关注今日：129 | 主题：461835
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
请问小胶质细胞活化与未活化状态的MARKER分别为什么？
页码直达：
这个帖子发布于12年零268天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教未活化的小胶质MARKER是什么？活化的小胶质的MARKER又是什么？ED1是活化的还是未活化的MARKER？还想请问一下活化和未活化的小胶质的形态是什么样的？多谢!
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
小胶质细胞在体状态下的活化表现为细胞胞体的增大以及突起减少，膜表面的MHC－II类抗原表达显著上调，ED1抗原染色阳性。在纯化的培养中，静息状态的（resting）microglia 表现为单极或双极的梭形，ED1、CD11染色均较淡，但与activated microglia 不能完全分开。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢你的帮助，你的这两张图是脑切片吧？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园回答问题（二）
已有 1348 次阅读
|个人分类:|系统分类:|关键词:胞内因子
&&&&& 2，所谓常见的细胞因子，表面的或是胞内的，处理起来有什么不同。为什么表面的用无血清培养基，胞内的要用到PBS，最后换回无血清培养基？胞内染色要加上非特异性抗体FC抗体？处理时间是多久合适？一种细胞可分装来分别检测，不同时染上多种抗体？抗体的实验建议值是多少，实验中又是怎么做的？
&&& 真是给我自己出了难题，今天周末，一点都不想动，可还是得把这些问题查出来。
& 其实也没有怎么查，按照实验室小boss讲到的，加上自己的理解，感觉不到的以后再自我纠正。
& 表面上的分子较好处理，通过MTT法计数得到细胞数量。
&& 先留个问好在这里，因为protocol上写到要玻璃棉除掉B细胞，得到T细胞。在操作时，没有看到有这一步，之后也没来得及问一下。而且后面有一个CD19算是B细胞的marker，这需要不一样的处理。
& 表面染色的是取10的6次方的细胞，离心收集，之后悬在20ul的无血清培养基中。胞内的是先取出10的7次方个细胞，离心收集，后用PBS洗上两遍，再加上多聚甲醛固定，PBS洗后再加皂素破膜，PBS洗上两遍。加上无血清培养基，20ul分装，因为检测多种胞内因子。
& 胞内的用到了PBS，只是在洗细胞，好再加别的试剂反应。之后要加抗体的时候，还是用培养基悬浮。表面分子不需要那么复杂处理，也用不着洗，于是不用PBS。用培养基不用PBS，主要是因为是活细胞吧。提供一个环境，让细胞活着。至于不加血清，可以考虑到这里不用它的功能。在养细胞时，胎牛血清是必须的，因为引导细胞分裂。这里不需要。
&&&胎牛血清作用待后续~~
& 不只有胞内因子需要加上FC抗体，表面的也要。因为表面也要非特异性的封闭。（这一点待后续求证）
& 表面分子染色后，要洗掉抗体。（用什么洗，PBS or& 培养基？）
&&表面很快，胞内过夜。这是见到的操作。
& 不能同时被染上多种，有解释说是我们有的抗体颜色只有这么几种，荧光发出同一种颜色会无法检测。 好像也有人做过，染上多种颜色，待求证和分析。
& 说是1ul/20ul样品，能染上80~90%的细胞。试验中本着节约的原则，会根据细胞数量经验值，适量少加一些。
转载本文请联系原作者获取授权，同时请注明本文来自鲁亮群科学网博客。链接地址：
上一篇：下一篇：
当前推荐数：1
评论 ( 个评论)
扫一扫，分享此博文
作者的其他最新博文
热门博文导读
Powered by
Copyright &关注今日：129 | 主题：461835
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】染色前使用4%多聚甲醛固定细胞是否会起到Triton在细胞表面打洞的效果？
页码直达：
这个帖子发布于2年零44天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
染色前使用4%多聚甲醛固定细胞是否会起到Triton在细胞表面打洞的效果？
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
PFA是交联固定，可以用冰甲醇固定来增加细胞的通透性！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
nogojin PFA是交联固定，可以用冰甲醇固定来增加细胞的通透性！ 那就好，我就是希望固定以后对细胞膜的通透性没有影响
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
细胞死了细胞膜就会有洞，所以做免疫荧光不打洞，细胞里的marker也是做得出的，只不过上抗体时间久一点罢了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
