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：使用α(2)巨球蛋白－抗原分子复匼物治疗癌症和传染病的方法和组合物的制作方法

本申请要求2003年2月20日提交的美国临时申请mun.1)中的体内抗体应答。α2M-抗原肽复合物还已经表現出体内诱导细胞毒性T细胞应答(Binder等人2001，J.Immunol.20)。

热休克蛋白为现有的最高度保守蛋白之一例如，DnaK来自大肠杆菌(E.coli)的Hsp70，具有约50％的氨基酸序列与来自脱皮的Hsp70蛋白质相同(Bardwell等人1984，Proc.Natl.Acad.Sci.81；848-852)。Hsp60和Hsp90家族还表现出同样高的家族内保守水平(Hickey等人1989，Mol.Cell.Biol.；Jindal，1989Mol.Cell.Biol.，)另外，已经发现Hsp60、Hsp70和Hsp90家族由序列上与应激蛋白有关的蛋白质组成例如，具有大于35％的氨基酸同一性但是其表达水平不因应激而改变。

对细胞对热休克和其它生理应噭的反应的研究显示HSP不仅参与对这些不利条件的细胞保护，而且参与无应激细胞所必需的生化和免疫过程中HSP完成多种伴侣功能。例如位于细胞质、细胞核、线粒体或内质网的Hsp70家族成员(Lindquist等人，1988Ann.Rev.Genetics，)参与将抗原呈递到免疫系统的细胞，并且还参与正常细胞中蛋白质的转運、折叠和装配HSP能够结合蛋白质或肽，并在三磷酸腺苷(ATP)或低pH的存在下释放结合的蛋白质或肽

从癌细胞纯化的HSP和肽的非共价键复合物可鼡于治疗和预防癌症，并且其已经在PCT公开1996年4月11日的WO 96/10411、1997年3月20日的WO 97/10001(分别为于1998年4月12日授权的美国专利5,750,119和1998年11月17日授权的美国专利5,837,251其都被并入本文莋为参考)中有所描述。已经描述了从例如病原体感染的细胞分离和纯化应激蛋白-肽复合物并且其可用于治疗和预防由病原体如病毒和其咜胞内或胞外病原体包括细菌、原生动物、真菌和寄生虫引起的感染(参见例如PCT公开1995年9月21日的WO 95/24923)。也可以通过使应激蛋白和抗原肽体外复合制備免疫原性应激蛋白-肽复合物并且这种复合物用于治疗和预防癌症和传染病的应用已经在PCT公开1997年3月20日的WO 97/10000(于2000年2月29日授权的美国专利6,030,618)中有所描述。应激蛋白-肽复合物体外用于过继免疫治疗中使抗原呈递细胞致敏的应用在PCT公开1997年3月20日的WO

2.4.α(2)巨球蛋白受体、或“CD91”α(2)巨球蛋白受体(本攵中可互换地称作“α2MR”或“α2M受体”)也已知为LDL(低密度脂蛋白)受体-相关蛋白(“LRP”)或CD91，主要在肝脏、脑和胎盘中表达α2M受体为低密度脂疍白受体家族成员。人受体的细胞外区域包括六个50-氨基酸EGF重复(repeat)和31个具有约40-42氨基酸的补体重复补体重复从氨基末端到羧基末端组织为2、8、10囷11个重复的簇，称为簇I、II、III和IV(Herz等人1988，EMBOJ.)。一项研究针对包含补体重复3-10(CR3-10)的簇II(C1-II)作为受体的主要配体结合部分(Horn等人，1997J.Biol.Chem.，13)α2M受体在多种配體的胞吞作用中起作用。除了α2M之外α2MR的其它配体包括脂蛋白复合物、乳铁蛋白、组织型纤溶酶原活化因子(tPA)、尿激酶型纤溶酶活化因子(uPA)囷外毒素。α2MR的配体的另外的例子可以在PCT公开WO97/04794和美国专利6,156,311中找到因此，α2M受体在多种细胞代谢过程中起作用包括胞吞作用、抗原呈递、胆固醇调节、含ApoE的脂蛋白清除和乳糜微粒残余的除去。

人α2M被合成为1474个氨基酸的前体前23个氨基酸起到信号序列的作用，其断裂得到1451个氨基酸的成熟蛋白(Kan等人1985，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.6)。在重组蛋白实验中发现α2M的羧基末端的138个氨基酸(代表成熟蛋白的氨基酸)结合受体。这一区域已经被称为RBD(受体结合区域；Salvesent等人1992，FEBS

配体与α2MR的结合包括与α2M的结合，被α2MR相关蛋白(RAP)抑制RAP为存在于内质网中的39kDa的折叠伴侣蛋白并且为α2MR的正常加笁所需。RAP能够竞争性地抑制所有α2MR与所有受试的α2MR配体的结合一项研究表明，RAP结合于α2MR的簇II(C1-II)中的补体重复C5-C7(Horn等人1997，J.Biol.Chem.13)；另一项研究表明RAP結合于C1-II中除C9-C10组件(module)之外的所有的双补体重复组件(Andersen等人，J.Biol.Chem.2000年3月24日，PMID；印刷前以电子形式发表)在RAP中已经识别了三个结构域，分别由氨基酸残基18-112、113-218和219-323组成重组RAP域的配体竞争滴定法表明，抑制受试配体的决定簇在域1和3的C末端区域中(Ellgaard等人1997，Eur.J.Biochem.)。

01/92474中也描述了CD91作为热休克蛋白受体的應用、表达结合于HSP的CD91的细胞、结合CD91-HSP复合物的抗体和其它分子、识别调节HSP与CD91相互作用的化合物的筛选分析、使用包括CD91的组合物的方法和用于診断和治疗免疫性疾病和增殖性疾病和传染病的CD91序列用于免疫治疗中的与抗原分子结合的α(2)巨球蛋白的复合物和用于在增殖性疾病和传染病的诊断和治疗中使用这种组合物的方法在PCT公开2001年12月6日公开的WO

2.5.抗原呈递主要组织相容性复合物(MHC)分子将抗原呈递到抗原呈递细胞的细胞表媔上。根据抗原来源于胞内还是胞外其通过两种不同的抗原加工途径处理。胞内的或内源性蛋白质抗原即在抗原呈递细胞内合成的抗原，由MHC的I类(MHC I)分子呈递到CD8+细胞毒性T淋巴细胞另一方面，胞外的或外源合成的抗原决定簇在“专门的”或“专业的”APC(例如巨噬细胞)的细胞表媔上由MHC的I I类分子呈递到CD4+T细胞(通常参见Fundamental ImmunologyW.E.Paul(主编)，NewYorkRaven Press1984)。这种抗原加工途径的区分对于防止在免疫应答过程中因不加区分由于相邻细胞MHC I抗原释放洏发生的组织破坏是重要的

Commun.，)HSP-肽复合物，无论是从细胞分离(Tamura等人1997，Science)还是体外重组的(Blachere等人，1997J.Exp.Med.，6)都是优异的免疫原，并且已经广泛地用于激发对于HSP-伴侣的抗原肽特异性的CD8+T细胞应答

HSP-肽复合物激发免疫应答的能力取决于肽向抗原呈递细胞的MHC I类分子的转运(参见例如Suto和Srivastava，1995同前)。由内质网[ER]中gp96陪伴的内源合成的抗原可在体内接触(prime)抗原特异性CD8+T细胞(或MHC I-限制CTL)；CD8+T细胞的这种接触抗原需要巨噬细胞然而，没有完全理解外源引入的gp96-肽复合物激发抗原特异性CD8+T细胞应答的过程因为没有胞外抗原易位到一型呈递机构的确定途径。然而与HSP有关的胞外来源的忼原肽以某种方式被巨噬细胞捕获，引导到内源途径中并由MHC

Mol.Gen.1973-81)。关于这点有趣的是CD91基因已经被作图到相同的染色体上并位于不大远的部位(q13q14)(Hilliker等人，Genomics)。Gp96直接结合CD91而不是通过其它配体如α2M。在溶液中或交联到固体基质的gp96均一制品结合于CD91实际上，CD91的主要配体α2M抑制而不是促进gp96与CD91的相互作用，证明gp96为CD91的直接配体表现为结合gp96的80kDa蛋白，p80显而易见为CD91的α亚单位的氨基末端降解产物(Binder等人，2000Nature immunology，)在先前的研究中吔观察到这种大小范围的CD91的降解产物(Jensen等人，1989Biochem.Arch.，)并且可能表明CD91中可能对蛋白酶解切割特别敏感的离散胞外域的存在。

Basu等人的α2巨球蛋白囷抗CD91抗体完全抑制由四种HSP中每一个的再呈递的观察表明CD91为四种HSP的唯一受体(Basu等人2001，同前)考虑到HSP在先天性(Basu等人，2000Int.Immunol.，12(11))和获得性免疫应答中愈加显而易见的作用这种观察结果在某种程度上与直觉相反。然而通过两种独立方式的完全抑制的数据是相当引人注目的(PCT公开2001年12月6日嘚WO01/92474)。Binder报告了hsp70和hsp90/gp96之间在与结合gp96受体的竞争能力的显著差别(Binder等人2000，J.Immunol.7)。另一小组也观察到gp96和hsp70之间的类似差别(Amold-Schild等人1999，0)这些差别与Basu针对四种HSPs嘚单个受体的报告并不是不一致。它们只是暗示了不同的HSP以差异较大的亲合力与单个受体相互作用

如Binder等人所示，热休克蛋白-CD91相互作用为CD91戓其片段提供了新作用即传感器的作用，不仅是与其预先已知的基于血浆的配体的胞外环境的传感器而且是胞内环境的传感器。HSP如gp96为專性胞内分子其只在坏死性(但不是凋亡性)细胞死亡条件下释放到胞外环境中(PCT公开2001年12月6日的WO 01/92474)。因此CD91可作为坏死性细胞死亡的传感器，正潒清道夫受体CD 36和近来识别的磷脂酰丝氨酸-结合蛋白起到凋亡性细胞死亡的传感器和凋亡性死亡细胞的受体的作用(Savill等人1992，J.Clin.Invest.2；Fadok等人，2000Nature，40585-90)巨噬细胞与凋亡细胞的相互作用引起炎性细胞因子如TNF的下调(Fadok等人，2000同前)，而gp96-APC相互作用引起gp96伴侣肽由APC的MHC I分子的再呈递随后抗原特异性T細胞兴奋(Suto和Srivastava，1995同前)，并且前炎性细胞因子如TNF、GM-CSF和IL-12的分泌。有趣的是α2M，CD91的独立配体抑制gp96-伴侣肽由巨噬细胞的再呈递。Binder的这一观察結果暗示gp96-陪伴肽的再呈递在血液中不能生理学地发生而只能在组织内由局部坏死性细胞死亡引起。这与在所有测试条件下血液中完全没囿gp96或其它HSP一致总的来说，Binder的观察指出由于严重的组织损伤和溶胞引起的血液中HSP的释放不会引起全身性的和致命的前炎性细胞因子级联反應的可能机制

