如何鉴定细菌的DNA房屋受损鉴定申请书状况

不知道的肯定以为是影视学院的学生在拍戏呢。
新郎的衣服已经被撕开,双脚也被透明胶带捆住了。
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  哪种样本会影响DNA亲子鉴定结果的准确性?对于委托鉴定人来说,DNA亲子鉴定结果的准确性是非常重要的,它关系到被鉴定人的切身利益,即使出错的可能性只有万分之一。
  哪些样本会影响DNA亲子鉴定结果的准确性?
  一,选取样本的问题
  水杯、牙刷、口香糖、头发等这类隐蔽成功率又不高的特殊样本,存在着亲子鉴定结果不准确的因素,因此我们建议在鉴定机构专家的指导下进行取样。
  二,样本污染
  在鉴定过程中,往往因DNA样本存在其他混合物质而造成亲子鉴定无法判断,这样也可能造成鉴定的不准确,比如取样过程中发生直接触碰,疑难样本中的混合斑等,我们建议,取样的时候,带上一次性手套,同时保证载体无DNA信息和干净。
  三,样本变质
  DNA是一种易于裂解的物质,在细菌或者高温等情况下,裂解成信息碎片,给亲子鉴定造成麻烦。我们常见的就是邮寄样本,由于时间较长或者快递耽误造成新鲜的样本变质,直接导致亲子鉴定不准确或实验失败。
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细菌总DNA的提取和鉴定
细菌总DNA的提取和鉴定
来源:互联网
点击次数:5706
【目的和要求】1.学会CTAB法提取细菌总DNA。2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。【实验原理】DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的,因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后,必须将其中蛋白质去除。CTAB(溴代十六烷基三甲胺)是一种去污剂,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中可溶并且稳定存在,若降低盐浓度,CTAB与核酸的复合物会沉淀出来,而大部分蛋白和多糖仍溶于溶液中。DNA的电泳原理与蛋白质的电泳原理基本相同。DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于DNA分子或DNA片断的分子量差别,电泳后呈现迁移位置的差异。【实验试剂和器材】(一)试剂:菌株(E.coli );蛋白酶K(20mg/ml);琼脂糖;标准DNA水解液1.10%SDS2.酚/氯仿/异戊醇(1/1/1)3.异丙醇;70%乙醇4.LB培养基:蛋白胨10g,酵母粉5g,NaCl 10g加蒸馏水至1升,然后灭菌备用。5.TE缓冲液:10mM Triso HCl,0.1mM EDTA (pH8.0)。6. CTAB/NaCl溶液(5% w/v):5g CTAB 溶于100ml 0.5M NaCl溶液中,需要加热到65℃使之溶解,然后室温保存。7.TAE缓冲液(50×)(pH8.0):每升溶液中含有242g Tris,57.1ml 冰乙酸,100ml 0.5mol/L EDTA。电泳时稀释成1× 浓度使用。8.溴酚兰-甘油指示剂:先配制0.1%溴酚兰水溶液,然后取1份0.1%溴酚兰溶液与等体积的甘油混合即成9.0.5μg/ml 溴乙啶染液:称取5mg溴乙啶,用重蒸水溶解定容到10ml,取1ml此溶液用1xTAE缓冲液稀释到1升,最终浓度为0.5μg/ml。(二)器材:锥形瓶(250ml),1.5ml 离心管,水浴锅,离心机,电泳槽,电泳仪,摇床,移液枪,洁净工作台,电磁炉,紫外成像仪【实验方法】(一)细菌总DNA的提取1.将菌株接种于液体LB培养基,37℃震荡培养过夜。2.取1.5ml培养物12000rpm离心2min。3.沉淀物加入567μl的TE缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入30μl 10%SDS和15μl的蛋白酶K,混匀,于37℃温育1h.4.加入100μl 5mol/L NaCl,充分混匀,再加入80μl CTAB/NaCl溶液,混匀后再65℃温育10min。5.加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心4-5min,将上清转入一只新管中,加入0.6-0.8倍体积的异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,沉淀可稍加离心。6.沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后,离心弃乙醇,在洁净工作台中稍加干燥,重溶于20μl TE缓冲液(含RNaseA-25ng/ml)中,准备电泳检测。(二)琼脂糖凝胶电泳1.制胶:称取琼脂糖粉末,置于三角瓶中,加入TAE缓冲液配成0.8%的浓度,加热使琼脂糖全部融化于缓冲液中,待溶液温度降至65℃时,立即倒入制胶槽中,插入样品梳。在室温放置0.5-1h,待凝胶全部凝结后,轻轻拔出样品梳。然后在电泳槽中加入电泳缓冲液直到没过凝胶为止。2.加样:取0.5-1μg 左右的样品,体积为10-20μl,加入1/4体积的溴酚兰-甘油指示剂,混匀后小心地加到样品槽中。同时另取一个已知分子量的标准DNA水解液,在同一凝胶板上进行电泳。3.电泳:维持恒压100V,电泳0.5-1h,直到溴酚兰指示剂移动到凝胶底部,停止电泳。4.染色:将凝胶取出后浸入0.5mg/ml 溴乙啶溶液中,染色0.5-1h。染液可反复多次使用。5.观察:将凝胶板置于254nm波长紫外灯下进行观察。DNA存在的位置呈现橙黄色荧光。【注意事项】1.溴乙啶有毒,配制和使用溶液时要戴手套,勿将溶液滴洒在台面或地面上。溴乙啶溶液于室温保存在棕色瓶中。2.倒凝胶板时不要太厚,否则影响电泳效果。
相关实验方法
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微生物DNA鉴定服务
微生物的形状是由基因决定的,基于DNA测序法的微生物鉴定法不仅快速,准确,而且不受细菌的培养条件和生长环境影响,对于难以实现人工培养的寄生菌和其它特殊细菌尤其有效。细菌16srDNA序列和真菌ITS徐立进化速度适中,非常适合细菌和真菌的DNA鉴定,已经得到了广泛应用。
英茂盛业的微生物DNA鉴定服务包括细菌16srDNA鉴定和真菌ITS鉴定,鉴定成功率在99%以上。绝大多数菌种可以鉴定到属或种。我们为古生菌,立克次氏体备有特殊鉴定方案,鉴定成功率在90%以上。
价格 检测周期
细菌16srDNA鉴定
真菌ITS鉴定
* 提取微生物样品基因组DNA
* 扩增出16srDNA或ITS序列
* DNA测序,将样品序列与GenBank中已知序列进行比对
* 判定微生物种类,可将微生物划分到属或种
* 与同源性较高菌种构建系统发育树(需单独订购)
1、可以提供基因组DNA、平板、斜面或菌液作为样品。
2、提供的平板和斜面培养样品需要有单菌落;DNA样品需从分离的单菌落提取;菌液样品需从单菌落中培养得到。
3、基因组DNA样品浓度不小于20ng/&l,总体积不小于20&l。DNA无明显降解。
4、致病性菌株请提供DNA样品。
5、测序出现大部分序列套峰为样品不纯所致,收取全部服务费用。
6、有极少数样品因为GeneBank中没有同源性较高的序列,不能鉴定到属或种。本公司将给出同源性最高的物种,并收取全部服务费用。
测序原始图谱
GeneBank比对参考物种
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