硝普钠复合异丙酚及异氟醚控制性降压用于颅内动脉瘤夹闭术--《内蒙古医学杂志》2005年01期
硝普钠复合异丙酚及异氟醚控制性降压用于颅内动脉瘤夹闭术
【摘要】：
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R614【正文快照】：
近年来 ,我院共做颅内动脉瘤夹闭术麻醉 2 0例 ,术中行硝普钠复合异丙酚及异氟醚控制性降压 ,效果满意 ,现报道如下。1　临床资料择期手术 2 0例 ,ASAⅡ～Ⅲ级。男 13例 ,女 7例 ;年龄 2 0～ 6 2岁。体重 4 5～ 6 0kg。无心、肺、肝肾功能异常。前交通动脉瘤 8例 ,后交通动脉
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京公网安备75号SAUCERNETIN STRUCTURALLY SIMPLIFIED SUBSTANCE AND PREPARATION METHOD THEREFOR AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND USE THEREOF
WIPO Patent Application WO/
Disclosed a saucernetin structurally simplified substance and the preparation method and pharmaceutical composition and use thereof. In particular, it relates to a compound of general formula (I) shown as formula (I) or an isomer thereof and a salt thereof, and the preparation method for such compounds. A novel pharmaceutical composition contains an effective amount of compound of formula I and a pharmacodynamically acceptable vector. The present invention also discloses the use of such compounds in preparing drugs for preventing and/or treating tumours. The tumours include neural glioblastoma, melanoma, gastric cancer, lung cancer, breast cancer, kidney cancer, liver cancer, oral epidermoid carcinoma, cervical cancer, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, and colon cancer and rectal adenocarcinoma.
Inventors:
XIE, Ping (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
谢平 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
CHEN, Xiaoguang (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
陈晓光 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
JIAO, Xiaozhen (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
焦晓臻 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
LIU, Xiaoyu (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
刘晓宇 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
LI, Yan (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
Application Number:
Publication Date:
12/06/2012
Filing Date:
05/28/2012
Export Citation:
INSTITUTE OF MATARIA MEDICA, CHINESE ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
中国医学科学院药物研究所 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
XIE, Ping (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
谢平 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
CHEN, Xiaoguang (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
陈晓光 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
JIAO, Xiaozhen (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
焦晓臻 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
LIU, Xiaoyu (No.1, Xian Nong Tan StreetXuanwu District, Beijing 0, 100050, CN)
刘晓宇 (中国北京市宣武区先农坛街1号, Beijing 0, 100050, CN)
International Classes:
C07C43/23; A61K31/09; A61K31/12; A61K31/36; A61P35/00; C07C41/26; C07C49/84; C07D317/54
View Patent Images:
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Domestic Patent References:
WOA1N/AWOA1N/AWOA2N/AWOA1N/A
Other References:
ZHANG, LIZI ET AL.: 'Total Synthesis of 8',8''-DemethylManassantin-8' CHINESE JOURNAL OF SYNTHESIS CHEMISTRY vol. 16, no. 6, 2008, pages 712 - 715
HANESSIAN, STEPHEN ET AL.: 'Total Synthesis and Stereochemical Confirmation of Manassantin A, B, and B 1' ORGANIC LETTERS vol. 8, no. 24, 2006, pages 5477 - 5480
KASPER, AMANDA C. ET AL.: 'Analysis of HIF-1 Inhibition by Manassatin A and Analogues with Modified Tetrahydrofuran Configurations' BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS vol. 19, no. 14, 2009, pages 3783 - 3786
XUE, PENG: '1. Synthetic Studies on the Derivatives of Saucernetin-8, an Inhibitor of HIF-l alpha 2. Total synthesis of (-)-Talaumidin and (-)-Galbelgin, Chinese Master's Theses Full-text Database E057-37' MEDICINE AND HEALTH SCIENCES 15 July 2010, ISSN
Attorney, Agent or Firm:
BEIJING SAN GAO YONG XIN INTELLECTUAL PROPERTY AGENCY CO., LTD. (A-1-102, He Jing Yuan Ji Men Li,Xueyuan Road, Haidian District, Beijing 8, 100088, CN)
权 利 要 求
1. 通式 （I) 合物或其异构体及其盐类
R1选自氢， C1-4直链或支链烷基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链 或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 卤素；