天空的轨迹 细胞死了细胞膜就会有洞，所以做免疫荧光不打洞，细胞里的marker也是做得出的，只不过上抗体时间久一点罢了 我是用非渗透性的染料去染细胞核以证明细胞膜表面形成了一定孔径的洞，那我应该不固定，直接活细胞染色？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最简单的是试验一下。你说的用非渗透性的染料去染细胞核去直接进行活细胞染色，不固定，标记上的可能性小。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
nogojin 最简单的是试验一下。你说的用非渗透性的染料去染细胞核去直接进行活细胞染色，不固定，标记上的可能性小。 恩，尝试一下很有必要
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
wodeyixueshengya 染色前使用4%多聚甲醛固定细胞是否会起到Triton在细胞表面打洞的效果？4%的多聚甲醛只是交联固定细胞的作用，里面没有Triton吧，但是Triton有打孔的作用。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
charlotte89 4%的多聚甲醛只是交联固定细胞的作用，里面没有Triton吧，但是Triton有打孔的作用。 我固定与不固定都做过，固定之后细胞通透性会增加
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
wodeyixueshengya
我固定与不固定都做过，固定之后细胞通透性会增加你的4%多聚甲醛是含有Triton吗？含有Triton就会有打孔的作用。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
charlotte89 你的4%多聚甲醛是含有Triton吗？含有Triton就会有打孔的作用。 我是用多聚甲醛粉末配的，应该不含Triton
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
wodeyixueshengya
我是用多聚甲醛粉末配的，应该不含Triton因为我没有专门试过固定跟不固定的细胞通透性差异，我认为理论上可能PFA没有打孔作用，不过还得看你的实验，我没有具体试过这个。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园关注今日：129 | 主题：461835
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】细胞是污染了吗？
页码直达：
这个帖子发布于3年零207天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近培养一株悬浮细胞，复苏以后状态一直不好。主要现象：1，许多细胞都非光滑圆润的外形，表面显得粗糙不规则2，细胞胀大，破裂较多，有大量的凋亡小体存在3，细胞培养液中有许多白色的极小颗粒，在高倍显微镜下观察，发现貌似有游动。发两张照片，高手帮看看是不是有污染。求助内容：1，细胞如有污染，可否通过简单的染色实验检测到？2，有无办法将此种细胞养活？
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谁能帮助回答一下呢，着急呀
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
会游动的小东西，一般就是污染。图片看起来很像。染色检测可以的，论坛里有，支原体和细菌的检测。如果是污染，很难再养活了，而且细胞状态也不行了，最好是重新复苏。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精氨酸、O 2或葡萄糖，每一种支原体都有自身持点。多数支原体适合于偏碱条件下生存(PH7．6—8．0)，对酸耐受性差。对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。支原体污染细胞后．培养液可不发生混浊．多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解．因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢．甚至从培养器皿脱落。为确定有无支原体污染可做如下检酗：①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向细胞面滴加pH5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高．但方法较为复杂
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