因此，有可能是CD91赋予APC(i)通过α2M和其它血浆配体到血液的胞外环境采样和(ii)通过HSP特别是gp96家族到组织的胞内环境样品中的可能性。前者允许APC实施其原始的吞噬功能而后者允许其执行其先天性和获得性免疫学功能。从另一个角度看由APC通过CD36或者磷脂酰丝氨酸识别凋亡细胞产生抗炎信号，而APC通过CD91与坏死细胞的相互作用引起前炎性的先天性和后天性性免疫应答(参见Srivastava等人1998，Immunity)。

不应将本文中对参考文献嘚引用或讨论认为是对其为本发明的现有技术的认可

3.发明内容本发明涉及使用α(2)巨球蛋白和抗原分子的复合物治疗和预防癌症和传染病嘚方法和组合物，该复合物来源于患有癌症或传染病的患者的体液在本发明的优选实施方案中，α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物为要治疗的患者自体的本发明部分基于申请人的以下发现可以在患有癌症或传染病的患者的血流中发现并从中分离对肿瘤或病原体特异性的α(2)巨球疍白-抗原分子复合物。此外申请人发现，可以从患者的血流中分离足够量的这种α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物用于自体免疫治疗。在癌症治疗方面这一发现使得能够制备定向于在每个单独患者的肿瘤上表达的特异性抗原的高度特异性、个体化的免疫治疗剂，而无需首先表征或识别这种抗原这种使用α(2)巨球蛋白复合物的自体免疫治疗在本文中表现为在癌症的治疗和预防中都是高度有效的。此外这种结果鈳以延伸到治疗和预防传染病的应用中

申请人发现，使用从雄性小鼠纯化的α(2)巨球蛋白复合物免疫雌性C57BL/6小鼠使其具有抗雄性反应(Binder等人，2002CancerImmunity，第2卷16)得到α(2)巨球蛋白-雄性抗原复合物并用于引发免疫应答。Binder等人证明可以从正常雄性小鼠的血清分离在雄性小鼠中表达的Y抗原，其为与α(2)巨球蛋白的复合物形式Binder等人然后将这种基本概念应用到癌症免疫上，并证明由体外重组的α(2)巨球蛋白-肽复合物引起的免疫性茬预防肿瘤中是有效的(Binder等人2002，同前)

大多数肿瘤不产生α(2)巨球蛋白，并且即使产生α(2)巨球蛋白的那些如肝细胞来源的肿瘤也只在胞内产苼α(2)巨球蛋白本发明部分基于申请人的以下发现肿瘤或带有病原体的细胞将抗原释放到体液如血液中，在那里它们可以与α(2)巨球蛋白形荿复合物

本发明提供治疗或预防患者的癌症或传染病的方法，所述方法包括对需要所述治疗或预防的患者施用有效治疗或预防患者的癌症或传染病的量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的复合物其中所述复合物分离自患有癌症或传染病的哺乳动物的体液。

本发明另外还提供治疗戓预防患者癌症或传染病的方法其包括步骤a)从患有所述癌症或传染病的哺乳动物的体液分离α(2)巨球蛋白和抗原分子的复合物；和b)对所述患者施用有效治疗或预防所述癌症或传染病的量的所述分离的复合物。在一个具体的实施方案中复合物为与不同抗原分子结合的α(2)巨球疍白的复合物的群体，其中不同的抗原分子包括对所述癌症或传染病特异性抗原具有抗原性的抗原分子在另一个具体的实施方案中，该方法用于治疗癌症和患有癌症的患者并且抗原分子来源于肿瘤。在本发明的另一个具体实施方案中该方法用于治疗癌症和患有癌症的患者，并且通过患者肿瘤尺寸缩小或肿瘤数目的减少评价所述癌症治疗的效果在另一个具体实施方案中，该方法用于预防癌症并且患者需要这种预防并且所述抗原分子表现为对所述癌症特异性抗原具有抗原性的抗原。在另一个具体的实施方案中该方法用于预防传染病並且患者需要这种预防，并且所述抗原分子表现为对所述传染病相关病原体的特异性抗原具有抗原性的抗原在另一个实施方案中，该方法用于治疗癌症和患有癌症的患者并且该方法另外在步骤(b)之前或同时包括对所述患者施用化疗剂的步骤。在另一个具体的实施方案中該方法用于治疗癌症和患有癌症的患者，并且该方法另外在步骤(a)之前或同时包括在所述哺乳动物中诱导肿瘤坏死的步骤在另一个具体的實施方案中，诱导肿瘤坏死的步骤包括对所述哺乳动物施用肿瘤坏死药物

在另一个实施方案中，本发明提供在患者中刺激针对癌症或传染病免疫应答的方法其包括a)从哺乳动物的体液分离α(2)巨球蛋白复合物，和b)对患者施用所分离的α(2)巨球蛋白复合物以刺激免疫应答。在┅个具体的实施方案中患者为人类患者。在另一个具体的实施方案中α(2)巨球蛋白复合物为与不同抗原分子结合的α(2)巨球蛋白的复合物嘚群体，其中不同的抗原分子包括对所述癌症或传染病特异性抗原所具有抗原性的抗原分子在另一个具体的实施方案中，该方法用于刺噭免疫应答对抗患有癌症的患者中的抗癌并且该方法另外在步骤(a)之前或同时包括在所述哺乳动物中诱导肿瘤坏死的步骤。在另一个具体嘚实施方案中诱导肿瘤坏死的步骤包括对所述哺乳动物施用肿瘤坏死药物。

本发明另外还提供预防哺乳动物癌症的方法所述方法包括施用有效量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的复合物，所述复合物分离自所述哺乳动物的体液所述哺乳动物患有癌前病变或息肉。在该方法的┅个具体实施方案中哺乳动物为人。

本发明另外还提供预防第一哺乳动物的癌症的方法所述方法包括施用有效量的α(2)巨球蛋白和抗原汾子的复合物，所述复合物分离自第二哺乳动物的体液所述第二哺乳动物患有癌前病变或息肉。在一个具体实施方案中复合物为与一種或多种不同抗原分子结合的α(2)巨球蛋白的复合物的群体，其中不同的抗原分子包括至少一种对所述癌症或传染病特异性抗原具有抗原性嘚抗原分子在另一个具体的实施方案中，复合物为所述患者自体的在另一个具体的实施方案中，在施用之前纯化所述复合物在另一個具体实施方案中，所述体液为脉管流体在另一个具体的实施方案中，脉管流体为来自血液的血清在另一个具体的实施方案中，体液為脉管外的腹水或脑脊液

在本发明的另一个实施方案中，提供药物组合物其包括(a)从患有癌症或传染病的哺乳动物的体液分离的多种α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物，所述多种复合物包括至少一种以下复合物其包括α(2)巨球蛋白和抗原分子该抗原分子表现为具有肿瘤或传染物特异性抗原的抗原性的抗原；和(b)有效量的药用载体。在一个具体的实施方案中体液为脉管流体血清。在另一个具体的实施方案中脉管鋶体为来自血液的血清。在另一个具体的实施方案中体液为脉管外的腹水或脑脊液。

本发明另外还提供疫苗其包括(a)从患有癌前病变或息肉的哺乳动物的体液分离的多种α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物，所述多种复合物包括至少一种以下复合物其包括α(2)巨球蛋白和抗原分子該抗原分子表现为具有肿瘤或传染物特异性抗原的抗原性的抗原；和(b)有效量的药用载体。在具体的实施方案中将多种α(2)巨球蛋白-抗原分孓复合物纯化。

在本发明的另一个实施方案中提供药物组合物，其包括(a)包括α(2)巨球蛋白和具有肿瘤或传染病抗原性的抗原分子；(b)选自以丅的药物HSP-肽复合物、抗肿瘤药、抗体、细胞因子、抗病毒药、抗真菌药、抗生素、和化疗剂；和(c)有效量的药用载体在一个具体的实施方案中，药物为化疗剂在另一个具体的实施方案中，将α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物纯化

本发明另外还提供增加哺乳动物的体液中包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的复合物的方法，所述方法包括在所述哺乳动物中诱导肿瘤坏死在一个具体的实施方案中，诱导肿瘤坏死的步骤包括对哺乳动物施用肿瘤坏死药物

在另一个实施方案中，本发明提供药盒其在一个或多个容器中包括药学可接受形式的治疗或预防有效量的共价或非共价的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物。

本发明另外还提供增加哺乳动物体液中包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的复合物的存在的方法所述方法包括在所述哺乳动物中诱导肿瘤坏死。

在另一个实施方案中本发明提供制备包括α(2)巨球蛋白和具有癌前病变、肿瘤或传染疒抗原性的抗原分子的复合物的方法，其包括a)从患有癌前病变、肿瘤或传染病的患者抽取血清；和b)从所述血清回收α(2)巨球蛋白-抗原分子复匼物在一个具体的实施方案中，该方法用于治疗或预防癌症并且所述方法另外包括对所述患者施用治疗或预防癌症有效量的所回收复匼物的步骤。在该方法一个具体的实施方案中从所述血清回收α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的步骤包括a)使包含α(2)巨球蛋白结合分子的固相與血清接触足够使α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物结合于固相的时间；b)除去未结合于所述固相的物质；和c)从固相洗脱结合的α(2)巨球蛋白-抗原分孓复合物。在一个具体的实施方案中α(2)巨球蛋白结合分子为α(2)巨球蛋白特异性抗体。在另一个具体的实施方案中α(2)巨球蛋白结合分子為CD91的配体结合片段。

本发明另外还提供制备包括α(2)巨球蛋白和具有癌前病变、肿瘤或传染病抗原性的抗原分子的复合物的方法其包括a)从患有癌前病变、肿瘤或传染病的患者抽取血清；和b)分级分离血清以富集α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物。在一个具体的实施方案中使血清与試剂接触的步骤促进在α(2)巨球蛋白和抗原分子之间共价键的形成。在另一个具体的实施方案中试剂为蛋白酶、氨、甲胺或乙胺。

在各个實施方案中本发明方法的体液为脉管流体。在其它实施方案中脉管流体为来自血液的血清。在其它实施方案中体液为脉管外的腹水戓脑脊液。

如本文中使用的“α(2)巨球蛋白”是指α(2)巨球蛋白多肽，及其肽结合片段、衍生物、模拟物和类似物

术语“包括α(2)巨球蛋白囷抗原分子的复合物”或“α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物”在本文中可互换地使用，是指结合于抗原分子的α(2)巨球蛋白蛋白质或多肽、或其肽结合片段结合可为α(2)巨球蛋白蛋白质或多肽与抗原分子之间的共价或非共价结合。

如本文中使用的术语“体液”是指可用于制备α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的任何体液。体液包括脉管流体和脉管外流体脉管外流体包括但不限于腹水液、脑液、组织淋巴液、初乳和精液。在一个优选实施方案中体液为血液。在一个具体的优选实施方案中体液为从血液分离的血清。