R2选自氢， C1-4直链或支链烷基；
R3选自氢， 羟基， 0=;
R4和 R5独立的选自氢， C1-4直链或支链烷基，卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 羧基， COO C1-4 直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰基， 卤素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。
2. 根据权利要求 1的化合物或其异构体及其盐类， 其特征在于，
R1选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支链烷氧基， 三卤甲氧 基， 卤素；
R2选自氢， C1-2直链或支链烷基；
R3选自氢， 羟基， 0=;
R4禾 B R5独立的选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支链烷氧 基， 三 甲氧基， 羧基， COO C1-2直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰基， 卤 素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。
3. 根据权利要求 1的化合物或其异构体及其盐类， 其特征在于， 所述化合物如式 (la)所示
其中环戊烷环上 1， 3位取代基为顺式取代， 7位， 7 ' 位， 8位， 8 '位手性中心 的构型可分别为 R或 S构型；
R1选自氢， C1-4直链或支链烷基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链 或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 卤素；
R2选自氢， C1-4直链或支链烷基；
R3选自氢， 羟基， 0=;
R4和 R5独立的选自氢， C1-4直链或支链烷基，卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 羧基， COO C1-4 直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰基， 卤素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。
4. 根据权利要求 3的化合物或其异构体及其盐类， 其特征在于，
R1选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支链烷氧基， 三卤甲氧 基， 卤素；
R2选自氢， C1-2直链或支链烷基；
R3选自氢， 羟基， 0=;
R4禾 B R5独立的选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支链烷氧 基， 三 甲氧基， 羧基， COO C1-2直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰基， 卤 素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。
5. 根据权利要求 1-4任一项的化合物或其异构体及其盐类， 其特征在于， 所述化 合选自
6、 制备权利要求 1-5中任一项化合物的方法， 其包括以下步骤：
1) 母环式 （VI) 化合物的合成
A.式 （II) 化合物在 12作用下发生取代得到式 （III) 化合物；
B.式 （III) 化合物经苄基保护得到式 （IV) 化合物；
C.式 （IV) 化合物再与环戊烯在醋酸钯的催化下发生偶联反应得到式 （Va) 和式 （Vb) 化合物；
D. 经过催化氢化得到式 （VI) 化合物；
1， 3-顺式二取代苯基环戊院
2) 母环与侧链的连接
将得到 1， 3-顺式二取代苯基环戊烷（式 VI)与 α-卤代取代的苯基烷基酮（式 VII) 经烷基化反应得到 8位， 8' 位酮化物（式 IX), 此化合物再还原得到 8位， 8' 位 羟基化物 （式 X);
其中 Rl， R2， R3， R4， R5如权利要求 1_5中任一项所定义， X代表卤素。
7、 一种药物组合物， 包括有效剂量的权利要求 1-5中任一项的化合物或其异构体 及其盐类和药效学上可接受的载体。
8、 权利要求 1-5中任一项的化合物用于制备预防和 /或治疗肿瘤的药物中的应用。
9、根据权利要求 8的应用， 所述的肿瘤选自神经胶质母细胞瘤、 黑色素瘤、 胃癌、 肺癌、 乳腺癌、 肾癌、 肝癌、 口腔表皮癌、 宫颈癌、 卵巢癌、 胰腺癌、 前列腺癌、 结肠癌、 直肠腺癌。
10、 根据权利要求 9 的应用， 所述的乳腺癌选自耐紫杉醇的乳腺癌， 所述的肺癌 选自非小细胞肺癌。
Description:
三白脂素结构简化物， 其制法和其药物组合物与用途 技术领域
本发明涉及新的三白脂素结构简化物， 其制备方法， 含它们的药物组合物， 及其作为药物， 尤其作为抗肿瘤药物的用途， 属于医药技术领域。
背景技术 目前认为， 由于大多数实体瘤的血管存在结构与功能方面的异常， 无法满足 肿瘤细胞快速生长对营养成分和氧的需求， 导致实体瘤产生特殊的低氧及酸性微 环境， 进而促使癌细胞对缺氧产生适应反应， 缺氧诱导因子 -l a (HIF-l ct )由于细 胞内氧含量改变而引发一系列反应中起调控作用的转录因子， 是癌细胞在缺血条 件下依然存活的重要因素。 免疫组织化学研究证实， HIF-l ct在人和动物的多种实 体瘤及其转移灶中高表达， 而在癌旁正常组织及良性肿瘤中检测不到 Cancer Research. , 2000 ; 60(11) 4693. ) 最新研究结果显示 HIF-1 α是 70余种缺氧诱导 基因的关键上游转录因子， 它可以上调下游靶基因的表达包括 VEGF ( Cancer Research . , 2002 ; 62{\?) 5089 )， 多药耐药基因 （MDR1) 等 （ Cancer Research . , 2002 ; 62{\2) 3387. )。 因而 HIF-1 α的过表达不仅可促使肿瘤的组 织的血管形成、 它还可降低肿瘤对化疗的敏感性， 诱发肿瘤细胞对抗癌药物的耐 葯， 并与临床分级， 放化疗失败及转移和预后密切相关 Ca r Res. , 2001 ; 61 ; 2911 )o 显然， 选择 HIF-1作为肿瘤治疗的靶点比选择单一或少数几种缺 氧诱导基因如 VEGF及其受体更具临床应用价值， 因而开发特异性的以 HIF-1 α为 靶点的药物已成为肿瘤治疗的新热点。
三白月旨素 _8 (manassantin A, saucernetin-8) 禾口三白月旨素 _7 (manassantin B， saucernetin-7) 是从中药三白草中分离得到的双木脂素类化合物 中草药, 2001， 32 ( 1)， 9-11 )。 近期文献报道三白脂素 _8， 三白脂素 _7和三白脂素 -7'都 对人乳腺癌 T47D细胞中的 HIF-1 α表达具有很强的选择性抑制作用， 其抑制活性 为 IC5。 3nmol o 并对多种缺氧诱导的 CDKN1A, VEGF和 GLUT-1基因也有很强的抑制 活性 （7： Nat. Prod. , 2004, 67， 767-771 ; Biochem. Biophy. Res. Commun. , , . )， 但这类， 提取分离困难， 因而来源有限。 另外天然产物结构 复杂， 通过合成的方法制备困难。
R= OCH3, (threo,threo)- Manassantin A, 1
R= OCH3, epi C-8'", (erythro,threo)- Manassantin A, 2
R,R= -OCH20-, (threo,threo)- Manassantin B， 3
R= OCH3, epi C-8'", (erythro,threo)- Manassantin B， 4
本发明要解决的技术问题是提供具有优良疗效且毒性低的具有 HIF-1 α抑制 作用的一类新化合物。
本发明要解决的另一技术问题是提供这类化合物的制备方法。
本发明要解决的又一技术问题是提供含有这类化合物的药物组合物。
本发明要解决的再一技术问题是提供这类化合物在制备抗肿瘤药物中的应 用。 为解决本发明的技术问题， 采用如下技术方案：
1. 通式 （I) 盐类
R1选自氢， C1-4直链或支链烷基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链 或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 卤素；
R2选自氢， C1-4直链或支链烷基；
R3选自氢， 羟基， 0=;
R4和 R5独立的选自氢， C1-4直链或支链烷基，卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 羧基， COO C1-4 直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰基， 卤素， 羟基； 或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。 优选的 R1选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支链烷氧基， 三卤甲氧基， 卤素；
