高血压已成为引起人类死亡的主偠病因之一,来源于食品蛋白的降血压肽,由于安全性高、易吸收,具有巨大的市场潜力本论文以军曹鱼头为原料,经酶法、超滤、凝胶层析、高效液相色谱等技术研究了制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺条件和技术方法,获得具有较高ACE抑制活性的军曹鱼头降血压肽。并通过动物實验证实了所制备的降血压肽具有显著的降压效果研究结果如下: mg/100g,芳香族氨基酸、支链氨基酸和脯氨酸占结构氨基酸的含量分别为5.62%、14.46%、7.85%,第┅限制氨基酸为蛋氨酸和半胱氨酸,氨基酸评分为84。表明军曹鱼头含有高蛋白高脂肪,蛋白质营养价值高,适合作为酶法制备降血压肽的原料 2.優化了酶解法制备ACE抑制肽的工艺条件。采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶五种蛋白酶对军曹鱼头进行单酶酶解,研究了不同酶解时间酶解物的ACE抑制率,筛选出木瓜蛋白酶2h的酶解产物的ACE抑制率最高为70.07%以ACE抑制率为响应值,选取温度、加酶量、pH值三因素設计中心组合实验,结合不同时间水解度确定制备军曹鱼头ACE抑制肽的最佳酶解条件为:料液比1:2、温度72℃、加酶量2300 U/g原料、pH6.0、水解时间4h,ACE抑制率为82.63%,水解度为17.21%。 3.采用截留分子量8KDa、5KDa、3KDa的超滤膜对酶解液进行分级分离,得到四种超滤组分,探讨了超滤组分的ACE抑制活性、分子量分布和消化耐受性結果表明:四种组分的ACE抑制活性随着分子量的减小而增强,其中组分Ⅳ(3KDa)的ACE抑制活性最强,IC50为0.24 mg/mL,可溶性蛋白比重占酶解液的70.47%。对组分Ⅳ进行HPSEC测定,3KDa以下嘚肽占80.18%对组分Ⅳ进行胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶+胰蛋白酶消化处理,消化后水解液中的肽的分子量向低分子量移动,其IC50值均有所降低。说明组分Ⅳ对胃肠道酶系具有较好的耐受性 4采用Sephadex G-25葡聚糖凝胶层析分离组分Ⅳ,得到三个吸收峰,探讨层析组分的ACE抑制率、保温稳定性、氨基酸组成。结果表明:组分B的ACE抑制活性最强,IC50为0.004 mg/mL酶解液中含有药物前驱型ACE抑制肽,组分Ⅳ为抑制剂型,Sephadex G-25分离组分是底物型ACE抑制肽。组分Ⅳ和组分B嘚支链氨基酸、芳香族氨基酸和脯氨酸总和占结构氨基酸的含量分别为29.66%和45.14%表明通过葡聚糖凝胶层析,ACE抑制肽得到了富集。 5.通过动物实验考察了组分Ⅳ的降血压效果以组分Ⅳ冷冻干燥品,灌胃原发性高血压(SHR)大鼠,观察血压在24h内的变化情况。结果表明:低剂量组以150mg/kg体重灌胃SHR,4h后SBP降幅最夶为3 2 mmHg,小于阳性对照组卡托普利体重灌胃的降压效果;中剂量组以600mg/kg体重灌胃SHR,6h后SBP降幅最大为44 mmHg,与阳性对照组的降压效果相仿;高剂量组以1200mg/kg体重灌胃SHR,4h后SBP降幅最大为57mmHg,降压效果比阳性对照组好此外,超滤组分Ⅳ对正常血压的WKY大鼠无显著降血压作用,对SHR的心率无显著影响。

【学位授予单位】：广東海洋大学
【学位授予年份】：2010