中国人民解放军军事医学科学院 博士学位论文 药物致QT间期延长体外HIRG通道评价模型的建立及其应用 姓名：复静 申请学位级别：博士 专业：卫生毒理学 指导教师：彭双清 中文摘要 药物致QT间期延长体外HERG通道评价模型的建立及其应用 中文摘要 博士生：夏静 导师：彭双清 临床使用的许多药物能够引起心脏QT间期延长，导致室性心律失常，增加发生 de 尖端扭转型室性心动过速(1’orsade 间期延长已超过肝损伤，成为导致药品撤市的主要原因和制药T业必须面对的首要安 全问题。QT间期在细胞水平代表心室肌细胞的动作电位时程(actionduration， potential APD)加上传导时间，APD的长短与膜电位的复极化密切相关。快速延迟整流钾电流 (the rectifier cullreIlt，I鼬)是动作电位复极期的主要 rapidlyactivatingdelayed potassium 外向钾电流，HERG基因(human ether-a．go—go．relatedgene)普遍认为编码II(r的a亚 单位，其表达形成的HERG钾通道与Il(r性质相似。很多实验证实凡是能够诱导QT间 极化的重要指标。因此，采用膜片钳电生理试验方法进行体外HERG通道检测成为综 合评估TdP危险性的重要部分。 目前，HERG通道检测已成为药物早期筛选和安全性药理实验的重要内容。而我 国相关试验并未广泛开展，尤其是对中草药致QT间期延长的风险评估严重滞后。近 年来，国内外中草药毒性引发心血管不良反应案例频发。基于以上现状，建立药物致 Chinesemedicine， QT间期延长的体外HERG通道模型并应用于传统中药(traditional TCM)的心脏毒性评估和机制研究，具有重要的理论和现实意义。因此，本研究拟采 用全细胞膜片钳技术，建立HERG离子通道模型，并选用具有明显心血管药理活性的 中药单体环维黄杨星D和蝙蝠葛碱，对其进行HERG电流抑制作用评价和机制研究。 首先，利用膜片钳全细胞记录技术建立HERG通道模型。采用原代培养心肌细胞， 形成全细胞模式后，记录到电压门控性钠、钾、钙电流。利用转染并稳定表达HERG mV， 电流的抑制效应。HERG的电流电压关系表明，步阶电流呈“钟型”，．40～+lO 随电压的升高，电流幅度迅速增加；+lO～+40mV，由于C型失活，电流幅度随电压 升高反而下降。尾电流在去极化时迅速上升，在+10mV时已接近峰值。以上电流的特 点与文献报道基本一致。此外，为判断HERG电流对药物的敏感性，试验采用阳性药 中文摘要 呈剂量依赖性，半数抑制浓度IC50分别为0．042 pM和O．038pM，结果与文献报道一致。 本部分从电生理和药理学阻断剂两方面均验证了记录电流为Il(r，表明药物致心脏QT 间期延长体外HERG通道评价模型已成功建立。 在此基础上，本研究利用建立的HERG通道模型，对环维黄杨星D和蝙蝠葛碱进 行抑制作用评价。早期心脏毒性筛选时，判断药物对HERG电流的抑制效应一般采用 尾电流峰值减小的程度

中国人民解放军军事医学科学院 博士学位论文 药物致QT间期延长体外HIRG通道评价模型的建立及其应用 姓名：复静 申请学位级别：博士 专业：卫生毒理学 指导教师：彭双清 中文摘要 药物致QT间期延长体外HERG通道评价模型的建立及其应用 中文摘要 博士生：夏静 导师：彭双清 临床使用的许多药物能够引起心脏QT间期延长，导致室性心律失常，增加发生 de 尖端扭转型室性心动过速(1’orsade 间期延长已超过肝损伤，成为导致药品撤市的主要原因和制药T业必须面对的首要安 全问题。