优选的 R2选自氢， C1-2直链或支链烷基；
优选的 R3选自氢， 羟基， 0=;
优选的 R4和 R5独立的选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支 链烷氧基， 三卤甲氧基， 羧基， COO C1-2直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰 基， 卤素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。 优选的式I)化合物， 包括但不限定于式 (la)所示
其中环戊烷环上 1， 3位取代基为顺式取代， 7位， 7 ' 位， 8位， 8'位手性中心 的构型可分别为 R或 S构型；
R1选自氢， C1-4直链或支链烷基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链 或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 卤素；
R2选自氢， C1-4直链或支链烷基；
R3选自氢， 羟基， 0=;
R4和 R5独立的选自氢， C1-4直链或支链烷基，卤素取代的 C1-4直链或支链烷基， C1-4直链或支链烷氧基， 卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧基， 羧基， COO C1-4 直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰基， 卤素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。 优选的 R1选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支链烷氧基， 三卤甲氧基， 卤素；
优选的 R2选自氢， C1-2直链或支链烷基； 优选的 R3选自氢， 羟基， 0=;
优选的 R4和 R5独立的选自氢， C1-2直链或支链烷基， 三卤甲基， C1-2直链或支 链烷氧基， 三卤甲氧基， 羧基， COO C1-2直链或支链烷基， C1-5直链或支链烷酰 基， 卤素， 羟基；
或者 R4和 R5形成 -OCH20相连成环。 优选的化合物， 包括但不限定于
在本发明中， 术语 "卤素"是指氟、 氯、 溴、 碘。
"卤素取代的 C1-4直链或支链烷基"和 "卤素取代的 C1-4直链或支链烷氧 基"是指烷基上的任意氢原子被卤素取代， 取代的卤素可以是一个或多个卤素取 代， 例如 1个， 2个， 或 3个。
本发明的 C1-4直链或支链烷基选自甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基。 本发明的 C1-4直链或支链烷氧基选自甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 丁氧基。
根据本发明， 式 （I ) 化合物可以异构体的形式存在， 式 （I ) 化合物可存在 环戊烷 1， 3取代的顺反异构体， 不对称中心具有 S构型或 R构型， 本发明包括所 有可能的立体异构体以及两种或多种异构体的混合物。
如果存在顺 /反异构体， 本发明涉及顺式形式和反式形式以及这些形式的混合 物， 如果需要单一异物体可根据常规方法分离或通过立体选择合成制备。 根据本发明， 本发明由式 （la) 表示的式 （I ) 化合物可通过如下反应路线 I 制备：
反应路线 I： 1) 母环 1， 3- 二取代苯基环戊烷的合成
1, 3-顺式二取代苯基环戊烷
i:取代 ii:保护 iii: 偶联 iv: 氢化
A. 式 （II) 化合物在 12作用下发生取代得到式 （III) 化合物；
B. 式 （III) 化合物经苄基保护得到式 （IV) 化合物；
C. 式（IV)化合物再与环戊烯在醋酸钯的催化下发生偶联反应得到式（Va)和式 (Vb) 化合物；
D. 然后经过催化氢化得到式 （VI) 化合物；
2) 母环与侧链的连接
V：烷基化 vi: 还原
将得到 1， 3-顺式二取代苯基环戊烷（式 VI)与 α-卤代取代的苯基烷基酮（式 VII) 经烷基化反应得到 8位， 8 ' 位酮化物（式 IX), 此化合物再还原得到 8位， 8 ' 位 羟基化物 （式 X); 其中 Rl， R2, R3， R4， R5如上所定义， X代表卤素。 本发明再一方面还涉及一种药物组合物，包括有效剂量的本发明化合物和药效 学上可接受的载体。 该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。 可通过将本发 明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和 /或辅剂结合， 制成适 于人或动物使用的任何剂型。 本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为 0. 1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠 道或非肠道， 如口服、 静脉注射、 肌肉注射、 皮下注射、 鼻腔、 口腔粘膜、 眼、 肺和呼吸道、 皮肤、 阴道、 直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂（包 括真溶液和胶体溶液）、 乳剂 （包括 o/w型、 w/o型和复乳）、 混悬剂、 注射剂 （包 括水针剂、 粉针剂和输液）、 滴眼剂、 滴鼻剂、 洗剂和搽剂等； 固体剂型可以是片 剂 （包括普通片、 肠溶片、 含片、 分散片、 咀嚼片、 泡腾片、 口腔崩解片）、 胶囊 剂 （包括硬胶囊、 软胶囊、 肠溶胶囊）、 颗粒剂、 散剂、 微丸、 滴丸、 栓剂、 膜剂、 贴片、 气 （粉） 雾剂、 喷雾剂等； 半固体剂型可以是软膏剂、 凝胶剂、 糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、 也制成是缓释制剂、控释制剂、 靶向制剂及 各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂， 可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂， 包 括稀释剂、 黏合剂、 润湿剂、 崩解剂、 润滑剂、 助流剂。 稀释剂可以是淀粉、 糊 精、 蔗糖、 葡萄糖、 乳糖、 甘露醇、 山梨醇、 木糖醇、 微晶纤维素、 硫酸钙、 磷 酸氢钙、 碳酸钙等； 湿润剂可以是水、 乙醇、 异丙醇等； 粘合剂可以是淀粉浆、 糊精、 糖浆、 蜂蜜、 葡萄糖溶液、 微晶纤维素、 阿拉伯胶浆、 明胶浆、 羧甲基纤 维素钠、 甲基纤维素、 羟丙基甲基纤维素、 乙基纤维素、 丙烯酸树脂、 卡波姆、 聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇等； 崩解剂可以是干淀粉、 微晶纤维素、 低取代羟丙 基纤维素、 交联聚乙烯吡咯烷酮、 交联羧甲基纤维素钠、 羧甲基淀粉钠、 碳酸氢 钠与枸橼酸、 聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、 十二烷基磺酸钠等； 润滑剂和助流剂 可以是滑石粉、 二氧化硅、 硬脂酸盐、 酒石酸、 液体石蜡、 聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片， 例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片， 或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂， 可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、 助流 剂混合， 将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。 也可将有效成分本发明化合物先 与稀释剂、 黏合剂、 崩解剂制成颗粒或微丸， 再置于硬胶囊或软胶囊中。 用于制 备本发明化合物片剂的各稀释剂、 黏合剂、 润湿剂、 崩解剂、 助流剂品种也可用 于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂， 可以用水、 乙醇、 异丙醇、 丙二醇或它们的 混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、 助溶剂、 PH调剂剂、 渗透压调节 剂。 增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、 卵磷脂、 羟丙基 _ β -环糊精等； PH调剂剂 可以是磷酸盐、 醋酸盐、 盐酸、 氢氧化钠等； 渗透压调节剂可以是氯化钠、 甘露 醇、 葡萄糖、 磷酸盐、 醋酸盐等。 如制备冻干粉针剂， 还可加入甘露醇、 葡萄糖 等作为支撑剂。
此外， 如需要， 也可以向药物制剂中添加着色剂、 防腐剂、 香料、 矫味剂或其 它添加剂。