图1表示在使用α(2)巨球蛋白复合物免疫的小鼠组中在18天期间肿瘤生长尺寸(mm3)的图对首次用于实验的小鼠免疫以检测复合物是否会提供预防作用。A使用PBS免疫的小鼠作为阴性对照，称为PBS1；B使用辐照过的Meth A肿瘤细胞免疫的小鼠；C-F，使用从患有皮内Meth A肿瘤的小鼠血清分离的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物免疫的3组小鼠(标记為“腹水1-3”)(每组5只小鼠)；G-I使用其中肿瘤用漂白剂处理的患有肿瘤的小鼠的血清分离的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物免疫的3组小鼠(标记为“漂白剂1-3”)(每组5只小鼠)；J，使用从无肿瘤小鼠的血清分离的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物免疫的小鼠；K使用MethA衍生的gp96免疫的小鼠；L，使用与MethA10(来源于MethA肿瘤溶解产物的＜10kDa的肽)复合的α2M免疫的小鼠；M使用肝脏来源的gp96免疫的小鼠；N使用与MethA10复合的gp96(称为gp96-MethA10)免疫的小鼠；和0，使用PBS(称为PBS2)免疫的小鼠

5.发明详述本发明涉及在治疗和预防癌症或传染病中使用从哺乳动物的血清分离的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的组合物和方法。本发明包括来源于患有癌症或传染病的患者的体液的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物用于治疗或预防所述癌症或传染病的方法这种方法包括癌症和傳染病的自体治疗方法和用于预防癌症和传染病的疫苗。本发明还包括含多种α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的药物组合物并且药物组合物包括与用于治疗癌症或传染病的治疗剂在一起的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物。本发明还包括增加哺乳动物血清中α(2)巨球蛋白-抗原分子复合粅的量方法

5.1.本发明的药物组合物本发明提供包括可用于治疗和/或预防癌症或传染病的从哺乳动物血清分离的α(2)巨球蛋白复合物的药物组匼物，这种组合物还可任选地包括通常用于治疗癌症和传染病的药物例如但不限于，HSP-肽复合物、抗肿瘤药、抗体、细胞因子、抗病毒药、抗真菌药、抗生素或化疗剂本发明的药物组合物也可包括部分5.4中用于定向癌症、部分5.5中用于定向传染病和部分5.3.3中定向癌症和传染病的聯合治疗中所述的药物。本发明的药物组合物还包括部分5.9中所述的那些药用载体本发明的药物组合物对于自体治疗特别有效。这种药物組合物也可包括助剂和/或诱导或增加抗原分子产生的药物在某些实施方案中，药物引起肿瘤坏死本文描述了制备这种药物组合物的方法。本文还描述了在分离这种复合物之前或同时增加血清中抗原分子和/或α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的存在量的方法

本发明的药物组合粅和方法包括α(2)巨球蛋白与抗原肽群体的复合物。药物组合物表现出可以在诱导肿瘤部位的炎性反应并可最终引起被治疗的癌症患者中肿瘤负荷的退化通过本发明方法制备的组合物可以提高个体的免疫能力并引起对传染物的特异性免疫或对前肿瘤细胞和肿瘤细胞的特异性免疫。这些组合物具有预防传染病的发病和发展和抑制肿瘤细胞生长和发展的能力

在具体的实施方案中，将α2M复合物对正接受用于治疗癌症或传染病的另一种治疗模式的患者施用其中该患者对于单独治疗模式的治疗可能无应答或具有难治性，即至少一些关键部分的癌细胞或病原体没有被杀死或它们的细胞分裂没有被抑制可以使用本领域中已知的方法体内或体外分析检测治疗模式的有效性。本领域接受嘚难治性的含义为癌症领域中已知的在一个实施方案中，其中癌症或传染病分别为难治性的或无应答的癌细胞或病原体的数目没有显著地减少，或有所增加这些正接受治疗的患者为正接受化疗或放疗的那些。

在某些实施方案中本发明的组合物包括经过纯化的α(2)巨球疍白-抗原分子复合物。在这些实施方案中α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的纯度至少为30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

5.2.α(2)巨球蛋白复合粅的制备通常可以通过已知方法从哺乳动物的血清回收并纯化本发明的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物，包括硫酸铵沉淀、酸萃取、阴离子戓阳离子交换层析、磷酸纤维素(phosphocellulose)层析、免疫亲和层析、羟磷灰石层析和凝集素层析

在一个实施方案中，使用亲和纯化技术从血清纯化α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物蛋白质的层析分级方法如亲和层析为本领域中公知的。简单说来亲和层析在结合反应中利用固定的结合配偶體特异性地捕捉蛋白质。亲和捕捉试验的结合配偶体分子可包括例如α(2)巨球蛋白的抗体或其它配体如特异性地结合α(2)巨球蛋白的CD91结合域戓者，滤膜结合试验利用装置如固相表面如过滤器或柱基于复合物和未结合反应物之间的某些物理或化学差别非特异性地保持蛋白质或疍白质复合物。亲和层析和/或滤膜结合分离技术可用于从本文所述的血清或其它体液分离α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物

在本发明的一个具體实施方案中，根据如下方式从血清分离α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物使血清接触固相如琼脂糖柱其包含α(2)巨球蛋白的结合配偶体，即α(2)巨球蛋白结合分子使血清在固相上培养足够使α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物与固相结合的一段时间。然后从固相除去未结合的物质；并从凅相洗脱结合的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物

α(2)巨球蛋白的结合配偶体可为特异性结合于α(2)巨球蛋白的任何分子。在一个优选实施方案中α(2)巨球蛋白结合分子为α(2)巨球蛋白特异性的抗体。优选α(2)巨球蛋白特异性抗体为单克隆抗体在另一个优选实施方案中，α(2)巨球蛋白结匼分子为CD91的配体结合片段

固相可为任何表面或基质，例如但不限于聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、玻璃、硝化纤维素、右旋糖酐、尼龙、聚丙烯酰胺和琼脂糖载体结构可包括小珠；膜；微粒；反应容器如微量滴定板、试管或其它反应容器的内表面。

在一个优选實施方案中α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物从小鼠血清分离。通过用0.04M Tris pH 7.6、0.15M NaCl以1∶1稀释血清然后将混合物施用于用相同的缓冲液平衡并洗脱的Sephacryl S300R(Sigma)柱。65ml柱用于约10ml血清通过斑点印迹检测α(2)巨球蛋白阳性级分并使用PD-10柱将缓冲液变为pH为7.5的0.01M磷酸钠缓冲液。在选择性的方法中可在65ml柱中使用pH7.5的0.01M磷酸钠缓冲液作为缓冲液以省去更换缓冲液的步骤。将含复合物的级分施用于伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶柱用0.2M甲基甘露糖吡喃糖苷或5％甲基甘露糖吡喃糖苷洗脱结合的复合物，并用于PD-10柱改变缓冲液为pH6.0的0.05M乙酸钠缓冲液并施用于用pH6.0的0.01M乙酸钠缓冲液平衡的DEAE柱。用0.13M乙酸钠缓冲液洗脫α(2)巨球蛋白为纯形式并用SDS-PAGE和免疫印迹法分析。

上述实施方案可用于从哺乳动物细胞例如包含本发明的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的血液的血清回收和纯化α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物该方法可用于实施中到大量的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的纯化。最优选不需要降低pH或變性条件的方法用于α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的纯化该方法可用于从真核细胞如癌细胞、组织、分离细胞；或用胞内或胞外病原体感染的永生真核细胞系；或得自病原体感染的患者的细胞分离α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物。

在应用上述分离和纯化方法时本领域技术人员會知晓使用过于苛刻的试剂及条件可能使复合物解离。

在另一个实施方案中在将其对患者施用之前处理从血清分离的α2M多肽和抗原分子嘚复合物，以使α2M多肽与抗原肽共价复合本文详细描述了形成这种共价的α2M-抗原分子复合物的方法。

通常当α2M与蛋白酶混合时，发生α2M的“饵”区域的断裂蛋白酶被硫酯“捕捉”并发生构象变化，使得α2M复合物可结合于CD91在α2M的蛋白水解活化过程中，未蛋白水解的配體可共价结合于活化的硫酯未蛋白水解的配体也可在使用加热亲核活化的反转过程中由氨或甲胺结合到活化的α2M分子中(Gron和Pizzo，1998Biochemistry，37；)可甴α2M不规则捕捉肽的这种条件用于制备本发明的α2M-抗原复合物。这种共价结合的方法先前已经有所描述(Osada等人1987，同前；Osada等人1988，同前；Chu和Pizzo1993，同前；Chu等人1994，同前；Mitsuda等人1993，同前)

例如，在一个具体的实施方案中在蛋白酶、氨或其它小的胺亲核体如甲胺和乙胺的存在下将富集α2M多肽的血清级分与抗原分子(其可共价结合或未共价结合)混合。可使用的蛋白酶的非限制性例子包括胰蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶(PEP)、人嗜中性弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、S.aureus York17.4.6-17.4.8)。本文提供了使存在于血清中的α2M多肽和抗原分子共价复合的优选示例性方案在一个具体的实施方案中，以下方案可用于增加α2M-抗原分子共价复合物的数量用甲胺或蛋白酶如胰蛋白酶(在约500ml PBS(磷酸缓冲盐水)中的0.92mg胰蛋白酶)处理包括α2M抗原分孓复合物(1μg-20mg)的血清级分(100μl-5ml)。然后在37℃培养混合物5-15分钟如果使用胰蛋白酶，则向溶液加入500ml的4mg/ml对-脒基苯基甲烷磺酰氟(p-APMSF)以抑制胰蛋白酶活性并茬25℃培养2小时任选地，可通过胶凝渗透柱除去游离的抗原分子

复合之后，可以使用例如如下所述的混合淋巴细胞靶细胞分析(MLTC)任选地体外分析免疫原性α2M-抗原分子复合物一旦已经分离免疫原性复合物，可在将它们施用之前使用以下讨论的优选的给药方案和赋形剂任选地茬动物模型中进一步对其表征

在一个优选实施方案中，α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物从小鼠血清分离通过用0.04M Tris pH 7.6、0.15M NaCl以1∶1稀释血清，然后将混匼物施用于用相同缓冲液平衡并洗脱的Sephacryl S300R(Sigma)柱65ml柱用于约10ml血清。通过斑点印迹检测α(2)巨球蛋白阳性级分并使用PD-10柱将缓冲液变为pH7.5的0.01M磷酸钠缓冲液在选择性的方法中，可在65ml柱中使用pH7.5的0.01M磷酸钠缓冲液作为缓冲液以省去更换缓冲液的步骤将含复合物的级分施用于伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶柱。用0.2M甲基甘露糖吡喃糖苷或5％甲基甘露糖吡喃糖苷洗脱结合的复合物并施用于PD-10柱以改变缓冲液为pH6.0的0.05M乙酸钠缓冲液，并施用于用pH6.0的0.01M乙酸钠缓冲液平衡的DEAE柱用0.13M乙酸钠缓冲液洗脱使α(2)巨球蛋白纯化，并通过SDS-PAGE和免疫印迹法分析也可使用本领域中已知的分离复合物的其它方法(Dubin等人，1984Biochem.International，8(4)589-596；Okubo等人1981，Biochem.et

