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相思子毒素抗原、抗体制备及两种免疫学检测方法的建立.pdf59页
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相思子毒素抗原、抗体制备及两种
免疫学检测方法的建立
ofAbrinToxinand
preparedantigenpolyclonaiantibody
methodsestablishmen
immunological
学位授予单位及代码：篮壹堡王盔堂
学科专业名称及代码：生塑匡堂王握
研究方向：生物丝牡
申请学位级别：亟
指导教师：王逦堡熬援
论文起止时间 09．3
毒性作用，也是一种对公共安全存在潜在威胁的牛物恐怖剂，因此，发展和建立特异、灵
敏的检测相思了毒素方法是十分急需、重要的。
本文经对相思．了毒素的传统提取纯化方法的优化、改进，建立了相思了毒素新的提纯
制备技术，获取的天然毒素作为建立相应检测方法的参考物质。利用大肠杆菌表达的重组
相思了毒素A链蛋白制备了2种动物来源的多克隆抗体，建立了基于胶体金免疫层析、
双抗体夹心牛物素．亲和素ELISA的相思予毒素快速、特异和灵敏的检测鉴定方法。
首先，根据相思予毒素对半乳糖的特异性结合能力，采用亲和层析技术将相思了种了
中大部分杂质除去；由于在植物种了中蛋白毒素总是与凝集素并存，根据二者分．了量的差
异进行了凝胶过滤层析，去除凝集素，最终获得天然相思予毒素纯品，电泳纯度为98％。
然后，利用大
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2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合氢键
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与其所诱导产生的或特异性结合的能力。抗原性的强弱与抗原分子的大小、化学成分、的结构、抗原与被免疫动物亲缘关系的远近等有密切关系。通常认为抗原的分子量愈大、化学组成愈复杂、立体结构愈完整以及与被免疫动物的亲缘关系愈远，则抗原性愈强。抗原的物理状态也对抗原性发生影响，例如蛋白质，聚合状态的比单体的抗原性强，一般球形分子的比纤维形分子的抗原性强。抗原加入改变物理状态后，抗原性也得到增强。例如，分子量高达10万的明胶由于缺乏苯环氨基酸，稳定性较差，在进入机体后容易被酶降解成低分子物质，如果加入少量酪氨酸（苯环氨基酸），就能增强其抗原性。外文名antigenicity抗原性介绍按抗原性
自发现后，用血清学方法在体外实验，证明了天然抗原与其相应抗体发生特异性结合，这是一个重要的免疫学现象，称这种特性为抗原的抗原性。在早期由于尚未建立对蛋白质抗原进行分析的方法，为研究抗原性的化学本质造成了困难。免疫化学家Landsteiner在本世纪20年代创建了人工结合抗原，并应用血清学方法对抗原性的化学本质进行了系统的研究，为抗原、抗体的相互作用提供了大量知识，为天然抗原化学性质的研究奠定了基础。
分为甲、乙、丙三型。甲型易引起大流行，病情较重；乙丙型引起流行或散发，病情较轻。由于的抗原性变化较快，人类无法获得持久免疫力。
病毒性肝炎之甲肝（HAV）
HAV病毒有实心和空心两种颗粒形态，实心颗粒有完整病毒，有传染性；空心者无传染性，但有抗原性。HAV病毒有四个蛋白，其中VP1基因主要为病毒核壳蛋白基因，含有中和抗体的的。尽管有四个基因型，但其抗原性相似，故HAV只有一个血清型和一个抗原抗体系统。
病毒性肝炎之乙肝（HBV）有三大抗原抗体系统。
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＞＞＞抗原和抗体不仅在生物体内发生反应，在体外也能进行反应，研究这..
