单核细胞趋化蛋白-1对膀胱肿瘤浸润淋巴细胞及裸鼠荷瘤的作用 论著 | 39康复网 | 医源世界
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单核细胞趋化蛋白-1对膀胱肿瘤浸润淋巴细胞及裸鼠荷瘤的作用
来源： 作者：李杜渐 陈一戎 王志平 秦大山 段国兰 史廷恺 付生军
摘要: 【摘要】 目的 探讨单核细胞趋化因子（MCP-1）对肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）细胞增殖的作用，以及能否增加TIL对膀胱肿瘤细胞的细胞毒性。方法 观察在不同浓度的MCP-1的作用下，不同时间相对应的TIL增殖的变化。用MTT法测定不同浓度的MCP-1作用后的TIL对细胞毒性的影响。用EJ细胞接种于20只裸鼠（BALB/c-nu/nu），21～28天后......
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　　【摘要】 目的 探讨单核细胞趋化因子（MCP-1）对浸润淋巴细胞（TIL）细胞增殖的作用，以及能否增加TIL对膀胱肿瘤细胞的细胞毒性。裸鼠动物实验对其抑瘤机制予以进一步阐明。方法 观察在不同浓度的MCP-1的作用下，不同时间相对应的TIL增殖的变化。用MTT法测定不同浓度的MCP-1作用后的TIL对细胞毒性的影响。用EJ细胞接种于20只裸鼠（BALB/c-nu/nu），21～28天后接种成功，随机对照分组，用MCP-1腹腔连续注射11天观察MCP-1对荷瘤裸鼠的作用。结果 MCP-1（1ng/ml）作用2周后，可显著增高TIL增殖（第2周）、（P&0.01），且可加强细胞杀伤率（16.4%）（P&0.01）。用MCP-10.5ng/ml及MCP-15ng/ml腹腔连续注射11天，每天1次，1次0.2ml。与生理盐水对照组相对比肿瘤体积和肿瘤重量以及单核细胞密度差异有显著性，肿瘤重量抑制率分别为40%与42%，肿瘤体积抑制率分别为48%与50%，病理切片单核细胞密度高于对照组（P&0.01），但用药两组间对比差异无显著性。结论 一定浓度的MCP-1可促进TIL细胞的增殖，并可增加TIL对EJ细胞的细胞毒性。在裸鼠动物实验中，一定浓度的MCP-1可抑制肿瘤的生长，其机制可能是由于肿瘤局部单核巨噬细胞密度升高并且杀瘤活性增强所致。
　　The effect of monocyte chemotactic protein-1on the bladder& 　　tumour infiltrating lymphocytes&&
　　Li Dujian，Chen Yirong，Wang Zhiping，et al.
　　Deparment of Urology，West China Hospital，Sichuan University，Chengdu610041.&&&&& 　　【Abstract】 Objective To study the effect of monocyte chemotactic protein（MCP-1）on the proliferation of tumour infiltrating lymphocytes（TILs）in patients with transitional cell cancer of bladder and their cytolysis to bladder tumor.To identify further the antitumor effect of MCP-1with nude mice treatment experiment.Methods TIL cell proliferation was assayed in the presence ofMCP-1by cell counting.Bladder caner cell line EJ was cultured as target cell and cytotoxicity of TIL with different concentration MCP-1（0.1ng/ml，1ng/ml，10ng/ml）were determined by3-（3，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bronide（MTT）asaay.The nude mice were injected in the axilla with2.6×16 6 /ml EJ cells suspended in0.1ml of normal salt solution（NS）.The inoculation was successed after4weeks.The mice bearing tumor were randomly dividedinto4groups.Different concentration MCP-1（0.1ng/ml，0.5ng/ml，5ng/ml）were injeced via peritoneal cavity for11consecutive days.Results The proliferation of TIL induced by recombinant interleukin-2（IL-2）was significantly strengthed by MCP-1in a concentration-depenˉdent manner and the cytoxicity was increased to28.3%at concentration of lng/ml compared with control in14days.（P&0.01）.Compared with controls，between two groups’there was significant difference in tumor volume and tumor weight the inhibited rate of tumor volume in two groups were48%，40%respectivety after injection of0.2ml MCP-1with0.5ng/ml，and that of tumor weight were50%，42%respectively after injection of0.2ml MCP-1with5ng/ml.The quantity monocyte of tumor were significant increased in two treatment groups compared with control group（P&0.01）.Conclusion The proliferation and cytoxicity of TILwas increased byMCP-1in a certain concentration.In nude mice experiment，the growth of tumor was inhibited by MCP-1in a certain concentration.Enhancement of the quantity and killing ability of monocyte may be involved in this mechanism.