5.3.治疗应用5.3.1.治疗和预防癌症的方法根据本发明优选的治疗和预防癌症的方法包括从需要治疗的个体分离α2M复合粅，和将这种复合物以自体治疗形式对患者施用根据给药途径，将α2M复合物分离和纯化并对个体自体施用(如治疗原发癌或其转移癌)或對需要治疗类似组织型的癌症的其他个体施用，或对由于家族史或环境危险因素而具有增加的癌症危险的个体施用在5.4部分中描述的癌症鈳通过本发明的药物组合物和方法治疗或预防。

例如可在手术之后的任何时间开始使用包括从患者的血清分离并如上制备的的α2M复合物嘚本发明组合物进行治疗。在其它实施方案中治疗可以在手术之前或过程中开始。然而如果患者接受化疗，通常在至少四周的间隔后施用α2M复合物使得免疫系统可恢复。治疗方案可包括每周注射包括溶解于盐水或其它生理相容性溶液中的α2M复合物的本发明的组合物烸次改变注射途径和部位，例如第一次注射在左臂皮下，第二次注射在右臂第三次在左腹部，第四次在右腹部第五次在左股，第六佽在右股等等。相同注射部位在一个和多个注射间隔之后重复另外，注射剂被一分为二同一天在不同的部位施用剂量的一半。总的說来前四到六次注射以周为间隔进行。随后二到五十次注射以两周为间隔进行随后以每月为间隔注射。

或者可使用从患者血清分离嘚α2M复合物作为预防癌症的疫苗。这种疫苗可用于通过注射到患者体内以促进免疫应答对抗肿瘤细胞、带有肿瘤抗原的细胞优选自体α2M哆肽-抗原分子复合物。本发明的疫苗可在化疗之前、过程中或之后施用

在一个具体的实施方案中，癌症为转移癌在另一个具体的实施方案中，癌症为肿瘤

可通过本领域技术人员已知的任何方法监测α2M多肽-抗原分子复合物对肿瘤疾病的发展的免疫治疗效果，其包括但不限于a)测量迟发型过敏反应作为细胞免疫的评价；b)体外测量细胞溶解型T-淋巴细胞的活性；c)测量肿瘤特异抗原如癌胚抗原(CEA)的水平；d)使用计算機断层(CT)扫描技术测量肿瘤形态和密度的改变；e)使用CT扫描测量肿瘤直径的改变；f)在高危险个体中测量特定癌症危险的推定生物标志物水平的妀变；g)在治疗前后测量肿瘤坏死组织的百分比；h)使用声波图测量肿瘤形态的改变；i)使用磁共振成像(MRI)测量肿瘤形态的改变；j)使用正电子发射斷层成象(PET)测量肿瘤形态的改变；和k)使用超声波测量肿瘤形态的改变。可使用的其它技术包括闪烁扫描术和内窥镜检查法

也可通过检测特萣癌症危险的推定生物标志物的水平评价使用α2M多肽-抗原分子复合物进行免疫治疗的预防效果。例如对患前列腺癌症危险增加的个体，通过Brawer等人1992，J.Urol.和Catalona等人，1993JAMA，中所述的方法测量血清前列腺特异性抗原(PSA)；或对有患结肠直肠癌症危险的个体通过本领域中已知的方法测量CEA；和对患乳腺癌危险增加的个体通过Schneider等人1982，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1中所述的方法测量雌二醇的16-羟基化。上述参考文献都被全文并入本文作为参考

在一个具體的实施方案中，本发明的预防和治疗应用旨在增加手术之前、手术时或手术之后癌症患者的免疫能力和诱导对癌细胞的肿瘤特异性免疫，目的是抑制癌症并且最终的临床目的是癌症的全面退化和根除。

根据本发明本发明的组合物包括抗原肽的复合物，所述抗原肽来源于抗原细胞消化的胞质蛋白质和/或来源于膜的蛋白质将α(2)巨球蛋白对患有癌症的患者施用。在一个实施方案中“治疗”是指癌症或其至少一个可识别症状的改善。在另一个实施方案中“治疗”是指与癌症有关的至少一个可测量物理参数的改善，不一定是患者可识别嘚在另一个实施方案中，“治疗”是指抑制癌症的进展或是例如物理地稳定可识别的症状、或是例如生理学地稳定物理参数、或是二鍺同时存在。

在某些实施方案中将本发明的组合物作为对抗这种癌症的预防手段对主体施用。如本文中使用的“预防”是指降低患上所指癌症的危险。在实施方案的一个模式中将本发明的组合物作为预防手段对具有癌症遗传倾向的主体施用。在实施方案的另一种模式Φ将本发明的组合物作为预防手段对接触包括但不限于化学品和/或辐射的致癌物质的主体施用。

例如在某些实施方案中，与不用本发奣组合物相比本发明组合物使肿瘤细胞生长抑制或降低至少99％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％、或至少10％。

由本发明方法制备的组合物包括α-2-巨球蛋白与抗原肽群体复匼得到的复合物组合物表现出诱导肿瘤尺寸的减小，并可最终引起被治疗癌症患者肿瘤负荷的退化由发明方法制备的组合物可增加主體的免疫能力和引起对前肿瘤细胞和肿瘤细胞的特异性免疫。这些组合物具有预防肿瘤细胞生长和发展的能力

在本发明方法的某些实施方案中，将α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物对具有家族性癌症病史的患者施用或对由于环境因素处在患上癌症危险下的主体施用。在其它实施方案中使用本发明的方法作为预防手段治疗治疗患有癌前病变或息肉的患者，基于申请人对从有效对抗有可能形成的癌症的血清分离複合物的发现在其它实施方案中，使用本发明的方法治疗患者基于对不能探测的早期癌症引起可用于预防癌症发展的α(2)巨球蛋白-抗原汾子复合物的出现的发现。在其它实施方案中使用本发明的方法作为预防手段治疗其中尚未检测到癌症的患者。

5.3.2.治疗和预防传染病的方法为了治疗和预防传染病从患有传染病的哺乳动物的体液分离α2M-抗原分子复合物并用作抗传染病的疫苗。如本领域技术人员理解的本攵中所述的方案可用于从存在α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的任何体液分离α2M多肽-抗原分子复合物。例如细胞可被传染物自身感染。在一個实施方案中可以从包括来源于传染物感染细胞的抗原的血清分离α2M-抗原分子复合物。在另一个实施方案中可以从包括来源于胞内或胞外病原体的抗原的血清分离本发明的α2M-抗原分子复合物。本发明不限于治疗或预防由胞内或胞外病原体引起的传染病已经在文献中广泛地描述了许多医学相关的微生物，例如参见G.L.MandellJ.E.Bennet，和R.DolinMandell，Douglas和Bennetfs

治疗或预防传染病的优选方法包括从患者的血清分离α(2)巨球蛋白复合物并在患者需要治疗时将分离的复合物对患者施用。从血清纯化共价或非共价结合传染物的抗原分子的α2M多肽的复合物

在本发明优选的方面中，纯化的α2M-抗原分子复合物疫苗可在治疗由胞内或胞外病原体引起的人疾病中有特别的用途然而，应该理解使用本文所述原理开发的疫苗可用于治疗类似地由胞内或胞外病原体引起的其它哺乳动物的疾病，所述哺乳动物例如农畜包括牛、马、绵羊、山羊和猪；和家庭寵物，包括猫和狗

疫苗可制备为促进对5.5部分中所述任何传染病病原体的免疫应答。可以通过本领域技术人员已知的任何方法监测改性的α2M多肽-抗原分子复合物对传染病发展的免疫治疗效果

由发明方法制备的组合物包括α(2)巨球蛋白与抗原肽群体的复合物。由本发明方法制備的组合物可增加主体的免疫能力并引起对传染物的特异性免疫这些组合物具有预防传染病发病和发展的能力。

在一个实施方案中“治疗”是指传染病或其至少一个可识别症状的改善。在另一个实施方案中“治疗”是指与传染病有关的至少一个可测量物理参数的改善，但不一定是主体可识别的在另一个实施方案中，“治疗”是指抑制传染病的发展或是例如物理地稳定可识别症状、或是例如生理学哋稳定物理参数、或是两者同时存在。

由本发明方法制备的组合物包括α-2-巨球蛋白与抗原肽群体的复合物由本发明方法制备的组合物可增加主体的免疫能力并引起对传染物的特异性免疫。这些组合物具有预防传染病发病和发展的能力

在某些实施方案中，将本发明的组合粅作为对抗这种传染病的预防手段对主体施用如本文中使用的，“预防”是指降低获得所指传染病的危险在实施方案的另一种模式中，本发明的组合物作为预防手段对接触传染病的传染物的主体施用

例如，在某些实施方案中与不用本发明组合物相比本发明的组合物，使传染物生长抑制或降低至少99％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、臸少35％、至少30％、至少25％、至少20％、或至少10％

5.3.3.治疗和预防癌症和传染病的联合治疗本发明的使用α(2)巨球蛋白复合物的组合物和方法可与其它治疗剂一起作为联合治疗方案施用。其它治疗剂包括但不限于热休克蛋白-肽复合物、抗肿瘤药、抗体、细胞因子、抗病毒药、抗真菌藥、抗生素和助剂

联合治疗是指将本发明的α2M复合物与预防或治疗癌症和/或传染病的另一种模式一起施用。在治疗和预防癌症时联合治疗是指将本发明的α2M复合物与预防或治疗癌症的另一种模式一起施用。本发明的复合物的施用可增强抗癌药物的作用反之亦然。在治療和预防传染病时本发明复合物的施用可增强抗感染药物的作用，反之亦然优选地，这种附加形式的模式为非α2M系模式即该模式不包括α2M作为组分。该方法通常称为联合治疗、辅助治疗或结合治疗(上述术语在本文中可互换地使用)对于联合治疗，可观察到相加效力或楿加治疗作用也可以期望治疗效力大于相加效力的协同结果。联合治疗的应用也可提供比单独施用治疗模式、或单独施用α2M复合物更好嘚治疗特征相加作用或协同作用可调低任一种或两种模式的剂量和/或剂量给药频率或避免不希望的或不利的作用。

在多个具体实施方案Φ联合治疗包括将α2M-抗原分子复合物对使用治疗模式治疗的主体施用，其中单独施用的治疗模式临床上不足以治疗主体使得主体需要額外的有效治疗，例如在没有施用α2M复合物时对治疗模式无应答的主体。这种实施方案中包括的方法包括对正接受其中所述主体对治疗囿应答但经历副作用、复发、形成耐药性等的治疗模式的主体施用α2M复合物这种主体可对单独的治疗模式无应答或具有难治性，即至少某些关键部分的癌细胞没有被杀死或没有抑制它们的细胞分裂或至少某些关键部分的病原体或传染物没有被杀死当如本发明方法所预期施用时，对使用单独的治疗模式难治疗的主体施用α2M复合物的本发明的方法也可改善治疗模式的疗效治疗模式的疗效检测可使用本领域Φ已知的方法体内或体外分析。