为达到用药目的， 增强治疗效果， 本发明的药物或药物组合物可用任何公知 的给药方法给药。 根据本发明， 式 （I ) 化合物及其异构体在抗肿瘤中显示出优良效果。 因而可 作为抗肿瘤药用于动物， 优选用于哺乳动物， 特别是人。 本发明的化合物可用于 制备预防和 /或治疗肿瘤的药物中的应用。 优选的肿瘤选自乳腺癌。 优选的乳腺癌 选自耐紫杉醇乳腺癌。 本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重 程度， 患者或动物的个体情况， 给药途径和剂型等可以有大范围的变化。 一般来 讲， 本发明化合物的每天的合适剂量范围为 0. 001-150mg/Kg 体重， 优选为 0. l-100mg/Kg体重， 更优选为 l-60mg/Kg体重， 最优选为 2_30mg/Kg体重。 上述 剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药， 这取决于医生的临床经验以及 包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用， 或与其他治疗药物或对症药物合并使 用。 当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时， 应根据实际情况调整它 的剂量。 有益技术效果
发明人发现以顺式 1， 3-芳基取代的环戊烷取代三白脂素结构中的 7 ' ， 1"- 反式芳基 -8 ' ， 8"反式甲基取代的四氢呋喃环合成的结构简化物化合物 9较天然 产物三白脂素 A的 HIF-1 α抑制活性明显增强。
对人乳腺癌 T47D细胞中 HIF-1 α抑制活性的 IC5。为 0. 013nmol,其活性较天然 产物三白脂素 A强 200多倍 (结果见表 1)。 且其对人耐紫杉醇乳腺癌 MX-1/T细胞 在裸鼠异体移植瘤的生长有明显抑制作用。
本专利所设计合成的三白脂素结构简化物较三白脂素活性更好并且更加易于 制备， 成分更低。
尤其是抗紫杉醇耐药的实体肿瘤作用， 其特点是作用靶点新颖， 毒性低 （结 果见表 2和表 3)。
附图说明 图 1. 三白脂素 -8衍生物化合物 9对人耐紫杉醇乳腺癌 MX-1/Taxol肿瘤增殖的影 响
图 2. 三白脂素 -8衍生物化合物 9对人肺癌 H460肿瘤增殖的影响 图 3三白脂素 -8衍生物化合物 9对人耐紫杉醇肺癌 H460/Taxol肿瘤增殖的影响
具体实施方式 下面的实施例及药物活性实验用来进一步说明本发明， 但这并不意味着对本发明 的任何限制。
下面的实施例用来解释本发明， 但对本发明无任何限制。
使用的原料为已知化合物或按已知方法制备。
制备虽然不生成本发明的化合物， 但是合成制备本通式（I )化合物的有用中间体。 实施例 1 : 步骤 A: 250mL圆底烧瓶中加入邻甲氧基苯酚 lOg ( 80.56mmol)， 氢氧化钠 5.7 6g ( 144mmol), 甲醇 lOOmL, -4°C下加入单质碘 20.4g ( 80.3mmol)， 于此温度下 反应 lh， TLC显示完全， 停止反应， 倒入水中， 乙酸乙酯提取， 连二亚硫酸钠洗， 饱和氯化钠洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸除溶剂， 硅胶短柱得粗品 10.6g收率 5 3%
? NMR(300M, CDC13， 5ppm) 7.18 (d,lH,J=8.4Hz,Ar-H) ,6.86(s,lH，Ar-H)，6.69(d， 1H,J=
8.1Hz，Ar-H)， 5.57 ( s， ΙΗ,ΟΗ) 3.88(s， 1H, -OCH3) 步骤 B: 200mL圆底烧瓶中加入化合物 1 10.6g (42.4mmol), 50mL无水 DMF 溶解， 加入无水碳酸钾 22g ( 159mmol)， 于冰浴下缓慢滴加溴苄 1.39mL(42.4mmo 1)， rt反应 2h， TLC显示完全， 停止反应， 加大量的水终止反应， 乙酸乙酯提取（t otal500mL), 水洗,饱和氯化钠洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸除溶剂， 硅胶柱层 析 （乙酸乙酯： 石油醚 =0:1-1:100)， 得纯品 10g， 收率 69.4%
? NMR(300M,CDC13, 5ppm) 7.30-7.43 (m， 5H，Ar-H)， 7.15 (d， lH,J=6.6Hz) , 6.91(s
， lH,Ar-H), 6.62 (d， lH,J=8.7Hz), 5.12 (s， 2H,-0 CH2), 3.86 (s， 3H， -OCH3) 步骤 C: lOOmL圆底烧瓶中加入环戊烯 340mg (5mmol)， 2-甲氧基 -4-碘苄酚醚 4. 3g ( 12.65mmol)， 醋酸钯 220mg (0.33mmol， 0.065eq)， 四丁基氯化铵 3.5g ( 12. 59mmol)， KOAc 3.4g (34.64mmol),无水 DMF 25mL， 氩气保护下于 80°C下反应 4h， TLC显示反应完全， 将反应液冷却后， 加 500mL乙酸乙酯稀释，水洗（lOOmL x3), 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸除溶剂， 硅胶柱层析 （乙酸乙酯： 石油醚 =1:20) 得白色固体 2.0g， 重结晶精制得纯品 1.8g, 收率 73.2%。
? NMR(300M，CDC13， 5ppm) 7.45-7.28 (m，10H， Ar-H) , 7.08-6.64 ( m，6H， Ar -H),6.07 (s, 1H,-CH=),5.17 (s, 2H,-OCH2-),5.13 (s, 2H,-OCH2-),3.99(s, lH),3.91(s， 3H,-OCH3),3.87(s, 3H， -OCH3),2.81-2.67 (m, 2H,-CH2-),2.58-2.47(m, 1H ,CH)，1.93 -1.81(m, 1H， CH).
13C NMR(75M,CDC13, 5ppm) 160·6,149·2,149·0,146·2,142·4,139·9,139·3,136·9,136·7, 129.5,
128.1,127.3,126.8,126.7,122.7,122.3,118.7,117.3,117.9,113.7,113.3,110.7,110.5,109.0,1 08.8, 70.7,70.5,55.6,51.2,41.5,33.7,32.7 步骤 D: lOOmL圆底烧瓶中加入 1.65g (3.35mmol)化合物 3,冰醋酸溶解， 加入 Pd- C (cat ), 常压氢化 2h后反应完全， 过滤， 蒸除溶剂， 硅胶短柱得白色固体 lg， 重结晶精制得纯品 0.9g， 85.7%。
? NMR(300M,CDC13, 5ppm) 6.86-6.76 (m， 6H, Ar-H) ,5.46 ( s， 2H, -OHx2) , 3.15(s, 2H,CHx2), 2.42-2.38 (m, 1H), 2.21-2.17 (m, 2H), 1.82-1.69 (m, 3H) 13C NMR(75M,CDC13, 5ppm) 146.7,144.1,139.1,138.3,119.8,119.7,114.5,110.21,110. 16,
110.12,91.79,56.3,45.8,45.0,44.3,35.9,34.1 步骤 E: 500mL三颈瓶中加入 L-乳酸乙酯 4 g ( 33.86mmol) , N,0_二甲基盐酸羟 胺 6.93 g (71.10mmol) ，无水 THF 50 mL, -20 °C ,氩气保护，滴加异丙基氯化镁（2 M) 80 mL, 30min内滴加完毕， _20°C反应 lh, N,0_二甲基盐酸羟胺完全融解， 0°C反应 lh, 0°C下滴加饱和氯化铵 20mL终止反应，加少量水融解析出的固体，分出 有机层， 水层用乙酸乙酯提取（60 mlx3)， CH2C12提取（50 mlx2)，合并有机层，无 水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸除溶剂， 柱层析（乙酸乙酯:石油醚 =1 : 1)分离得无色油状 液体 2.5 g, 收率 55.6% .
[a] D -36.58 (c = 1.2, CHC13); 1H NMR (300 MHz, CDC13, ^ppm) 4.46 (q, 1H , CH , / = 6.9 Hz), 3.70 (s, 3H，OCH3)， 3.23 (s, 3H ,NCH3), 1.34 (d, 3H，CH3 J = 6.9 Hz) 步骤 F: 200mL三颈瓶中加入 3,4-二甲氧基溴苯 6.16 g (28.4 mmol), 无水 THF 50 mL, 冷却至 -78 °C , Ar气保护，滴力口 n-BuLi 17.8 mL (1.6M)(28.4 mmol),滴加完毕 后，于 -78 °C下反应 lh,将 1.35 g(10.1 mmol) 化合物 5 溶于 10 mL无水 THF,滴加 至反应液中， 于 -78 °C下反应 lh, TLC监测反应完毕，滴加 30 mL饱和氯化铵终止反 应，加少量水融解固体，分出有机层，水层用乙酸乙酯提取 (100mL X 3),合并有机层， 水、 饱和氯化钠洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸除溶剂， 硅胶柱层析（乙酸乙酯： 石油醚 =1 :5)分离得无色油状液体 1.58 , 收率 74.5% .