&&&&& Key words monocyte chemotactic protein-1 cellular proliferation cytotoxicity mice bladder cancer&&
　　膀胱移行细胞癌是泌尿外科的常见肿瘤，其早期经过电切及卡介苗灌注可以起到良好效果，但仍有20%～30%的复发率，且有较多副作用。中晚期肿瘤的治疗及免疫治疗患者预后均不理想。本研究旨在观察不同浓度的单核细胞趋化因子（MCP-1）在不同时间对膀胱肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）细胞增殖以及对膀胱肿瘤细胞株（EJ）杀伤作用的影响，裸鼠动物实验对MCP-1的抗瘤机制则进一步探讨。为提高膀胱肿瘤的免疫治疗提供依据。
　　1 材料和方法&&& 　　1.1 资料
　　15例膀胱移行细胞癌患者均经病理诊断。男11例，女4例，年龄45～76岁，平均60.5岁。病理分级:Ⅰ级5例，Ⅱ级8例，Ⅲ级2例。临床分期:T 1 7例，T 2 6例，T 3 2例，原发10例，复发5例。
　　1.2 细胞培养条件
　　EJ在含15%胎牛血清200mmol/L L-谷氨酰胺、青霉素100U/ml，链霉素100U/ml的RPMI1640液，5%CO 2 和95%空气的37℃饱和湿度条件下无菌培养，常规方法进行传代。
　　1.3 TIL的制备及培养
　　参照改良的Rosenberg法 ［1］& 制备，将淋巴细胞悬液用15%FCS-1640培养液调整细胞数至1.0×10 6 /ml，置于37℃5%CO 2 及含IL-2（1000U/ml）1640培养液中培养。TIL悬液用计数板计出悬液的细胞数量。均用数量/ml表示。MCP-1浓度分别为0.1ng/ml，1ng/ml，10ng/ml加入到TIL细胞中，刺激细胞增殖。
　　1.4 MTTI法测定不同浓度MCP-1对TIL细胞毒性的影响
　　MTT法参照Sargent等 ［2］& 描述的MTT法并加以改良，用含15%FCS的RPMI1640培养液常规方法进行细胞传代培养。当EJ细胞生长状态稳定，呈对数生长期底面长满时，用0.25%胰酶和0.02%EDTA消化细胞，用培养液将消化下来的细胞重新悬浮成单细胞悬液，计数并调整浓度。EJ细胞以5×10 4 /ml的终浓度接种于96孔板，每孔100μl，在含5%CO 2 的37℃饱和湿度条件下孵育24h后，然后用由不同浓度MCP-1作用15天的TIL（MCP-1浓度分别为0.1 ng/ml，1ng/ml，10ng/ml，0ng/ml）加于EJ细胞，效靶比为2:1，10:1，50:1，设3个复孔。每孔加入15μl MTT浓度为0.1%，继续孵育4h，1000rpm离心10min，弃上清加入DMSO150μl及20μl甘油酸缓冲液，强震荡10min，静置20min，在酶标仪测各组在570nm处吸光值，计算每组平均值，实验重复3次。细胞抑制率（%）=（1-实验孔/对照孔）×100%
　　1.5 裸鼠动物实验
　　20只BALB/c nu/nu裸鼠，体重15～20g，雌性，年龄4～6周，由甘肃省肿瘤医院提供。用含15%FCS的RPMI-1640培养基常规方法进行EJ细胞传代培养，当细胞生长状态良好，呈对数生长期时，用0.25%胰酶和0.02%EDTA消化细胞，并用吸管吹打，用培养液将消化下来的细胞重新悬浮成单细胞悬液，计数后，1000rpm离心10min后，弃上清液，随后放入适量生理盐水，吹打，调整细胞浓度为2.6×10 6 /ml。于每只裸鼠右腋窝皮下注射0.1 ml细胞悬液。21～28天后20只裸鼠接种瘤株成功 ［3］& ，瘤体直径≥0.5cm，将20只裸鼠随机分成4组（每组5只）。
　　1.6 用药过程
　　MCP-1浓度:0.1ng/ml，0.5ng/ml，5ng/ml。分对照组:裸鼠5只，腹腔注射NS0.2ml，每天1次，共11次。用药组:裸鼠15只，每组5只，腹腔分别注射不同浓度的MCP-10.2ml，每天1次，共11次。停药2周后处死小鼠，解剖出肿瘤，测小鼠瘤体体积，称重量。
　　计算公式:V=π/6（a 2 ×b）&&&
　　V:肿瘤体积a:肿瘤短径b:肿瘤长径&&&
　　肿瘤体积抑制率（%）=（1-实验组肿瘤体积/对照组肿瘤体积）×100%。&&&
　　肿瘤重量抑制率（%）=（1-实验组肿瘤重量/对照组肿瘤重量）×100%
　　1.7 在光镜下观察各组裸鼠病理切片单核细胞密度
　　染 色:苏木素-伊红染色（H.E染色）计数:一张病理切片连续10个高倍视野（400×）单核细胞计数。
　　1.8 统计学处理
　　实验结果取3次实验的均值，标准差均小于5%。SPSS8.0统计软件。方差分析、X 2 、t检验。
　　2 结果
　　2.1 细胞生长曲线及增殖时间