1、 取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。2、 涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。3、 晾干：让涂片在空气中自然干燥。4、 固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。5、 染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。6、 水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。7、 媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。8、 脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。9、 复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
培养液没有变浑浊吧？若是，感觉不像是污染。应该是细胞状态不好。可参考下
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我也有过这种情况，当然，最后结局都不好。你现在这样的细胞是飘着的还是贴着，还是似贴非贴的状态？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
这个帖子是不错，保留下来。细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作 3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多。比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。1关于黑胶虫的描述1.1分类上的描述对于黑胶虫的分类，学术界没有明确给予说法。关于黑胶虫的分类，目前大部分人认为黑胶虫污染是微生物感染。在一些文章论述上把黑胶虫归为生物污染类型，但是没把它归为确定的生物分类类型，只是把黑胶虫独立为一种未知生物。而根据中国病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，但是由于课题经费不够而不能继续下去，最终也没有有力证明黑胶虫是属于原虫。也有一些学者不认为所谓的黑胶虫污染是一种生物污染，而认为是细胞碎片类物质，是在细胞培养时，细胞衰亡破裂产生的；也有在文献中报道说是玻璃瓶中类似氧化硅的物质，那个文献很少人找得到；还有报道黒胶虫是一种纳米级的细菌。1.2形态上的描述形态上类似与杆状细菌，但长度比细菌长，直径约在0.5~1微米，不染色观察为黑色；胶虫成熟后呈线状，而且形态是椭圆形。1.3运动形式在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动），即很多细胞培养者看到的，像黑色的小虫游来游去。可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去。但是在物理学上来说，颗粒足够小，在液体中也是做布朗运动的，这不足以说明黑胶虫的布朗运动就证明它是生物。1.4生理上的描述1.4.1抗性抗细菌和抗霉菌的药物对黑胶虫均无效，可以保守的判定黑胶虫不属于细菌。1.4.2环境抗逆性将培养器材150度烘烤8小时，可以消除，这个黑胶虫高压灭菌泡酸都不死。可见黑胶虫可以耐高温高压，而且还有点嗜酸，如果证实它是生物的话，那它很有可能是极端微生物，一种古菌。1.4.3营养条件“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。可见“黑胶虫”是一种异养生物。2对黑胶虫的各种猜测及相应的处理2.1非生物类2.1.1细胞碎片类在细胞培养的时候， 由于细胞代谢、物质交换、周边环境变化，尤其是在从37度培养箱中拿出来观察的过程中，由于液体培养基的比热较大，液内温度高于外界温度，造成冷热交换、小范围内形成液体流动加剧，当然这些小岁末就会被搅动起来形成似乎“游动”的感觉；随着细胞培养的继续，部分细胞开始衰亡，细胞膜结构破裂，破裂之后的细胞内容物泄露到培养液中。尤其是溶酶体的破坏，连续性地造成其他细胞和细胞器的损伤，如果换液不很勤，又会出现进一步破坏和残渣的出现；再者，“黑焦虫”问题是很多细胞培养者已经发现的问题，但到目前为止尚未找到其监测和排除的试剂和手段，这首先是由于所谓“黑焦虫”病原体根本难以收集和捕捉， 这也从另一个侧面证明了“黑焦虫”问题的难以确定性；再说任何一种外来的微生物在培养基中都会有生命活动的反应和表现，而不是简单地运动那样的外观性表现。举一个例子：如果“黑焦虫”的运动状况已经到了用显微镜已经可以观察出的程度，其营养代谢和能量需求也就可想而知。这样，培养液中的影响消耗、酸碱含量程度等都要发生明显变化。比如说：迅速的、大含量的沉淀， pH值的迅速下降，细胞大量破碎死亡、引发其它类型微生物侵染等等。而这些状况，在所谓的“黑焦虫”感染中，是很难观察到的。同时“黑焦虫”的出现而影响细胞状态似乎得不到有力的证据。倒是细胞状态下降的时候，“黑焦虫”明显增多了。很有可能是细胞状态下降时，细胞衰亡产生的细胞碎片。所以黑胶虫属于细胞碎片是比较可能和合理的。2.1.2玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西网上有一篇文章说，黑胶虫其实不是一种生物，是无机物，其本质是玻璃培养瓶里的硅颗粒。