[a]D -36.58 (c = 1.2, CHC13); 1H NMR (300 MHz, CDC13, δ ppm) 7.53(dd , 1 H , ArH , Ji = 2.1 Hz, J2 = 8.4 Hz),7.51 (d , 1H , ArH , J = 2.1 Hz) ,6.90(d , 1H ,ArH , J = 8.4 Hz), 5.11 (q， 1H，CH , J = 6.9 Hz), 3.97 (s, 3H，OCH3)， 3. 95 (s, 3H ,OCH3), 1.34 (d, 3H,CH3, J = 6.9 Hz) 步骤 G: 50ml圆底瓶中加入化合物 6 1.28 g(6.1 mmol),吡啶 6ml,0 °C下分批加入对 甲苯磺酸酐 2.4 g(7.32mmol), 0 °C下反应 lh, TLC监测反应完毕，蒸除大部分溶剂， 加 150ml乙酸乙酯稀释，用饱和硫酸铜洗 50ml X 3，分出有机层，水、饱和氯化钠洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 蒸除溶剂， 柱层析（乙酸乙酯:石油醚 =1 :3)分离得浅黄色 固体 1.83 g, 收率 87.7% .
m.p.80-81 °C
[a]D -36.58 (c = 1.2, CHC13); IH NMR (300 MHz, CDC13, ^ppm) 7.76(d , 2H , ArH , J =6.6 Hz),7.58(d , IH , ArH , J = 2.1 Hz, J = 8.4 Hz) ,7.44(d，1H，A rH , J = 2.1 Hz),7.27(d , IH , ArH , J =6.6 Hz,), 6.88(d ,1H ,ArH , J = 8.4 Hz), 5.77 (q， IH，CH , J = 6.9 Hz), 3.96 (s, 3H，OCH3)， 3.92 (s, 3H，OCH3)， 2. 41(s , 3H ,CH3),1.34 (d , 3H，CH3 ，J = 6.9 Hz) 步骤 H : lOOmL圆底烧瓶中加入 0. 6g ( 1. 91隱 ol )化合物 4， 20mL无水乙腈溶解， 加入 1. 43g (4. 4mmol) C義 化合物 7 1. 6g ( 4. 4mmol )溶于 5mL无水乙腈中， 并 于室温下滴入圆底烧瓶中， rt反应 4. 5h， TLC显示反应完全， 停止搅拌， 过滤， 乙酸乙酯洗滤饼， 蒸除溶剂， 硅胶柱层析 （乙酸乙酯： 石油醚 =1 : 3 ) 得无色粘稠 状液体 1. 3g， 97. 5%
? NMR(300M,CDC13, 5ppm) 7.84-6.67 (m， 12H,Ar-H) ,5.41-5.34(m, 2H,CHx2), 3.93-3.82(m, 18H,-OCH3x6),3.11-3.07(m,2H,CHx2),2.38-2.19 (m,4H),1.79-1.66(m, 6H,-CH3x2), 1.576-1.476
13C NMR(75M,CDC13, 5ppm) 198.1,192.0,176.0,166.9,160.7,154.1,150.5,149.6,145. 8,
143.8,140.7,128.1,124.1,119.4,117.0,112.4,112.2,110.7,110.2,92.0,86.8,79.1,70.8,70.2,5 6.5,56.4,56.3,45.7,43.9,40.4,37.5,33.8,24.6,21.3,19.4 用类似的方法以化合物 4为原料与 a -溴 -3,4-二甲氧基苯乙酮反应得到下列化合物 收率 89.5%
1H NMR(300M,CDC13, δρριπ) 7.69-6.77(m, 12H,Ar-H), 5.27(m ,4H,-OCH2CO-x2), 3.95- 3.88(t, 18H, -0CH3x6), 3.15 (s, '2H, - CH- χ2)， 2.42- 2.38 (m, 1H),2.21(m, 2H) , 1. 91-1.81 (m, 2H), 1.76-1.69 (m, IH) 用类似的方法以化合物 4为原料与 α -溴 -3,4-二氯苯乙酮反应得到下列化合物 收率 50%
1H NMR(300M,CDC13, ^ppm) 8.29 (s, 2H， Ar-H), 7.89 (d，2H， J=8.7Hz, Ar-H) , 7.57 (d, 2H, J=8.1Hz, Ar-H), 6.80 (m, 6H) , 5.19(s, 4H，- OCH2-)， 3.89 (s, 6H, -OCH x2), 3.30-3.16 (m， 2H), 2.22 (m， 2H)， 2.12 (m, 1H)， 1.84-1.65 (m， 3H). 用类似的方法以化合物 4为原料与 α -溴苯乙酮反应得到下列化合物
收率 92.8%
1H NMR(300M,CDC1 , Spp ) 8.01 (d， 4H， J=6.9Hz， Ar-H) ,7.62 (m， 2H， Ar-H), 7.49 (t， 4H， J=7.5Hz, Ar-H) , 6.82-6.74 (m， 6H， Ar-H), 5.32 (s, 4H， -OCH2-)， 3. 88 (s, 6H, -OCH3x2), 3.15 (m,2H), 2.40 (m, IH), 2.19 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.73 (m, IH) 用类似的方法以化合物 4为原料与 1-(1，3-苯并氧 )2-溴乙酮反应得到下列化合物 收率 47%
? NMR(300M,CDC13, ^ppm) 7.63 (d， 2H, J=1.5Hz, Ar-H) ,7.49(s, 2H, Ar-H), 6.81(m， 8H, Ar-H), 6.03(s, 4H，-OCH20-)， 5.20(s, 4H，-COCH20-)， 3.86(s, 6H, - OCH3x2), 3.14(m， 2H), 2.38(m， 1H), 2.19 (m, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.69 (m, 1 H). 用类似的方法以化合物 4为原料与 α -溴 -3,4-二氯苯乙酮反应得到下列化合物 收率 67.2%
? NMR(300M,CDC13, ^ppm) 7.98-7.84(m, 4H， Ar-H),6.59-7.31(m, 8H， Ar-H),5. 15(s, 4H， -OCH2CO-), 3.88(s, 6H， -OCH3x2), 3.14-3.16(m, 2H)， 2.43-2.37(m, 1 H)， 2.22(m, 2H)， 1.85-1.83 (m， 2H)， 1.76-1.65 (m， 1H). 用类似的方法以化合物 4为原料与 (S)-2-对甲苯磺酰氧基苯丙酮反应得到下列化合 物
收率 73.4%
? NMR(300M,CDC13, ^ppm) 8.11(d， 4H， J=7.8Hz, Ar-H), 7.58(m, 2H， Ar-H), 7. 46(m， 4H， Ar-H), 6.72(m, 6H， Ar-H), 5.45(q, 2H， J=6.9Hz, -OCHCO-), 3.81(s, 6 H， -OCH3x2), 3.11(m， 2H)， 2.35(m， 1H), 2.17(m, 2H)， 1.85-1.83 (m， 2H)， 1.788 (m， 2H)， 1.68(m,7H). 13C NMR (100MHz, CDC13) δ (ppm) 199. 09， 149. 91， 145. 05， 140. 34, 134. 54， 133. 36, 128. 93, 128. 58, 118. 85, 116. 64, 111. 60, 78. 32, 55. 92, 45. 29, 43. 54, 33. 47, 18. 85. 步骤 I : lOOmL圆底烧瓶中加入 1. 33g (1. 9mmol) 化合物 8, 5mLCH2C12溶解， 加入 40mL甲醇， 于搅拌下加入 PS-brohydride l lg ( 27. 5mmol ), 室温搅拌 24h， TLC显示反应完全， 过滤， 甲醇， 乙酸乙酯， CH2C12洗涤， 蒸除溶剂， 硅胶柱层析 (乙酸乙酯： 石油醚 =1 : 1) 纯品 1. 33g， 收率 99. 5%
? NMR(300M,CDC13, 5ppm) 6.96-6.82 (m， 12H, Ar-H) ,4.64(s, 1H ,CH),4.62(s， 1H,CH),
4.19(s , 2H,CH X 2),4.09-4.07(m, 2H,CHX 2),3.92-3.87(m, 18H,-OCH3 X 6),3.22-3.2 l(m， 2H， CHX 2), 2.25-2.16 (m， 3H)， 1.87-1.73 (m， 3H)， 1.17-1.15 (d， 6H,-CH 3 X 2)
13C NMR(125M,CDC13, 5ppm) 150.6,149.0,148.8,145.9,141.1,132.6,120.0,119.2, 119.1,111.1,110.8,110.0,84.4,78.4,55.9,55.8,45.5,33.5,29.7,17.2 用类似的方法以化合物 10为原料得到下列化合物
? NMR(300M,CDC13, 5ppm) 7.00-6.64(m, 12H, Ar-H),5.04-4.98(m, 2H,-CHOH)， 4.16(dd, 2H， J=10.2Hz, 2.7Hz), 4.08(d， 2H,J=7.8Hz), 4.05-3.89 (m， 18H, -OCH 3x6), 3.44-3.28 (m， 2H)，
2.49-2.41(m, 1H)， 2.25-2.18 (m， 2H)， 1.95-1.89(m, 2H)， 1.76-1.69(m, 1H) 8?
