冠状动脉粥样硬化小鼠模型的建立--《第11届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编》2012年
冠状动脉粥样硬化小鼠模型的建立
【摘要】：正动脉粥样硬化(As)是当前严重危害人类生命和健康的主要疾病冠心病(CAD)的基础病变,与众多危险因子关系密切。对CAD进行有效防治不仅是临床工作者、更是从事CAD基础研究者的面临的一大难题,盖因目前的实验研究,尤其是应用基因修饰的实验动物研究,都只能在As或者冠状动脉结扎造成心肌缺血/心肌梗塞(MI)的层面开展,因为目前国内外很少有真正由于冠状动脉粥样硬化造成的CAD动物模型存在。尽管近二十年来,由于有了ApoE及LDL受体基因敲除小鼠,奠定了小鼠在As研究领域中的主角地位,各种影响As遗
【作者单位】：
【分类号】：R541.4【正文快照】：
动脉粥样硬化(As)是当前严重危害人类生命和健康的主要疾病冠心病(CAD)的基础病变，与众多危险因子关系密切。对CAD进行有效防治不仅是临床工作者、更是从事CAD基础研究者的面临的一大难题，盖因目前的实验研究，尤其是应用基因修饰的实验动物研究，都只能在As或者冠状动脉结
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唐晓霞;许迪;陆凤翔;何安霞;周蕾;雍永宏;曹克将;;[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年04期
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李亚丹;林玉凤;臧大维;;[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年40期
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东南大学学报（医学版）
JSoutheastUniv（MedSciEdi）
2011，Aug；30（4）：537-540
［J］．ElsevierBV，（1-2）：110-115．
mice［J］．Nature，（6464）：645-648．
［4］BHATIAM，BONNETD，MURDOCHB，etal．Anewlydiscov-eredclassofhumanhematopoieticcellswithSCID-repopulat-ingactivity［J］．NatMed，）：．
［5］LUCIARV，DARIOGL，EMANUELAP，etal．Identification
J］．Na-andexpansionofhumancolon-cancer-initiatingcells［ture，：111-115．
［6］SWAMINATHANSK，OLINMR，FORSTERCL，etal．Iden-tificationofanovelmonoclonalantibodyrecognizingCD133
［7］唐权，．东南大学学报：窦骏，顾宁．癌干细胞研究现状［J］
），276-279．医学版，
［8］SHMELKOVSV，stCLAIRR，LYDEND，etal．AC133/
CD133/Prominin-1［J］．IntBiochemCellBiol，）：715-719．
［9］KOVSV，JUNL，stCLAIRR，etal．Alternativepromotersreg-ulatetranscriptionofthegenethatencodesstemcellsurfaceJ］．Blood，（6）：．proteinAC133［
动脉粥样硬化模型小鼠血管平滑肌
细胞原代培养及鉴定
刘晶，马坤岭，倪杰，黄文瑾，刘必成，陈压西，阮雄中
（1．东南大学附属中大医院肾内科，江苏南京．重庆医科大学教育部感染性疾病分子生物学重点实验室脂质研究中心，重庆400016）
［摘要］目的：介绍动脉粥样硬化模型小鼠血管平滑肌细胞（VSMC）原代培养及鉴定的方法。方法：分离载
组织贴块法获得原代平滑肌细胞，免疫荧光及免疫组化方法检测细胞的纯脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉，
度和分化状态。结果：培养第3天时，可见自组织块周围长出少量梭形或长梭形细胞，至培养2周细胞融合
“峰、成片，呈谷”状生长。肌动蛋白免疫组化及荧光染色显示，细胞传至第6代后纯度在98%以上，证实应用此方法分离原代VSMC可以满足平滑肌体外功能实验的需求。结论：应用组织贴块法培养小鼠VSMC，操
