给稳定,提供生物膜合成底物,并调节胞内的氧化水平,防止胞浆中脂质过量形成的细胞毒性等。
第二、利用Protein Pilot软件给出的蛋白质定量信息,对各时间点的脂肪滴蛋白质的整体表达模式进行分层聚类分析,结果显示术后脂肪滴蛋白质组的表达变化与肝再生进程紧密相关：肝再生早期6h和12h的表达模式相似,而24h的与二者相近；随后48h和72h的表达谱相似,而120h的与二者相近；在这6个时间点中,肝再生晚期120h的蛋白表达变化最接近于假手术组。这些结果与我们的理论预期相符,也显示了八标iTRAQ技术是平行分析多组蛋白质样品的有效工具。
第三、本研究共发现29种蛋白质在大鼠肝再生过程中呈现差异表达,其中14种主体上呈上调表达,15种呈下调表达。如脂肪滴表面17-βHSD 11/13、ACSL的水平在术后24h显著上调,而脂肪结合蛋白L-FABP在肝再生24h-72h期间出现显著下调,这些蛋白质可能通过调节细胞内脂质的运输、合成和代谢,参与肝再生中损伤应激和细胞增殖等生物进程。
总结：本研究首次建立了脂肪滴蛋白质在肝再生中的动态变化图谱,发现了潜在的差异分子,并系统探讨了脂肪滴及其表面蛋白参与调节肝再生进程的可能途径和方式：1)参与细胞应激,调节胞内氧化水平;2)储存脂类,降低脂质过量产生的细胞毒性；3)保持脂质代谢平衡,供给细胞增殖所需能量和生物膜合成底物；4)募集和转运蛋白因子,与其它细胞器相互交流；5)暂存胞内大量合成的蛋白,收容失活异常蛋白辅助降解,维持细胞内环境平衡等。本研究为进一步研究脂肪滴功能和肝再生机理提供了有价值的线索。
【关键词】：
【学位授予单位】：复旦大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：Q4【目录】：
ABSTRACT6-8
一. 研究背景8-21
1.1 肝再生的蛋白质组学研究8-12
1.2 脂肪滴功能的研究进展12-20
1.3 本课题的目的与意义20-21
二. 材料与方法21-32
2.1 实验材料21-24
2.2 实验方法与步骤24-32
2.2.1 大鼠肝再生模型建立24-25
2.2.2 脂肪滴蛋白质提取25-28
2.2.3 蛋白质质谱鉴定28-29
2.2.4 蛋白质表达谱差异分析29
2.2.5 差异蛋白质的定量与定位验证29-32
三. 实验结果32-61
3.1 大鼠肝再生中脂肪滴的形成变化32-34
3.2 脂肪滴蛋白质提取效率34
3.3 蛋白质质谱鉴定及统计分析34-43
3.4 与已报道的脂肪滴蛋白质组比较43-48
3.5 鉴定蛋白质的功能分类48-53
3.6 蛋白质表达模式聚类分析53-56
3.7 差异蛋白质的定量与定位验证56-61
四. 讨论61-73
4.1 八标iTRAQ技术在比较蛋白质组研究中的应用61
4.2 脂肪滴蛋白质的分类及其对脂肪滴功能的提示61-65
4.3 差异蛋白质的功能分析65-73
五. 结论73-75
六. 参考文献75-90
硕士期间发表的论文90-91
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京公网安备75号检查粪便隐孢子虫需先除去脂肪滴--《临床检验杂志》1998年01期
检查粪便隐孢子虫需先除去脂肪滴
【摘要】：检查粪便隐孢子虫需先除去脂肪滴阮秀勤张永侠（利辛县人民医院检验科，安徽２３６７００）刘卫东赵磊（利辛县卫生防疫站检验科）应用改良抗酸染色法查粪便隐孢子虫的涂片在用甲醇固定前，滴加乙醚溶解并洗去脂肪滴，然后再固定染色，使与隐孢子虫囊染色相似的脂滴性红色...
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R446.139【正文快照】：
检查粪便隐孢子虫需先除去脂肪滴阮秀勤张永侠（利辛县人民医院检验科，安徽２３６７００）刘卫东赵磊（利辛县卫生防疫站检验科）应用改良抗酸染色法查粪便隐孢子虫的涂片在用甲醇固定前，滴加乙醚溶解并洗去脂肪滴，然后再固定染色，使与隐孢子虫囊染色相似的脂滴性红色颗
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不同蚕蛹油中脂肪酸的性状及组分分析
研究不同蚕蛹油的脂肪酸种类和相对含量.采用气相色谱-质谱方法,对KOH/CH3OH酯交换法甲酯化4种不同的蚕蛹油进行定量分析.结果表明:柞蚕蛹、蓖麻蚕蛹、家蚕蛹及剿丝后家蚕蛹油的酸价、皂化值和过氧化值存在显著差别;4种蛹油的脂肪酸成分的种类都以棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸为主,但含量存在显著区别;4种蚕蛹油中,柞蚕蛹油的不饱和脂肪酸相对含晕是最高的,达77.29%;蓖麻蚕蛹油的α-亚麻酸相对含量最高,为50.52%;缫丝后家蚕蛹油不饱和脂肪酸的相对含量比缫丝前降低.
PAN Wen-juan
FANG Ting-ting
LIAO Ai-mei
ZHANG Hai-xiang
WEI Zhao-jun
作者单位：
合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009:
合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥师范学院生命科学系,安徽,合肥,230061
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