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Z8T9.0/Zl0lN3/X3d 2H， J=8.7Hz), 4.12 (d， 2H, J=9.3Hz), 3.92(d， 2H, J=15.3Hz), 3.89(s, 6H, -OCH: x2), 3.20(s， 2H)， 2.43(m， 1H)， 2.24(m， 2H)， 1.86(m， 2H)， 1.74(m, 1H) 用类似的方法以化合物 18为原料得到下列化合物
? NMR(300M,CDC13, ^ppm) 7.28-6.78(m, 12H, Ar-H), 5.01 (d， 2H， J=8.7Hz,- CHOH) ,
4.15 (dd， 2H, Ji=7.5Hz, J2=2.7Hz, -OCH2C-), 3.91-3.85 (m， 8H, -OCH3x2, -OC H2C-)， 3.18 (m， 2H， 2.23 (m， 1H)， 2.04 (m， 2H) , 1.85(m， 2H)， 1.75-1.63 (m， 1H). 用类似的方法以化合物 24为原料得到下列化合物
? NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 6.86-7.35 (m， 16H, Ar-H), 4.91(d, 2H， J=2.4Hz), 4.35-4.38 (m， 2H)， 3.91(s, 6H)， 3.22 (m， 2H)， 2.46-2.50 (m， 1H)， 2.27 (m， 2H)， 1.89 (m,2H), 1.17 (d, 6H, J=6.6Hz). 药理实验
实验例 1、 三白脂素 -8及衍生物对 HIF-1活性抑制作用
报告基因实验 (Report gene assay)
采用瞬时共转染 pGL2-TK-3HRE/pRL-CMV质粒的 T47D细胞模型进行检测。 PGL2-TK-3HRE 为含有 HRE ( HIF-1 结合反应元件） 的萤火虫荧光素酶质粒， pRL-CMV为海肾荧光素酶质粒。 缺氧条件下 pGL2-TK-3HRE在细胞中高表达萤 火虫荧光素酶， pRL-CMV不受影响。
1. 人乳腺癌细胞 T47D ( ATCC ) 用含 10 FBS , penicillin(100 IU/ml), streptomycin(100 g/ml)的RPMI-1640， 于常氧 21%02、 5% C02条件下进行培养。 T47D细胞接种于 96孔板， 45000细胞 /孔， 21 02 5 C02培养 48 h后， 融合度 约 90-95%， 应用 lipofectamine 2000进行瞬时共转染， 每孔加入 0.5 μ? lipo2000， pGL2-TK-3HRE、 pRL-CMV分别为 0.2 μg, 0.01 g， 转染后 6 h换液， 18 h加入 不同浓度的待测化合物， 每个浓度设 3个复孔， 常氧培养 30 min后， 转入 1%02、 5% C02低氧 20 h， 弃去培养液， 加入 5(^l Dual-Glo荧光素酶底物液， 3 min后将 液体转入 96孔 Costar白板， GloMax96孔板发光检测仪， 检测萤火虫荧光素酶相 对荧光强度， 后加入 50 μ? Stop-Glo, 混匀检测海肾荧光素酶相对荧光强度， 得出 归一化结果。
2. 结果判定：
用以下公式计算化合物对 HIF-1活性抑制率， 并按中效方程计算 IC50。
抑制率％= (空白对照归一化值一待测物归一化值） /空白对照归一化值） X 100%， 计算待测化合物 IC5o。
(二） 结果
表 1. 三白脂素 -8及衍生物化合物 9对 HIF-1活性抑制作用
IC50 ( 10— ol/L)
化合物 9 0.00132 注： MA为三白脂素 -8， 缺氧 /常氧条件下萤火虫荧光素酶表达升高约 20倍。 应用此模型筛选化合物 2个， 母体化合物三白脂素 -8 (MA) 对 HIF-1抑制 的 IC5Q为 5.04X 10— 8mol/L， 其衍生物化合物 9的 IC5Q在 10— umol/L水平。 -8及衍生物化合物 9对 HIF-1活性抑制作用 MA
- - -24.6 -10.96 16.34 67.08 5.16 化合物 9 10.5 37.4 58.7 57.4 79.4 93.7 0.0013 注： MA为三白脂素 -8， 结果为三次实验平均值。 母体化合物三白脂素 -8 ( MA ) 对 HIF-1的 IC5Q为 5.2x10— 8mol/L， 其衍生物 化合物 9IC5Q为 1.3x10— umol/L。 表 3 . 化合物 9及衍生物对 HIF-1活性抑制初筛结果
化合物 IC5Q (lxlO 1 mol/L)
化合物 9 5.1
化合物 14 4.1
化合物 15 17.5
化合物 16 3.6
化合物 23 2.9
化合物 25 5.6 对化合物 9的 11个衍生物进行 HIF-1活性抑制作用检测，结果显示，对 HIF-1 活性抑制的 5()在 10— 1Qmol/L有 4个（其强度与化合物 9相当），分别为化合物 14、 化合物 16、 化合物 23、 化合物 25， 在 10—9mol/L有 1个为化合物 15。 实验例 2、 三白脂素 -8及衍生物常氧条件下对肿瘤细胞生长抑制作用 (一） 方法
MTT法测定三白脂素及衍生物对肿瘤细胞生长抑制作用
将对数生长期的细胞， 用 0.25%胰酶 -EDTA消化后， 配制成一定浓度的单细 胞悬液， 根据细胞生长速度的差异， 按 100-2000个 /孔接种于 96孔板， 每孔加入 细胞悬液 100 μ?。 24 h后， 加入含不同浓度化合物及相应溶剂对照的新鲜培养基， 每孔加 100 μL (DMSO终浓度 &0.1% )， 每种受试化合物设 5?7个剂量组， 每组 至少设 3个平行孔， 于 37°C继续培养 120 h后， 弃上清， 每孔加入 100 新鲜配 制的含 0.5mg/mL MTT的无血清培养基，继续培养 4 h，弃上清后，每孔加入 200 μL DMSO溶解 MTT甲簪沉淀， 微型振荡器振荡混匀后， 在酶标仪参考波长 450 nm， 检测波长 570 nm条件下测定光密度值 (OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组， 用以下公式计算化合物对肿瘤细胞的抑制率， 并按中效方程计算 IC50。
抑制率 (％) = (对照组平均 OD值一给药组平均 OD 值) /对照组平均 OD值 χ100% (二） 结果
白脂素 -8对肿瘤细胞生长抑制作用
IC50(mol/L)
U251 HEPG2 BxPC3 MCF-7
MA &1.00xl0"s &1.00xl0"s 4.93x10— 6 2.22x10- 6
三白脂素 -8
