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口蹄疫非结构蛋白3ABC单克隆抗体的制备及初步应用
本研究制备了3ABC蛋白的单克隆抗体，建立了针对口蹄疫(FMD)的非结构蛋白3ABC的单抗捕获ELISA和竞争ELISA方法。经临床试验证明，这两种方法均具有较高的敏感性和特异性，可以用于临床检测。具体研究情况如下：
1．口蹄疫3ABC蛋白单克隆抗体的制备
以纯化的3ABC蛋白为免疫原，免疫Balb/C小鼠，将脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，用间接ELISA方法筛选，采用有限稀释法对其进行克隆，经过3次融合共获得3株能稳定分泌抗3ABC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1D1，1E2,2E3。三株单抗的腹水效价分别为2×100，2×100，2×100。所有单抗特异性良好，与载体蛋白无交叉反应。
2．单抗捕获ELISA的建立和初步应用
以单抗1D1包被酶标板，再加入粗提的3ABC蛋白，通过单抗捕获3ABC蛋白，建立了3ABC单抗捕获ELISA方法。用方阵滴定确定单抗浓度为1：2000，蛋白最佳浓度是2.1μg/ml，最佳血清稀释倍数为1:400，通过测定160份FMDV阴性血清，确定了该方法的阳性判定标准。特异性、重复性及临床试验结果表明，该方法特异性强、重复性好。与国外同类试剂盒的比较试验，共检测血清184份，两者均检测为阳性14份，均检测为阴性165份，符合率97.28％；与国内同类试剂盒的比较试验，共检测血清168份，两者均检测为阳性3份，均检测为阴性159份，符合率95.83％。
3．竞争ELISA的建立和初步应用
以3ABC蛋白为抗原，以酶标单抗1D1为第二抗体，建立了检测FMD非结构蛋白3ABC抗体竞争ELISA方法，对于影响ELISA反应条件的各种因素进行了优化和选择。用方阵滴定确定蛋白包被浓度为2.1μg/ml，酶标单抗的浓度为1:3200，通过检测160份阴性血清，20份阳性血清，确定血清抑制率大于60判定为阳性。特异性、重复性及临床试验结果表明，该方法特异性强、重复性好。
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