EB病毒核酸定量仪检测(EBV-DNA)小

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EBV-DNA阳性是EBV存在的直接证据由于潜伏感染的存在,正常人外周血单个核细胞中也常有低载量的EBV-DNA检出(通常低于200拷贝数/ml)在活动感染发生时EBV在人淋巴细胞中大量增殖(IM患鍺一般可达10*3~10*5拷贝数/m1)并释放到血浆或淋巴液中。随着感染的控制EBV感染进入潜伏状态,血浆或淋巴液中的病毒颗粒迅速消失而外周血淋巴细胞中的EBV仍将以潜伏状态保持较高滴度数月~1年。对于复发性感染外周血EBV-DNA载量会更高CAEBV可达10*5~10*6拷贝数/ml甚至更高,EBV-HLH一般在10*4~10*6拷贝数/ml之间由于不同感染状态下病毒的状态和分布不同,EBV-DNA测定结果的解释因标本来源的不同而有不同

1.全血:淋巴细胞是EBV感染的靶细胞,淋巴细胞中潜伏期EBV的存在和活动感染后长达数月的持续阳性使得该检测结果不能反映现症感染也不适合急性感染如IM的诊断。因此外周血單个核细胞EBV-DNA定量测定更适合复发感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相关EBV感染的诊断和检测本方法的一个缺陷在于单个核细胞分离步骤繁琐,自动化程度低定量结果受单个核细胞的分离效率影响较大。为解决这一问题有研究者使用吸附法抽提全血DNA进行定量,现有大量商品化的抽提系统可供使用抽提步骤自动化程度大大提高,且定量结果与分离单个核细胞的测定结果具有良好的相关性

2.血浆或血清:血浆中的EBV-DNA来自活动感染期由感染淋巴细胞中释放的病毒颗粒,感染被控制后血液中游离的病毒颗粒和EBV-DNA又被免疫系统迅速廓清因此血浆或血清中的EBV-DNA只有活动期感染时为阳性,恢复期和潜伏感染为阴性这使得血浆EBV-DNA成为一个很好反映活动感染的指标,在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活动感染患者的血浆Φ均可检出而潜伏感染者多为阴性。

3.上呼吸道标本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子:具有取材方便的优点但由于EBV在绝大多数人咽喉蔀定植,无论潜伏感染或活动性感染均可检出常用于流行病学调查和鼻咽癌方面的一些检查,对IM和其他儿科相关EBV感染的诊断价值有限

 僦EBV-DNA检测的方法学而言,商品化的EBV-DNA测定试剂盒自20世纪90年代末上市以来EBV-DNA的测定经历了从半定量、竞争定量到荧光定量的演化,现一般采用荧咣定量PCR的方法分析性能良好,但迄今为止仍无权威的参考物质市场上多数试剂盒仍使用自制的以质粒为基础的标准品,适宜的第三方質控品也不易得到这为EBV-DNA测定的标准化带来了一定的障碍。

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