【论文】不同表现甲状腺功能亢进症心脏病患者内皮素和肿瘤坏死因子α的变化_百度文库
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不同表现甲状腺功能亢进症心脏病患者内皮素和肿瘤坏死因子α的变化目​的​观​察​不​同​临​床​表​现​甲​状​腺​功​能​亢​进​症​心​脏​病​(​简​称​甲​亢​心​)​患​者​血​内​皮​素​(​E​T​)​和​肿​瘤​坏​死​因​子​α​(​T​N​F​-​α​)​的​变​化​,​探​讨​E​T​和​T​N​F​-​α​与​甲​亢​性​心​脏​病​临​床​表​现​的​关​系​。​方​法​分​别​测​定0​例​单​纯​甲​亢​及5例​甲​亢​心​患​者​(​按​不​同​临​床​表​现​又​分​为​心​律​失​常​、​心​绞​痛​及​心​力​衰​竭​等​亚​组​)​血​游​离​三​碘​甲​状​腺​原​氨​酸​(​F​T)​、​游​离​甲​状​腺​素​(​F​T)​、​E​T​、​T​N​F​-​α​,​与0​例​正​常​对​照​组​比​较​。​结​果​①​单​纯​甲​亢​及
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35姜黄素对细胞外基质蛋白1影响HaCat细胞肿瘤坏死因子_分泌研究_高志祥
福建中医药2012年2月第43卷第1期；50FujianJournalofTCMFubr；姜黄素对细胞外基质蛋白1影响HaCat细胞肿瘤坏；高志祥1，汪五清2，顾军1；（1.第二军医大学第一附属医院，上海200433；要：；目的；研究姜黄素对细胞外基质蛋白1（ECM1）影响Ha；方法；分空白对照组、ECM1组及不同浓度姜黄素组（10；7细胞上清液作用于HaC
福建中医药2012年2月第43卷第1期50FujianJournalofTCMFubruary）姜黄素对细胞外基质蛋白1影响HaCat细胞肿瘤坏死因子α分泌研究高志祥1，汪五清2，顾军1（1.第二军医大学第一附属医院，上海.复旦大学华山医院南汇分院，上海201300）摘要：目的研究姜黄素对细胞外基质蛋白1（ECM1）影响HaCat细胞肿瘤坏死因子α分泌研究。方法分空白对照组、ECM1组及不同浓度姜黄素组（10、20、40mol／L）。将转染pEGFP-N2-ECM1的含有ECM1的MCF-7细胞上清液作用于HaCaT细胞，采用ELISA法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，与空白对照组及不同浓度姜黄素组TNF-α水平进行比较。结果ECM1组24h时TNF-α水平明显高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同浓度姜黄素组24h时TNF-α水平明显低于ECM1组，差异有统计学意义（P＜0.05），呈浓度依赖性；加入结论本研究显示ECM140mol／L浓度姜黄素组TNF-α水平与空白对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。对培养的HaCaT细胞TNF-α分泌具有促进作用，而姜黄素对此有抑制效果。关键词：细胞外基质蛋白1；HaCaT细胞；肿瘤坏死因子α中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：X（0-02角质形成细胞是构成表皮的主要细胞，也是一种重要的免疫细胞［1］，可分泌细胞因子，并辅助细胞免疫应答。HaCaT细胞保持有正常人角质形成细胞的分化和增殖特性，是研究角质形成细胞生理功能的模型。细胞外基质蛋白1（extracellularmatrixpro-tein1，ECM1）是一种分泌性糖蛋白。基因定位在染色体lq21临近表皮分化复合体区（EDC），由于其特殊的基因定位和在骨发育、肿瘤转移、皮肤分化发育等方面的一系列发现，近年来引起研究者对其生物学功能的重视［2］，但对于ECM1的生物学功能尚未完全了解。姜黄素是从姜黄属植物姜黄、莪术、郁金等中药中提取的单体。现有研究显示，姜黄素具有抗炎和抗氧化等多种药理作用［3］。肿瘤坏死因子α（TNF-α）在银屑病中起到重要作用，本研究探讨ECM1对HaCaT细胞分泌TNF-α的影响及不同浓度姜黄素对此干预后的效果，以期为深入了解银屑病发病机制及姜黄素用于银屑病治疗提供初步参考。1材料与方法1.1主要试剂与仪器胰蛋白酶（上海第一生化药业有限公司）；小牛血清（NBS，56℃30min灭活，天津正江现代生物技术有限公司）；角质形成细胞无血清培养基（K-SFM，GIBCO／BRL公司）；DMEM细胞培养基（highglucose，上海坤肯生物化工有限公司）；二甲基亚砜（DMSO，无锡阳山生化有限责任公司）；青霉素（华北制药股份有限公司）、链霉素（山东瑞阳制药有限公司）；血细胞计数板（江苏盐城锦辉玻璃仪器厂）；培养瓶、细胞培养板、培养皿（广州洁特过滤制品有限公司）。