　　见图1。从图1中可以看出，从膀胱肿瘤标本中分离的TIL第1周，在不同浓度MCP-1的作用下，生长速度缓慢，增殖能力低下（P&0.05）。7天后，TIL开始增殖，至15天达到高峰，扩增明显。当MCP-1为1ng/ml时，扩增密度最为显著（P&0.01）。
　　图1 不同浓度MCP-1对TIL增殖的作用略
　　2.2 不同浓度MCP-1诱导TIL细胞毒活性的变化
　　从表1中可以看到，当MCP-1浓度为1ng/ml时，A 570nm& 值最小，当效/靶比为50:1时，细胞抑制率达到28.2%，与未加MCP-1的TIL相比较，杀伤率增加16.4%（P&0.01）。
　　表1 不同浓度MCP-1作用下TIL的细胞抑制率 （略）
　　2.3 实验中20只裸鼠均荷瘤成功，无1例死亡，出瘤率100%
　　从表2、表3可以看到，当MCP-1浓度为0.5ng/ml与5ng/ml，腹腔连续注射11天，用药肿瘤体积明显较对照组小，肿瘤重量抑制率分别为40%与42%，肿瘤体积抑制率分别为48%与50%，病理切片单核细胞密度高于对照组（P&0.01），但用药两组间肿瘤体积和瘤重及病理切片单核细胞密度差异无显著性（P&0.05）。当MCP-1浓度为0.1 ng/ml时，肿瘤重量抑制率为4%，肿瘤体积抑制率为2%，病理切片单核细胞密度无明显增高，与对照组相比差异无显著性（P&0.05）。
　　表2 对照组及实验各组荷瘤裸鼠肿瘤体积与重量 （略）&&& 　　表3 实验各组与对照组之间每连续10个高倍视野单核细胞分布之比较 （略）
　　3 讨论
　　早期研究表明TIL在肿瘤原位一般处于免抑制状态，使肿瘤得以生长。趋化因子是能使细胞发生趋化作用的细胞因子。单核细胞、自然杀伤细胞，嗜碱粒细胞和激活记忆的T细胞，是有MCP-1受体并且对MCP-1有反应能力的细胞 ［4］& 。国外实验证实:MCP-1可激活T细胞克隆增殖，并分泌IL-2，Ca 2+& 和IL-2的协同作用可增加可溶性CD25表达，促进T细胞生长，CD28配体可进一步增强上述效应 ［5］& 。对MCP-1产生应答的主要为CD45RA - 、CD45RO + 、CD4 + 、CD8 + 等活化记忆T细胞，它们参与抗原识别和信号转导，并且在细胞克隆中观察到上述效应 ［6］& 。Taub DD研究证实:MCP-1能诱导杀伤性T细胞（CTL）脱颗粒和释放酯酶，促进Th1和Th2细胞克隆化，释放多种淋巴因子，上调T细胞功能，增强机体免疫反应 ［7］& 。在本实验中观察到，当MCP-1作用浓度为1ng/ml时，TIL增殖密度显著提高（P&0.01）。但MCP-1浓度过低时，对TIL细胞增殖无明显促进作用。浓度过高，反而抑制细胞增殖。说明MCP-1在一定浓度时可以有效地刺激TIL增殖。MTT法测定不同浓度的MCP-1诱导TIL，当MCP-1为1ng/ml时其细胞毒性明显增强。在裸鼠动物实验中，我们观察到MCP-1对于人膀胱肿瘤生长具有抑制作用，当MCP-1浓度为0.5ng/ml及5ng/ml时，与生理盐水对照组相比，瘤体体积、瘤重及单核细胞密度，用药组与对照组彼此之间差异有显著性，但两组间抑瘤作用差异无显著性，当MCP-1浓度为0.1ng/ml时，则无明显抑瘤作用，说明MCP-1的治疗浓度应该采用最适剂量。众所周知，机体对肿瘤的免疫应答首先表现在局部，肿瘤局部组织内的免疫反应与全身免疫并不一致。通过腹腔注射MCP-1使肿瘤局部单核细胞密度明显升高，起到了抑制肿瘤生长的作用。MCP-1能诱导CD11c、CD11b表达，后者与CD23结合可促进氧化物产生和IL-1、IL-6、TNF-α分泌，并调理单核细胞吞噬功能 ［8］& 。有学者报道，虽然MCP-1表达较高的肿瘤和转基因细胞体外生长活性无明显差异，但动物体内成瘤力却明显下降和消失，肿瘤生长缓慢浸润细胞数量可增加2倍以上 ［9］& 。有人把转基因肿瘤细胞作为疫苗免疫动物，发现动物对再 次接种肿瘤细胞的抵抗力较对照组增强了100倍以上 ［10］& 。在我们的实验中可以发现MCP-1对TIL细胞的强弱取决于MCP-1的局部浓度、TIL细胞的敏感性以及同时存在的其他细胞因子的影响。通过本实验证明了MCP-1对TIL有促进增殖作用，并且可增强TIL对EJ细胞的杀伤。应用裸鼠实验可以更好地观察MCP-1对单核细胞抗肿瘤作用的影响。Marcella Reale ［11］& 等报道BCG膀胱灌注后，患者外周血单核细胞中MCP-1的表达均显著升高，在TUR-BT的标本中，与未经BCG灌注的治疗组相比，BCG灌注治疗的患者标本MCP-1出现高表达。为提高膀胱肿瘤的免疫治疗效果，减少副作用，提供了新的思路，但真正将MCP-1应用于临床，将其增强抗肿瘤的机制完全弄清楚，还需做更多的工作。
　　参考文献
　　1 汪谦.现代医学实验方法，北京:人民卫生出版社，.
