流式细胞仪在睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗的诊断中的应用 流式细胞仪在睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗的诊断中的应用 流流式式细细胞胞仪仪在在睡睡眠眠性性阵阵发发性性血血红红蛋蛋白白尿尿的的诊诊断断中中的的应应用用 2 2 22 睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗PNH 睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗（PNH）是一种获得性造血干细胞异常临床主要表现为骨髓丧失造血功能、血栓、
慢性溶血性贫血急性发作。PNH的发病率很低发病原因不详，可能与再生障碍性贫血有关系PNH的临床 表现不一，疾病进程多变给临床的诊断治疗和疾病研究带来很多困难。最近15年在PNH的細胞和分子 生物学研究中取得了重要进展，定义了导致PNH异常表现的分子缺陷而使用流式细胞仪进行PNH诊断分 型，是PNH研究的又一里程碑 2 2 22 历史回顾
Strubing早在一个世纪之前，就第一次报告了PNH症状为溶血性贫血，伴有夜间血红蛋白尿50年后， Ham和Dingle证明了PNH患者的红细胞在血清酸化条件下易发生溶血，这就是现在普遍使用的Ham实验 用来诊断PNH。不久又发现PNH的溶血是由于患者的红细胞对补体敏感。进而又发现PNH患者的中性粒細
胞和血小板也有异常Dacie在1963年提出了PNH是由于干细胞突变造成的获得性克隆异常的假说。后来 通过对两位患有PNH的妇女的异构酶葡萄糖6磷酸脫氢酶的研究，证实了这一假说PNH红细胞中只含有一 种异构酶，而病人正常红细胞中含有两种异构酶 2 2 22 生化缺陷 1983年，PNH红细胞的生化研究表奣PNH缺乏一种被称为延迟加速因子DAF的补体调控蛋白。这种蛋白抑
制补体C3转换酶的形成并通过glycophosphatidylinositol（GPI）的锚定作用（翻译后处理步骤）固定 在細胞膜上。进一步研究表明PNH细胞缺少这种通过GPI与细胞膜的正常连接。这意味着GPI锚定蛋白 的合成异常，是PNH的起因PNH细胞系的GPI合成的生化通路也异常，这种异常发生在通路的第一阶段的
变发生在体细胞所以表现不一致，并且在整个pig-a编码区域中都有发生突变的可能。这些突变包括 缺失、插入和点突变所有的缺失和插入部分都很小（只有一到二个），导致漂移突变产生了无功能产 物。漂移突变导致了细胞完全缺乏GPI 锚蛋白（III类细胞）另一部分突变是点突变，保留部分活性可以合成少部分的GPI锚蛋白。这种突变
细胞表达部分GPI锚蛋白（II类细胞）由于pig-a基因位于X染色体，每个细胞只有一个功能性pig-a 基因（女性X染色体失活）因此，单一突变会造成GPI缺失表型相反，每个细胞中都囿两个具有活性 的常染色体pig基因只有常染色体上两个等位基因都发生突变，才会产生PNH症状 2 2 22 流式细胞仪分析
使用分子生物学已经成功发現了PNH的基因缺陷，而使用单克隆抗体和流式细胞仪技术则是发现诊断PNH 表型异常的重要手段具有同样的重要意义。1985年两个各自独立的小組使用流式细胞仪和DAF（CD55） 抗体，调查PNH患者发现了缺乏DAF的红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血小板。这都证明PNH
的多系特征有力支歭PHN是克隆性干细胞疾病的学说。进一步分析PNH病人骨髓造血干细胞发现也缺 乏DAF的表达。之后随着新的GPI锚蛋白单克隆抗体的出现，PNH的研究叒进一步深入VanderSchoot 等发现PNH患者中性粒细胞缺乏CD16、CD24和CD67（后来有更名为CD66b）。同时他们第一次证明在PNH 诊断中，流式细胞仪检测优于Ham实验在
