elisa双抗体夹心法免疫层析技术原理是什么?

正处于此行业中,希望对你有帮助。1 胶体金免疫层析试纸条定义
以胶体金为显色媒介、利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理,在层析过程中完成这一反应,从而达到检测的目的。组成:样品垫、金垫(微孔)、硝酸纤维素膜(NC膜),吸水垫组成,互相衔接粘贴在PVC底板上。胶体金试纸产品一般有两种模式:金垫模式和微孔模式形式金垫模式:其实就是卡扣-金垫模式,这种试纸一般已经预先装在了卡扣当中,使用时,直接加入样品即可。卡扣-金垫模式:最左边是加样孔卡扣-金垫模式,内部试纸条结构微孔模式:有时胶体金会以独立于试纸外的微孔来包装储存,使用时需要将样品先加入到微孔之中混合均匀,然后再滴加到样品垫中。微孔模式:分为微孔和试纸条两个部分,先将样品加到微孔中混合均匀(微孔里是已经冻干了的金标抗体),然后再将试纸条插入微孔中,使样品自动向上层析。微孔模式:试纸条内部结构2
试纸条方法分类双抗体夹心法适用范围:大分子检测,检测病毒抗原的大多数都是用这种方法。大的抗原分子有多个抗原位点 判读方法:C线显色时,T线显色则为阳性,T线不显色则为阴性竞争法适用范围:小分子检测小分子只有一个抗原位点,不能同时结合两个抗体。判读方法:C线显色时,T线显色则为阴性,T线不显色则为阳性(和双抗体夹心法是相反的判读!!!)3 涉及三大技术——胶体金技术:为诊断提供肉眼可见的显色媒介——层析载体技术:NC膜、吸水纸、样品垫、金垫——免疫学技术:识别系统:特异性的检测样本中需要检测的物质(抗原抗体识别系统和受体识别系统)4 胶体金免疫学原理试纸条中最为关键技术,产品质量50-70%是取决于抗原和抗体性质,其他性能是产品体系来实现。抗体:特异结合——钥匙和锁的关系抗体识别单个药物或一大类药物例如:黄曲霉毒素M1等金标抗体是什么?胶体金是一群以胶体状态,粒径在微米级以下的悬浮于水溶液中的金的颗粒 ,在免疫标记技术中较常用的一种非放射性示踪剂。也就是说,金标抗体,就是和胶体金结合在一起的抗体,相当于给抗体染了色。这样的话,原本我们肉眼看不到的抗体,就能因为有颜色而被我们看到。以竞争法的试纸条(微孔形式),测试样品中是否含黄曲霉毒素M1(AFM1)为例:竞争法:就是微孔已经有了我们的金标抗体(这个金标抗体能和特定抗原特异性结合)。T线处已经预先包被了抗原(这个抗原和样品中的抗原一样),这个时候,样品中的抗原和T线处的抗原就是情敌关系,它俩都想和金标抗体结合,所以叫做竞争法。如果是和样品中的抗原结合,那就没得和T线结合了,T线就没有金标抗体,就没有颜色。如果样品里没有抗原,那这个金标抗体就会和T线结合,T线就会有红色。C线是质控线,包被了二抗,这个二抗无论如何都可以金标抗体结合,用于查看产品是否正常反应。如果C线都不显色,那这个检测就是无效的,建议重新测一次。如果待检样品中无抗原存在,金标抗体在泳动过程中先和T线包被抗原结合,形成肉眼可见红线,多余金标抗体继续泳动和质控线(C线)包被的羊抗鼠二抗结合,也形成一条肉眼可见红线。如果待检样品中有抗原存在,则样品中的抗原、T线处包被抗原竞争和金标抗体结合,T线的包被抗原被抑制,从而T线不显色,样品中的抗原和金标抗体结合后继续泳动,直到和C线的二抗再次结合。}

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