MTS法探讨联合应用组蛋白去已酰化酶抑制剂与顺铂对口腔鳞癌细胞的毒性作用_百度文库
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MTS法探讨联合应用组蛋白去已酰化酶抑制剂与顺铂对口腔鳞癌细胞的毒性作用|目​的​ ​研​究​组​蛋​白​去​乙​酰​化​酶​抑​制​剂​S​A​H​A​(​ ​S​u​b​e​r​o​y​l​a​n​i​l​i​d​e​ ​H​y​d​r​o​x​a​m​i​c​ ​A​c​i​d​)​与​顺​铂​联​合​应​用​对​口​腔​鳞​癌​细​胞​T​c​a13​及​K​B​的​毒​性​作​用​。​方​法​ ​采​用​M​T​S​法​首​先​检​测​不​同​浓​度​的​S​A​H​A​和​顺​铂​单​独​作​用​于​口​腔​鳞​癌​细​胞​后​,​对​其​生​长​增​殖​的​影​响​。​然​后​,​根​据​细​胞​对​两​种​药​物​的​剂​量​反​应​,​选​择​低​剂​量​的
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三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞增殖的研究
来源：青年人()&更新时间： 19:10:20 &【字体： 】
摘　要：目的：体外试验研究三氧化二砷对口腔鳞癌的可能治疗作用。方法：以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞为研究对象之一，采用台盼蓝拒染法计数活细胞，观察三氧化二砷作用于Tca8113细胞的量效关系、时效关系。采用平皿法姬姆萨染色观察三氧化二砷对Tca8113细胞的克隆形成抑制作用。以舌鳞状细胞癌临床新鲜标本组织块为研究对象之二，消化后细胞悬液与各浓度三氧化二砷、一定浓度的MTX、5-Fu、PYM体外培养后MTT法测定临床舌癌细胞生长抑制率。结果：三氧化二砷对Tca8113细胞、临床舌癌细胞均有显著生长抑制作用。1μmol As2O3台盼蓝染色活细胞计数Tca8113细胞生长抑制率28.57%，克隆形成抑制率31.01%;3μmol As2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率58.36%，克隆形成抑制率76.63%;5μmol As2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率86.03%,克隆形成抑制率91.30%。体外药敏测定：1μmol浓度As2O3的临床舌癌细胞的生长抑制率39.5%，3μmol浓度As2O3为47.2%，5μmol浓度As2O3为89%，MTX为36.5%，5-Fu为41.3%，PYM为58.16%。临床药敏标准一般大于30%为敏感，PYM大于50%为敏感。结论：体外试验表明三氧化二砷可显著抑制人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞的生长，对临床癌细胞也表现了良好的抗增殖作用，三氧化二砷可能成为治疗口腔鳞癌的有效药物。　　关键词：砷剂；口腔鳞癌；药物敏感性试验　　中图分类号：R739.8　　文献标识码：A　　文章编号：99)03-222-03
PRELIMINARY STUDY OF ARSENIC TRIOXIDE IN THE TREATMENTOF ORAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA
WANG Yue-ping, ZHU Han-guang, ZHANG zhi-yuan et al.The Ninth hospital Shanghai second University. Shanghai 200025;