　　2 Sargent JM，Tayor CG.Appraisal of the MTT assay as rapid test of chemˉsenitivity in acute meyloid leukemia.Br J Cancer，.
　　3 Thomas E.Ahlering，Louis D，et al.A new in vivo model to study invaˉsion and metastasis of human bladder carcinoma.Cancer Research，0-6665.
　　4 Hironao，Wakabayashi，et al.Purification and identi-fication of mouse lung microvessel endothelia cell drived chemottractant for lung-metasˉtasing murine RAW177large-cell lymphoma cell:identification as mouse chemotactic protein1.Cancer Research，8-4464.
　　5 Taub DD，Turcovski-Corrales SM，Key ML，et al.Chemokines and Tl ymphocyte activation:I.Beta chemokines costimulate human T lymphoˉcyte activation in vitro.J Immunol，（6）:.
　　6 Taub DD，Proost P，Murphy WJ，et al.Oppenheim JJ.Monocyte chemoˉtactic protein-1（MCP-1），-2，and-3are chemotactic for human T lymphocytes.J Clin Invest.）:.
　　7 Taub DD，Ortaldo JR，Turcovski-Corrales SM，et al.Beta chemokines costimulate lymphocyte cytolysis，proliferation，and lymphokine producˉtion.J Leukoc Biol，）:81-89.
　　8 Lecoanet-Henchoz S，Ganchat JE，Aubry JP，et al.CD23regulates monocyte activation through a novel interaction with the adhesion molealles CD11b-CD18and CD11c-CD18.Immunity，.
　　9 Bottazzi B，Walter S，Govoni D，et al.Monocyte chemotactic cytokine gene transfer modulates macrophage infiltration，growth，and susceptibiliˉty to IL-2therapy of a murine melanoma.J Immunol，（4）:.
　　10 Manome Y，Wen PY，Hershowitz A，et al.Monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）gene transduction:an effective tumor vaccine strategy for non-intracranial tumors.Cancer Immunol Immunolther，）:227-235.
　　11 Marcella Reale，Romina Intorno，Raffaele Tenaglia，et al.Production of MCP-1and RANTES in bladder cancer patients after bacillus Calˉmette-Guerin immunotherapy.Cancer Immmunol Immunother，-98. 　　　　作者单位:1610041四川大学华西医院泌尿外科　730030兰州医学院第二附属医院泌尿研究所&
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(一)趋化因子的种类?1.　趋化因子的命名 1986年以来，陆续发现了一类主要由免疫细胞产生的、具有趋化白细胞作用的细胞因子(chemoattractant cytokines或chemotactic cytokines)。在1992年第3届国际趋化因子研讨会上，绝大多数学者建议把chemoattractant(chemotactic) cytokine简称为chemokines, 本书暂译名为趋化因子。