ebioscience 流式抗体的流式抗体,能用来做免疫荧光吗

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【求助】哪里可以买到大鼠CD34流式抗体?
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这个帖子发布于10年零0天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
因为一直没有买到直接标记的流式抗体,所以采用间接标记法,但是试验结果一直为阴性,老师劝我换抗体,但是确实没有找到啊,请问有没有谁知道哪个公司有卖的啊?急求!
不知道邀请谁?试试他们
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你在哪里呀,你和当地的基因公司联系,他们原来代理过的,国外进口的,好像是serotec公司罢。
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请上以下网址查找:.cn可砍价,大概2000元多一点。
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我用的是BD公司的,很多代理都可以买到啊,比如晶美,就是贵了点哦。
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前段时间没能上网,今天上来看到各位提供的信息,非常感谢!但是这些产品都是做小鼠或者人的,大鼠的还是没有找到。顺便说一句,我在成都,有没有人知道哪个公司有代理?
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继续求救,急需!
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你难道就不能在网上搜索一下,或者看看人家文献里用的是哪个公司的产品,然后再到该公司网站查询好后,联系你所处城市的试剂代理商。
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丁香园荣誉版主
不知道你要发什么样的文章,如果是5分以上的文章,那么建议你买BD 的流式抗体;如果你随便发发SCI的文章,那么ebioscience的抗体其实也很好,价格还便宜,且有小包装;如果想发国内的文章,那我觉得无所谓什么公司的了。
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santa cruz
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基因公司代理的BD Phartmagin的流式抗体,有各种直接荧光标记的,而且效价还挺高,我们就用BD的抗体做对照和质控!基因公司好像各地都有代理。做免疫荧光santa的不稳定,做westen 用还可以。他们公司北京办电话是010-
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关于丁香园细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
一、制备前——培养细胞1. 培养细胞用0.25%的胰酶消化。2. PBS或生理盐水洗涤细胞2次,再用PBS或生理盐水悬浮细胞,加入预冷的无水乙醇,终浓度为60%~70% ,快速混匀,并用封口膜封口,置4℃下可保存15天左右。二、制备1. 取1×106个细胞/100μl,先加入一抗混匀,置室温下避光反应30min。2. 用PBS洗涤细胞2次,离心沉淀弃掉上清液(离心转数一般为800~1000rpm,5min)。3. 00μl PBS重悬细胞,再加入FITC或PE标记荧光二抗(用量均按说明书要求加入)混匀,室温下反应30min。4. PBS再洗涤细胞2次,加入500μl PBS重悬成单细胞悬液,上机检测。注意:染色的抗体加入量和反应时间,一般根据试剂使用说明书的要求进行。若说明书上未说明,应先进行预实验,掌握好剂量与最佳反应时间后,再进行流式样品的制备。制备好的样品,若不能及时上机检测,用1%~4%的多聚甲醛固定,4℃下可保存5天。
(共1个问题)
相关实验Protocol
谁能提供实验帮助?
谁做这个实验?
直接免疫荧光简单些
谁关注这个实验?
丁香通采购热线:400-
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Ebioscience公司网址:美国ebioscience(成立于1999年,位于圣地亚哥,由PMG的人员创立,专注在人和小鼠的CD系列/细胞因子相关试剂流式抗体.大部分产品的克隆号与PMG一样)以其高品质的产品,良好的服务及实惠的价格赢得了多家世界顶尖实验室和科研机构的青睐。产品种类丰富:包括人、小鼠和大鼠的免.学相关试剂。* 产品种类丰富:包括人、小鼠和大鼠的免疫学相关试剂* 质量超群:6步严格质控* 结果可靠:高亲和力、高纯度、高信噪比* 小包装:流式抗体除常规的100T包装外,还提供价格更便宜的25T和50T的小包装,方便使用&eBioscience公司流式问答:
