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测试甲胎蛋白诊断肝癌的标准是什么？
测试甲胎蛋白诊断肝癌的标准是什么？测试甲胎蛋白（AFP）的意义在于能对肝癌作出定性诊断。全国肝癌研究防治协作会议拟定的甲胎蛋白诊断肝癌的标准为：“对流电泳法阳性或放射免疫法≥400μg/L,持续4周，并排除妊娠、活动性肝病及生殖腺胚胎源性肿瘤。”按此标准对肝癌进行定性诊断，其准确率极高。若AFP高于正常（20μg/L<AFP<400μg/L）值，则必须进一步作检查，并密切随访。大多数小肝癌病例都是在这组患者中筛选出来的。
　　测试甲胎蛋白（AFP）的意义在于能对肝癌作出定性诊断。全国肝癌研究防治协作会议拟定的甲胎蛋白诊断肝癌的标准为：“对流电泳法阳性或放射免疫法≥400μg/L,持续4周，并排除妊娠、活动性肝病及生殖腺胚胎源性肿瘤。”按此标准对肝癌进行定性诊断，其准确率极高。若AFP高于正常（20μg/L<AFP<400μg/L）值，则必须进一步作检查，并密切随访。大多数小肝癌病例都是在这组患者中筛选出来的。
　　但AFP阳性并不一定都是肝癌。因为很多情况下均可出现AFP阳性。如慢性活动性肝炎、新生儿时期任何原因引起的肝脏病变、源于卵囊器官的肿瘤、生殖系统肿瘤、妊娠妇女等均可出现AFP阳性，但其阳性多为一过性的、低水平的，极少大于400μg/L.
　　此外，AFP阴性也不能绝对排除肝癌可能。因为AFP的阳性率一般只有60%~70%,大约1/3的肝癌患者AFP呈阴性，这部分患者的AFP目前还无法测出。以上就是关于的解答。
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国家中医药管理局113工程培养的全国首批肝病治疗专家，跨世纪学科带头人。对慢性肝炎、病毒性肝炎(大/小三阳、丙肝、戊肝等)... []
杭州同济医院肝病研究室主任、浙江省中西医结合医学会肝病专业委员会委员、温州医学院兼职教授、主任医师。理论功底扎实，积累了几十年... []
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AFP与AFU和CAl9-9联合检测对原发性肝癌的诊断意义
发布时间：
【题　名】AFP与AFU和CAl9-9联合检测对原发性肝癌的诊断意义
【作　者】许可银 张弘 朱郁飞
【机　构】南通大学附属医院消化内科 江苏南通226001
【刊　名】《现代医药卫生》2011年 第24期 页　共2页
【关键词】原发性肝癌 肿瘤标志物 甲胎蛋白 岩藻糖苷酶 糖类抗原
【文　摘】目的：探讨肿瘤标志物甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）、α-L-岩藻糖苷酶（alpha-L-fucosidase,AFU）、糖类抗原（CAl9-9）联合检测在原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma,PHC）诊断中的应用价值。方法：应用电化学发光免疫分析法和全自动生化分析仪法测定70例PHC患者和50例正常对照组血清AFP、AFU、CAl9-9的含量,并分析对PHC诊断的敏感性和特异性。结果：PHC组AFP、APU、CAl9-9水平明显高于正常对照组,差异极有统计学意义（P〈0.01）;AFP、AFU、CAl9-9单个肿癌标志物诊断PHC的敏感性分别为65.7%、87.1%、50.8%,特异性分别为92%、62%、78%;3种肿瘤标志物联合检测在PHC诊断中的敏感性和特异性分别为98.6%和98%,联合检测的敏感性与单项检测差异极有统计学意义（P〈0.01）。结论：AFP、AFU、CAl9-9联合检测对PHC有一定的诊断价值,尤其可提高AFP阴性PHC的诊断率。
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AFP、GGT-Ⅱ和MMP-9联合检测对原发性肝癌诊断的意义
