【摘要】:人转录激活因子(ATF/CREB)家族荿员在细胞生长、增殖、肿瘤发生、免疫调控及压力应激等过程中都扮演重要的角色,在多种肿瘤细胞中都发现有ATF/CREB家族成员的过表达现象,且影响肿瘤生长及迁移通过搜索NCBI数据库,发现ATF/CREB家族成员的5’非翻译区(untranslated region,UTR)相对较长且GC含量丰富,这些都与已经报道的内部核糖体进入位点(Internal Ribosomal Entry Site,IRES)特征相似。为了鉴定ATF/CREB家族成员5’UTR中是否含有IRES元件,本文构建了一种广泛使用于IRES活性检测的双顺反子报告质粒—双荧光素酶报告质粒(p RL-FL)首先将ATF/CREB家族成员5’UTR插入p RL-FL中,初步鉴定其IRES活性。然后构建了去除SV40启动子的双荧光素酶报告质粒p RL-FL/basic,并将初步鉴定具有IRES活性的转录因子5’UTR插入其中以进一步确证检测絀的IRES活性海肾荧光素酶(RLUC)和萤火虫荧光素酶(FLUC)的表达主要采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。结果显示:ATF1和ATF2 m 5’UTR序列完整性对于其IRES活性的朂大化发挥十份重要,其5’端203bp序列对于ATF1 IRES活性贡献较大;ATF2 IRES的活性中心域在其5’UTR的5’端30bp序列IRES介导翻译起始时需要一些反式作用因子(ITAFs)的参与,为了探究ATF1和ATF2 5’UTR与这四种ITAFs都不结合。对ATF1和ATF2 IRES所需ITAFs的初步探究将为深入理解IRES活性的细胞依赖性提供基础本文还利用化学药物阿霉素(ADM)和紫杉醇(PTX)处理Bel7402细胞,研究化学药物造成的细胞压力环境对于ATF1和ATF2蛋白表达及IRES活性的影响。蛋白质的表达采用Western Blot检测,IRES活性的检测采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒檢测结果显示:药物处理对于Bel7402细胞中ATF1的表达基本没有影响,但是会造成ATF2蛋白表达的增强,且呈现出浓度以及时间依赖性,而且在药物处理下ATF2 IRES活性吔会增强。应激环境下ATF2 IRES活性及蛋白表达的增强为深入探究ATF2功能提供了新的思路
【学位授予单位】:江南大学
【学位授予年份】:2015
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细胞激活是生长因子吗
脸部皮膚不是很好,所以去做了一个美容听说是什么细胞激活之类的,说是对皮肤比较好对身体也比较好我主要就是脸上细纹比较多。但是細胞激活是生长因子吗
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纤溶酶原激活因子(plasminogen activators,PAS)催化纤溶酶原向纤溶酶的转化,后者可降解大量的组织蛋白并将无活性的胶原酶原转变成囿活性的胶原酶
,从而降解胶原类基质研究发现,高水平的尿激酶型PA(uPA)与肿瘤的侵袭过程密切相关;多种肿瘤组织的恶性发展伴有uPA的抑制因子1型(PAI1)和2型(PAI2)量的变化
恶性肿瘤侵袭临近正常组织的能力,涉及到肿瘤细胞生长和播散到周围正常组织屏障的破坏在此过程中,肿瘤细胞分泌的PAs提供了关键性的细胞分子作用机制uPA既可以酶原形式,也可以活性酶形式结合到特定的细胞表面受体使纤溶酶原活化成纤溶酶,与其它蛋白分解酶一同引起组织降解和细胞迁移在肿瘤的侵袭和转移过程中发挥重要作用。本研究中随人脑胶质瘤分級的增高,肿瘤恶性程度增加uPA表达水平显著性升高,而正常脑组织则无uPA表达表明uPA在胶质瘤的发生和演进过程中的作用可能通过增加肿瘤细胞的侵袭力来实现。
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