1. eBioscience公司提供了哪些荧光标记抗体?答:eBioscience公司提供FITC,PE,PE-Cy5,PE-Cy5.5,PE-Cy7,APC,APC-Cy5.5,APC-Cy7,Cy5, PacificBlue&,andAlexaFluor&488,647and700等荧光标记抗体。&2. eBioscience公司提供抗体浓度是多大?答:eBioscience公司的提供抗体包括两种规格:ug和tests. 在ug规格的抗体中,亲和纯化、生物素标记、功能纯化生物素标以及FITC和Alexa Fluor& 488标记的抗体浓度为0.5 mg/ml;APC、PE、Alexa Fluor& 647,700和tandem标记的抗体浓度为0.2 mg/ml;功能纯化抗体浓度是1 mg/ml;而tests规格的抗体浓度标注在说明上,通常建议每test为20ul。&3. 流式细胞实验的对照应该如何设置?什么是同型对照?答:①在应用流式技术检测细胞表面抗原时,我们通常要设的一个对照就是同型对照。同型对照:使用与荧光标记抗体相同来源、相同标记、相同剂量和亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。例如应用eBioscience公司的FITCanti-humanCD3:CatNo.11-0037,抗体亚型MouseIgG2a做流式染色;建议用FITCMouseIgG2a,KIsotypeControl:CatNo.11-4724作为同型对照。②细胞因子的流式检测时,由于细胞经过了培养刺激活化的处理,为保证测得结果的准确性和客观性,除了同型对照外,还需另设置未刺激对照和刺激对照。未刺激对照:激活时由于BFA等的存在抑制了胞内蛋白的转运,因此在激活过程中产生的抗原与细胞因子会滞留胞内,未刺激对照也应包含BFA等阻断剂。激活对照:激活对照使用细胞表面表达CD69来评价激活与否,如果未达到CD69期望的水平,则激活步骤出了问题,某一试剂可能失活,过期,制备不当或溶剂污染,需制备新鲜刺激剂重新实验。&4. 间接免疫荧光标记法如何设置同型对照?答:同型对照的目的是消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色,而确保检测结果的真实性。在采用间接免疫荧光标记法流式检测时,所设的同型对照是与一抗相同剂量、相同亚型和相同生物素标记(或纯化)免疫球蛋白,之后的荧光标记过程与实验检测组相同即可。eBioscience公司提供了各色标记和纯化的同型对照免疫球蛋白。&5. 为什么流式细胞术多色分析时要进行荧光补偿调整?答:在进行流式细胞术多色分析时,待测细胞通常携带两种或两种以上的荧光素,如异硫氰荧光素(FITC)、藻红蛋白(PE)、别藻红蛋白(PECY5)等。这些荧光素被激光激发后发出不同波长的荧光,理论上每一种荧光通过选择恰当的滤光片可被相应的检测器检测到,而不受其他荧光的干扰。但目前这些荧光染料都具有宽发射谱性质,尽管它们的发射峰各不相同,但发射谱范围有一定的重叠,也就是说,相邻的检测器会检测到彼此的荧光信号,例如,FITC检测器会检测到少量的PE光谱,而PE检测器会检测到较多的FITC光谱。这样就影响了检测结果的准确性,因此,多色分析时必须进行光谱重叠的校正。&6. 如何检测胞内因子抗体的特异性?答:可以应用过量的相应细胞因子先封闭该胞内因子的荧光标记抗体,或者先用不带荧光标记的相应因子抗体先封闭细胞,进一步流式操作作对照;另外同型对照也可以判断细胞的固定、破膜的效果以及非特异性背景的影响。&7. 为什么用CD452SSC设门法进行流式细胞术白血病表型分析?答:免疫分型所用的样本通常是骨髓,由于骨髓中各种大小和分化程度的细胞均有,只根据细胞大小和颗粒密度很难将不同组分的细胞区分开。而造血系统细胞的CD45表达的荧光强度(FI)与细胞分化程度有一定关系,即分化程度高的成熟白细胞其CD45的FI也高,分化程度低的细胞其FI也低,而红系细胞的FI最低。在成熟白细胞中,各类细胞其 CD45的FI亦不相同,其中淋巴细胞和单核细胞的FI高于中性粒细胞。因此,根据各类细胞CD45的FI和颗粒密度不同,采用CD452SSC(侧向角散射)设门法可以将原始细胞(低FI,低或高SSC)、淋巴细胞(高FI,低SSC)、单核细胞(高FI,中等SSC)、中性粒细胞(低FI,高 SSC)、红系细胞(最低FI,低或高SSC)和细胞碎片(最低FI,最低SSC)清楚地区分开。
嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司,免费热线:400-698-4168。ebioscience的流式抗体,能用来做免疫荧光吗(抗体,免疫荧光) - 免疫实验 - 生物秀
标题: ebioscience的流式抗体,能用来做免疫荧光吗(抗体,免疫荧光)
摘要: [ebioscience的流式抗体,能用来做免疫荧光吗(抗体,免疫荧光)] ebioscience的流式抗体,剩下点想用来做免疫荧光,可以吗有人这么做过没有?(说明书上没写能与不能) 关键词:[抗体 免疫荧光]……
ebioscience的流式,剩下点想用来做免疫荧光,可以吗有人这么做过没有?(说明书上没写能与不能)
回复能做。回复什么荧光标记的?如果是FITC荧光比较好。有些如PE-cy7不合适做免疫荧光。回复通常是可以做的,仔细看看说明书,一般也有标明出来的。我还帮客户找了,同时做免疫组化双染的,客户很满意~
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eBioscience流式抗体常见问题(二)
来源:生物谷
浏览人数: 2051
eBioscience公司提供了哪些抗体?
