血糖的测定及激素对血糖浓度的影响 - 生化分子 - 生物秀
标题: 血糖的测定及激素对血糖浓度的影响
邻甲苯胺法（O-T法） 【基本原理】 葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺，再脱水生成希夫氏（Schiff）碱，然后经分子重排，生成一组蓝绿色化合物，在630nm处有一吸收峰，吸光度大小与血糖浓度成正比。 【器材】水浴箱、 试管、分光光度计。 【试剂】 1．邻甲苯胺试剂……
I . 邻甲苯胺法（O-T法）
【基本原理】
葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺，再脱水生成希夫氏（Schiff）碱，然后经分子重排，生成一组蓝绿色化合物，在630nm处有一吸收峰，吸光度大小与血糖浓度成正比。
水浴箱、 试管、分光光度计。
1．邻甲苯胺 取冰醋酸（AR）940ml,加入硫脲（AR）1.5g，溶解后加入邻甲苯胺60 ml混匀，置棕色瓶中，室温保存。新配试剂应放置24小时后（待老化）使用。此试剂腐蚀性极强，应避免与皮肤接触而造成灼伤。
2．12mmol/L苯甲酸溶液 称取苯甲酸1.4g，加入蒸馏水900ml,加热助溶，冷却后加蒸馏水至1000ml。
3．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 准确称取无水葡萄糖（预先置80℃烤箱中干燥至恒重，移置干燥器中保存）1.802g,用12mmol/L苯甲酸溶液溶解，移至100ml容量瓶中，再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中，冰箱内保存。
4．葡萄糖标准应用液（5mmol/L）准确吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml，置于100ml容量瓶中，再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度。
【操作步骤】
混匀，置沸中煮沸12分钟，取出置流水中冷却5分钟用分光光度计波长630nm，以空白调零，读取各管吸光度。
1．邻甲苯胺与葡萄糖的反应并非特异 ，其他糖在反应中亦能产生与葡萄糖相似的吸收光谱，它们的相对吸光度比率分别为：葡萄糖=1.00;果糖=0.06;甘露糖=0.96;半乳糖=1.42;蔗糖=0.16。但这些糖中只有葡萄糖、果糖、半乳糖存在于正常人血清中，而后两者在正常人血液中含量甚微，不影响试剂测定结果。
2．葡萄糖与邻甲苯胺的呈色强度与反应条件（邻甲苯胺和冰醋酸的批号、试剂配制后保存的时间以及加热温度和时间）有关。因此，各管的反应条件必须完全一致。
3．邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易被氧化成红棕色，用此种邻甲苯胺配制的试剂、空白管颜色深，反应灵敏度低，严重影响测定结果。须经以下方法处理方可应用：在500ml邻甲苯胺中加入盐酸羟胺0.5g,置50～60℃中20分钟并不时摇动，使邻甲苯胺还原，颜色变浅。如上述处理不够理想，则将邻甲苯胺用全玻璃器重，收集199～201℃无色或浅黄色的流出液，置棕色瓶加黑纸袋避光密封保存。
II. 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
【基本原理】
人和动物体内，血糖浓度受各种激素调节而维持恒定。胰岛素能降低血糖；其他很多激素则具有升高血糖的作用，其中以肾上腺素作用较为迅速而明显。胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖合成糖元，又加强糖的氧化作用，故可以降低血糖；肾上腺素促进肝糖元分解而增高血糖。
此实验观察家兔注射胰岛素和肾上腺素前后的血糖浓度变化。
注射器 、针头、刀片、。
1．肾上腺素和胰岛素
3．25%葡萄糖
【基本操作】
1．动物准备