【摘要】：我国是肝病大国,每年有13万患者死于肝癌,占全球肝癌死亡总数的45%。近来随着肝癌治疗的进展,早期肝癌规范化治疗可提高肝癌的生存率。因此对于提高原发性肝癌(PHC)的诊断率成为当前医学发展的一项重要任务。甲胎蛋白(AFP)作为原发性肝癌特异的肿瘤标志物,应用于临床诊断PHC已有20余年。它是目前诊断PHC的一项重要指标。但近年来亦发现一些良性肝胆疾病患者中AFP 也可呈高值,与PHC 有一定程度的重叠,更重要的是有部分PHC 患者AFP 呈低值甚至为阴性,有的文献报道其阴性率可达30%以上。因此以单一AFP作为PHC的肿瘤标志物容易造成PHC的漏诊和误诊,近年来国内外学者对于其他的肝癌标志物如基质金属蛋白酶同工酶9(MMP-9)、γ-谷氨酰转肽酶同工酶-Ⅱ(GGT-Ⅱ)等的研究取得了一定的进展,故考虑将多个肝脏肿瘤标志物联合检测逐渐成为临床提高原发性肝癌确诊率的趋势。本文拟对30 例PHC 患者的血清或血浆AFP、GGT-Ⅱ、MMP-9联合检测,并以其他66例(包括各型肝硬化30例、各型肝炎20 例、肝转移癌6例及正常对照者10 例)为对照,拟证明三者联合检测比其单独检测可以明显提高PHC的确诊率。
检测结果显示:GGT-Ⅱ作为一个肝癌标志物,其在PHC 患者中的检出率较高,达93.3%,明显优于AFP 单项检测的73.3%的检出率。特异性亦高达90.91%,略低于AFP 的95.45%。MMP-9 在发生肝外转移的PHC 患者血浆中的浓度明显高于未发生肝外转移的患者。表明检测血浆中的MMP-9 的对于判断PHC 患者是否发生肝外转移具有重要意义。AFP、GGT-Ⅱ、MMP-9三者联合检测可明显提高PHC 的检出的灵敏度、阴性预示值,降低漏诊概率,故有必要进行肿瘤标志物的联合检测。
【关键词】：
【学位授予单位】：吉林大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2005【分类号】：R735.7【目录】：
文献综述7-13
参考文献13-17
材料与方法18-27
参考文献39-42
中文摘要42-45
英文摘要45-50
导师及作者简介51
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日期:来源:本站作者:张锐 点击:次
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作者：张锐&&&&作者单位：(吉林省肝胆病医院，吉林 长春 130062)
【摘要】& 目的：探讨肿瘤异常蛋白(Tumour abnormal protein,TAP)、 AFP mRNA对肝癌的诊断价值。方法： TAP测定利用末梢血，借助特殊凝聚助剂，用显微镜观察特异形态凝聚物，按形态结果分为阳性、阴性及临界。AFP mRNA荧光定量PCR法检测。结果：原发性肝癌TAP阳性率为94%(47/50)，明显高于肝硬化20%(10/50)及慢性肝炎10%(5/50)阳性率。16例AFP阴性TAP阳性率为81%(13/16)。6例肝癌手术切除2周后TAP逐渐转阴，而用肝动脉栓塞化疗术则TAP不转阴，AFP mRNA早期肝癌Ⅰ期6例、Ⅱ期11例阳性，50例肝癌患者中72%(36/50)阳性,其中肝外转移阳性率100%(30/30),无肝外转移阳性率45%(9/20),慢性肝炎10%(5/50),肝硬化22%(11/50)。结论：TAP、 AFP mRNA在慢性活动性肝炎和肝硬化的恶变和肝癌的早期诊断中有一定的意义
【关键词】& 肿瘤异常蛋白;AFP mRNA;原发性肝癌
恶性肿瘤是当今威胁人类健康和生命的主要疾病之一，成为仅次于心脑血管疾病的人类第二大死亡原因，且发病率呈上升趋势，引起了全世界的普遍关注。原发性肝癌在我国是第3位常见的恶性肿瘤，且近年发病率有上升的趋势。肝癌起病隐匿，早期缺乏典型临床症状，因而早期诊断对肝癌的治疗显得尤为重要[1-2]。从发生原位癌起发展到早期浸润癌需经过1年、数年或更长时间，从早期癌发展成中、晚期癌，往往也需要1年或数年时间[3]。在亚临床期，人的免疫系统还没有太多的损伤，是治疗的最佳时机。能否在肿瘤的亚临床期即检测出来，是本文用肿瘤异常蛋白(TAP)、AFP mRNA检测结果要证明的问题。
　　1 资料与方法
　　1.1 研究对象：肝癌50例(肝外转移30例，无肝外转移20例)，慢性肝炎标本50例，肝硬化标本50例，健康人20例。
　　1.2 仪器和试剂：TAP检测系统和TAP凝聚助剂。浙江慈溪市引进苏联伽利欣博士的技术。自动荧光PCR分析仪采用PE7700自动荧光PCR仪(美国Perkin)。
　　1.3 方法