　　Abstract: Objective： To explore the possible anticancer effect of arsenic trioxide (As2O3) on oral cancer in vitro.Methods： Tongue squamous cell carcinoma cell Tca8113 and cells isolated from clinical tongue squamous cell carcinoma specimen was used in vitro studies. The anticancer effect of As2O3 on oral carcinoma cell cancer was studied by MTT Assay and human tumor colony Assay (HTCA).Results： As2O3 obviously inhibited the growth and survial of Tca8113 and Tongue cancer ell. The tumor inhibition rate (TLR) was 86.3% and the tumor colony forming inhibition rat was 91.3% for the Tca8113 with 3umol As2O3. The drug sensitity of antitumor drugs was 47.2% with 3umol As2O3、36.5% with the MTX、41.3% with the 5-Fu and 58.6% with the PYM for cells isolated from the tongue carcinoma specimen. Conclusion: The As2O3 might be one efficient drugs in the treatment of oral squamous cell carcinoma in vitro study.　　Key words: A Trioxide squ Oral anticancer drug sensitivity
　　三氧化二砷是最早用于治疗恶性肿瘤的化疗药物之一，在近一个世纪的研究中，三氧化二砷既作为毒物致死人命，又被认为是恶性肿瘤的诱导剂，特别象是肺癌和皮肤癌的致癌物。近来，三氧化二砷用于治疗急性早幼粒细胞白血病取得了显著的疗效，对其机理的研究表明三氧化二砷是一种凋亡诱导剂和增殖抑制剂，其对其它恶生肿瘤的作用即抗瘤谱还不清楚。本研究对三氧化二砷在口腔舌鳞癌中的抗增殖作用进行了初步探讨，现报导如下：
材料和方法1　材料1.1　舌癌细胞：采用人舌癌细胞系Tca8113作为靶细胞之一，以PRMI1640完全培养液传代培养。实验时将Tca8113细胞株细胞消化计数调整浓度为2×105/ml。将临床手术切除的人舌癌原发灶标本制成一定浓度的细胞悬液，同样以PRMI1640完全培养液培养。1.2　化疗药物：As2O3哈尔滨医大附一院制备，储存液以生理盐水稀释为100μmol/L。顺铂(DDP)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、氨甲喋呤(MTX)、氮芥(HN2)、平阳霉素(BLEO)。
2　方法2.1　将形态正常、生长良好的Tca8113细胞消化后，以2×105个细胞/ml的浓度接种于PRMI1640培养液内培养(37°C，5%CO2)。实验时收集细胞并用台盼蓝拒染法计数活细胞。细胞活力(%)=活细胞数/总细胞数×100%；生长抑制率(%)=(对照组-实验组)/对照组活细胞数×100%。2.2　取对数增殖期细胞，0.25%胰酶消化单细胞悬液，将150～200个Tca8113细胞接种于培养皿中，37°C、5% CO2饱和空气和湿度条件下培养24小时后加入药物，继续培养12天后终止培养，固定后姬姆萨染色，计数细胞集落，(细胞数＞50个为一个集落)。克隆形成抑制率=(1-实验组克隆数/对照组克隆数)×100%。2.3　将临床切除的新鲜舌癌标本组织块制成一定浓度的癌细胞悬液，采用MTT法检测As2O3-10μmol/L、CDDP100μg/ml、MTX、5-FU、NH2、BLEO的抗增殖作用。
3　结果3.1　三氧化二砷对Tca8113的抗增殖抑制作用　　根据台盼蓝活细胞拒染法计数结果，得到三氧化二砷作用Tca8113细胞的不同时间、不同浓度的抗增殖抑制率，作出其量-效、时-效关系。(如图1、2)在5μmol/L浓度下作用Tca8113细胞72小时时，增殖抑制率达86.03%，作用120小时达95.15%。
图1　三氧化二砷对Tca8113细胞抗增殖作用的量效关系
图2　三氧化二砷对Tca8113细胞抗增殖作用的时效关系
3.2　三氧化二砷对Tca8113细胞的克隆形成抑制试验结果　　克隆形成抑制试验也表明三氧化二砷对Tca8113细胞有明显的抗增殖抑制作用。在3μmol/L浓度下其克隆形成抑制率76.63%，5μmol/L浓度下克隆形成抑制率91.30%。(见图3)