取正常家兔两只，实验前预先饥饿，称体重（一般为2～3kg）。
一般多以耳缘静脉取血，先去毛，用二甲苯擦拭兔耳，使其血管充血，再用干棉球擦干，于放血部位涂一薄层凡士林，再用粗针头刺破静脉放血，将血液收入抗凝管中（每ml血约需2mg草酸钠）边收集边摇匀，以防凝固。用干棉球压迫血管止血。
3．注射激素后取血
取饿兔血后，其中一只兔皮下注射胰岛素，剂量按0.75单位/公斤体重计算，并记录注射时间。一小时后再取血。取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克而死亡。
另一只兔皮下注射肾上腺素，剂量按0.4mg/公斤体重计算，并记录注射时间。半小时后再取血。
算出注射胰岛素后血糖降低和注射肾上腺素后血糖增高的百分率。
测血糖常用化学法有邻甲苯酚法,常用酶法为葡萄糖氧化酶法、己糖法。
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葡萄糖的体外分解对血糖测定的影响
曾钦凤，钟毓琼，梁淑连 《实用医技杂志》 2006年3月 第5卷 第6期
　　为阻止血液标本中葡萄糖的体外分解，《全国临床检验操作规程》指明采用草酸钾?氟化钠作抗凝剂。但随着自动生化分析仪的日益普及，有的实验室为求方便，采用血清标本来完成包括血糖在内的一整套生化项目的检查。据观察了解，血清葡萄糖测定结果有明显偏低的现象。现将我们的有关实验结果报道如下。
　　1& 材料与方法
　　1.1& 抗凝管&
　　草酸钾?氟化钠干燥抗凝。
　　1.2& 血标本来源&
　　2名志愿供血者及40名来本实验室做生化检查的病人。
　　1.3& 试剂&
　　血葡萄糖(GLU、氧化酶法)。试剂盒系美国贝克曼?库尔特公司产品，通过美国FDA的认可和中国SDA的批准。
　　1.4& 仪器&
　　美国BECKMANCOULTER公司生产的SYNCHRON LX20全自动生化分析系统。
　　2& 实验与结果
　　将2名志愿供血者静脉血液，各分装2 ml于抗凝与非抗凝管内，在10 min内分离出血浆与血清，立即测定血葡萄糖。之后放置室温。在抽取血液后的1 h、3 h、8 h再进行分离和测定。每次测定吸出样品后，即轻轻混匀全血，加盖封闭，待下一次测定之前离心分离。血标本均无溶血。表1& 不同时间测定血清与血浆葡萄糖结果(略)
　　结果显示，血清与血浆相比较，即使立即测定，血葡萄糖结果已有下降，1 h~8 h下降明显。
　　我们又随机取40例病人，每个病人血标本分装非抗凝管与抗凝管中，分别制成血清与血浆，在BECKMANCOULTER公司生产的SYNCHRON LX20全自动生化分析仪上测定血葡萄糖浓度。全部操作按日常工作循序进行。当日上午完成测定。分离出的血标本在测定前及测定中均置于密闭状态，室温20 ℃。测得血清葡萄糖浓度(x)范围为2.63 mmol/L~15.35 mmol/L，均值为5.89 mmol/L；血浆葡萄糖浓度(y)范围为2.85 mmol/L~16.84 mmol/L，均值为6.72 mmol/L。经配对资料比较t检验，t=11.53&t0.01 (40)，故P&0.01，其差别有显著意义。说明在日常工作中，如不注意防止葡萄糖的体外分解，会明显影响糖尿病的诊断和监护，而且这种误差，即不能在室内质控分析中发现，也不能在室间质评中反映出来。
　　3& 讨论
　　在糖尿病发病率呈现上升趋势的今天，应强调不能忽略血清测定葡萄糖引起的误差。由于草酸钾?氟化钠对多项生化检查存在干扰，不适用于全套生化检查。要选择一种既能较好阻止血葡萄糖体外分解，又能适用于其他生化检查的抗凝剂实属必要，有待进一步探讨。
　　(湛江市第二人民医院，广东 湛江 524003)
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糖酵解引起血糖测定前误差的原因及对策
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