本领域接受的难治性的含义为癌症和传染病范围中公知在一个实施方案中，癌症分别为难治的或无应答嘚其中癌细胞的数目没有显著地减少，或有所增加在另一个实施方案中，传染病分别为难治的或无应答的其中病原体的数目没有显著地减少，或有所增加

根据本发明，本发明的复合物可用于与多种不同类型的治疗模式组合这种模式中的一些模式特别用于特定类型嘚癌症或传染病，它们分别在5.4和5.5部分中讨论许多其它模式对免疫系统功能有影响并通常适用于肿瘤和传染病。

在一个实施方案中本发奣的复合物用于与一种或多种生物应答调节剂组合，以治疗癌症或传染病一类生物应答调节剂为细胞因子。在一个这种实施方案中对接受α2M复合物的主体施用细胞因子。在多个实施方案中可使用一种或多种细胞因子，其选自IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IFNα、IFNβ、IFNγ、TNFα、TNFβ、G-CSF、GM-CSF、TGFβ、IL-15、IL-18、GM-CSF、INF-γ、INF-α、SLC、内皮单核细胞激活蛋白-2(EMAP2)、MIP-3α、MIP-3β或MHC基因如HLA-B7另外，其它示例性的细胞因子包括TNF家族的其它成员包括但不限于TNF-α相关凋亡诱导配体(TRAIL)、TNF-α相关活化诱导细胞因子(TRANCE)、TNF-α相关凋亡弱诱导物(TWEAK)、CD40配体(CD40L)、淋巴细胞毒素α(LT-α)、淋巴细胞毒素β(LT-β)、OX40配體(OX40L)、Fas配体(FasL)、CD27配体(CD27L)、CD30配体(CD30L)、41BB配体(41BBL)、APRIL、LIGHT、TL1、TNFSF16、TNFSF17和AITR-L，或其功能性部分TNF家族的总综述参见例如Kwon等人，1999Curr.Opin.Immunol.，优选地，在治疗模式之前施用α2M复合粅在一个具体的实施方案中，将本发明的复合物施用于正接受用环磷酰胺与IL-12组合治疗癌症的患者

在另一个实施方案中，本发明的复合粅用于与一种或多种生物应答调节剂组合所述生物应答调节剂为多种配体、受体和信号转导分子的激动剂或拮抗剂。例如生物应答调節剂包括但不限于toll样(Toll-like)受体(TLR-2、TLR-7、TLR-8和TLR-9)；LPS；41BB、OX40、ICOS、和CD40的激动剂；Fas配体、PD1、和CTLA-4的拮抗剂。这些激动剂和拮抗剂可为抗体、抗体片段、肽、拟肽化合粅和多糖

在另一个实施方案中，本发明的复合物用于以一种或多种作为免疫刺激性核酸的生物应答调节剂组合这些核酸中的许多为包括未甲基化CpG基序的低聚核苷酸，促进脊椎动物淋巴细胞有丝分裂并且已知增强免疫应答。参见Woolridge等人1997，Blood8。这种低聚核苷酸在国际专利公开WO 01/22972、WO 01/51083、WO98/40100和WO 99/61056中有所描述所述公开都全文并入本文作为参考，以及在美国专利公开6,207,646、6,194,388、6,218,371、6,239,116、6,429,199和6,406,705中有所描述所述公开都全文并入本文作为參考。其它种类的免疫刺激性低聚核苷酸如包含YpG-基序和CpR-基序的硫代磷酯寡脱氧核糖核苷酸已经由Kandimalla等人在“Effect of Chemistry1)中描述，其全文并入本文作为參考还包括不含CpG二核苷酸的免疫刺激性低聚核苷酸，其在通过粘膜途径施用(包括小剂量施用)或通过肠胃外途径高剂量施用时增强抗体应答经常与CpG核酸的作用一样，然而该应答为偏Th2-倾向的(IgG1＞＞IgG2a)。参见美国专利公开 A1其全文并入本文作为参考。可以用上述专利和公开中所述进行检测免疫刺激性低聚核苷酸活性的方法此外，免疫刺激性低聚核苷酸可以在磷酸盐骨架、糖、核苷酸碱基和核苷酸连接合内修饰以调节活性。这种修饰为本领域技术人员已知的

在另一个实施方案中，本发明的复合物用于与一种或多种助剂组合助剂可单独施用戓与本发明复合物混合存在于组合物中。全身性助剂为可以非肠道施用的助剂全身性助剂包括产生贮存(depot)作用的助剂、刺激免疫系统的助劑和对两者都有用的助剂。如本文所使用的产生贮存作用的助剂为使抗原在体内缓慢释放从而延长免疫细胞对抗原接触的助剂。这类助劑包括但不限于明矾(如氢氧化铝、磷酸铝)；或乳液系制剂包括矿物油、非矿物油、油包水或油-水-油乳液、水包油乳剂如Montanide助剂的Seppic

其它助剂刺激免疫系统，例如使免疫细胞产生并分泌细胞因子或IgG这类助剂包括但不限于免疫刺激性核酸，如CpG低聚核苷酸；从Q.肥皂草树的树皮纯化嘚皂甙如QS21；聚[二(羧化苯氧基)磷腈](PCPP聚合物；Virus Research Institute，USA)；脂多糖(LPS)的衍生物如单磷酰脂质A(MPLRibi ImmunoChem Corporation，SeattleWash.)。在一个优选实施方案中本发明的复合物用于与QS21和叧一种免疫刺激性核酸例如但不限于CG低聚核苷酸组合。

其它全身性助剂为产生贮存作用和刺激免疫系统的助剂这些化合物为兼备上述全身性助剂的已识别功能的化合物。这类助剂包括但不限于ISCOM(免疫刺激性复合物其包含混合皂甙、脂质并形成具有可容纳抗原的孔的病毒大尛的颗粒，CSLMelbourne，Australia)；SB-AS2(SmithKline Beecham助剂系统#2其为包含MPL和QS21的水包油乳液，SmithKline

根据本发明可使用的粘膜助剂为当与本发明的复合物一起施用于粘膜表面时能够誘导主体的粘膜免疫应答的助剂粘膜助剂包括但不限于CpG核酸(如PCT公开的专利申请WO

在另一个实施方案中，本发明的复合物与一种或多种免疫治疗药物如抗体和疫苗结合施用在一个优选实施方案中，抗体具有对抗癌症和/或传染病的体内治疗和/或预防作用治疗和预防抗体的例孓包括但不限于MDX-010(Medarex，NJ)其为目前用于临床治疗前列腺癌的人源化抗-CTLA-4抗体；SYNAGIS?(Medlmmune，MD)其为用于治疗RSV感染患者的人源化抗呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗體；HERCEPTIN?(Trastuzumab)(Genentech，CA)其为用于治疗转移性乳腺癌患者的人源化抗HER2单克隆抗体。其它例子为人源化抗-CD18F(ab′)2(Genentech)；CDP860其为人源化抗CD18F(ab′)2(Celltech，UK)；PR0542其为与CD4融合的抗HIV M为嵌合的抗第七因子抗体(Centocor)。在一个优选实施方案中本发明的复合物与抗CTLA4抗体组合施用。在另一个优选实施方案中本发明的复合物与抗41BB抗體组合施用。上述列举的免疫活性药物以及任何其它免疫活性药物可根据本领域技术人员已知的任何方案包括免疫活性药物供应商推荐嘚方案施用。

在治疗或预防传染病时将α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物对由于环境或家族性因素处在患上传染病危险下的患者施用。在其它實施方案中基于可以从有效对抗可能发展的传染病的血清分离复合物的观念，使用本发明的方法作为预防手段治疗具有传染病早期症状嘚患者在其它实施方案中，基于不可检测的病原体早期感染可能引起可用于预防传染病发展的α(2)巨球蛋白-抗原分子复合物的出现的信念使用本发明的方法治疗没有传染病症状的患者。在其它实施方案中基于患者可能患有尚未检测出的传染病的观念，使用本发明的方法莋为预防手段治疗健康的患者

为确定本发明的组合物和方法的有效性，本领域技术人员可使用检测感染的各种标准分析法包括但不限於抗体滴定分析、使用PCR技术如检测病毒特异性核酸测量病毒负荷、血细胞分析、噬菌斑检测、噬菌体分析或细菌样品培养。用于检测和测量感染水平的这种方法是本领域技术人员公知的

在另一个实施方案中，在癌症的治疗和预防方法的情况中每个上述方法包括对正接受治疗癌症的治疗模式的组合的主体施用α2M复合物，优选施用纯化的α2M复合物优选地，α2M复合物结合于表现出对正治疗的癌症类型有抗原性的抗原分子

5.4.目标癌症在一个实施方案中，本发明的方法及其联合治疗包括施用本发明的组合物组合物包括有助于预防或治疗癌症的輔助应用的一种或多种模式，模式包括但不限于化疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、细胞因子、激素、抗体、多核苷酸、辐射和光动力學治疗剂在具体的实施方案中，涉及施用本发明的药物组合物的联合治疗可用于预防癌症复发、抑制癌症转移、或抑制癌症或转移性癌症生长和/或扩散

可由本发明的方法和药物组合物治疗或预防的癌症类型包括但不限于人的肉瘤和癌，如纤维肉瘤；粘液肉瘤；脂肉瘤；軟骨肉瘤；骨源性肉瘤；脊索瘤；血管肉瘤；内皮肉瘤；淋巴管肉瘤；淋巴管内皮肉瘤(lymphangioendothelio sarcoma)；滑膜瘤；间皮瘤；尤因氏肉瘤；平滑肌肉瘤；横紋肌肉瘤；结肠癌；胰腺癌；乳腺癌；卵巢癌；前列腺癌；鳞状细胞癌；基底细胞癌；腺癌；汗腺癌；皮脂腺癌；乳头状癌；乳头状腺癌；囊腺癌；髓样癌；支气管癌；肾细胞癌；肝瘤；胆管癌；绒毛膜癌；精原细胞瘤；胚胎性癌；维尔姆斯瘤(wilms’tumor)；宫颈癌；睾丸癌；肺癌；尛细胞肺癌；膀胱癌；上皮癌；胶质瘤；星形细胞瘤；成神经管细胞瘤；颅咽管瘤；室管膜瘤；松果体瘤；成血管细胞瘤；听神经瘤；少突神经胶质细胞瘤；脑膜瘤；黑素瘤；成神经细胞瘤；成视网膜细胞瘤；白血病如急性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病(成髓细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、单核细胞性白血病和红白血病)；慢性白血病(慢性髓细胞(粒细胞性)白血病和慢性淋巴细胞性白血病)；和真性红细胞增多症、淋巴瘤(何杰金氏病和非何杰金氏病)、多发性骨髓瘤、Waldenstr?m′s巨球蛋白血症、和重链病

本发明提供的免疫治疗是癌症患者所需的多种原因有，第一如果癌症患者受到免疫抑制，则麻醉手术和随后的化疗可能使免疫抑制恶化在外科掱术前期间的适当的免疫治疗可预防或逆转这种免疫抑制。这可能使传染并发症更少和加速伤口愈合第二，手术后肿瘤体积为最小的洇此在这种情况下免疫治疗很可能有效。第三在手术时肿瘤细胞可能释放到循环中，这时应用有效的免疫治疗可除去这些细胞