高速台式冷冻离心机（TGL-16G）收稿日期：基金项目：上海市卫生局中医药科研基金资助课题（A）通讯作者：顾军（1962―），男，教授，主任医师，博士生导师，主要从事银屑病发病机理研究及诊疗。E-mail：（湖南星科科学仪器有限公司），TNF-αELISA试剂盒（上海亚培生物科技有限公司），姜黄素（Sigma公司）。1.2细胞、主要试剂配制HaCaT细胞株：博和康生物技术有限公司。含ECM1上清液：由前期实验制备（构建ECM1表达载体pEGFP-N2-ECM1，采用脂质体转染MCF-7细胞，经G418筛选获得稳定表达ECM1的MCF-7细胞）。角质形成细胞无血清培养基：重组表皮生长因子2.5μg、注射用青霉素钠10万U、垂体提取物25mg、硫酸链霉素0.1g，于无菌条件下配制、混合，总体积500mL，分装，于4℃保存。DMEM培养基：称取13.4g干粉，溶于750mL双蒸馏水中，加青霉素100U／mL，链霉素100U／mL，NaHCO33.7g，调整pH值至7.4，双蒸馏水加至总体积1000mL。经0.22μm微孔滤膜过滤后分装，4℃保存。0.25%胰蛋白酶配制：称取胰蛋白酶0.25g，采用PBS溶解，稀释至100mL，0.22μm微孔滤膜滤过、分装，-20℃保存。1.3实验方法1.3.1HaCaT细胞培养及传代HaCaT细胞培养选择角质形成细胞无血清培养基进行。当HaCaT细胞生长至近融合时，进行传代。将上层培养基弃去，采用PBS清洗2次，再用0.25%胰蛋白酶消化，略吹打，制成单细胞悬液。以适当浓度接种至培养瓶。将培养瓶置于培养箱中，培养条件为5%CO2、37℃。每隔2～3d换1次液。选择形态良好、生长旺盛的HaCaT细胞进行实验。1.3.2实验分组按每孔5×103细胞将HaCaT细胞接种于96孔板，每孔100μL，置培养箱中，贴壁后，吸弃培养液。分为空白对照组、ECM1组（加入含ECM1上清100μL）、姜黄素组（加入含ECM1上清及姜黄素，姜黄素浓度依次为10、20、40mol／L，各第1期高志祥等：姜黄素对细胞外基质蛋白1影响HaCat细胞肿瘤坏死因子α分泌研究［7］51100μL；ECM1上清100μL）。每个浓度设3个复孔，培养24h。1.3.3ELISA法检测TNF-α水平收集细胞培养上清液，5000r／min离心15min，吸取上清，按试剂盒（上海亚培生物科技有限公司）说明测定TNF-α含量。1.4统计学处理采用SPSS11.0统计软件进行统计学处理和分析。2结果ECM1组24h时TNF-α水平明显高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；姜黄素组24h时TNF-α水平明显低于ECM1组，差异有统计学意义（P＜0.05），呈浓度依赖性；加入40mol／L浓度姜黄素组TNF-α水平与与空白对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。表1组别各组TNF-α水平比较（±s），银屑病患者外周血淋巴细胞具有促进自身角质形成细胞生长的作用［8］，导致角质形成细胞过度增殖。姜黄素是姜黄中提取的有效成份单体，现代药理学研究证实其具有降低血液胆固醇，抑制血栓形成和心肌梗死，免疫调节，抑制HIV复制，保护肝细胞，抗纤维化，抗肿瘤等功能。研究显示姜黄素能降低佐剂性关节炎大鼠血清TNF-α水平［9］。有关姜黄素对于角质形成细胞分泌细胞因子的研究相对较少，本研究显示ECM1可促进角质形成细胞分泌TNF-α，而姜黄素对此有抑制作用，效果呈浓度依赖性，这为进一步了解银屑病发病机制及姜黄素用于银屑病治疗提供初步参考依据。姜黄素这一效果是通过抑制ECM1进而抑制TNF-α产生还是通过其它相关途径直接作用于进角质形成细胞进而抑制ECM1诱导的TNF-α产生尚有待进一步研究。参考文献：［1］GRONCA.Keratinocrytesandcytokines［J］.VetImmnnolImm-nnopathol，／2）：1-12.［2］CHANI.Theroleofextracelluarmatrixprotein1inhumanskin［J］.ClinExpDermatol，）：52-56.［3］SIDDIQUIAM，CUIX，WUR，etal.Theanti-inflammatoryef-fectofcurcumininanexperimentalmodelofsepsisismediatedbyup-regulationofperoxisomeproliferator-activatedreceptor-gamma［J］.CritCareMed，）：.［4］NICKOLOFFBJ，NESTLEFO.Recentinsightsintotheim-munopathogenesisofpsoriasisprovidenewtherapeuticopportuni-ties［J］.JClinInvest，（12）：.