作简单，结果稳定，纯度较高，具有推广应用价值。
［关键词］动脉粥样硬化；血管平滑肌细胞；组织贴块培养法；小鼠［［［中图分类号］R-33；Q813．11文献标识码］A文章编号］（7-04doi：10．3969/j．issn．．2
Amethodforisolationandcharacterizationofprimarycultureofsmoothmusclecellfromaortaofatheroscleroticmousemodel
LIUJing1，MAKun-ling1，NIJie1，HUANGWen-jin1，LIUBi-cheng1，CHENYa-xi2，RUANXiong-zhong2
（DepartmentofNephrology，ZhongdaHospital，SoutheastUniversity，Nanjing210009，China；2．CentreforLipidResearch，KeyLaboratoryofMolecularBiologyonInfectiousDiseases，MinistryofEducation，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China）
［收稿日期］［修回日期］
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（）；江苏省自然科学基金资助项目（BK2009279）［作者简介］刘晶（1985-），女，湖北随州人，在读硕士研究生。E-mail：lemiliay@163．com
［通信作者］马坤岭E-mail：mmkkll@hotmail．com
［Abstract］Objective：Tosetupamethodforisolationandcharacterizationofsmoothmusclecellfromaortaofandprimaryatheroscleroticmousemodel．Methods：ThemediumlayerofaortafromApoE-/-mousewasisolated，
vascularsmoothmusclecells（VSMCs）wereobtainedusingtissueexplantmethodcharacterizedbyimmunohisto-chemicalandimmunofluorescentstaining．Results：VSMCsmigratedfromexplantsofmouseaortatissueafter3daysofculture．Twoweekslater，VSMCsgrewtoformafusingmonolayerinapatternofspikingandfading．Immunohis-tochemicalandimmunofluorescentstainingdemonstratedthatthepurityofVSMCswasmorethan98%．Conclu-sion：Thetissueexplantmethodisasimple，stable，andreliablemethodfortheprimarycultureofVSMCs，whichcouldbewidelyusedtoisolateVSMCswithhighpurityforinvitrofunctionaltests．［Keywords］atherosclerosis；vascularsmoothmusclecell；tissueexplantmethod；mice血管平滑肌细胞（VSMC）是血管中膜的主要细
胞，其舒缩调节着血流和血压，病理情况下VSMC参与
［1］动脉粥样硬化、血管再狭窄等的发生、发展。体外培养原代VSMC是近年来一些实验室常用的技术，成
成纤维细胞生长因子至终浓度1ng?ml。1．2实验方法
原代细胞培养10%水合氯醛2ml腹腔注射
麻醉小鼠，浸泡在75%乙醇中。在无菌条件下打开腹腔，暴露心脏；1ml注射器穿刺右心室，抽出循胸、
10ml注射器抽取无菌PBS约8ml，环中血液，连接在
穿刺左心室的头皮针上，冲洗主动脉；依次剪去胸腹腔器官直至暴露主动脉，完整分离主动脉，放入35mm无菌平皿中，加入1ml无菌PBS（pH7．2），迅速转移至超净台。用镊子小心剥离主动脉外的脂肪组织，至
PBS缓冲液中漂洗2次。将剥离的血血管光滑透明，
