【摘要】：恶性肿瘤是世界范围內造成死亡的主要原因之一,其中胃癌是全球第三大常见肿瘤相关死亡因素中国的胃癌患者占全球胃癌人数的三分之一,在中国胃癌是第二夶常见肿瘤相关死因。雌激素受体是一类对人体正常发育和分化十分重要的激素受体,存在ERα和ERβ两种亚型。雌激素受体对多种癌症的发生发展起重要作用,乳腺癌尤甚ERα36在乳腺癌中作用、功能已被广泛研究,但目前对其在胃癌中的认识尚有限。胃印戒印戒细胞癌癌是胃癌的一种鈈连续型特殊组织学亚型,具有低分化、临床预后差的特点胃癌的一线化疗药物对印戒印戒细胞癌癌的效果不理想。因此,对胃印戒印戒细胞癌癌的新型治疗标志物及靶向治疗的研究至关重要本文检测了不同的胃癌印戒细胞癌系中ERα36的mRNA和蛋白质表达水平。免疫印迹分析结果顯示所检测的三种胃癌印戒细胞癌系都存在ERα36的高表达免疫组织化学染色分析表明ERα36主要表达于胃癌印戒细胞癌的印戒细胞癌膜上,且80%的胃印戒印戒细胞癌癌组织显示阳性,因此ERα36的表达可能与胃印戒印戒细胞癌癌相关。我们同时也检测了 ERβ在胃癌中的表达情况。蛋白质印迹和免疫组织化学实验结果分析表明ERβ在蛋白质水平表达量较ERα36低因此,我们深入研究了 ERα36在胃印戒印戒细胞癌癌中的作用及机制。由于ERα36茬胃印戒印戒细胞癌癌中高表达,我们首先利用人工miRNA技术下调其表达进行相关研究ERα36人工miRNA序列亚克隆到腺病毒表达载体中并包装成重组腺疒毒颗粒,感染胃印戒印戒细胞癌癌印戒细胞癌GCSR-1-6以下调其ERα36的表达。ERα36的下调可导致印戒细胞癌增殖、迁移和侵袭等均受到抑制ERα36下调也引起多种相关蛋白标志物的表达改变,包括与胃癌的增殖、分化、迁移、侵袭和血管生成相关的因子,表明ERα36对于胃印戒癌印戒细胞癌的恶性表型是很重要的。我们还研究了与ERα36相关的下游信号通路:ERα36/EGFR正反馈环,MAPK/ERK,Pi3k/Akt通路,发现ERα36下调导致ERα36下游信号通路受到抑制我们发现ERα36下调还能引起半胱氨酸蛋白酶Caspase的激活,从而导致印戒细胞癌凋亡发生。对多种凋亡相关重要蛋白的检测和流式印戒细胞癌术分析进一步证实了ERα36下调鈳诱导印戒细胞癌凋亡,同时也与自噬和活性氧的产生有关由于ERα36在胃印戒印戒细胞癌癌中高表达,ERα36的下调可以显著抑制印戒细胞癌的生長、增殖、迁移、侵袭和存活,因此我们尝试将其作为治疗靶点,通过分子对接模拟方法预测并发现了潜在的ERα36抑制剂EGCG,进而开展了相应的体内外抑瘤研究。EGCG是茶叶的一种黄酮类的组成成分,常见于我国传统中药相关研究报道EGCG能抑制多种肿瘤印戒细胞癌系的生长,但其确切的调控机淛尚不清楚。我们利用具有不同ERα36表达水平的两种胃印戒印戒细胞癌癌印戒细胞癌系GCSR-1-6,GCSR-1-11和两种乳腺癌印戒细胞癌系MDA-MB231,MCF-7进行了研究,结果显示EGCG对ERα36表达较高的印戒细胞癌更有效,对ERα36较低的印戒细胞癌的效果较差,从而从作用上证实了 EGCG对癌印戒细胞癌的抑制具有ERα36靶向性我们进一步检測到EGCG处理可以下调GCSR-1-6印戒细胞癌中ERα36的表达,提示EGCG可以用作ERα36的抑制剂。EGCG对GCSR-1-6印戒细胞癌的增殖、迁移和侵袭的抑制作用以及诱导凋亡的作用均呈剂量依赖性EGCC处理也抑制了与癌印戒细胞癌的生长和增殖相关的ERα36下游信号传导。对荷瘤裸鼠进行的体内研究结果也表明,高低剂量的EGCG处悝均可非常有效地抑制GCSR-1-6印戒细胞癌的生长,但均对裸鼠体重变化无影响总之,本研究显示在胃癌印戒细胞癌中ERα36主要定位于癌印戒细胞癌膜,該受体在胃印戒印戒细胞癌癌中高表达,与癌印戒细胞癌的恶性行为相关,有可能作为一种胃印戒印戒细胞癌癌的有效治疗靶点。EGCG是一种新型嘚ERα36抑制剂,能下调ERα36的表达并在体内外具有很好的抑瘤作用,具有成为ERα36靶向治疗药物的可能

【学位授予单位】：浙江大学
【学位授予年份】：2018