QT间期在细胞水平代表心室肌细胞的动作电位时程(actionduration， potential APD)加上传导时间，APD的长短与膜电位的复极化密切相关。快速延迟整流钾电流 (the rectifier cullreIlt，I鼬)是动作电位复极期的主要 rapidlyactivatingdelayed potassium 外向钾电流，HERG基因(human ether-a．go—go．relatedgene)普遍认为编码II(r的a亚 单位，其表达形成的HERG钾通道与Il(r性质相似。很多实验证实凡是能够诱导QT间 极化的重要指标。因此，采用膜片钳电生理试验方法进行体外HERG通道检测成为综 合评估TdP危险性的重要部分。 目前，HERG通道检测已成为药物早期筛选和安全性药理实验的重要内容。而我 国相关试验并未广泛开展，尤其是对中草药致QT间期延长的风险评估严重滞后。近 年来，国内外中草药毒性引发心血管不良反应案例频发。基于以上现状，建立药物致 Chinesemedicine， QT间期延长的体外HERG通道模型并应用于传统中药(traditional TCM)的心脏毒性评估和机制研究，具有重要的理论和现实意义。因此，本研究拟采 用全细胞膜片钳技术，建立HERG离子通道模型，并选用具有明显心血管药理活性的 中药单体环维黄杨星D和蝙蝠葛碱，对其进行HERG电流抑制作用评价和机制研究。 首先，利用膜片钳全细胞记录技术建立HERG通道模型。采用原代培养心肌细胞， 形成全细胞模式后，记录到电压门控性钠、钾、钙电流。利用转染并稳定表达HERG mV， 电流的抑制效应。HERG的电流电压关系表明，步阶电流呈“钟型”，．40～+lO 随电压的升高，电流幅度迅速增加；+lO～+40mV，由于C型失活，电流幅度随电压 升高反而下降。尾电流在去极化时迅速上升，在+10mV时已接近峰值。以上电流的特 点与文献报道基本一致。此外，为判断HERG电流对药物的敏感性，试验采用阳性药 中文摘要 呈剂量依赖性，半数抑制浓度IC50分别为0．042 pM和O．038pM，结果与文献报道一致。 本部分从电生理和药理学阻断剂两方面均验证了记录电流为Il(r，表明药物致心脏QT 间期延长体外HERG通道评价模型已成功建立。 在此基础上，本研究利用建立的HERG通道模型，对环维黄杨星D和蝙蝠葛碱进 行抑制作用评价。早期心脏毒性筛选时，判断药物对HERG电流的抑制效应一般采用 尾电流峰值减小的程度

病情分析：过敏也叫过敏反应，又称变态反应，是一种不正常的免疫反应，指特异体质对正常人可耐受的外界物质（如花粉、宠物毛屑、鸡蛋、牛奶等）产生的过敏反应，体内产生了针对这些特异性抗体----免疫球蛋白e.过敏性疾病是以过敏反应为病理生理基础的一组疾病，通常包括过敏性鼻炎、鼻结膜炎、哮喘、特应性皮炎和接触性皮炎、荨麻疹和血管性水肿及过敏性休克、昆虫过敏、药物过敏、食物过敏等。过敏性疾病的临床症状可以从轻微的喷嚏到危及生命的哮喘急性发作及过敏性休克，症状可以涉及全身几乎所有的器官和系统。常见的症状有：1.耳鼻喉症状：鼻痒、喷嚏、流涕、鼻塞、耳痒。2.眼部症状：眼痒、流泪。3.呼吸道症状：咳嗽、喘息、胸闷。4.消化道症状：腹痛、腹泻。5.皮肤科症状：风团、水肿及其他皮疹等。常见的过敏原可分为：1.食入性过敏原：鱼、虾、蟹、牛奶、鸡蛋、腰果及某些口服药物等；2.吸入性过敏原：尘螨、花粉、霉菌、宠物皮屑；3.注入型过敏原：昆虫叮咬毒液及某些注射型药物；4.接触性过敏原：染发剂、化妆品、乳胶制品及镍制品等。经常对以上过敏原过敏的人群的体质，就是过敏体质。由于过敏的原因不同，所有需要准备的药也不尽相同。如有过敏还是应及时就医。