趋化因子又称可诱导的小分子蛋白(small-inducible protein, SIP)、间分泌(intercrine)、细胞因子PF-4超家族(PF-4 superfamily of common ancestral cytokines)或PF-4样细胞因子(PF-4 like cytokine)等。?2. 趋化因子亚族及其成员 通过基因克隆和cDNA、氨基酸序列分析，人的趋化因子超家族目前至少发现有19个成员，它们具有以下共同的特点。(1)来自同一个祖先基因(common ancestral gene)。(2)成熟分子为分子量8～10kDa的小分子多肽。(3)可诱导性(inducible)。(4)不同成员在氨基酸水平上有21％～90％的同源性，其中不同亚族成员间同源性为21％～31％，同一亚族不同成员间同源性为25％～90％。所有趋化因子均含有4个Cys的保守基序(motif)，组成特征性的两个二硫键。第一个Cys前的N端肽段较短，约4～12氨基酸，第4个Cys后C端肽段较长，为18～24氨基酸。(5)其相应的受体属于G蛋白偶联受体， 这类受体有7个跨膜区(seven predicated transmembrane domains, STR)，在胞浆内与三个亚单位所组成的G-蛋白(heterotrimeric G protein)相偶联。?根据多肽链一级结构中第1、2两个Cys排列的方式，可将趋化因子超家族分为两个亚族(subfamily): (1)C-X-C亚族(或α亚族)，除NAP-4以外，这个亚族其余成员分子中N端两个Cys之间被另一个氨基酸残基所分隔；(2)C-C亚族(或β亚族),第1、2两个Cys是相连的。两个亚族所包括的成员见表4-11。　表4-11 　两个趋化因子亚族所包括的成员? ?C-X-C亚族(α亚族)?IL-8/NAP-1(interleukin-8/neutrophil-activating protein 1,白细胞介素8/中性粒细胞激活蛋白1)NAP2/CTAPⅢ/βTG(neutrophile-activating protein 2/connective tissue-activatingpeptide Ⅲ/β-thromboglobulin, 中性粒细胞激活蛋白2/结缔组织激活肽Ⅲ/β-凝血球蛋白)NAP-4(neutrophil-activating protein 4, 中性粒细胞激活蛋白4)GROα/MGSA(growth related gene α/melanoma growth-stimulating activity,生长相关基因α/黑素瘤生长刺激活性)GROβ(growth related gene β, 生长相关基因β)GROγ(growth related gene γ,生长相关基因γ)PF-4(platelet factor-4, 血小板因子-4)ENA-78(a 78-residue epithelial cell-derived neutrophil-activator, 78氨基酸上皮细胞来源的中性粒细胞活化剂)?γIP-10(interferon γ-inducible protein-10, γ干扰素诱生蛋白-10)Mig(monokine inducible by γ-interferon, γ干扰素诱生的单核因子)GCP-2(granulocyte chemoattractant protein-2，粒细胞趋化蛋白2)C-C亚族(β亚族)MCP-1/MCAF(monocyte chemoattractant protein-1/monocyte chemotactic and activating factor, 单核细胞趋化蛋白-1/单核细胞趋化和激活因子)MCP-2/HC14(monocyte chemoattractant protein-2,单核细胞趋化蛋白-2)MCP-3/NC28(monocyte chemoattractant protein-3, 单核细胞趋化蛋白-3)MIP-1α/LD78(macrophage inflammatory protein-1α，巨噬细胞炎症蛋白-1α)MIP-1β/Act-2(macrophage inflammatory protein-1β，巨噬细胞炎症蛋白-1β)RANTES(reduced upon activation, normal T expressed and secreted, 正常T细胞表达和分泌，活化时表达下降的因子)?1309(活化人T细胞一种基因产物，cDNA克隆并表达成功)? ?注: (1)NAP-2/CTAPⅢ/βTG是由血小板碱性蛋白(platelet basic protein,PBP)N端加工后形成。(2) LD78和Act-2分别是人的MIP-1α和MIP-1β，与小鼠源性MIP-1α和MIP-1β有很高?同源性。(3)GROα、GROβ和GROγ指基因产物。　3.　趋化因子作用特点 趋化因子C-X-C和C-C亚族的生物学活性有明显的差别。 C-X-C亚族中，除γIP-10、Mig和PF-4外，其余成员均具有趋化和激活中性粒细胞的活性。编码这个亚族成员的基因定位于第4号染色体长臂，氨基酸水平上的同源性在25％～90％。γIP-10主要趋化单核细胞和T细胞。