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做石蜡切片时二甲苯透明时间长短对切片有何影响
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我的大鼠脑组织标本拿到病理科包埋后，结果片子一切就卷成小棒，始终不能成开。后来在园子里看了一些经验介...
不知道邀请谁？试试他们
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最好把整个脑组织先进行修块，完整的脑组织不容易脱水和透明。修块之后（基本是完整脑的一半大小）脱水，7...
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***********1.取材：切取你所需要部位，厚度在0.3～0.4mm之间；2.脱水：60％、7...
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小小冰 edited on
关于丁香园脑组织冰冻切片方法优化——灌流固定过程注意事项
　　1、灌流固定原理
　　组织固定的原理主要是在不影响酶、抗原活性的情况下固定液快速渗入组织内，使蛋白质快速凝固，阻断细胞的新陈代谢，而对糖原、核酸和碳水化合物起到保护作用。常用的的有6种：95%酒精、4%甲醛、甲醇、丙酮、EAF固定液、AAF固定液。邱前程等认为对于多数抗体而言，EAF固定液的固定效果要优于其他固定液，但是个人认为不同的固定液固定组织有不同的原理，绝不可一概而论。95%酒精穿透性强，可使蛋白质变性而固定组织，兼有脱水的作用；4%多聚甲醛与10%福尔马林作用原理类似，主要是与组织内的氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键，使蛋白质相互交联而固定组织； 甲醇的机理主要是使蛋白质变性； 丙酮渗透力强，使蛋白质沉淀，其多用来固定细胞而很少用于固定组织；EAF、AAF主要为几种单纯固定液的混合液配合缓冲液组成，并且加入冰醋酸以促染色，所以此二者虽然可以应用于多数组织的固定，但由于不同组织组成成份(蛋白质、脂肪、核、糖原等的构成比例) 不同，使用这两种固定液的固定效果也不同，不可一概而论。不同的固定液都有不一样的优缺点，需要根据自己实际过程中所用的组织，后续不同的需要来选择不同的固定液。
　　2、灌流固定方法
　　高永强等认为在脑组织冰冻切片时，4%多聚甲醛心脏灌流固定的效果优于其他方法，我们在实验过程中将此方法进行改进: ①多聚甲醛固体不易溶解，用1&PBS配制的多聚甲醛溶解后，用约90&m孔径的定性滤纸过滤溶液，以减少在后续免疫荧光染色中因多聚甲醛颗粒造成的非特异发光。②多聚甲醛配制完成后，4℃保存，此时多聚甲醛挥发少，并可被提前预冷，使灌流固定效果优良，1周之内用完。③NS置换血液和多聚甲醛灌流固定组织时，灌流管中都不应有气泡，否则会造成空气栓塞，影响灌流固定效果。④NS灌流置换血液时，灌流管的长度不宜过长，1m的高度即可，否则由于NS的重力和灌流速度过快会使灌流液体的压力过大，造成微小血管破裂而影响灌流效果。⑤李晶晶等认为多聚甲醛灌流固定时速度先快后慢的方式可以提高组织固定效果。我们在实际实验中用三通管来操作，将用来灌流的尖端磨平的针头从大鼠左心尖插入大鼠主动脉根部，固定针头后开始NS灌流，待流出的NS的灌流液澄清后说明动物体内的血液基本被完全置换，在用三通管换成多聚甲醛灌流固定前，事先用100ml的注射器(不带针)抽取大约60ml 4%多聚甲醛，待NS将血液置换完全后，将连接多聚甲醛用来灌流固定的输液器从药液过滤器与输液针(灌流固定针)之间的连接件处分开输液器，将100ml 的注射器与输液针相连，把事先抽好的60ml 4%多聚甲醛快速推注动物体内，之后分开注射器与输液针，再将连接多聚甲醛的输液器从药液过滤器处与输液针连接，之后滴注多聚甲醛约1小时。该过程需保证NS将动物体内的血液全部置换后，方可用多聚甲醛固定，否则残存的红细胞会造成非特异染色，从而影响免疫组化染色结果的准确性；还需保证多聚甲醛的灌流速度先快后慢，这样组织固定效果优良。取出脑组织后将脑组织浸泡在4%多聚甲醛中，4℃过夜。组织固定完成后，将组织在4℃冰箱用20%、30%的蔗糖梯度脱水，待组织块沉底后取出。组织脱水所用的蔗糖溶液的体积须大于所脱水组织体积的5倍才可达到比较好的脱水效果，蔗糖溶液体积过小会使脱水不充分，导致切片时产生数目多、体积较大的冰晶，最终表现在免疫组化染色图片上则是无数空洞，从而影响免疫组化染色结果的准确性。
　　参考文章：
　　1、李慧，黄景阳，袁中瑞.提高脑组织冰冻切片质量的几点体会[J].中国免疫学杂志,).
　　2、邱前程，卢善明，黄杰雄．不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响［J］.分子诊断与治疗杂志，):250-252．
　　3、高永强，杨巧莲，王伟．大鼠局灶性脑缺血模型制备及取脑方法实验研究［J］.包头医学院学报，):6-9．
　　4、李晶晶，朱鸿，施彩虹．三种方法对大鼠视网膜固定效果的比较研究［J］.上海交通大学学报(医学版)，):．
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在体肠灌流之后的肠子能做病理切片吗?
如果能做的话，肠子该怎么处理呢？
用石蜡包埋需要先在固定液中进行固定，这样处理了之后对染色有影响吗？
我想用DAPI或者EB染色细胞核，有荧光的那种，也没有关系吗？
没有关系的，那这样你就得做免疫荧光了
我再问下，能告诉我详细的做免疫荧光的步骤吗？
不好意思，我这边没有
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