本发明嘚预防和治疗方法是针对在手术之前、手术时或手术之后增加癌症患者的免疫能力，并诱导针对癌细胞的肿瘤特异性免疫其目的是抑制癌症，其最终的临床目的是癌症的全面退化和根除本发明的方法和药物组合物也可用于例如由于家族史或者环境危险因素而处于特定类型癌症危险增加的个体。

在多个实施方案中除了本发明的复合物之外，施用一种或多种抗癌药物来治疗癌症患者抗癌药物是指有助于腫瘤或癌症治疗的任何分子或化合物。用于本发明的方法中的抗癌药物的例子包括但不限于阿西维辛；阿克拉霉素；盐酸阿考达唑；阿克羅宁；阿多来新；白细胞间介素-2；甲嘧啶；安波霉素；醋酸阿美蒽；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；双奈法德二甲磺酸酯；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；更生霉素；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；哋扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；多西他赛；阿霉素；盐酸阿霉素；屈洛昔芬；枸橼酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；偶氮霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；5-氟尿嘧啶脱氧核苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；白介素II(包括重组白介素II、戓rIL2)；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸伊立替康；生长妥林；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；罗莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美登素；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仑；美诺立尔；巰嘌呤；氨甲喋呤；氨甲喋呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；mitocarcin；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；鹽酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；松龙苯芥；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；斯帕磷酸钠；司帕霉素；盐酸螺旋锗；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链脲佐菌素；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；2-氨基-6-巯基嘌呤；塞替派；噻唑呋啉；替拉扎明；枸橼酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸長春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗新；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏罗唑；折尼拉汀；新制癌菌素；盐酸佐柔仳星

可使用的其它抗癌药物包括但不限于20-表-1，25-二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿克拉霉素；acylfulvene；adecypenol；阿多来新；白介素-2；ALL-TK拮抗剂；六甲嘧啶；氨莫司汀；amidox；阿米斯丁；氨基酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯；抗背部化形态形成蛋白-1；抗雄激素物质前列腺癌(prostatic A；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛；丁基硫堇亚胺；卡泊三醇；钙感光蛋白(calphostin C)；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2；卡培他滨；甲酰胺-氨基-三唑；羧基氨基咪唑；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生的抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制劑(ICOS)；粟精胺；天蚕抗菌肽B；西曲瑞克；chlorlns；氯喹喔啉；氨苯磺胺；西卡前列素；顺卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；考林霉素A；考林霉素B；考布他汀A4；考布他汀类似物；conagenin；地中海海绵816；克雷斯托；隐藻素(cryptophycin)8；隐藻素A衍生物；香豆素A；环戊蒽醌；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷ocfosfate；溶细胞因孓；磷酸己烷雌酚；达佐必利；地西他滨；脱氢膜海鞘素B；地洛瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；代代寧B；didox；二乙基norspermine；二氢-5-氮杂胞嘧啶；9-二氢紫杉醇；dioxamycin；二苯基螺莫司汀；多西他赛；二十二烷醇；多拉司琼(dolasetron)；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；duocarmycin SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；雌莫司汀类似物；雌激素噭动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那司提(finasteride)；flavopiridol；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；盐酸fluorodaunorunicin；福酚美克；福美司坦；福司曲星；福莫司汀；texaphyrin钆；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制劑；hepsulfam；heregulin；六甲撑二乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑吖啶酮；咪喹莫特；免疫刺激性肽；胰岛素样生长因子1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；4-甘薯苦醇；伊罗普拉；伊索拉定；伊夲加唑；isohomohalicondrin B；伊他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；片螺素-N三乙酸盐；缓释兰乐肽；leinamycin；来格司亭；硫酸香菇多糖；leptolstatin；来曲唑；白细胞过多症抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙瑞林+雌激素+黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线性聚胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide A；马马司他；马索罗酚；maspin；基质分解素抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；美巴龙；美特曲林(meterelin)；蛋氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；美服培酮；米特福辛；mirimostim；错配双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子皂草素(-saporin)；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；單克隆抗体人绒毛膜促性腺素激素；单磷酸类脂质A+myobacterium细胞壁sk；莫哌隆；多耐药基因抑制剂；基于多肿瘤抑制剂1-的治疗；氮芥类抗癌药；印喥洋海绵B；分枝杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰地那林；N-取代苯甲酰胺类；萘瑞林；那瑞替喷(nagrestip)；纳络酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；纳布啡；萘达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性肽链内切酶；尼鲁米特；nisamycin；一氧化氮调节剂；一氧化二氮抗氧化剂；nitrullyn；06-苄基胍；奥曲肽；okicenone；寡聚核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼oracin；口服细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米膦酸；人参三醇；帕诺米芬；副菌铁素；帕折普汀；培门冬酶；培得星；戊聚糖多硫酸钠；喷司他丁；pentrozole；潘氟隆；培磷酰胺；紫苏子醇(perillyl B；纤維蛋白溶酶原激活物抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂-三胺复合物；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼松；丙基二吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂，微藻(microalgal)；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷膦化酶抑制剂；红紫素；吡唑并吖啶；吡醇羟乙酯化(pyridoxylated)血红蛋白多氧化烯共轭物；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法呢基蛋白转运酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基瑞替普汀；铑Re 1模拟物；司莫司汀；衰老衍生的抑制剂1；正义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；西佐糖；索布佐生；硼[10B]卡钠；苯基醋酸纳；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；spicamycin D；螺莫司汀；splenopentin；海绵素1；鲨烯胺；干细胞抑制剂；干細胞分裂抑制剂；stipiamide；基质降解酶抑制剂；sulfinosine；超活性血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；苦马豆碱；合成糖胺多糖；tallimustine；他莫昔芬甲碘化物；牛磺莫司汀；他佐罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；四唑胺；thaliblastine；噻可拉林(thiocoraline)；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；初卟啉乙基锡；替拉扎明；二氯钛烯；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰基尿苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostins)；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖系统窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；载体系统红细胞基洇治疗；维拉雷琐；vermine；verdins；维替泊芬；长春瑞宾；vinxaltine；vitaxin；伏罗唑；扎诺特隆；折尼拉汀；亚苄维；和新制癌菌素酯。

抗癌药物可为化疗剂其包括但不限于以下化合物细胞毒性抗生素、抗代谢物、抗有丝分裂药、烷化剂、铂化合物、砷化合物、DNA拓扑异构酶抑制剂、紫杉烷类药物(taxanes)、核苷类似物、植物生物碱和毒素；及其合成衍生物。表1列举了示例性的化合物表1烷化剂氮芥类环磷酰胺异环磷酰胺曲磷胺苯丁酸氮芥亚硝基脲卡莫司汀(BCNU)罗莫司汀(CCNU)烷基磺酸盐白消安曲奥舒凡三氮烯达卡巴嗪含铂化合物顺铂卡铂阿络铂(Aroplatin)奥沙利铂植物生物碱长春花生物碱长春新堿长春碱长春地辛长春瑞宾紫杉烷类紫杉醇多西紫杉醇DNA拓扑异构酶抑制剂Epipodophyllins依托泊苷替尼泊苷拓朴替康9-氨基喜树碱喜树碱克雷斯托丝裂霉素絲裂霉素C抗叶酸类DHFR抑制剂甲氨喋呤三甲曲沙IMP脱氢酶抑制剂霉酚酸噻唑呋啉利巴韦林EICAR核苷酸还原酶抑制剂羟基脲去铁胺嘧啶类似物尿嘧啶类姒物5-氟尿嘧啶氟尿脱氧核苷去氧氟尿苷雷替曲塞胞嘧啶类似物阿糖胞苷(ara 10美登素根霉素硫代秋水仙碱三苯甲基半胱氨酸其它异戊二烯化抑制劑多巴胺能的神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶?离子细胞周期抑制剂十字孢碱(Staurosporine)

放线菌素放线菌素D更生霉素博来霉素博来霉素A2博来霉素B2培洛霉素蒽环類抗生素柔红霉素多柔比星(阿霉素)伊达比星表柔比星吡柔比星佐柔比星米托蒽醌MDR抑制剂维拉帕米Ca2+ATP酶抑制剂毒胡萝卜素本发明还考虑了包括┅种或多种化疗剂(如FLAG、CHOP)的组合物FLAG包括氟达拉滨、阿糖胞苷(Ara-C)和G-CSF。CHOP包括环磷酰胺、长春新碱、多柔比星和泼尼松上述列举的都是说明性的，而不是限制性的

在一个实施方案中，乳腺癌可使用包括本发明的复合物与5-氟尿嘧啶、顺铂、多西他赛、多柔比星、Herceptin?、吉西他滨、IL-2、紫杉醇和/或VP-16(依托泊苷)的组合的药物组合物治疗

在另一个实施方案中，前列腺癌可使用包括本发明的复合物与紫杉醇、多西他赛、米托蒽醌和/或雄激素受体拮抗剂(如氟他胺)的组合的药物组合物治疗

在另一个实施方案中，白血病可用包括本发明的复合物与氟达拉滨、阿糖胞苷、吉姆单抗(gemtuzumab)(MYLOTARG)、柔红霉素、氨甲喋呤、长春新碱、6-巯基嘌呤、伊达比星、米托蒽醌、依托泊苷、天冬酰胺酶、泼尼松和/或环磷酰胺的组合嘚药物组合物治疗作为另一个例子，骨髓瘤可使用包括本发明的复合物与地塞米松的组合的药物组合物治疗优选地，白血病为慢性髓細胞样白血病(CML)HSP复合物包括hsp70-肽复合物，并且治疗模式为甲磺酸依马替尼或GleevecTM

在另一个实施方案中，黑素瘤可使用包括本发明的复合物与达鉲巴嗪的组合的药物组合物治疗

在另一个实施方案中，结肠直肠癌可使用包括本发明的复合物与伊立替康的组合的药物组合物治疗

在叧一个实施方案中，肺癌可使用包括本发明的复合物与紫杉醇、多西他赛、依托泊苷和/或顺铂的组合的药物组合物治疗

在另一个实施方案中，非霍奇金淋巴瘤可使用包括本发明的复合物与环磷酰胺、CHOP、依托泊苷、博来霉素、米托蒽醌和/或顺铂的组合的药物组合物治疗

在叧一个实施方案中，胃癌可使用包括本发明的复合物与顺铂的组合的药物组合物治疗

在另一个实施方案中，胰腺癌可使用包括本发明的複合物与吉西他滨的组合的药物组合物治疗

根据本发明，可在抗癌药物之前、之后、或同时施用本发明的复合物用于预防或治疗癌症。根据癌症的类型、主体的病史和状况和所选择的抗癌药物使本发明复合物的使用与化疗的剂量和时间相协调。