管转入另一个装有3ml含20%FBSDMEM/F12培养
液的35mm无菌平皿中，用眼科剪剪碎，碎片大小
为平滑肌细胞功能研究的前提。之前的研究多是从大
兔等动物中分离VSMC。近年来，尽管小鼠作为模鼠、
式生物在生物医学研究中的优势越来越明显，但分离
小鼠原代主动脉平滑肌细胞的报道不多。采用酶耗材少，但消化酶消化法获得的原代细胞所需时间短、
受温度和时间的影响大，不如传统的组织贴块法培养稳定。本实验采用组织贴块法成功培养了动脉粥样硬化模型小鼠主动脉VSMC，并对其进行了鉴定。
材料与方法
1mm×1mm左右。将组织块均匀种植于培养瓶底，翻转培养瓶，加入2ml含20%FBS的新鲜DMEM/F12培养基；6h后待组织块牢固贴附于细胞瓶底，再轻轻翻转培养瓶，使组织块完全浸没于培养液中。放入含5%CO2的37℃培养箱，静止培养3d，观察后换液。1．2．2细胞的生长和传代细胞接种3d后，贴壁的细胞呈放射性伸展，部分区域已融合生长，立即更换新鲜培养基，弃去没有贴壁的细胞及破碎细胞。当单层细胞铺满近培养瓶底的80%以上时即可进行传代。传代时，弃去旧的培养液，加PBS缓冲液并翻转清洗细胞面，重复3次；加入适量的0．25%胰酶，放入培养箱中消化2～3min；当显微镜下观察到细胞成片地收缩变圆时，立即加入含血清的培养基终止消化，将细胞
第1次原瓶培养，补足培养液，放自瓶壁上吹打下来，入培养箱。5d后可再传代。
1．3细胞鉴定1．3．11．3．2
相差显微镜检查按常规方法观察细胞形态。α-SMA免疫组化染色将细胞用胰酶消化、离
）小动物来源载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-鼠，遗传背景为C57BL/6小鼠，是经典的动脉粥样硬化模
由重庆医科大学实验动物中心提供，鼠龄8周型小鼠，
1．1．2主要试剂及配制水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司），磷酸盐平衡液（PBS，武汉博士德公DMEM/F12培养基（Gibco公司），青链霉素（Hy-司），
clone公司），谷氨酰胺（Sigma公司），胎牛血清（FBS，Gibco公司），重组胎牛成纤维细胞生长因子（R＆D
0．25%胰酶（Hyclone公司），公司），肌动蛋白（α-Abcam公司），DAB染色试剂SMA，免疫组化试剂盒、
Alex488羊抗兔二抗（Invitrogen公盒（福州迈新公司），
100%乙醇（上海久亿化学试剂有限公司）。司），
75%乙醇：取75ml乙醇至量筒中，加蒸馏水至100ml。10%水合氯醛：10g水合氯醛溶于100ml蒸馏水中，置37℃水浴锅中至完全溶解。20%FBSDMEM/F12培养基：160mlDMEM/F12中加入40mlFBS；加100μl
青、链霉素至终浓度分别为100U?ml和100μg?ml－1；加2mlL-谷氨酰胺至终浓度2mmol?L－1；加8μl
心，种植在放有载玻片的24孔板中培养。待细胞生长良好，弃培养液，加PBS放于摇床上洗涤3次，每次5min；弃PBS，每孔加入500μl4%的多聚甲醛固定
30min；用PBS洗涤5min×3次；加入0．25%TritonX-100室温15min以便抗体更好地进入细胞；用PBS洗涤5min×3次；用10%山羊血清37℃封闭非特异性抗体30min，勿洗；加兔抗鼠α-SMA一抗（1∶100稀释），4℃过夜；PBS洗涤5min×3次；生物素标记二抗，室温孵育30min；PBS洗涤5min×3次；链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶，室温孵育20min；PBS洗涤5min×3次；DAB显色剂显色5～10min，在显微镜下观察，待细
PBS充分冲胞着色而背景颜色较淡时马上吸去显色液，
PBS充分清洗后置于普通光镜下苏木素复染1min，洗，
观察。1．3．3
α-SMA免疫荧光染色将细胞用胰酶消化、
离心，种植在放有载玻片的24孔板中培养。待细胞生
分离培养的原代主动脉平滑肌细胞
长良好，弃培养液，加PBS放于摇床上洗涤5min×3次；弃PBS，每孔加入500μl4%的多聚甲醛固定30min；用PBS洗涤5min×3次；加入0．25%TritonX-100室温15min以便抗体更好地进入细胞；用PBS洗涤5min×3次；加入10%山羊血清37℃封闭非特异性抗体60min；继而加入兔抗鼠α-SMA一抗（1∶100稀释），4℃过夜；PBS洗涤5min×3次；荧光标记羊抗兔二抗（1∶1000稀释）37℃避光孵育2h；PBS洗涤5min×3次；加入DAPI染核，室温避光10min；PBS洗涤5min1次；然后用10%的甘油封片，在荧光显微镜下观察。