C-C亚族主要趋化和激活单核细胞和某些T细胞亚群， 基因定位于第17号染色体长臂，而且各成员的基因密切连锁，氨基酸水平上同源性在25％～70％。两个亚族之间同源性为21％～31％。?趋化因子除趋化和激活中性粒细胞、单核细胞或某些T细胞亚群外， 有些成员还可趋化嗜酸性粒细胞，或趋化嗜碱性粒细胞并刺激其释放组织胺。某些趋化因子还具有刺激造血细胞、成纤维细胞、角化细胞或黑素瘤细胞的生长。趋化因子除了以游离形式发挥作用外，还可结合到细胞外基质(ECM)或内皮细胞表面，从而趋化白细胞到相应的组织或血管内皮处， 聚集并激活中性粒细胞或单核细胞。下面仅就C-X-C亚族中的IL-8和GRO以及C-C亚族中MCP-1/MCAF、MIP-1α、MIP-1β和RANTES作一介绍。?(二)IL-8?1986年Kownatzki等首先证实了单核细胞可产生一种中性粒细胞趋化因子。嗣后， 不同实验室根据这种因子不同的生物学活性有不同的命名，如中性粒细胞激活蛋白-1(neutrophil-activating protein-1, NAP-1)，单核细胞来源的中性粒细胞趋化因子(monocyte-derived neutrophil chemotactic factor, MDNCF), 单核细胞来源的中性粒细胞激活肽(monocyte-derived neutrophil-activating peptide, MDNAP)，中性粒细胞激活因子(neutrophil-ac-tivating factor, NAF)，中性粒细胞激活肽(neutrophil-activating peptide, NAP)，T淋巴细胞趋化因子(T lymphocyte chemotactic factor, TCF)和内皮细胞来源的中性粒细胞激活肽(endothelial-derived nentrophil-activating peptide, EDNAP)。1988年基因克隆成功，属于C-X-C亚族(α亚族)成员，目前文献中多采用名称是IL-8(interleukin-8)/NAP-1。1.　IL-8的产生?(1)IL-1、TNF、LPS和PMA均能诱导单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞和表皮细胞等合成和分泌IL-8。?(2)PHA等丝裂原活化的T细胞也可产生IL-8。?(3)人类多种肿瘤细胞均可高表达IL-8。其中甲状腺癌、鳞状细胞癌、 黑素瘤等可组成性产生IL-8，而星状细胞瘤、肝癌、肾细胞癌等则需在IL-1β或TNF-α等刺激下才合成和分泌IL-8。?2.　IL-8的分子结构 IL-8分子量8.3kDa，不成熟的IL-8为99个氨基酸，单核细胞产生的成熟IL-8分子主要形式为72个氨基酸，而内皮细胞产生的成熟IL-8分子主要为77个氨基酸。在α亚族中，IL-8与GROα、GROβ、GROγ、ENA-78和NAP-2相对有较高源性。 IL-8分子含4个Cys，无N糖基化位点，IP8.0～8.5，耐热、耐碱，但对巯基化合物敏感。1988年Matsushima首次获得IL-8 cDNA克隆，并在大肠杆菌(Escherichia coli)和中国仓鼠卵母细胞中表达成功。人IL-8基因定位于第4号染色体，基因组有4个外显子和3个内含子。5?端上游有典型的“CAT”和“TATA”盒以及AP-1结合序列和糖皮质反应元件(GRE)等结构。IL-8基因与CXC亚族中PF-4、GROα、 γIP-10基因相连。成熟的IL-8分子可有6种不同形式，分别由69、70、71、72、77和79个氨基酸组成，其差异在IL-8分子的N端，是由蛋白酶水解的不同所致。在体外， 凝血酶或血纤维蛋白溶酶可将77氨基酸形式裂解为72氨基酸形式的IL-8，后者较前者的生物学活性要高2～10倍。?3.　IL-8受体 IL-8受体有两型L-8R A型(或IL-8RⅠ)和IL-8R B型(或IL-8RⅡ)，两型受体在氨基酸水平上有77％同源性，最近命名为CDw128。IL-8R A特异性结合IL-8， 为高亲和力，受体主要分布于中性粒细胞(每个细胞20000受体，Kd为8×10-10M)、单核细胞、 T细胞和黑素瘤细胞。IL-8R B除与IL-8结合外，还可结合GROα、GROβ、GROγ和NAP-2，与IL-8、GROα、GROβ和GROγ结合为高亲和力。与IL-8R B结合的这5种配体分子近N端均具有一个Glu-Leu-Arg(ELR)序列，可能是与IL-8R B结合的一个重要结构。此型受体主要分布于中性粒细胞和髓样细胞前体细胞系，如HL60细胞系。IL-8R属于G蛋白偶联受体，与fMLP受体和C5a受体有29％～34％同源性。IL-8与相应受体结合后可使细胞内Ca??２＋?浓度短暂升高,百日咳杆菌毒素(IAP)可抑制IL-8的这种刺激作用， 表明IAP敏感的G蛋白与IL-8受体的信号转导有关。此外，细胞膜磷酸肌醇脂代谢和PKC也与IL-8R的信号转导有关。最近证实人红细胞膜表面Duffy抗原(gpD)可结合包括IL-8在内的多种趋化因子，这种受体还分布在肾脏和大脑，可能具有清除循环中IL-8等趋化因子的功能，在炎症发生过程中具有重要的调节作用。