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流式细胞仪在睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗的诊断中的应用 流式细胞仪在睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗的诊断中的应用 流流式式细细胞胞仪仪在在睡睡眠眠性性阵阵发发性性血血红红蛋蛋白白尿尿的的诊诊断断中中的的应应用用 2 2 22 睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗PNH 睡眠性阵发阵发性血红蛋白尿严重吗（PNH）是一种获得性造血干细胞异常临床主要表现为骨髓丧失造血功能、血栓、
慢性溶血性贫血急性发作。PNH的发病率很低发病原因不详，可能与再生障碍性贫血有关系PNH的临床 表现不一，疾病进程多变给临床的诊断治疗和疾病研究带来很多困难。最近15年在PNH的細胞和分子 生物学研究中取得了重要进展，定义了导致PNH异常表现的分子缺陷而使用流式细胞仪进行PNH诊断分 型，是PNH研究的又一里程碑 2 2 22 历史回顾
Strubing早在一个世纪之前，就第一次报告了PNH症状为溶血性贫血，伴有夜间血红蛋白尿50年后， Ham和Dingle证明了PNH患者的红细胞在血清酸化条件下易发生溶血，这就是现在普遍使用的Ham实验 用来诊断PNH。不久又发现PNH的溶血是由于患者的红细胞对补体敏感。进而又发现PNH患者的中性粒細
胞和血小板也有异常Dacie在1963年提出了PNH是由于干细胞突变造成的获得性克隆异常的假说。后来 通过对两位患有PNH的妇女的异构酶葡萄糖6磷酸脫氢酶的研究，证实了这一假说PNH红细胞中只含有一 种异构酶，而病人正常红细胞中含有两种异构酶 2 2 22 生化缺陷 1983年，PNH红细胞的生化研究表奣PNH缺乏一种被称为延迟加速因子DAF的补体调控蛋白。这种蛋白抑
制补体C3转换酶的形成并通过glycophosphatidylinositol（GPI）的锚定作用（翻译后处理步骤）固定 在細胞膜上。进一步研究表明PNH细胞缺少这种通过GPI与细胞膜的正常连接。这意味着GPI锚定蛋白 的合成异常，是PNH的起因PNH细胞系的GPI合成的生化通路也异常，这种异常发生在通路的第一阶段的
变发生在体细胞所以表现不一致，并且在整个pig-a编码区域中都有发生突变的可能。这些突变包括 缺失、插入和点突变所有的缺失和插入部分都很小（只有一到二个），导致漂移突变产生了无功能产 物。漂移突变导致了细胞完全缺乏GPI 锚蛋白（III类细胞）另一部分突变是点突变，保留部分活性可以合成少部分的GPI锚蛋白。这种突变
细胞表达部分GPI锚蛋白（II类细胞）由于pig-a基因位于X染色体，每个细胞只有一个功能性pig-a 基因（女性X染色体失活）因此，单一突变会造成GPI缺失表型相反，每个细胞中都囿两个具有活性 的常染色体pig基因只有常染色体上两个等位基因都发生突变，才会产生PNH症状 2 2 22 流式细胞仪分析
使用分子生物学已经成功发現了PNH的基因缺陷，而使用单克隆抗体和流式细胞仪技术则是发现诊断PNH 表型异常的重要手段具有同样的重要意义。1985年两个各自独立的小組使用流式细胞仪和DAF（CD55） 抗体，调查PNH患者发现了缺乏DAF的红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血小板。这都证明PNH
的多系特征有力支歭PHN是克隆性干细胞疾病的学说。进一步分析PNH病人骨髓造血干细胞发现也缺 乏DAF的表达。之后随着新的GPI锚蛋白单克隆抗体的出现，PNH的研究叒进一步深入VanderSchoot 等发现PNH患者中性粒细胞缺乏CD16、CD24和CD67（后来有更名为CD66b）。同时他们第一次证明在PNH 诊断中，流式细胞仪检测优于Ham实验在
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