MorphologyofprimaryculturedarteryVSMCs（×200
细胞接种3d后可见培养瓶底少数细胞自组织块周围游离出来；5d后细胞生长迅速，呈典型的峰谷样生长，细胞形体多呈长梭形、核大，可见明显的肌丝纤维（图1）。免疫组化结果显示，超过98%的VSMCsα-SMA表达呈阳性，即细胞质内呈现棕黄色反应，胞核
超过98%的呈紫色（图2）；免疫荧光结果亦显示，
VSMCsα-SMA表达呈阳性，即细胞质内呈现绿色，胞核
呈蓝色（图3）。
α-SMA免疫组化染色
Immunohistochemistrystainingofα-SMAexpression
inVSMCs（×400）
而异，消化的时间、温度要求较为严格，而且一些胶原酶价格昂贵，实验成本高。组织贴块法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法，可避免酶消化
法的上述弊端。
在本实验中，我们发现以下几点与实验成功率、分离的细胞数量及纯度密切相关：（1）在解剖镜下撕掉外膜。黑色破布状外膜要撕干净，否则会直接影响分离细胞的纯度，因为外膜的成纤维细胞生长快且能和VSMC竞争营养，这一步需要细致进行。（2）小鼠主
内皮细胞数量少，内膜无须刮除，在传动脉细小壁薄，
动脉VSMC是动脉中膜的主要细胞成分，高血压、
动脉粥样硬化、肺动脉高压等心血管系统疾病均以VSMC的异常增生和迁移为特征，因此建立简单高效、切实可行的原代VSMC分离培养方法，是研究VSMC
在各种因素作用下生物学特性必不可少的环节。一直以来，原代平滑肌细胞培养都采用组织贴块培养法和酶消化法，两者各有所长。酶消化法虽然耗时短，获得细胞数目多，
但消化酶的选择则因动物种属
达α-SMA分子，证明其分化状态没有改变，可用于体
总之，我们采用的VSMC的原代细胞组织贴块培养法操作简单，结果稳定，纯度较高，重复性好，可作为研究和防治心血管疾病的细胞模型。
［参考文献］
［1］OWENGK，KUMARMS，WAMHOFFBR．Molecularregu-lationofvascularsmoothmusclecelldifferentiationdevelop-J］．PhysiolRev，）：767-801．mentanddisease［
［2］张鹏，林福玉，张迎梅，等．小鼠主动脉血管平滑肌原代细
．生物技术通讯，）：胞的分离培养及鉴定［J］54-57．
［3］任立群，张秀云，孙波，等．大鼠胸主动脉平滑肌细胞的组
．吉林大学学报：医学版，2002，28织贴块法培养及鉴［J］
α-SMA免疫荧光染色
（2）：135-136．
［4］司徒镇强，．西安：世界图书出版西吴军正．细胞培养［M］
．安公司，
［5］CARTAL，SMALDONES，ZILBERBERGL，etal．p38MAPK
isanearlydeterminantofpromiscuousSmad2/3signalingin．JBiolChem，theaortasoffibrillin-1（Fbn1）null-mice［J］（9）：．
［6］LIAOYB，REGANCP，MANABEI，etal．Smoothmuscletar-getedknockoutofconnexin43enhancesneointimalformationinresponsetovascularinjury［J］．ArteriosclerThrombVascBiol，）：．
［7］RAYJL，LEACHR，HERBERTJM，etal．Isolationofvascu-larsmoothmusclecellsfromasinglemurineaorta［J］．Meth-odsCellSci，）：185-188．
［8］XUSW，FUJJ，CHENJW，etal．Developmentofanopti-mizedprotocolforprimarycultureofsmoothmusclecellsfromratthoracicaortas［J］．Cytotechnology，-2）：65-72．［9］DEATONRA，SUC，VALENCIATG，etal．Transforming
growthfactor1inducedexpressionofsmoothmusclemarkergenesinvolvesactivationofPKNandp38MAPK［J］．JBiolChem，）：．