4.　IL-8的生物学活性?(1)趋化和激活中性粒细胞L-8的这种效应无明显种属特异性。动物腹腔或静脉注射IL-8可引起外周血中性粒细胞数量的增加。IL-8可使中性粒细胞外形改变，促进其脱颗粒，激活中性粒细胞并使其产生呼吸爆发(respiratory burst)、释放超氧化物(O2-、H2O2)和溶酶体酶。局部注射IL-8可趋化中性粒细胞，并刺激中性粒细胞产生白三烯B4(LTB4)而使皮下血浆渗出，IL-8还能诱导中性粒细胞上调Macl抗原(CD11b/CD18)的表达，促进中性粒细胞粘附到内皮细胞和内皮细胞下的基质蛋白。?(2)趋化嗜碱性粒细胞，并刺激其释放组织胺，可能与速发型超敏反应的发生有关。 此外，还可刺激GM-CSF或IL-5预先处理的嗜酸性粒细胞的脱颗粒作用。?(3)趋化T淋巴细胞:可趋化部分静止的CD4+或CD8+T细胞，这种趋化作用需要单核细胞的同时存在。局部注射IL-8可使局部和引流区淋巴结T细胞明显增多。 IL-8还可明显趋化IL-2活化的NK细胞。?(4)IL-8是角化细胞的复合促有丝分裂原(co-mitogen)， 也是黑素瘤细胞的自分泌生长因子。?5.　IL-8与临床 目前关于IL-8与疾病的关系的研究仅仅开始。已发现牛皮癣皮屑中和类风湿性关节炎关节滑液中含有IL-8，IL-8可诱导中性粒细胞产生软骨降解酶，引起关节组织损伤，皮质激素能抑制非特异性炎症可能与抑制IL-8的产生有关。此外，某些与中性粒细胞积聚有关的炎症和呼吸系统疾病局部或血清中IL-8水平往往升高，如胃炎、炎症性结肠炎、肺纤维化或成人呼吸窘迫综合征、支气管肺泡灌洗液、慢性支气管炎、支气管扩张、败血症休克、急性脑膜炎球菌感染、酒精性肝炎等。IL-8水平升高往往与局部浸润的单核细胞和中性粒细胞数量相平行。?IL-8与IL-1、TNF-α、G-CSF、GM-CSF或IFN等联合应用有可能治疗中性粒细胞减少症以及HIV所致的免疫缺陷症等。肿瘤局部注射IL-8可趋化中性粒细胞、T细胞和NK细胞，在治疗肿瘤中可能有应用前景。?(三)GRO?GRO(growth related gene, 生长相关基因)可分为GROα、GROβ和GROγ三种，此处指基因产物，属于C-X-C亚族。GROα又称为黑素瘤生长刺激活性(melanoma growth-stimulating activity, MGSA)，常以GROα/MGSA表示。GROα与GROβ和GROγ分别有90％和86％的同源性。GROα、GROβ和GROγ与ENA-78和NAP-2也有较高的同源性。此外， 在DNA和氨基酸水平上人GRO与细胞因子诱导的大鼠中性粒细胞趋化剂(CINC)、小鼠巨噬细胞炎症蛋白-2(murine macrophage inflammatory protein 2, MIP-2)也有较高的同源性。?　　GROα前体长107氨基酸，切除N端34氨基酸先导序列后形成73氨基酸的成熟分子。 单核细胞、成纤维细胞、黑素瘤细胞、上皮细胞和脐带静脉内皮细胞等经血清、PDGF或IL-1、TNF等炎症介质刺激下均可表达GROα，在某些肿瘤细胞GROα的表达是组成性的(constitutive)。GROα趋化人中性粒细胞的能力约为IL-8的10倍， 但在激活中性粒细胞并刺激其脱颗粒的作用则弱于IL-8。体内试验表明，GROα与急性炎症的发生密切相关， 使炎症局部有大量中性粒细胞浸润。GROα对单核细胞则无趋化作用。GROα对人Hs294T黑素瘤细胞的生长有一定的刺激活性，对滑膜来源的成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型的表达有下调作用。GROα与IL-8RB有高亲和力的结合，还可与人红细胞膜Duffy抗原(gpD)结合。?　　　(四)MCP-1/MCAF?　　单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)又称单核细胞趋化和激活因子(monocyte chemotactic and activating factor,MCAF),属于C-C亚族(β亚族)成员。MCP-1/MCAF起初是从人髓样单核细胞系THP-1、神经胶质瘤细胞系以及LPS或PHA刺激的人PBMC培养上清中发现。目前已知，单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、B细胞、 平滑肌细胞等在PHA、LPS、Poly I-C、IL-1、IFN-γ、PDGF、EGF或某些病毒刺激下均可被诱导分泌MCP-1。某些肿瘤细胞系则可组成性产生MCP-1。?　　人MCP-1/MCAF基因定位于第17对染色体。人MCP-1前体长99个氨基酸， 切除23个氨基酸先导序列后形成76氨基酸的成熟分子，为碱性蛋白。非糖基化的MCP-1分子量8.7kDa，经不同糖基化后MCP-1分子量有13kDa和15kDa两种。MCP-1分子中11与36 Cys和12与52Cys之间所形成两个链内二硫键以及Try28和Arg30，对于MCP-1的学活性是必需的。 