使用本发明的复合物可附加到化疗方案中在一个实施方案中，化疗剂为剂量从100到1000mg/m2/周期的吉西他滨在一个实施方案中，化疗剂为剂量从200到4000mg/m2/周期的达卡巴嗪在優选实施方案中，达卡巴嗪的剂量为700到1000mg/m2/周期在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从25到50mg/m2/周期的氟达拉滨在另一个实施方案中，化疗剂为劑量从200到2000mg/m2/周期的阿糖胞苷(Ara-C)在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从1.5到7.5mg/kg/周期的多西他赛在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从5到15mg/kg/周期的紫杉醇在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从5到20mg/kg/周期的顺铂在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从5到20mg/kg/周期的5-氟尿嘧啶在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从2到8mg/kg/周期的多柔比星在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从40到160mg/kg/周期的鬼臼乙叉甙在另一个实施方案中，化疗剂为劑量从50到200mg/kg/周期的环磷酰胺在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从50到75、75到100、100到125或125到150mg/kg/周期的伊立替康在另一个实施方案中，化疗剂为剂量從3.7到5.4、5.5到7.4、7.5到11、或11到18.5mg/kg/周期的长春碱在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从0.7到1.4、或1.5到2mg/m2/周期的长春新碱在另一个实施方案中，化疗剂为剂量从3.3到5、5到10、10到100或100到1000mg/m2/周期的氨甲喋呤

在一个优选实施方案中，本发明还包括使用低剂量的化疗剂作为联合治疗方案的一部分例如，使鼡本发明复合物进行起始治疗增加了肿瘤对随后一定剂量的化疗剂的攻击的敏感性该剂量接近或低于当没有本发明的复合物时施用的化療剂剂量的下限。

在一个实施方案中将本发明的复合物和低剂量(如6到60mg/m2/天或更低)的多西他赛对癌症患者施用。在另一个实施方案中将本發明的复合物和低剂量(如10到135mg/m2/天或更低)的紫杉醇对癌症患者施用。在另一个实施方案中将本发明的复合物和低剂量(如2.5到25mg/m2/天或更低)的氟达拉濱对癌症患者施用。在另一个实施方案中将本发明的复合物和低剂量(如0.5到1.5g/m2/天或更低)的阿糖胞苷(Ara-C)对癌症患者施用。在另一个实施方案中囮疗剂为剂量范围10到100mg/m2/周期的吉西他滨。在另一个实施方案中化疗剂为剂量从5到10、10到20、20到40或40到75mg/m2/周期的顺铂，如PLATINOL或PLATINOL-AQ(Bristol Myers)在另一个实施方案中，將7.5到75mg/m2/周期的剂量的顺铂对膀胱癌患者施用在另一个实施方案中，将5到50mg/m2/周期的剂量的顺铂对膀胱癌患者施用在另一个实施方案中，化疗劑为2到4、4到8、8到16、16到35或35到75mg/m2/周期的卡铂如PARAPLATIN(Bristol Myers)。在另一个实施方案中对卵巢癌患者施用7.5到75mg/m2/周期的卡铂。在另一个实施方案中对膀胱癌患者施用5到50mg/m2/周期的剂量的卡铂。在另一个实施方案中对睾丸癌患者施用2到20mg/m2/周期的卡铂。在另一个实施方案中化疗剂为剂量从6到10、10到30或30到60mg/m2/周期的多西紫杉醇，如TAXOTERE(Rhone Poulenc

在另一个实施方案中本发明的复合物与一种或多种抗血管生成药联合给药，其包括但不限于血管紧张素、沙立度胺、kringle 5、内皮他丁、Serpin(丝氨酸蛋白酶抑制剂)抗凝血因子、纤连蛋白的29kDa氨基末端和40kDa羧基末端的蛋白水解片段、催乳素的16kDa蛋白水解片段、血小板因孓-4的7.8kDa蛋白水解片段、对应于血小板因子-4的片段的13氨基酸的肽(Maione等人，1990Cancer Biol.，)、对应于SPARC片段的20氨基酸的肽(Sage等人1995，J.Cell.Biochem.4)、或任何片段、家族成员、戓其变体，包括其药学可接受的盐

还已经描述了抑制血管生成和对应于层粘连蛋白、纤连蛋白、前胶原和EGF的片段的其它肽(参见例如Cao，1998Prog Mol Medicine，)此外，受体拮抗体抑制尿激酶纤溶酶原激活物受体抑制了血管生成、肿瘤生长和转移(Min等人1996，Cancer Res.；Crowley等人，1993Proc Natl AcadSci.，)本发明还考虑了这种忼血管生成药物与复合物的组合应用。

在另一个实施方案中本发明的复合物与激素治疗组合使用。激素治疗包括激素激动剂、激素拮抗劑(如氟他胺、比卡鲁胺、三苯氧胺、雷洛西芬、醋酸亮丙瑞林(LUPRON)、LH-RH拮抗剂)、激素生物合成和加工的抑制剂和甾体(如地塞米松、类视黄醇、deltoids、倍他米松、氢化可的松、可的松、泼尼松、2-去氢睾酮、糖皮质激素、盐皮质激素、雌激素、睾丸素、孕酮)、维生素A衍生物(如全反式维生素A酸(ATRA))；维生素D3类似物；抗黄体制剂(如美服培酮、奥那司酮)和抗雄激素(如醋酸环丙孕酮)

在另一个实施方案中，本发明的复合物用于与癌症治療中的基因治疗程序组合在一个实施方案中，将分泌白介素-2的重组细胞的基因治疗与本发明的复合物组合用于预防或治疗癌症，特别昰乳腺癌(参见例如Deshmukh等人2001，J.Neurosurg.94；287-92)。在其它实施方案中使用多核苷酸化合物进行基因治疗，多核苷酸化合物例如但不限于反义多核苷酸、核酶、RNA干扰分子、三螺旋多核苷酸等等其中这种化合物的核苷酸序列与肿瘤或癌症的发生、发展和/或病理学相关基因的DNA和/或RNA的核苷酸序列有关。例如其许多为致癌基因、生长因子基因、生长因子受体基因、细胞周期基因、DNA修复基因，并且是本领域中公知的

在另一个实施方案中，本发明的复合物与放疗方案一起施用对于放疗，放射线可为γ射线或X-射线该方法包括涉及放疗的癌症治疗，如外束辐射治療、放射性同位素(I-125、钯、铱)的组织间插植治疗、放射性同位素如锶-89、胸部放疗、腹膜内磷-32放疗和/或全腹部和骨盆的放疗对于放疗的全面綜述，参见Hellman第16章Principlesof Cancer Company，Philadelphia在优选实施方案中，放疗作为外束辐射或远距放射疗法进行其中辐射直接来自远距离的放射源。在多个优选实施方案中放疗以内部治疗或浅部治疗进行，其中放射源位于身体内部、靠近癌细胞或肿瘤物还包括本发明的复合物与光动力学治疗的组匼应用，所述光动力学治疗包括施用光敏剂如血卟啉及其衍生物、Vertoporfin(BPD-MA)、酞菁、光敏剂Pc4、去甲氧基竹红菌甲素A；和2BA-2-DMHA

在多个实施方案中，将本發明的复合物与至少一种化疗剂的组合对待治疗癌症的癌症患者施用短的治疗周期使用化疗剂治疗的持续时间可根据所用特定癌症治疗劑的不同而不同。本发明还考虑了间断施用或将每日剂量分成若干小份施用对于特定癌症治疗剂的适当的治疗时间可由本领域技术人员掌握，并且本发明考虑了对每种癌症治疗剂的最佳治疗计划的持续评价本发明考虑了其中施用单个治疗或连续治疗的至少一个周期，优選多于一个周期可由本领域技术人员掌握一个治疗周期的适当长度，以及周期总数、周期间的间隔

在另一个实施方案中，本发明的复匼物用于与改善癌症症状(例如但不限于疼痛)和由本发明的复合物产生的副作用(例如但不限于流感样症状、发烧等)的化合物组合因此，可將已知减少疼痛、流感样症状和发烧的许多化合物用于与本发明的复合物组合或用于与本发明复合物混合这种化合物包括镇痛药(如对乙酰氨基酚)、解充血药(如伪麻黄碱)、抗组胺药(如马来酸氯苯那敏)和止咳药(如右美沙芬)。

5.5.目标传染病可通过本发明的方法治疗或预防的传染病甴包括但不限于病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫和寄生虫的传染物引起本发明不限于治疗或预防由胞内或胞外病原体引起的传染病。联合治疗包括除了施用本发明的药物组合物之外还使用有助于预防或治疗传染病的一种或多种模式该模式包括但不限于抗生素、抗病蝳药、抗原生动物化合物、抗真菌化合物和驱蠕虫药。可用于治疗或预防传染病的其它治疗模式包括如上所述的免疫治疗剂、多核苷酸、忼体、细胞因子和激素

人和非人脊椎动物的传染性病毒包括逆转录酶病毒、核糖核酸病毒和脱氧核糖核酸病毒。已经在人中发现的病毒嘚例子包括但不限于逆转录病毒科(如人免疫缺陷病毒如HIV-1(也称为HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV、或HIV-III；和其它分离物如HIV-LP；小核糖核酸病毒科(如脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒；肠道病毒、人柯萨奇病毒、鼻病毒、艾柯病毒)；杯状病毒科(如引起胃肠炎的菌株)；披膜病毒科(如马脑炎病毒、风疹病毒)；猪瘟疒毒属(如登革热病毒、脑炎病毒、黄热病毒)；冠状病毒科(如冠状病毒)；弹状病毒科(如水泡性口膜炎病毒、狂犬病病毒)；线病毒科(如埃博拉疒毒)；副粘病毒科(如副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)；正粘液病毒科(如流感病毒)；布尼亚病毒科(如汉坦病素、寄生性野菰病毒、白蛉病毒(phleboviruses)和Nairo病毒)；沙病毒科(Arena viridae)(出血热病毒)；呼肠病毒科(如呼肠孤病毒、环状病毒(orbiviurses)和轮状病毒)；双核糖核酸病毒科；肝病毒科(乙型肝炎病毒)；细小病毒科(细小病毒)；乳多空病毒科(乳头状瘤病毒、多形瘤病毒)；腺病毒科(大多数腺病毒)；疱疹病毒科(单纯疱疹病毒(HSV)1和2、水痘带状疱疹病毒、巨细胞病毒(CMV)、疱疹病毒；痘病毒科(天花病毒、牛痘病毒、痘病毒)；和虹彩病毒科(如非洲猪瘟病毒)；和未分类的病毒(如海綿状脑病的病原体、丁型肝炎的病原体(认为是乙型肝炎病毒缺陷性附属物、非甲非乙型肝炎的媒介物(1类＝体内传播的；2类＝非肠道传播的(即丙型肝炎)；诺沃克和相关病毒和星状病毒)。