A:物种――人、小鼠、大鼠、非人灵长类、犬类等。检测指标――包括细胞表面标记(CD分子,膜骨架,趋化因子受体)和胞内指标(细胞因子,核内转录因子)。抗体标记――生物素标记抗体,亲和纯化抗体以及直标荧光素抗体。eB抗体的直标荧光素有(括号内是发射光波长):紫光(405nm)激发: eFluor& 450 (450nm) 蓝光(488nm)激发:FITC (518nm)、Alexa Fluor& 488 (519nm)、PE (575nm)、PerCP-eFluor610(610nm)、PE-Cy5 (667nm)、PerCP-Cy5.5 (695nm)、PerCP-eFluor& 710 (710nm)、PE-Cy7 (785nm)黄绿光(532-561nm)激发:PE (575nm)、PE-Cy5 (667nm)、PE-Cy7 (785nm)红光(633nm)激发:APC (660nm) 、eFluor& 660 (660nm)、Alexa Fluor& 647 (668nm)、Alexa Fluor& 700 (723nm)、APC-eFluor& 780 (780nm)
eBioscience抗体的保存期限?
A:请见试剂瓶包装上的标注,如没有标注的一般为收货后6个月。特殊情况见说明书或咨询联科生物。
eBioscience抗体交叉反应性
A:ebioscience公司测试了抗体与非人灵长类及猪、犬类的交叉反应性。
抗人抗体的交叉反应性请见网页
抗小鼠抗体的交叉反应性
亲和纯化抗体与功能性抗体的区别?
A:eBioscience提供的亲和纯化抗体含有叠氮化钠,这些产品主要用于flow cytometry, WB, IP, and IHC 实验;功能级抗体则不含有叠氮化钠,而且进行了内毒素检测,这些抗体的内毒素含量低于或者等于工业内毒素标准0.001 ng/ mg。功能性抗体一般用于体外功能实验,如刺激、阻断、中和。
eBioscience公司提供抗体浓度是多大?
A:eBioscience公司的提供抗体包括两种规格:ug和test包装.
在ug规格的抗体中,亲和纯化、生物素标记、功能纯化生物素标以及FITC和Alexa Fluor& 488标记的抗体浓度一般为0.5 mg/ml;APC、PE、Alexa Fluor& 647,700和tandem标记的抗体浓度一般为0.2 mg/ml;功能纯化抗体浓度一般为1 mg/ml;具体以抗体标识为准。
tests规格的抗体浓度标注在说明上,通常建议每test为5 ul。
eBioscience抗体可以应用于哪些实验
A: 具体单个抗体的应用请见说明书
Flow cytometric analysis- surface antigen staining (FC) 细胞表面抗原的流式检测
Flow cytometric analysis- intracellular staining (IC Flow) 细胞内抗原的流式检测
Immunohistochemistry (IHC) 免疫组织化学
Immunohistochemistry- frozen sections (IH/F) 免疫组织化学――冰冻切片
Immunohistochemistry- paraffin sections (IHC-Paraffin) 免疫组织化学――石蜡切片
Immunoblotting (WB) 免疫印记
Immunoprecipitation (IP) 免疫沉淀
ELISA 酶联免疫吸附分析
ELISPOT 酶联免疫斑点
Bioassays (FA) 生物分析(功能实验)
Neutralization/Blocking studies (NU) 中和/阻断研究
In vitro Cytokine Capture Assay (IVCCA) 体外细胞因子捕获分析
In vivo studies in mice 小鼠的体内研究
Chromatin immunoprecipitation (ChIP) 染色质免疫沉淀
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