　　1.3.1 TAP的检测：①制片：采末梢血1滴，推制厚薄均匀的血片3张置水平台上，自然干燥;②染色：将已干燥血片移置操作水平净化台内，10 min后用滴管垂直将凝聚助剂加在血片上，每张血片加3滴，1.5～2 h后，形成圆形斑点;③显微镜检测：用4X平场消色差物镜，观察血片上的3个斑点，寻找特异形态的凝聚物;④结果判断： 阳性：凝聚物颗粒直径&38 &m，边缘完整，呈椭圆形、不规则形或多边形，具有折光性，中央有淡染区，部分周边有弧形条带状小颗粒形成。临界：直径&38 &m，凝聚物形态类似阳性颗粒。阴性：斑点呈雪花状、树枝状，无上述颗粒。
　　1.3.2 AFP检测:微粒子发光法(美国雅培公司)。
　　1.3.3 荧光定量PCR检测AFP mRNA方法的建立：①引物、探针的设计、合成： 从GenBank中调出AFP的DNA和RNA序列，由上海博亚生物有限公司合成;②MGB探针的设计、合成：根据美国PE公司提供的引物探针设计软件，设计由上海基康生物工程公司合成;③荧光定量PCR检测外周血中AFP mRNA：标本收集和总RNA的提取：各组于晨起空腹抽外周静脉血5 ml，枸椽酸钠抗凝，以淋巴细胞分离液密度离心法分离外周血单个核细胞(PMNC)。标本冻于-80℃，用TRInol试剂提取PMNC总RNA，逆转录成cDNA;④荧光定量PCR检测外周血中AFP mRNA 反应体系：5&PCR buffer 10 &l,上下游引物各0.3 &mol/L,10 mmol dNTPs 1 &l,探针0.06 &mol/L,Taq DNA聚合酶3 U，cDNA或阳性模板5 &l,加无菌去离子水至50 &l。加5 &l于不同的反应管中，在PE7700扩增仪上进行扩增。反应条件：93℃ 2 min，93℃ 30 s，60℃ 1 min，共40个循环，所有反应信息资料被PE7700扩增仪收集并储存于其附件Macintosh电脑(含相应的分析软件)中，反应结束后该电脑根据阳性定量标准模板的扩增情况自动绘制标准曲线。根据阳性定量模板和待测样本的扩增情况，算出反应体系中待测样本中cDNA的拷贝数。
　　2 结果
　　2.1 TAP与AFP检测结果：见表1。肝癌患者中，16例AFP阴性，其中TAP阳性13例(81%)。
　　2.2 肝癌大小与TAP的关系：见表2。6例肝癌手术切除2周后TAP逐渐转阴，而用肝动脉栓塞化疗术则TAP不转阴。
　　2.3 肝病患者AFP mRNA检测结果：见表3。20例健康人AFP mRNA均阴性。29例原发性肝癌AFP mRNA阳性标本血清中AFP阴性7例。AFP mRNA早期肝癌Ⅰ期6例、Ⅱ期11例阳性,进行24～50个月的追踪观察发现患者外周血AFP mRNA与肝癌复发呈正相关。表1 各组TAP与AFP检测结果[例(%)]表2 肝癌大小与TAP的关系表3 AFP mRNA与肝病的关系
　　3 讨论
　　AFP是肝癌较特异的标记物，约70%患者AFP可呈阳性，但另有30%肝癌患者阴性及部分慢性肝炎、肝硬化患者AFP阳性，影响了AFP对肝癌的诊断价值[4]。TAP在肝癌患者中显示出较高的阳性率，且与AFP阳性不重叠，在16例AFP阴性的肝癌患者中，TAP阳性13例(81%)，说明TAP的阳性不依赖于AFP的存在，可能为肝癌代谢时所释放的其他代谢物所形成。
　　癌细胞在代谢过程中会向血液中排放出一种异常糖蛋白，当癌细胞的数量达到约10E+5或10E+5以上时，TAP可测出血液中的异常糖蛋白，癌细胞数量从10E+5发展到10E+9，至少需要1～3年时间，也就是说，TAP可在形成临床癌块前约1～3年就能检查出癌症。
　　在50例肝癌患者TAP阳性47例,阳性率为94%,AFP阳性34例,阳性率为68%，在16例AFP阴性的肝癌患者中TAP阳性13例(81%),提示TAP在肝癌诊断中比AFP更灵敏、更有价值。如果与AFP联合检测可明显提高肝癌的检出率，不同程度弥补了AFP在肝癌诊断中的不足之处。
　　TAP是由苏联学者Kostyantin&A&Galakhin发现，是癌细胞在其新陈代谢过程中排放出来的异常糖蛋白和钙-组蛋白复合物。初步的临床验证表明，TAP对恶性肿瘤的灵敏度达93.2%或86.44%，特异性为92.6%或98.1%(前者视临界值定为阳性，后者视临界值为阴性)。本文所检测肝癌50例，其中有47例TAP阳性，阳性率为94%，明显高于慢性肝炎、肝硬化组(10%、20%)。结果提示恶性肿瘤的TAP阳性率高，可用于恶性肿瘤的筛选。肝硬化一般可视为是肝癌的癌前病变，但并非所有肝硬化都会发生肝癌，这可能是肝硬化TAP阳性率较低的原因。因此TAP可作为肝硬化与肝癌鉴别的手段之一，特别是伴有硬化结节，CT、MRI难于鉴别时，TAP有助于肝硬化与肝癌的鉴别。