在氨基酸水平上，MCP-1与另外两种单核细胞趋化蛋白MCP-2(HC14)和MCP-3(NC28)分别有62％和72％ 同源性，与C-X-C亚族中IL-8有24％同源性。?　　体内和体外实验均证实了MCP-1对单核细胞具有趋化活性，激活单核细胞和巨噬细胞， 使其胞浆内Ca2+?浓度升高，超氧阴离子的产生和释放，并释放溶菌酶，上调单核细胞和巨噬细胞粘附分子如integrin家族β2组和α4分子的表达和细胞因子IL-1、IL-6的产生，活化的巨噬细胞可抑制肿瘤细胞的生长。 MCP是嗜碱性粒细胞的趋化剂和激活剂，尤其是刺激嗜碱性粒细胞脱颗粒和组胺释放的作用较为强烈。MCP-1与MCP-1R发生特异性的结合，此受体主要分布于单核细胞、 髓样前体细胞系和嗜碱性粒细胞，属于IL-8R家族。分布于人红细胞表面的Duffy抗原也可结合MCP-1。?　　风湿性关节炎病人的滑液和血清中MCP-1水平明显升高， 滑液组织巨噬细胞组成性地产生MCP-1，提示MCP-1与风湿性关节炎的病理损伤有关。高胆固醇血症时，动脉内侧平滑肌细胞产生高水平MCP-1，单核细胞粘附于血管壁并浸润动脉壁。肾脏炎症时， IL-1诱导肾小球细胞产生MCP-1。高血脂症时，LDL与肾小球细胞结合，刺激其产生MCP-1， 趋化单核细胞在局部浸润。?　　(五)MIP-1α和MIP-1β?　　巨噬细胞炎症蛋白1(macrophage inflammatory protein 1, MIP-1)最初从LPS刺激小鼠巨噬细胞上清中发现。根据MIP-1分子结构的差异，可分为小鼠MIP-1α和MIP-1β。人的MIP-1α又称LD78，人的MIP-1β又称Act-2。在同一种属中，MIP-1α和MIP-1β间约有70％ 同源性。不同种属MIP-1之间也有较高的同源性，如人和小鼠MIP-1β有　表4-12 　MIP-1α与MIP-1β学活性比较??生物学活性 MIP-1α MIP-1β 趋化单核细胞 + + 趋化嗜酸性粒细胞并刺激其脱颗粒 + 　 趋化嗜碱性粒细胞 + - 刺激肥大细胞、嗜碱性粒细胞释放组织胺 + 　 趋化T细胞 CD4+、CTL “naive”T 趋化B细胞 + 　 急性炎症性肉芽肿介质 + 　 促进CD8+T细胞与内皮细胞的粘附 ± + 　注：MIP-1β对某些生物学功能的调节作用尚未见有报道。T细胞需MIP-1预处理；内皮细胞需经IL-1等因子的刺激，使之表达VCAM-1分子。　77％同源性，并且人和小鼠MIP-1α和MIP-1β均有种属交叉反应性。成熟的人和小鼠MIP-1β分子均为69个氨基酸，MIP属于C-C亚族(β亚族)的成员。?　　活化后的T细胞、B细胞、单核细胞和肥大细胞均表达MIP-1α和MIP-1β。MIP-1α和MIP-1β均可趋化单核细胞，但对其它细胞的调节作用则有所差别(表4-14)。?　　MIP-1α与MIP-1α/RANTES受体结合，MIP-1α/RANTES受体正如命名所示,除与MIP-1α配体结合外，还可与RANTES结合，此型受体主要分布于单核细胞、T细胞、 髓样细胞前体细胞系、B细胞以及嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞等。?　　　(六)RANTES?　　RANTES是reduced upon activation, normal T cell expressed and secreted的略写词，国内尚未见翻译的专业术语，从产生条件角度来试译， 似为此种在正常T细胞表达和分泌，活化时其产生水平则降低。RANTES最初认为是只是T细胞产生的，以后发现，RANTES与凝血酶刺激人血小板所释放的嗜酸性粒细胞趋化物质是同一种分子。除T细胞(CD4+和CD8+)和血小板外，肾小管上皮细胞、肾小球膜细胞、肾脏、肝脏等也可表达RANTES。人RANTES的前体是高度碱性的蛋白，91个氨基酸，切除23个氨基酸先导序列后成熟分子含68氨基酸，与MIP-1α和MIP-1β有较高同源性。人和小鼠RANTES在氨基酸水平上同源性在90％以上。RANTES属于C-C亚族(β亚族)成员。?　　RANTES对多种白细胞具有趋化或/和刺激作用1)趋化单核细胞；(2)趋化未刺激的CD4+CD45RO+记忆T细胞以及活化后的CD4+和CD8+T细胞；(3)趋化嗜酸性粒细胞并刺激其脱颗粒和呼吸爆发；(4)是嗜碱性粒细胞较强的趋化剂，但刺激其组织胺等介质释放的作用较弱；(5)RANTES预处理T细胞可增加其与IL-1α刺激内皮细胞的粘附能力。?　　百日咳杆菌外毒素可抑制RANTES的生物学活性， 提示其受体跨膜信号的转导与IL-8R相似。RANTES与MIP-1α/RANTES受体相结合，此型受体主要分布于单核细胞、T细胞、髓样细胞前体细胞系、B细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞等，如人单核细胞性白血病细胞系THP-1上与MIP-1α/RANTES结合位点每个细胞约700个，Kd值700pM。
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