可影响细胞生长，细胞状态好时，不明显。细胞状态较差，数量少时才容易看到，最好的办法是用一次性培养瓶，可消除黑胶虫影响。2.1.3血清聚合物产物gibco公司的血清说明，此物为血清聚合产物，而不是微生物2.2生物类2.2.1支原体有人曾认为黑胶可能是支原体污染，因为相对比较权威的网站文章指出，黑胶虫可以通过滤膜，可以在空气中传播。而恰巧口腔支原体为人体口腔中之正常菌丛，所以实验室之操作人员的污染亦可能为支原体的污染源。但有人为此做了实验证明黑胶虫不会是支原体，原因如下：1、光镜下可见, 因为体积不对，支原体在普通显微镜下不能看到。2、多种染色后可见，甚至hoechst即能将它染色,一般来说支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。所以，黑胶虫是一种支原体的可能性比较小。2.2.2真菌有很多人发现类似黑胶虫的，但最后确定是真菌，二性霉素B对其有效。那说明黑胶虫不存在只是细胞培养中的真菌感染，还是说明黑胶虫污染属于真菌类污染物。如果黑胶虫是一种真菌，那么由此引起的污染是不会引起那么多人的关注，即使它很特殊。但是这不能排除那些认为“黑胶虫”是真菌的细胞者，看到的只是一般真菌感染。由于细胞被感染了，要进行拯救处理，不像理论上那么简单，稍有不注意都是很容易导致培养失败，所以黑胶虫是一种真菌也是不太可能。2.2.3寄生类原虫黑胶虫属于寄生类的原虫，而不是细菌、支原体，也不是什么补体、细胞碎片或蛋白沉淀。有人在400倍以上的高倍镜下可以清楚的看到胶虫有两种不同形态，一种较大，运动较慢，泛红光；另一种较小，运动较快，红中带绿，个小的围着个大的分布，很可能是公的围着雌的。这种生物也并非离开细胞就不能存活，也有人做过这样的试验，单纯培养过污染胶虫的血清4周，直到满视野都是黑煤渣般的胶虫。给人的感觉是胶虫和细胞一样有丛集性，如果胶虫密度低则生长缓慢，如果手懒，拖了几天没换液，待胶虫生长到一定浓度后便会飞速分生，细胞受感染的程度也大，这时除了培养基中可见外，细胞表面通常也象长满了粉刺，所以有人认为细胞旁分泌的某些因子可以抑制胶虫的生长。据说，中国病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。由此黑胶虫属于原虫的有比较大的可能性。3关于黑胶虫出现的几种情况1.“黑胶虫”的出现常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。就是在细胞生长状态不良时，黑胶虫容易出现。“黑胶虫”生长与细胞的生长有此消彼长的关系，即当细胞状态好时小黑点会相应的减少；反之则增加，似乎有细胞竞争生长的关系，但总的来说它的出现似乎并不影响细胞的生长。2.细胞刚用的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，小黑点一般不出现，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长。细胞进过多次传代的情况下，也会使黑胶虫出现。3.换用了其他公司的血清，多是北方公司的血清，就出现了这种非常类似这里的”黑胶虫“的情况。在北京医科大学/中国协和医科大***合出版社出版的《现代实验血液学研究方法与技术 》书中关于检查血清中写道，“我国北方小牛血清还多见黑胶虫污染”。其实在很多，遭遇黑胶虫的案例中，大部分细胞培养者都认为黑胶虫来源于血清。4关于再细胞培养中出现黑胶虫后的几种处理建议1．换好一点的血清，当然最好是进口胎牛血清（国产血清太脏），就是价格高的离谱，经济条件不允许，可以用进口新生牛血清代替。建议如果使用的是Hyclone或GIBCO的血清可不必灭活，这样可以有效减少“小黑点”的形成。一般的血清都不要去灭活处理，为什么呢？INVITROGEN公司在其血清说明书上解析道：经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清，沉淀物的形成会显著增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时，血清尽量不经热灭活。2．如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。如果细胞不是非常珍贵，可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔，也有建议庆大霉素500ug/ml洗涤。3．换用进口的一次性塑料培养瓶。4．停止复苏，停止养细胞，彻底消毒所有用于细胞培养的一切用品，包括所用的培养瓶，培养基，吸管，胰酶，孵箱，超净台、空间等等你能想到的和细胞培养相关的所有物品。一个星期后，再复苏污染之前冻存的细胞，注意你的白大衣衣袖污染即可。这样你可能觉得动作太大，但可以用一个星期的时间挽救两个月的时间，还有其他你为了找到污染源，去除污染所耗费的精力，和财力。5．在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。所有东西最好重配；如果实在要抢救，重点突破，留几瓶污染不是很严重的细胞抢救，其余弃去6．如果有其它可用的细胞，那么污染的细胞最好扔掉；如没有，可试着用抗生素，最可靠的是细菌培养加药敏，据药敏结果选择抗生素，当然不能影响到细胞的状态。