　　TAP检测结果为阴性，可排除有肿瘤生长的迹象。 TAP检测结果为阳性，而无临床症状者，应于1个月后复测。如一次复测结果为阴性，则可排除恶性肿瘤。复测结果仍为阳性，应进一步做其他方法的检查。如其他方法的检查仍未发现异常者，则应在1个月后再复测一次。如复测结果仍为阳性者，则应进行预防性阻断治疗并继续跟踪做定期(3个月一次)复测以达到转阴为止。
　　TAP用于健康人群的体检，如果检查结果阴性，从癌细胞分裂增殖成癌肿块的时间来看，至少可以保证受检者1年内不会产生临床癌，如果我们每年进行一次TAP检测，临床癌的发生会得到有效监控。
　　TAP检查会发现许多亚临床期癌症患者，这些人群过去往往被认为是&假阳性&，但从癌症的发生发展过程来看，我们每个人每天有几百万细胞发生突变，可见体内携带癌细胞的人群非常多。TAP还不能检测出体内携带少量癌细胞(10E+5以下)的人群，但已经给我们提供了非常重要的信息，只要我们抓紧时间，就能使大量的TAP阳性患者免受临床期癌症的痛苦。
　　AFP阳性率与肝癌大小有一定关系。有报道，HCC &3 cm者AFP阳性率仅为25%～50%，4 cm HCC AFP多达400 &g/L,5 cm者可达700～1 000 &g/L[5]。但事实上AFP与肿瘤大小的关系并不十分密切。本文结果TAP阳性与肿瘤大小也无一定关系，提示决定TAP阳性是肿瘤细胞所分泌的异常糖蛋白，并非决定肿瘤细胞的多少。其实有研究表明接近或进入终末期的癌症患者，TAP常呈阴性，认为终末期时癌细胞代谢下降，所分泌的糖蛋白也因此下降有关[6-7]。由于TAP阳性率与肿瘤大小无关，使更多更早期的肿瘤被发现。
　　TAP作为临床期癌症的检测方法，具有灵敏度高、适用癌谱广泛、患者无痛苦等优点，是其他检测方法无法比拟的。TAP对几乎所有癌肿都有较高的灵敏度，在10E+6个肿瘤细胞时，就能测到TAP的存在，此时肿瘤的肿块直径&0.1 cm，肿瘤内尚未形成血管，具有可逆性，对药物干扰非常敏感，是肿瘤治疗的最佳时期。这对癌症患者是至关重要的。
　　对6例肝癌手术切除2周后TAP逐渐转阴，而用肝动脉栓塞化疗术则TAP不转阴，提示TAP有预示肿瘤复发的价值，但确切的价值有待于长期随访观察才能最后确定。
　　荧光定量PCR技术既巧妙地利用了PCR技术核酸扩增的高效性，探针技术的高特异性和光谱技术的高敏感性及计量高准确性等优点，同时又克服了普通PCR技术易污染，不能定量，探针杂交灵敏度不高，分离洗脱条件不易控制等不足，在疾病的基因诊断中有广阔的应用前景。
　　采用荧光定量PCR技术检测外周血中AFP mRNA在50例肝癌患者中72%(36/50)阳性,其中肝外转移阳性率100%(30/30),无肝外转移阳性率45%(9/20),慢性肝炎10%(5/50),肝硬化22%(11/50)。表明外周血中AFP mRNA检出率与肝肿瘤大小、临床分期及有无肝外转移密切相关。
　　原发性肝癌(肝外转移、无肝外转移)、肝硬化AFP mRNA拷贝在1.42E4～7.69E8之间,而慢性肝炎AFP mRNA拷贝仅在1.08E3～5.21E5之间，提示AFP mRNA在外周血中的数量与病情有密切关系。
　　AFP mRNA早期肝癌Ⅰ期6例阳性，Ⅱ期11例阳性，进行24～50个月追踪观察发现患者外周血AFP mRNA与肝癌复发呈正相关。提示AFP mRNA的表达可以促进肿瘤的生长[5]，推测外周血中AFP mRNA也许是肝癌在早期复发的一个指标，并且连续检测外周血AFP mRNA可以作为一个预后因子。
　　在29例原发性肝癌AFP mRNA阳性标本血清中AFP有7例阴性，说明AFP mRNA比血清AFP更敏感,联合检测外周血中AFP mRNA可能有助于提高血清AFP阴性或低阳性肝癌的诊断灵敏度,在慢性活动性肝炎和肝硬化的恶变检测和肝癌的早期诊断上也有一定的意义
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(责任编辑：竹)
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