Taxol 1·40χ10-8 9·16χ10—9 3·66χ10-7 6·35χ10-8 注： U251 : 人神经胶质母细胞瘤细胞株； HEPG2: 人肝癌细胞株； MCF-7: 人乳 腺癌细胞株； BxPC3: 人胰腺癌细胞株 表 5. 三白脂素 -8及衍生物化合物 9在常氧条件下对肿瘤细胞生长抑制作用
IC50 (mol/L)
MX-1 MX-l/T MCF-7 MCF-7/T T47D MA 2. lxlO-8 7·4χ10-8 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 8.4xl0—7 化合物 9 6·3χ10-8 8·5χ10-8 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 6.3xl0-8 Taxol 5·2χ10-8 &1.0xl0"6 4.0xl0-9 &1.0xl0"6 5.2xl0-9 表 5 (续 1 )
IC50 (mol/L)
MD-MBA-231 A549 A549/T SW-1990
&1.0xl0"5 2.3xl0-7 1.5xl0-7 1.9x10 化合物 9 ■7
4. lxlO-8 &3.2x10-9 &3.2xl0"9 2.5x10
l.lxlO-8 2.4xl0-8 &1.0xl0"6 2.9x10 表 5 (续 2)
IC50 (mol/L)
A375 HT-29 HCT-8 HepG2 BGC-823 MA &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 化合物 9 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 Taxol 2.0x10—: 6.4x10— 10 2·5χ10—7 2.3x10— 8 7.2x10— 9 表 5 (续 3)
IC50 (mol/L)
U251 CRL-1611 Kert-3 H460 MA &1.0xl0" &1.0xl0° &1.0xl0° &1.0xl0" 化合物 9 &1.0xl0" &1.0xl0"5 &1.0xl0"5 &1.0xl0": Taxol 9.5xl0-9 4·2χ10—8 4.8xl0—8 6.8x10— 8 注： MA: 三白脂素 -8。 X
MX-1、 T47D、 MCF-7 MD-MBA-231 : 人乳腺癌细胞株； MX-l/Taxol: 人乳腺癌 耐 Taxol细胞株； MCF-7 Taxol: 人乳腺癌耐 Taxol细胞株； A549: 人非小细胞肺 癌细胞株； A549/Taxol: A549耐 Taxol细胞株； SW-1990: 人胰腺癌细胞株 A375: 人黑色素瘤细胞株； HT-29: 人结直肠腺癌细胞株； HCT-8: 人结肠癌细胞 株； HepG2: 人肝癌细胞株； BGC-823: 人胃癌细胞株； U251 : 人神经胶质母细 胞瘤细胞株； CRL-1611 : 人肾癌细胞株； Kert-3: 人肾癌细胞株； H460: 人非小 细胞肺癌细胞株。 表 7.三白脂素 -8及衍生物化合物 9在常氧条件下对人胰腺癌细胞生长抑制作用
IC50 (mol/L)
MIA-Paca ll Capan-2 SW-1990 PANC-1
MA &1.0xl0"5 l.OxlO-7 1.9xl0-6 3.4xl0-7 化合物 9 &1.0xl0"5 &3.2x10-9 2.5xl0-7 7.8xl0-8
Taxol 8·5χ10-9 2.9xl0-8 —— 注： MA: 三白脂素 -8。
ΜΙΑ-Paca I Capan-2 SW-1990 PANC-1 : 人胰腺癌细胞株。 三白脂素 -8衍生物化合物 9在常氧条件下对不同器官组织来源的实体瘤细胞生 长的抑制作用具有明显的选择性， 其中对人乳腺癌细胞、 人肾癌细胞和人胰腺癌 细胞生长抑制作用明显。 实验例 3、 三白脂素 -8衍生物化合物 9对裸鼠异体移植瘤的生长抑制作 用
(一） 方法
1、 实验材料与动物
药品配制： 化合物 9用 0.5%羧甲基纤维素钠配制， 配制浓度分别为 7.5mg/ml、 3.8 mg/ml禾 B 6 mg/ml 3 mg/ml, 灌胃给药体积为 20 ml/kg LX2-32C为紫杉烷类 化合物， 配制为 3 mg/ml， 腹腔注射给药体积为 10 ml/kg。 Taxol为紫杉醇注射液， 购于北京协和药厂， 生理盐水 1:1 稀释， 配制为 3 mg/ml， 腹腔注射给药体积为 10 ml/kg
动物： Nu/Nu裸鼠 （16— 18g)， 雌性， 由北京维通利华实验动物技术有限公 司提供。 合格证号： SCXK京 。
2 实验操作
无菌条件下收集 MX-l Taxol、 H460/TaxoL H460肿瘤细胞， 用灭菌生理盐水 调整细胞密度至 5 X 107个 /ml， 取 0.2 ml接种于裸鼠腋窝皮下， 待肿瘤生长至直径 为 1 cm大小时， 无菌条件下取出， 切成约 lmmX lmmX lmm大小的瘤块， 均匀 接种于裸鼠腋窝皮下。接种后待瘤体积达到 100~200mm3， 按照瘤体积将裸鼠随机 分组并开始给药。 共分为 3组， 每组 4?9 只， 设空白对照组， 阳性药 Lx2-32C 30 mg/kg或紫杉醇 30 mg/kg， 为腹腔注射给药， 给药体积均为 10 ml/kg， 每 3 d—次， 共给药 3~4次。 化合物 9灌胃给药剂量为 150mg/kg、 75mg/kg (在 MX-1/T瘤株）， 120 mg/kg、 60mg/kg (在 H460瘤株） 给药组。 化合物 9每日灌胃给药， 每日称体 重、 测量瘤径。 按下述公式计算肿瘤体积： 体积(?)=^ 132 / 2 (&: 长径, b: 短径)。 绘制肿瘤增殖曲线， 比较各组肿瘤的生长情况， 计算相对瘤体积 (RTV=Tn/To)与肿 瘤增殖速率 (T/C%=RTVt/RTVc)。 实验结束时脱颈椎处死动物并剥出肿瘤， 称量动 物体重及瘤重， 计算肿瘤生长抑制率 (％)， 并将结果进行统计学处理。
抑瘤率 (％)= (对照组平均瘤重一治疗组平均瘤重） /对照组平均瘤重 X 100 %
(二） 结果
在对三白脂素 -8衍生物化合物 9进行的体内活性研究显示， 对裸鼠人乳腺癌、 人非小细胞肺癌均具有较强的生长抑制作用，对裸鼠人耐紫杉醇乳腺癌 MX-1/T异 体移植瘤抑瘤率可达 73.5%， 对裸鼠耐紫杉醇人肺癌 H460/T及亲本株 H460的抑 瘤率分别为 44.3%和 51.9%。
1.化合物 9对裸鼠人耐紫杉醇乳腺癌 MX-1/Taxol的生长抑制作用
化合物 9对裸鼠移植瘤 MX-1/Taxol的生长抑制作用 （肿瘤重量）
体 重 （g ) X土 SD
剂 量 (只） 抑瘤率 组 另 ?