［5］DAVISGE，SENGERDR.Endotheliaextracellularmatrix：biosynthesis，remodeling，andfunctionsduringvascularmorpho-genesisandneovesselstabilization［J］.CircRes，）：.［6］SUNC，MATHURP，DUPUISJ，etal.PeptidoglycanrecognitionproteinsPglyrp3andPglyrp4areencodedfromtheepidermaldifferentiationcomplexandarecandidategenesforthePsors4locusonchromosome1q21［J］.HumGente，（1／2）：113-125.［7］BHUSHANM，MOORET，HERRICKAL，etal.Nailfoldvideocapillaroscopyinpsoriasis［J］.BrJDermatol，（6）：.［8］王刚，刘玉峰.银屑病患者外周血单个核细胞对自身角质形成细胞的促生长作用［J］.第四军医大学学报，）：.［9］蔡辉，郑召岭，商玮，等.姜黄素对佐剂性关节炎大鼠关节液和血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β的影响［J］.医学研究生学报，）：.空白对照组ECM1组姜黄素组TNF-α含量／（pg／mL）123.44±26..131）10μmol／L组20μmol／L组40μmol／L组203.15±41...66注：与空白对照组比较，1）P＜0.05。表1结果提示，ECM1有促进HaCaT细胞分泌TNF-α的作用，而姜黄素对此有抑制作用且呈浓度依赖性。3讨论银屑病是一种慢性、炎症性皮肤病，易复发。银屑病发病机制较为复杂，牵涉多种发病环节和数个病理信号［4］。ECM1是一种分泌性糖蛋白，具有广泛生物学功能［5］。ECM1基因定位在染色体lq21临近表皮分化复合体区（EDC），EDC有至少58个基因参与KC的终末分化，银屑病易感基因PSORS4被绘制在EDC中，包括S100A8和S100A9在内的其它几个EDC基因在银屑病患者高表达［6］。角质形成细胞可产生TNF-α。TNF-α是重要的炎症因子，能促进中性粒细胞浸润，引起发热，促进细胞增殖和分化。银屑病患者中血清TNF-α水平可见升高。TNF-α通过活化T细胞，增加T细胞浸润及皮损中角质形成细胞增殖进而影响银屑病发病包含各类专业文献、外语学习资料、专业论文、行业资料、中学教育、文学作品欣赏、各类资格考试、生活休闲娱乐、幼儿教育、小学教育、35姜黄素对细胞外基质蛋白1影响HaCat细胞肿瘤坏死因子_分泌研究_高志祥等内容。
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肿瘤坏死因子α对缺血复灌心肌的保护作用及其信号转导机制
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川芎嗪对新生大鼠心肌成纤维细胞分泌TNFα和TGFβ1的影响
【摘要】：目的探讨川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对新生大鼠心肌成纤维细胞(Cardiac Fibroblast,CFs)分泌肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)和转化生长因子β1 (Transforming Growth Factorβ1,TGFβ1)的影响。方法采用胰酶消化法和差素贴壁法获取CFs,用放射免疫分析法、双抗夹心ELISA法分别测定不同条件下培养的CFs培养液上清中的TNF-α和TGFβ1的水平。结果在给定浓度范围内川芎嗪可以按剂量依赖的方式抑制CFs分泌TNF-α和TGFβ。有促进CFs分泌NO趋势,但是无统计学意义(P0．05)。结论川芎嗪可以剂量依赖性抑制新生大鼠CFs分泌TNF-α和TGFβ1。川芎嗪可能通过影响 CFs分泌的细胞因子改变局部促细胞生长因子与抑制细胞生长因子的平衡关系,发挥其抑制心肌纤维化的作用。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R285.5【正文快照】：
心肌纤维化是左室肥厚的重要病理学特征，是心力衰竭、心律失常发生的重要环节。心 肌成纤维细胞(Cardiac Fibroblasts，CFs)是心肌纤维化的主要效应细胞，:毕心脏组织细胞总 数的60一70%，除具有支持心肌细胞作用外，还具有自分泌和旁分泌功能，能够分泌多种生 物活性物质l
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