图3　三氧化二砷对Tca8113细胞克隆形成抑制率的影响
3.3　三氧化二砷对临床舌癌细胞的药敏测定　　7例临床舌癌患者的临床标本分离细胞的药敏测定结果表明，三氧化二砷有较好的临床应用前景。三氧化二砷5例敏感，其1μmol/L浓度下平均抑制率为39.5%;3μmol/L浓度为47.2%;5μmol/L浓度下89%。PYM 5例敏感，平均抑制率为58.16%。MTX 6例敏感，平均抑制率为36.5%。5-Fu 6例敏感，平均抑制率为41.3%。3.4　形态学变化　　倒置显微镜下见对照组细胞伸展性好，界限清楚，胞质均匀，核大，核仁清楚，细胞分裂相多见，生长良好，形成致密贴壁的多角形细胞。三氧化二砷低浓度组表面为细胞外形改变不明显，但细胞胞浆有发泡样表现。高浓度组孤立细胞多见，分裂相罕见，有较多细胞浮起。姬姆萨染色后观察，低浓度组可见细胞核浓缩、边聚，高浓度组细胞核膜不完整，细胞发泡更明显。
4　讨论　　三氧化二砷是人类最早用于治疗恶性肿瘤的化学药物之一，公元前16世纪即有砷剂治疗浅表皮肤癌的记录，19世纪Lissauer应用亚砷酸溶液治疗慢性白细胞，这被认为是第一次使用抗癌药物治疗恶性肿瘤，本疗法直到20世纪30年代仍被报导用以治疗慢性髓细胞性白细胞［1］。本世纪50年代由于新的化疗药的不断发现，因砷剂的口服毒性极大其在肿瘤治疗领域渐被淘汰。　　三氧化二砷即砒霜，又是一种毒药。中毒剂量10～50mg，致死剂量60mg［2］。口服微量的砷剂却有一定的有利的生物学效应，可扩张胃肠道的血管，促进微循环，改善分泌和吸收，也可升高白细胞；但在较大剂量下，可能引起毛细血管的极度扩张，刺激粘膜形成水泡，引起腹痛、腹泻、便血等中毒现象［3］。在砷剂的毒理学研究中还发现砷是肺癌和皮肤癌的诱导剂［4］。　　现代砷剂在恶性肿瘤治疗中的应用是哈尔滨医科大学第一附属医院纯化砷剂注射液“癌灵一号”并且用于治疗急性早幼粒细胞白细胞取得显效开始［5］，上海第二医科大学瑞金医院上海血液学研究所对其治疗机理的研究中发现三氧化二砷的治疗作用是诱导肿瘤细胞凋亡，且可能快速降解PML/RAR α融合基因蛋白或进行性下调bcl-2基因的mRNA和蛋白表达途径而诱导凋亡［6］。体外研究的报导表明，三氧化二砷对实体瘤食道癌、胃癌、直肠-结肠癌有相同的研究结果［7］，但临床一直未见有三氧化二砷在治疗实体瘤取得显效的报导。　　我们的体外研究从舌癌细胞系Tca8113细胞和临床舌癌标本分离肿瘤细胞都发现三氧化二砷对其有明显的抗增殖抑制作用。5μmol/L浓度下作用Tca8113细胞72小时增殖抑制率达86.03%，作用120小时达95.15%，其克隆形成抑制率达91.30%；临床药敏测定亦表明三氧化二砷与临床常用化疗药PYM、MTX、5-Fu的药敏无明显差异，三氧化二砷应该有可能成为治疗口腔恶性肿瘤的有效化疗药物。　　三氧化二砷进入血液后，95%～97%与红细胞内的血红蛋白结合，再分布至全身各组织器官［8］。倪建华等研究三氧化二砷的药代动力学发现，持续二小时滴注100μmol/L浓度的三氧化二砷注射液500ml,测得其血浓度峰值仅为4.7μmol/L，其扩散至实体肿瘤组织中的浓度肯定是较低的，我们的进一步研究也证实了这一点。三氧化二砷治疗实体瘤能否取得显效，其进入肿瘤组织的途径有可能是其关键所在。
作者简介：王跃平(1963-)，男，主治医师，口腔医学硕士，现在黄浦区中心医院口腔科
作者单位：上海第二医科大学第九人民医院(200011)
参考文献：［1］　李振主编.恶性肿瘤的化学治疗与免疫治疗.人民卫生出版社，1.［2］　倪建华，陈国强，沈志祥等.静脉滴注三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的药代动力学分析.中华血液学杂志，0.［3］　王振义，陈竺主编.肿瘤的诱导分化和凋亡疗法.上海科学技术出版社，257.［4］　IARC. Monographs on the evaluation of carcinogenic risk of chemicals to man. Lyon: IARC,.［5］　孙鸿德，李元善，马玲等.癌灵一号结合中医辨证治疗急性早幼粒白血病32例.中华中西医结合杂志，0.［6］　陈国强、朱军、石学耕等.三氧化二砷诱导APL细胞凋亡及其分子机制的初步研究.中华血液学杂志，)：25.［7］　顾琴龙、纪玉宝、陈雪华等.三氧化二砷对胃癌细胞杀伤作用的初步研究.肿瘤，1.［8］　孔祥瑞主编.必须微量元素的营养、生理及临床意义.合肥：安徽技术出版社，.
