乳腺石蜡切片免疫荧光步骤报告出来再做生化免疫是为什么

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甘草甜素对人工诱导小鼠乳腺炎的免疫保护效应研究
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石蜡切片的免疫荧光出现了问题,求前辈指点一二。
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我是先烤片、脱蜡、水化,流水冲洗ph6的柠檬酸高压修复,PBS洗三次破膜,3%双氧水阻断15min,PBS洗3次。5%BSA封闭室温2h,1%BSA稀释的一抗。孵育过夜。PBS洗三次,二抗。PBS洗三次,DAPI。PBS洗三次,封片。蓝色为DAPI的染核。绿色是染的核蛋白,为何会这样?下面电脑拍的图是第一次做的抗体1:200。上面手机拍的第二次1:400做的。请问问题出在哪里?求前辈指点一二。
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谁能帮忙解答一下,把PBS洗的时间增加一倍,效果依然不好。
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为什么组织都被染上了?现在一抗、二抗、DAPI之后我都是PBS摇床洗15min×3次。修复的柠檬酸也是新配的,PBS也是新配的。
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你做的目的蛋白是核蛋白,抗体稀释液中一定要加triton打孔,这就是为什么抗体浓度那么高阳性却很少,在镜下找阳性肯定很费劲,只有零星几个区域有信号。单从片子上来说,非特异比较多,背景比较亮,一抗二抗浓度都要调整。如果身边有要做免疫荧光的(单标双标都可以)可以联系我(),我是科研单位的实验室,一定比公司便宜的多。谢谢!
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同意楼上有位说的是过度曝光了,换句话说,解决方案之一是调整曝光设置。当然如果优化染色条件那是更好了。
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核蛋白一定要破膜?不必吧,都切成片了。照相条件太差了,感觉是有信号的。没有对照不好说。
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panker 核蛋白一定要破膜?不必吧,都切成片了。照相条件太差了,感觉是有信号的。没有对照不好说。圆形的视野使用手机拍的。矩形的视野是显微镜的相机拍的。是因为做的不好,就随便用手机拍了一下。主要是染得很差。
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重点是对照做实验的时候尽量加阳性和阴性对照许小平来了 panker 核蛋白一定要破膜?不必吧,都切成片了。照相条件太差了,感觉是有信号的。没有对照不好说。圆形的视野使用手机拍的。矩形的视野是显微镜的相机拍的。是因为做的不好,就随便用手机拍了一下。主要是染得很差。
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许小平来了 deepcyan 同意楼上有位说的是过度曝光了,换句话说,解决方案之一是调整曝光设置。当然如果优化染色条件那是更好了。主要是非特异性太亮。就算看到特意的染色,也不能确实是特异性啊昨天试了1:00的稀释。结果跟1:100、1:200的染色也差不多。如果是这样的话,对照是必须要的了。不加一抗只加二抗作为阴性,这个最容易,一般第一次做染色时都要有的。
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许小平来了 deepcyan 许小平来了 deepcyan 同意楼上有位说的是过度曝光了,换句话说,解决方案之一是调整曝光设置。当然如果优化染色条件那是更好了。主要是非特异性太亮。就算看到特意的染色,也不能确实是特异性啊昨天试了1:00的稀释。结果跟1:100、1:200的染色也差不多。如果是这样的话,对照是必须要的了。不加一抗只加二抗作为阴性,这个最容易,一般第一次做染色时都要有的。做过了,只加二康的,也有很多非特异性染色那就只能换抗体了。还有,如果用共聚焦的话,控制一下曝光条件,也许能看出阴性对照与染色组的差别。
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应用RNA原位核酸杂交检测乳腺癌石蜡切片中ER mRNA、PR mRNA表达
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官方公共微信抗原修复在陈旧石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化检测中的应用--《军事医学》2014年12期
抗原修复在陈旧石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化检测中的应用
【摘要】:目的探索一种简便有效的抗原修复方法,用于陈旧切片的人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,h MAM)免疫组化检测。方法将乳腺癌患者陈旧乳腺组织石蜡切片脱蜡至水,按常规免疫组化步骤进行检测。其中,实验组直接将切片浸入p H 3.5的柠檬酸盐缓冲液中室温修复10~15同时以微波和高压加热修复法处理相应患者石蜡切片作为对照,最后以SP检测系统检测抗原修复及与抗体反应的效果。结果实验组与高压组和微波组比较,修复效果较好,且无组织脱片与折损现象。结论建立了一种利用陈旧组织切片检测乳腺珠蛋白的简便、有效的抗原修复方法,并能很好地防止脱片现象发生。
【作者单位】:
【关键词】:
【基金】:
【分类号】:R361.2【正文快照】:
人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,h MAM)是Watson和Fleming等[1]1996年从乳腺癌细胞中克隆出的一种分泌性差异表达蛋白,其组织特异性表达以及分泌性蛋白的特点使其在乳腺癌临床早期诊断、转移检测以及免疫治疗上具有潜在的应用价值。在h MAM石蜡切片免疫组化染色中,现在常采用
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【参考文献】
中国期刊全文数据库
邹亮;;[J];健康研究;2013年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
孙淑明;林豪雨;卢晓峰;梁伟全;谢舜峰;;[J];中国医药指南;2014年05期
张卫琴;;[J];现代医药卫生;2014年07期
中国博士学位论文全文数据库
杨琳;[D];北京协和医学院;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
吴计生;段淑云;郝建平;;[J];实用医技杂志;2006年20期
骆新兰,蔡秀玲,刘艳辉,庄恒国,张威;[J];中华病理学杂志;2005年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库
周伟;黄焰;;[J];生物技术通讯;2011年04期
刘秀娜;王仙园;周娟;潘自铁;赵力军;胡川闽;;[J];解放军护理杂志;2005年11期
吴国球;张臣;孙宏伟;赵成桂;芦慧霞;;[J];现代医学;2006年02期
吕晓娟;黄焰;张贺秋;陆应麟;进淑娟;戴振华;韩晓伟;;[J];军事医学;2012年02期
李世拥,李矩,骆成玉,于波,安萍,蔡慧芸;[J];中华外科杂志;2002年03期
杨超;康炜;李建华;尤涛;王永锋;;[J];检验医学;2014年01期
薛云;[J];辽宁医学杂志;2004年03期
;[J];;年期
;[J];;年期
;[J];;年期
中国博士学位论文全文数据库
黄焰;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库
进淑娟;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
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