7．有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。由于黑胶虫尚未明确鉴定出是什么生物，所以上述的处理方法不一定正确，可以供考虑采用。8.有人为寻找到杀灭“黑胶虫”的方法，做了一个试验，他取有“黑胶虫”污染的六孔板，每孔内有2ml培养液，向有污染的孔内分别加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新洁尔灭原液，边加边在倒置显微镜下观察。最后他得出结论：新洁尔灭与水或培养基的比例为1：4时即可杀死“黑胶虫”。但是新洁尔灭对细胞的负面影响太大，比较珍贵的细胞培养最好不采用此方法。5.国外关于黑胶虫的相关情况在国外的生物论坛上也有很多人在讨论black dots 和black particles，也就是我们所说的黑胶虫。他们所描述black dots 和black particles的情况，基本上和国内论坛上相似。国外有人用实验证明black dots 或black particles 不是支原体，而在细菌范围内。基本过程如下：If the poster is concerned about mycoplasma, there are tests to identify them. One is a Hoechst dye staining technique to look for extranuclear DNA spots.Also, prepare a dry flame-fixed smear from another aliquot of the media (5-10 ul) and stain with crystal violet. See under microscope at high magnification if there is anything resembling bacteria. And by the way, estimate the size of the particles to be sure it is in the range of bacteria.6总结从前面关于黒胶虫的描述可以看出，人们遇到的黒胶虫并不都是一样的，有象细菌的、有象支原体的、有象原虫的、有象真菌的，还有象细胞碎片的。在国内个实验室的器材条件参差不齐，而且实验人员的操作质量也不尽相同，同一种现象也可能有些许差异，当用描述出来的现象的差异可能变大也可能变小。所以很多人看到细胞被细菌污染了，不好处理，而却描述出来的现象和流传的黑胶虫类似，就会把培养失败的原因归结到无法处理的黒胶虫污染，甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫。这样的事情多了，黑胶虫就会人为的变种，象什么的都有。黑胶虫是否存在，还有待于科学的发展。但有一点可以肯定的，大部分人发现的“黒胶虫”并不是真正那个未知的黒胶虫，而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
&=细胞污染图片这个链接里边有一个白色链球菌，感觉跟我的图片里的小白点有点像呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
linyixiao0214 这个帖子是不错，保留下来。细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置 ...说的很详细，谢谢，受益了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
细胞有没有正常生长，或细胞是否污染，是细胞培养的关键。虽然，顺利的时候，细胞培养起来很简单，可不顺的时候就会出现各种问题-------细胞污染啦、细胞生长缓慢啦、细胞形态看着不对劲啦、死细胞率多啦。。。。。。。。毕竟，细胞作为一种体外培养的物质，受许多外界因素的影响，培养基、血清、孵育温度，CO2浓度。。。。。。除此之外，还有一种影响因素就是抗生素，我在英格恩技术博客看到了很多关于这方面文章，你可以参考下
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼上说的太详细了，十分感动，一直都是在养细胞的实验，没事遇到个细胞污染真的很头疼的~~~~(&_&)~~~~看到这样的帖子真的是受益匪浅啊！如果是支原体污染的话，建议可以去汉恒生物申请免费的试用装，哈哈不要钱的，这也是极好的~
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
跟我的细胞一模一样，细胞液不浑浊，细胞不会马上死，但是数量会缓慢的减少直到最后Game over。已经搞了几个星期没搞定，用了去支原体的药也没有效果，楼主后来是怎么处理的啊？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
cheff0412 edited on
我的细胞最近也是污染，很头疼，想问楼主最后怎么解决的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园}