［10］WAMHOFFBR，BOWLESDK，MCDONALDOG，etal．L
typevoltagegatedCa2channelsmodulateexpressionofsmoothmuscledifferentiationmarkergenesviaaRhoKinase/My-ocardin/SRF-dependentmechanism［J］．CircRes，）：406-414．
Immunofluorescencestainingofα-SMAexpressionin
VSMCs（×400）
代2次后基本可以排挤掉。（3）由于小鼠的主动脉组
织有限，应选择瓶底面积为12．5cm的培养瓶，否则导致老化，细胞密度过低会直接影响细胞的生长速度，
因为VSMC生长过程中分泌的一些细胞因子会促进自身的生长。
VSMC有许多标记分子凝蛋白多肽（SM-MHC）
，如α-SMA
、平滑肌22α（SM22α）等，常
被用以鉴定原代VSMC的纯度和分化状态，而α-SMA
。因此我们选择为鉴定平滑肌细胞的传统标志物
α-SMA对原代培养VSMC进行鉴定。VSMC并非一种
终末分化的细胞，在特定的条件下可以发生“表型转［1］
换”。体外培养条件下，原代VSMC传代后分化状态是否会改变，可能会直接影响VSMC的体外功能。在应用大鼠的原代VSMC的研究中，应用第3～15代
［9］［10］
大鼠肺动脉VSMC或第11～15代大鼠VSMC均有报道。而小鼠的VSMC研究中，有采用第3～8代小
也有谨慎的学者鼠主动脉VSMC进行研究的报道，
在分离主动脉VSMC后仅使用第3～5代进行研究。在本实验中，我们应用α-SMA的免疫组化和免疫荧光
98%的细胞都表染色鉴定分离培养的第6代VSMC，
包含各类专业文献、中学教育、文学作品欣赏、高等教育、各类资格考试、专业论文、行业资料、幼儿教育、小学教育、18动脉粥样硬化模型小鼠血管平滑肌细胞原代培养及鉴定等内容。　
　者:曾玮[ 科目:细胞生物学实验 题目: 小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数 一、目的和要求 1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法,并对小鼠脾细胞进行原代培养。... 　肺动脉平滑肌细胞原代培养原代培养_基础医学_医药卫生_专业资料。肺动脉平滑肌细胞...血管平滑肌细胞组织贴块法培养技巧 血管平滑肌细胞培养常用于动脉粥样硬化等多种与... 　小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数姓名 王德祥 学号
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【求助】泪奔！动脉粥样硬化模型小鼠主动脉油红染色阴性
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这个帖子发布于7年零302天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
好郁闷啊，我在北京买的8周龄apoE-/-小鼠，高脂饮食8周后取整个主动脉，除去血管外组织后打开管腔内都是白白的，油红染色后有红色的东西，但是在其对应的外膜位置都有更大块的染成红色的组织，所以我不敢肯定是不是内膜的斑块，把外膜的这种东西分离掉以后，内膜的红色就看不到了。那不就是造模失败么。这些老鼠买起来花了很多的钱，可是现在连模型都没有造成功，老板那里已经很难交代了。有做过类似大体染色的能不能给点意见啊？现在真是一筹莫展啊
不知道邀请谁？试试他们
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外膜的红色是没有剔除干净的脂肪组织，做油红O染色前，一定要把动脉分干净，否则会影响视觉。喂高脂8周的apoE小鼠肯定是有斑块的，我觉得还是你的方法不对，并不能说明造模失败。你的动物处死前周龄是多少？血脂水平如何？另外，是否你取材及染色时太过粗暴，有些斑块是很容易掉的
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我也在做APOE小鼠，现在纯合子可以出现斑块，但是杂合子怎么喂都没有，杂合子已经高脂饮食20周了还是没有，本来想省点钱用杂合做的，现在看来还是危险，有兴趣交流一下吧我邮箱dentist.