(mg/kg) 开始 /结 ( % ) 开 始 结 束 X土 SD 束
阴性对照组 8/8 16.0 ± 1.2 17.2土 2.0 6.9土 2.1
LX32C 30mg/kgx3 4/4 15.6 ± 0.8 13.8+1.2 2.7土 0.7** 60.9 化合物 9 75mg/kgxl2 6/5 16.3 ± 1.4 15.9土 0.8 2.4土 1.6** 65.2 化合物 9 150mg/kgxl2 6/4 15.8土 1.3 12.9土 0.1 1.9土 0.5" 73.5 注： LX2-32C为紫杉烷类化合物。 ** P & 0.01, 与阴性对照组比较。 化合物 9对裸鼠移植瘤 MX-1/Taxol的生长抑制作用 （肿瘤体积）
体 重 （g ) X土 SD
剂 量 (只） 相对瘤体积 相对肿瘤增殖率 组 另 ?
(mg/kg) 开始 / X土 SD (T/C% ) 开 始 结 束
阴性对照组 8/8 16.0 ± 1.2 17.2土 2.0 83.2+31.8
LX32C 30mg/kgx3 4/4 15.6 ± 0.8 13.8+1.2 35.7土 12. * 42.9 化合物 9 75mg/kgxl2 6/5 16.3 ± 1.4 15.9土 0.8 34.0+28.6" 40.8 化合物 9 150mg/kgxl2 6/4 15.8土 1.3 12.9土 0.1 22.1±6.7** 26.6 注： LX2-32C为紫杉烷类化合物。 ** P & 0.01, 与阴性对照组比较。 三白脂素 -8衍生物化合物 9对人耐紫杉醇乳腺癌 MX-1/Taxol肿瘤增殖的影响见图 1.
2. 三白脂素 -8衍生物化合物 9对人肺癌裸鼠移植瘤 H460及耐紫杉醇 H460/Taxol 的生长抑制作用
2.1化合物 9对裸鼠移植瘤 H460的生长抑制作用 化合物 9对裸鼠移植瘤 H460的生长抑制作用 （肿瘤重量)
体 重 （g ) X土 SD
剂 量 (只） 瘤 重 （g) 抑瘤率 组 另 ?
(mg/kg) 开始 /结 X土 SD ( % ) 开 始 结 束
阴性对照组 9/9 19.6 ± 1.3 19.4土 1.4 3.4+0.3
Taxol 30mg/kgx3 8/8 20.5土 0.8 17.5土 2.3 1.1土 0.3" 67.6 化合物 9 60mg/kgx8 8/7 19.9 ± 1.9 16.9土 1.2 1.5土 0.4" 54.7 化合物 9 120mg/kgx8 8/7 19.6土 1.5 17.0土 1.1 1.6土0.1** 51.9 ** P & 0.01, 与阴性对照组比较。 化合物 9对裸鼠移植瘤 H460的生长抑制作用 （肿瘤体积)
体 重 （g ) X土 SD 相对瘤体 相对肿瘤增殖 剂 量 (只）
(mg/kg) ■ 积
开 始 结 束 X土 SD (T/C% ) 束
阴性对照组 9/9 19.6 ± 1.3 19.4土 1.4 19.3+12.7
Taxol 30mg/kgx3 8/8 20.5土 0.8 17.5土 2.3 5.1+3.3" 26.4 化合物 9 60mg/kgx8 8/7 19.9 ± 1.9 16.9土 1.2 6.7+2.6* 34.5 化合物 9 120mg/kgx8 8/7 19.6土 1.5 17.0土 1.1 6.7土 1.7*" 34.5
*P & 0.05, ** P & 0.01, 与阴性对照组比较。
2.2 三白脂素 -8衍生物化合物 9对裸鼠移植瘤 H460/Taxol的生长抑制作用
化合物 9对裸鼠移植瘤 H460/Taxol的生长抑制作用 (肿瘤重量) 动物数 （只） 体 重 （g ) X土 SD
剂 量 瘤 重 （g) 抑瘤率 组 另 ?
(mg/kg) 开始 /结束 开 始 结 束 X土 SD ( % ) 阴性对照组 9/9 19.6 ± 1.3 19.4土 1.4 4.9土 1.8
Taxol 30mg/kgx3 8/8 20.5土 0.8 17.5土 2.3 2.4+0.7" 51.6 化合物 9 60mg/kgx8 8/7 19.9 ± 1.9 16.9土 1.2 3.6+1.5 27.9 化合物 9 120mg/kgx8 8/7 19.6土 1.5 17.0土 1.1 2.8土 0.8* 44.3 *P & 0.05、 ** P & 0.01, 与阴性对照组比较。 化合物 9对裸鼠移植瘤 H460/Taxol的生长抑制作用 （肿瘤体积）
动物数 （只） 体 重 （g) X土 SD 相对肿瘤增殖 剂 量 相对瘤体积 组 另 ?
(mg/kg) 开始 /结束 开 始 结 束 X土 SD
(T/C% ) 阴性对照组 9/9 19.6 ± 1.3 19.4土 1.4 30.2+11.9
Taxol 30mg/kgx3 8/8 20.5 ± 0.8 17.5土 2.3 19.0+6.4* 62.9 化合物 9 60mg/kgx8 8/7 19.9 ± 1.9 16.9土 1.2 20.2土 7.6 66.1 化合物 9 120mg/kgx8 8/7 19.6土 1.5 17.0土 1.1 15.4土 8.4* 50.9 *P & 0.05, 与阴性对照组比较。
三白脂素 -8衍生物化合物 9对人耐紫杉醇肺癌 H46( raXol肿瘤增殖的影响见图 3
& 2004-. All rights reserved.}