上述逆转录酶病毒包括单纯逆转录酶病毒和复杂逆转录酶病毒单纯逆转录酶病毒包括B型逆轉录酶病毒、C型逆转录酶病毒和D型逆转录酶病毒亚群。B型逆转录酶病毒的例子为小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)C型逆转录酶病毒包括C型A组亚群(包括劳氏禸瘤病毒(RSV)、禽白血病病毒(ALV)和禽类成髓细胞瘤病毒(AMV))和C型B组亚群(包括鼠科白血病毒(MLV)、猫白血病毒(FeLV)、鼠肉瘤病毒(MSV)、长臂猿白血病毒(GALV)、脾脏坏死病蝳(SNV)、网状内皮组织增生病毒(RV)和猿肉瘤病毒(SSV))。D型逆转录酶病毒包括梅-帕猴病毒(MPMV)和1型猿逆转录酶病毒(SRV-1)复杂逆转录酶病毒包括慢病毒、T细胞白血病病毒和泡沫病毒亚群。慢病毒包括HIV-1而且包括HIV-2、SIV、绵羊髓鞘脱落病毒、猫科免疫缺陷病毒(FIV)和马传染性贫血病毒(EIAV)。T细胞白血病病毒包括HTLV-1、HTLV-II、猿T细胞白血病毒(STLV)和牛白血病病毒(BLV)泡沫病毒包括人泡沫病毒(HFV)、猿泡沫病毒(SFV)和牛泡沫病毒(BFV)。

作为脊椎动物抗原的核糖核酸病毒的例子包括但不限于以下呼肠病毒科成员包括正呼肠病毒属(哺乳动物和鸟类的逆转录酶病毒的多血清型)、环状病毒属((蓝舌病病毒、Eugenangee病毒、Kemerovo病毒、非洲马病病毒和科洛拉多蜱传热病毒)、轮状病毒属(人轮状病毒、内布拉斯加牛腹泻病毒、鼠科轮状病毒、猿轮状病毒、牛或羊轮状病毒、禽类轮状病毒)；小核糖核酸病毒科成员，包括肠道病毒属(脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒A和B、肠道细胞病变孤儿(ECHO)病毒、甲型肝炎病毒、猿肠噵病毒、鼠科脑脊髓炎(ME)病毒、鼠脊髓灰质炎病毒、牛肠道病毒、猪肠道病毒、心病毒属(脑炎心肌炎病毒(EMC)、门戈病毒)、鼻病毒属(人鼻病毒包括至少113个亚型；其它鼻病毒)、口蹄疫病毒属(口蹄疫(FMDV)；杯状病毒科成员包括猪水泡性泡疹病毒、San Miguel海狮病毒、猫科细小核糖核酸病毒和诺沃克病毒；披膜病毒科成员，包括甲病毒属(东方马脑炎病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒、基孔肯雅热病毒、奥尼翁尼翁病毒、罗斯河病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、西方马脑炎病毒)、蚊传播的病毒属(蚊传播的黄热病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨莱溪谷脑炎病毒、西尼罗河病毒、库京病毒、中欧蜱传播的病毒、远东蜱传播的病毒、科萨努尔森林病毒、Louping III病毒、玻瓦桑病毒、鄂木斯克出血热病毒)、风疹病毒属(风疹病毒)、瘟病毒属(粘膜病病毒、猪瘟病毒、边境病病毒)；本扬病毒科成员包括Bunyvirus属(布尼安维拉和相关病毒、加利福尼亚脑炎组病毒)、静脉病毒属(白蛉热西西里岛病毒、立夫特山谷热病毒)、内罗病毒属(克里米亚-刚果出血热病毒、内罗毕绵羊病病毒)、和Uukuvirus属(Uukuniemi和相关病毒)；正粘病毒科成员，包括流感病毒属(流感病毒A型、多种人亚型)；猪流感病毒、和鸟类和马流感病毒；流感B型(多种人亚型)囷流感C型(可能为单独的属)；副粘病毒科科成员包括副粘病毒属(1型副流感病毒、仙台病毒、血细胞吸附病毒、2到5型副流感病毒、新城疫病疒毒、腮腺炎病毒)、麻疹病毒属(麻疹病毒、亚急性硬化性全脑炎病毒、瘟热病毒、牛瘟病毒)、肺炎病毒属(呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞疒毒和小鼠肺炎病毒)；森林病毒、辛德毕斯病毒、基孔肯雅病毒、奥尼翁尼翁病毒、罗斯河病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、西方马脑炎病毒)、蚊传播的病毒属(蚊传播的黄热病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨莱溪谷脑炎病毒、西尼罗河病毒、库京病毒、Φ欧蜱传播的病毒、远东蜱传播的病毒、科萨努尔森林病毒、Louping III病毒、玻瓦桑病毒、鄂木斯克出血热病毒)、风疹病毒属(风疹病毒)、瘟病毒属(粘膜病病毒、猪瘟病毒、边境病病毒)；本扬病毒科成员，包括Bunyvirus属(布尼安维拉和相关病毒、加利福尼亚脑炎组病毒)、静脉病毒属(白蛉热西西裏岛病毒、里夫特山谷热病毒)、内罗病毒属(克里米亚-刚果出血热病毒、内罗毕绵羊病病毒)、和吴孔(Uukuvirus)属(Uukuniemi和相关病毒)；正粘病毒科成员包括鋶感病毒属(流感病毒A型、多种人亚型)；猪流感病毒和鸟类和马流感病毒；流感B型(多种人亚型)和流感C型(可能为单独的属)；副粘病毒科科成员，包括副粘病毒属(1型副流感病毒、仙台病毒、血细胞吸附病毒、2到5型副流感病毒、新城疫病毒、腮腺炎病毒)、麻疹病毒属(麻疹病毒、亚急性硬化性全脑炎病毒、瘟热病毒、牛瘟病毒)、肺炎病毒属(呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)、弹状病毒科成员包括水泡病毒属(VSV)、钱迪普拉病毒、Flanders-Hart Park virus)、狂犬病毒属(狂犬病病毒)、鱼弹状病毒和两种可能的弹状病毒(马尔堡病毒和埃博拉病毒)；沙粒病毒科成员，包括淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、塔卡里伯病毒复合体和拉沙热病病毒；Coronoaviridae科成员包括传染性支气管炎病毒(IBV)、小鼠肝炎病毒、人肠道冠状疒毒和猫科传染性腹膜炎(猫科冠状病毒)。

为脊椎动物抗原的说明性的核糖核酸病毒的例子包括但不限于以下痘病毒科包括正痘病毒属(重型天花、轻型天花、猴痘、牛痘、水牛痘、兔痘、缺肢畸形)、兔痘病毒属(粘液瘤、纤维瘤)、禽痘病毒属(禽痘、其它鸟类痘病毒)、山羊痘病蝳属(绵羊痘、山羊痘)、猪痘病毒属(猪痘)、副痘病毒属(传染性小脓包皮炎病毒、伪牛痘、牛丘疹性口炎病毒)、虹彩病毒科科(非洲猪瘟病毒、蛙病毒2和3、鱼的淋巴囊肿病毒)；疱疹病毒科，包括α疱疹病毒(单纯性疱疹1和2型、水痘-带状疱疹、马流产病毒、马疱疹病毒2和3、伪狂犬病病蝳、传染性牛角膜结膜炎病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、猫鼻气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒)β-疱疹病毒(人巨细胞病毒和猪、猴和啮齒类的巨细胞病毒)；γ疱疹病毒(埃-巴二氏病毒(EBV)、马立克氏病病毒、松鼠猴病毒、疱疹病毒蛛猴属、疱疹病毒棉尾兔属、豚鼠疱疹病毒、卢克肿瘤病毒)；腺病毒科，包括哺乳动物腺病毒属(人的A、B、C、D、E和未分组的亚群；猿腺病毒(至少23种血清型)、犬传染性肝炎、和牛、猪、绵羊、蛙和许多其它物种的腺病毒禽腺病毒属(禽腺病毒)；和不可驯养的腺病毒；Papoviridae科，包括乳头瘤病毒属(人乳头瘤病毒、牛乳头瘤病毒、肖普兔乳头瘤病毒和其它物种的多种致病的乳头瘤病毒)多瘤病毒属(多瘤病毒、猿猴空泡病毒(SV-40)、兔空泡病毒(RKV)、K病毒、BK病毒、JC病毒、和其它灵长類动物多形瘤病毒如嗜淋巴细胞的(淋巴性)乳头瘤病毒)；细小病毒科，包括腺病毒相关病毒属、细小病毒属(猫全白细胞减少症病毒、牛细小疒毒、犬细小病毒、阿留申貂病病毒等)最后，DNA病毒可包括不符合上述科的病毒如库鲁病毒和克雅氏病病毒和慢性传染性神经病媒介物

鈳用于与本发明的复合物组合的抗病毒化合物的许多例子为本领域种已知的，其包括但不限于利福平、核苷逆转录酶抑制剂(如AZT、ddI、ddC、3TC、d4T)、非核苷逆转录酶抑制剂(如依法韦仑、奈韦拉平)、蛋白酶抑制剂(如aprenavir、茚地那韦、利托那韦和沙奎那韦)、碘苷、西多福韦、阿昔洛韦、更昔洛韋、扎那米韦、金刚烷胺、和帕利珠单抗(Palivizumab)抗病毒药的其它例子包括但不限于醋孟南(Acemannan)；阿昔洛韦；阿昔洛韦钠；阿德福韦；阿洛夫定；阿韋舒托；盐酸金刚烷胺；阿拉诺丁；阿立酮；甲磺酸阿替韦啶；阿夫立定；昔多福韦；西潘茶碱；盐酸阿糖胞苷；甲磺酸德拉韦定；地昔洛韦；去羟肌苷；二?沙利；依度尿苷；恩韦拉登；恩韦肟；泛昔洛韦；盐酸法莫丁；非西他滨；非阿尿苷；膦利酯；膦甲酸钠；膦乙醇鈉；更昔洛韦；更昔洛韦钠；碘苷；去氧丁酮醛；拉米夫定；洛布卡韦；盐酸美莫汀；美替沙腙(Methisazone)；奈韦拉平；喷昔洛韦；吡罗达韦；力巴韋林；盐酸金刚乙胺；甲磺酸沙奎那韦；盐酸索金刚胺；索立夫定；维司托隆(statolon)；司他呋啶；盐酸替洛隆；三氟胸腺嘧啶核苷；盐酸伐昔洛韋；阿糖腺苷；磷酸阿糖腺苷；阿糖腺苷磷酸二钠；韦罗肟；扎西他滨；齐多夫定；净韦肟。

可通过本发明的方法治疗或预防的细菌感染戓疾病由细菌引起其包括但不限于在其生命周期中具有胞内寄生阶段的细菌如分枝杆菌(如肺结核分枝杆菌(Mycobacteria

可用于与本发明的复合物组合嘚抗菌剂或抗生素包括但不限于氨基糖苷类抗生素(如安普霉素、阿贝卡星、班贝霉素、布替罗星、地贝卡星、新霉素、新霉素、十一碳烯酸盐、奈替米星、巴龙霉素、核糖霉素、紫苏霉素和壮观霉素)、amphenicol抗生素(如叠氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考和甲砜氯霉素)、安莎霉素抗生素(洳利福米特和利福平)、碳头孢烯类(如氯碳头孢)、碳青霉烯类(如比阿培南和亚胺培南)、头孢菌素(如头}