抗原和抗体不仅在生物体内发生反应，在体外也能进行反应，研究这种反应的方法之一是用琼脂双重扩散法，这种方法如下图所示。在琼脂片上开孔，在其中加入抗原和抗体，使其在琼脂中扩散，扩散了的抗原和抗体在一定的位置发生反应。在琼脂中出现可以用肉眼观察到的线，我们把这种线叫沉降线。X和Y表示两种抗原，x和y为相应的抗体，下图中哪一项表示正确的沉降线
A．B．C．D．
题型：单选题难度：中档来源：安徽省期中题
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据魔方格专家权威分析，试题“抗原和抗体不仅在生物体内发生反应，在体外也能进行反应，研究这..”主要考查你对&&免疫系统的组成和功能&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
免疫系统的组成和功能
免疫系统的组成和功能：一、免疫系统的组成：二、免疫系统的功能：1、非特异性免疫（1）组成：①第一道防线：皮肤、黏膜。②第二道防线：体液中的杀菌物质（如溶菌酶）和吞噬细胞。(2)特点：人人生来就有，不针对某一特定病原体。 2、特异性免疫（第三道防线） (1)组成：主要由免疫器官和免疫细胞借助血液循环和淋巴循环而组成。(2)作用：抵抗外来病原体和抑制肿瘤等。 (3)方式：体液免疫和细胞免疫。(4)过程 ①体液免疫： ②细胞免疫3．监控和清除功能：监控并清除体内已经衰老或因其他因素而被破坏的细胞，以及癌变的细胞。 知识点拨：识别抗原和特异性识别抗原的细胞1、识别抗原的细胞：吞噬细胞.B细胞、T细胞、记忆细胞、效应T细胞。 2、特异性识别抗原的细胞：吞噬细胞只能识别自己与非己成分，因而没有特异性的识别能力，除吞噬细胞以外①中其余的细胞都有特异性的识别能力。 3、抗体与抗原结合后的反应 ①抑制病原体的繁殖，或揶制病原体对人体细胞的黏附。②多数情况下，抗原、抗体形成沉淀或细胞集团进而被吞噬细胞吞噬消化。4、体液免疫和细胞免疫的关系
知识拓展：1、免疫细胞的来源和功能
2、免疫活性物质并非都由免疫细胞产生，如唾液腺、泪腺细胞都可产生溶菌酶。 3、抗原和抗体 ①成分：抗原并非都是蛋白质，但抗体都是蛋白质。②来源：抗原并非都是外来物质（异物性），体内衰老、癌变的细胞也是抗原；抗体是人体受抗原刺激后产生的，但也可通过免疫治疗输入。③分布&&&&&&&&&&&&&& 抗原：主要存在于细胞外的抗原引起体液免疫，存在于细胞内的抗原由细胞免疫清除。抗体：主要分布于血清，也分布于组织液和外分泌液（如乳汁）中。
发现相似题
与“抗原和抗体不仅在生物体内发生反应，在体外也能进行反应，研究这..”考查相似的试题有：
10005210075573505844909991091499检测抗原抗体的体外方法
11:28:37&&&来源：&&&评论：&&
抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，并在外界条件的影响下呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)。试验所采用的抗体常存在于血清中，因此又称之为血清学反应(serological reaction)。一、抗原抗体反应的特点(一)抗原抗体
2.间接凝集反应(indirect passive agglutination)&&是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的微球载体上，形成致敏载体(免疫微球)，与相应的抗体或抗原在电解质存在的条件下进行反应，产生凝集，称为间接凝集或被动凝集；实验室常用的载体微球有人O型血红细胞、绵羊或家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭等，根据应用的载体种类不同，分别称为间接血凝、间接乳胶凝集及间接炭凝试验等。本试验主要用于某些传染病如钩端螺旋体抗原和原发性肝癌的早期诊断。间接凝集反应扩大了凝集反应的应用范围，其发展取决于载体，修饰载体使其带有化学活性基团，或选用吸附力强、稳定性高和带有色素的载体，必将演化出新的方法。
3.间接凝集抑制试验(indirect agglutination inhibition test)&&将可溶性抗原与相应抗体预先混合并充分作用后，再加入抗原致敏的载体，此时因抗体已被可溶性抗原结合，阻断了抗体与致敏载体上的抗原结合，不再出现凝集现象，称为间接凝集抑制试验。临床常用的免疫妊娠试验(immune pregnancy test)即属此类。若以红细胞作为载体则称为间接血凝抑制试验。
所有上述凝集试验均可划分为正向和反向凝集试验，以已知抗原测抗体的凝集试验为正向凝集试验，通常&正向&两字省略，反之，为反向凝集试验。
4.协同凝集试验(co-agglutination)&&以金黄色葡萄球菌为载体，利用其细胞壁中的A蛋白(SPA)具有结合人及多种哺乳动物IgG Fc段的特性。将特异性抗体结合至金黄色葡萄球菌菌体，其Fab段暴露于菌体表面，遇到相应抗原时与之结合，即可导致金黄色葡萄球菌凝集(图18.2)。称为协同凝集试验。常用于早期诊断流脑、伤寒、菌痢及布鲁氏菌病。
5.抗人球蛋白试验(anti-human globulin reaction)&&机体受抗原刺激后，除可产生完全抗体外，在某些病人(先天性溶血性贫血)也可产生不完全抗体(IgG)，后者虽能与抗原结合，但不出现肉眼可见反应现象。Coomb等把含有不完全抗体血清球蛋白注射到异种动物体内，使其产生抗人球蛋白抗体，将该抗人球蛋白抗体加入到颗粒性抗原与相应的不完全抗体复合物中，就能出现肉眼可见的凝集现象，称为抗人球蛋白试验，又称Coomb's试验。主要用于检测Rh抗体及布鲁氏菌抗体。
图18.2&凝集试验示意图
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