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高脂喂养8周应该有明显的斑块吧，我想问一下：1，你的高脂方案？2，你的血管分离是否干净。3，斑竹现在做得如何？有机会给我们晚辈指导指导！！！
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请教楼主，您的动脉标本的取材方法，能按步骤一步一步介绍一下吗？小弟初学。。。不会表达，感激不尽
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有谁知道北京哪里付费可以负责小鼠 腹主动脉血管 油红染色服务的？目前血管已经取出冻存（技术还不自信，需要委托专业的技术人员），如有能帮助的将十分感谢。我的联系方式010-，邮箱:
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请教各位师兄师姐 ，小弟也是做这块的，刚刚拿到ApoE小鼠，想要构建动脉粥样硬化模型，但不知道高脂饲料怎么配比？都是自己配吗？还是能买到现成的？小弟新手，感蒙赐教啊~~小弟qq
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ApoE小鼠有专用的高脂饲料，如有需要请联系我。
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请问楼主用的什么高脂饲料呢？小弟初学者一枚，希望楼主指导指导啊
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ApoE-/-小鼠颈总动脉粥样硬化动物模型的建立
目的 探讨建立载脂蛋白E(ApoE-/-)小鼠颈动脉粥样硬化动物模型的有效方法.方法 C57BL/6小鼠3只,ApoE-/-小鼠6只,共分为3组.A组:C57BL/6小鼠(n=3)给予普通饲料喂养；B组:ApoE-/-小鼠(n=3)给予高脂饲料喂养；C组:ApoE-/-小鼠(n=3)给予高脂饲料结合颈动脉部分结扎术.1周后采用超声检测C组ApoE-/-小鼠左、右颈总动脉中点的收缩期峰值流速(PSV)和血流方向；5周后检测血脂,油红O染色观察各组小鼠左颈总动脉粥样斑块形成.结果 C组ApoE-/-小鼠术后1周左颈总动脉PSV为(9.4±0.8)cm/s,较右颈总动脉PSV(102.0±7.8) cm/s显著减少(P＜0.01),同时舒张期出现反向血流；ApoE-/-小鼠在高脂喂养5周后出现明显高脂血症；油红O染色可见C组ApoE-/-小鼠形成进展型纤维粥样斑块.结论 颈总动脉部分结扎术加高脂饮食法建立ApoE-/-小鼠颈总动脉粥样硬化模型可有效缩短造模时间.
Abstract：
Objective To develop a model of atherosclerosis in apolipoprotein E (ApoE-/-) mice.Methods Totally 3 male C57BL/6 mice and 6 ApoE-/-mice were divided into 3 groups:C57BL/6 mice (n =3) in group A were fed on a chow diet for5 ApoE-/-mice (n =3) in group B were fed on a high fat diet for 5 ApoE-/-mice (n =3) in group C were subjected to partial ligation of carotid artery followed by feeding of a high-fat diet for 5 weeks.The flow velocity at the midpoint of the common carotid arteries in group C was measured by animal ultrasonogram at 1 st week after operation.The venerous blood was taken for measuring the level of serum lipid before the mice were sacrificed after 5 weeks.The left carotid artery in all mice was quickly removed for histological examination.Results Peak systolic velocity (PSV) in LCA [(9.4 ±0.8) cm/s] was significantly slower than in RCA [(102.0 ±7.8) cm/s]during systole in group C (P ＜0.01) at first week after partial ligation,and during diastole reversed flow in LCA was observed.Hyperlipidemia was observed in ApoE-/-mice fed on high fat diet for 5 weeks.Oil O red staining showed that partial ligation and high fat diet induced advanced fibrous atheroma plaque in LCA of apoE)/-mice.Conclusion The novel combined methods of high diet with partial ligation of carotid artery can be used to establish a successful atherosclerotic animal model.
HUANG Dong-ya
作者单位：
同济大学附属东方医院神经内科,上海,200120
年，卷(期)：
Keywords：
在线出版日期：
基金项目：
同济大学人才建设项目
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