收稿日期：9
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口腔粘膜高分化鳞状细胞癌已转移淋巴能治愈如何治疗
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核心提示：手术切除和放射治疗（放疗）仍是治疗口腔癌的两种最有效方法，两者综合应用常优于单独应用。化学治疗（化疗）目前仍属辅助治疗，用于手术前或与放疗配合应用。选择手术抑放疗，除决定于病情外，还取决于经治医生的临床经验与技术以及医院的条件设备。应客观地估计病人情况采用多学科会诊的方法来决定治疗方案。口腔癌治疗的成败在很大程度上决定于第1次治疗是否正确。
　　一、治疗
　　手术切除和放射治疗(放疗)仍是治疗的两种最有效方法，两者综合应用常优于单独应用。化学治疗(化疗)目前仍属辅助治疗，用于手术前或与放疗配合应用。选择手术抑放疗，除决定于病情外，还取决于经治的临床经验与技术以及的条件设备。应客观地估计病人情况采用多学科会诊的方法来决定治疗方案。口腔癌治疗的成败在很大程度上决定于第1次治疗是否正确。
　　具备以下条件可采用手术治疗：①无远处转移;能在安全边界内切除原发灶与颈转移灶;②病变属放疗效果差者;③手术切除引起的口腔功能损伤不大，或虽大但通过重建或赝复能使其得到相当程度的补偿并取得病人的同意。
　　通常口腔癌病人初次就诊时极少伴有远处转移。如疑有远处转移，特别是原发癌较小时，应首先排除第2个原发癌。口腔可较早发生远处转移，但此癌病程长，原发灶尚可切除者仍可考虑手术。
　　估计手术可完整切除原始肿瘤与颈转移灶外，还可切除其周围一定量的正常组织而不危及重要组织如颈内动脉、颈总动脉、脑组织等，即可考虑手术切除。CT虽有助于估计癌瘤侵犯范围，但仍可在术时发现其侵犯范围比原先估计的要大。这种情况在术前应充分考虑。手术野残留肉眼可见的癌组织即使很少，亦将使手术治疗失败或大大降低治疗效果。术前估计能完整切除癌瘤但可能安全边界不够，经过术前放疗和/或化疗后癌瘤有缩小亦可考虑手术，亦可先手术后放疗。
　　有下列情况时放疗效果差：①口腔腺上皮来源的癌、状鳞癌、鳞癌中心坏死缺者对放疗不敏感或虽敏感但放疗后仍会有残癌。②癌侵犯或紧贴骨质，如、硬腭癌或舌、颊粘膜、口底等处癌侵犯上、下颌骨时。骨组织易受放射线损伤，勉强达到放疗根治量常导致骨坏互以致还要进一步手术。③已有明确颈转移灶。口腔癌的颈转移灶难以用放疗根治，故宜手术。即使小的原发癌可用放疗控制，但从放疗开始到结束约需2个月左右才能作颈部手术，此时颈转移灶可能发展到难以手术，因此还是作原发灶与颈转移灶的联合根冶术为妥。除非原发癌已较晚，否则可考虑作原发与颈转移灶的术前放疗后再手术。
　　二、放射治疗
　　放射治疗无论是单用或与外科手术综合应用，在口腔癌治疗中均起重要作用。对早期病变采用外照射配合间质插植治疗可获得手术切除同样的效果，并可保持美容、正常咀嚼、吞咽及发音功能，使患者生存质量提高。对中、晚期病变尤其是出现颈淋巴结转移时，单纯放疗疗效较差。理想的治疗方案选择需经放射科与外科医生互相配合，根据病变的解剖部位、浸润范围、颈淋巴结转移程度以及病人全身情况等制定综合治疗方案。
　　1、外放射治疗
　　适用于因各种原因不能接受间质或手术综合治疗者，以及治疗后局部复发或病变广泛行姑息治疗者。
　　2、术前放疗
　　目的是控制原发灶或颈部淋巴结的亚临床，减少手术时的播散机会，同时使肿瘤体积缩小，使原来不能手术的肿瘤病灶变为可以手术，从而提高了手术切除率，减少了局部复发率。
　　3、术后放疗
　　适用于手术后癌肿残留或病理检查提示切缘有癌组织或切缘离肿瘤组织边缘小于0.5cm的病例。术后伤口愈合即可进行放疗。
　　4、间质放疗
　　镭针组织间插植治疗在半个世纪广泛应用于临床，并对、颊粘膜癌、口底癌等的治疗取得了满意的局部控制效果。随着人工放射性同位素192Ir、125I、198Au等的出现及后装技术的发展，镭针治疗已为192Ir后装间质治疗所代替。
　　5、口腔筒照射
　　适用于病灶浅、易于暴露，并能保持照射位置的小病灶，且癌瘤浸润深度小于0.5cm。作为外照射前或后的一种加量照射技术，采用千伏X线或电子束照射，使颌骨受量减少，肿瘤区剂量提高，减少后期并发症。
　　三、化学治疗
　　头颈部癌多数为鳞癌，对化疗敏感性较低。在头颈部癌治疗中很少单独应用化疗，常与放疗或手术治疗综合应用，以杀灭亚临床癌细胞;或与放疗合用，以增加放射敏感性;也用于头颈部晚期或复发性癌的姑息治疗。临床资料报道，用于头颈部癌的化疗药物主要有甲氨喋呤(MTX)、博来霉素(BLM)、顺氯氨铂(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)。单一用药疗效差，多药联用或与放射、手术配合治疗效较好。以及服用羟基它里宁效果也比较好。
（实习编辑：曾文璧）
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