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1、amamamamamamam（）酸化SBR法处理啤酒废水受进水碱度和反应温度的影响，最佳温度是℃最佳碱度范围是～mgL。ltgtamamamamamamamam视原水水质情況如碱度不足，采取预调碱度方法进行本工艺处理；若温度差别不大运行参数可不做调整，若温度差别较大视具体情况而定。ltgtamamamamamamamamUASB好氧接触氧化工艺处理啤酒废水此处理工艺中主要处理设备是上流式厌氧污泥床和好氧接触氧化池处理主要过程为：废水经过转鼓过滤机，轉鼓过滤机对SS的去除率达%以上随着麦壳类有机物的去除，废水中的有机物浓度也有所降低ltgtamamamamamamamam调节池既有调节水质、水量的作用，还由于廢水在池中的停留时间较长而有沉淀和厌氧发酵作用ltgtamamamamamamamam由于增加了厌氧处理单元，该工艺的处理效果非常好ltgtamamamamamamamamnb房和床位来创收，通

2、amamamamamamam其Φ薯干含水%%、淀粉%左右、蛋白质%左右。ltgtamamamamamamamam薯干原料中的蛋白质可作为氮源供菌体生长ltgtamamamamamamamam薯干原料中含有铁、镁、钾、钙等的无机盐，选用的嫼曲霉C对这些成分不敏感,故不必对原料做这方面的预处理ltgtamamamamamamamam本设计采用液体深层好氧发酵、钙盐法提取技术生产钙盐法提取柠檬酸酸。ltgtamamamamamamamam这兩种方法都是国内比较流行的生产方法有着大量的实际经验，易于操作风险小。ltgtamamamamamamamam由于本设计为发酵车间的设计着重于车间的工艺计算、设备选型。ltgtamamamamamamamam通过全厂物料衡算、车间热量衡算确定发酵车间主要设备发酵罐、种子罐的设计和选型以及全厂及车间布臵。ltgtamamn宿登记、縋加押金等有机地联系在一起；对操作员权限分类管理有助于即。

3、再次在ASPNET中利用NET框架中的ADONET的强大功能，可以高效便捷的访问数据库ASPNET提供了简单的模型，该模型使开发人员能够编写应用程序的运行逻辑并且保留了会话状态功能；最后，NET框架和ASPNET中提供了默认授权和验證方案可以根据需要方便地移除、添加或者替换这些方案。ltgtamamamamamamamamVisualBasicNET语言是VisualBasic的后继版本但它除了在语法上还保留VisualBasic原有的踪影外，在其他的很多方面都和VisualBasic截然不同ltgtamamamamamamamamVisualBasicNET是一种完全面向对象的BASIC语言，它能够继承重载，共享成员结构化异常处理。ltgtamamamamamamamam它有强壮的语言严格的类型检查，變量声明时候初始化支持垃圾收集。ltgtamamamamamamamam功能强大支持委托，F

4、凸度定义为在宽度中点处厚度与两侧边部标志点平均厚度之差CR＝hc〔her+hel〕式Φher和hel为右部及左部的标志点厚度。ltgtamamamamamamamam所谓标志点是指不包括边部减薄部分的边部点一般取离实际边部mm左右处的点。ltgtamamamamamamamamhc为带材宽度方向中心点嘚厚度ltgtamamamamamamamam楔形（CT）楔形：即左右标志点厚度之差CT＝her－helhe边部减薄（E）边部减薄：即带钢与轧辊接触处的轧辊压扁在板边由于过渡区而造成的帶钢边部减薄。ltgtamamamamamamamamEr=herhErEL=heLhEI式中hER和hEl为带材实际右边部和左边部的厚度（上面各式中右部一般指传动侧左部为操作侧）。ltgtamamamamamamamam局部高进行程序开发；其次ASPNET可以无缝地与其它HTML编辑器及其编程工具一起工作，使得Web开发更加方便

5、常没把投资信息化与投资房间内的设施（如增添浴缸或沙发）嘚投资回报等同看待，没有把信息化建设与影响和改善酒店的经营、管理效率等方面的功效挂起钩来没有把信息化的价值融入酒店自身價值链在竞争中发挥的作用挂起钩来。ltgtamamamamamamamam二、行业问题ltgtamamamamamamamam酒店业属于以人为本的劳动密集型服务行业，IT行业属技术密集型行业ltgtamamamamamamamam由于这种行業间本质上的差异，致使很多IT公司尽管竭尽全力将最先进的产品设备或解决方案推销给酒店其结果通常是酒店付出了昂贵的代价却不尽洳人意。ltgtamamamamamamamam纠其原因主要表现在：技术功能与酒店需求错位，目前的管理系统很多不能解决酒店面临的关键问题；管理决策层没有整体的規划让开发商牵着鼻子走；供应商和酒店没有利益上的一致性。ltgtamamamamamamamam三、服务不到位问题ltg。

6、有效的对客户进行服务对客房进行全方位嘚管理，提高服务质量ltgtamamamamamamamam使用本系统可以处理相对烦琐的客流量统计和资金的管理。ltgtamamamamamamamam操作人员可通过房态查看或客房查询来进行住宿登记也可通过追加押金使房客继续入住或直接退房结账。ltgtamamamamamamamam操作员管理可实时地对操作人员的权限进行有效地管理和设置从而使酒店在管理上汾工明确ltgtamamamamamamamam本系统运用JAVA的图形化开发工具JCreator和Access数据库原理等技术，以及采用JAVA的Alication模式进行开发设计ltgtamamamamamamamam开发工具与平台为了适用系统运行平台的變化性，本系统选择当今流行的Java语言作为系统的开发语言ltgtamamamamamam是描述带材横截面形状的一项主要指标。ltgtamamamamamamama

">　　钙盐法提取柠檬酸酸钙是钙鹽法提取柠檬酸酸的钙盐

　　钙盐法提取柠檬酸酸钙 分子式：

　　白色结晶状粉末微溶于水，能溶于酸

　　适用范围：在食品工业中鼡作鳌和剂、缓冲剂、组织凝固剂以及钙质强化剂。作为营养强化剂使用量：谷类及其制品8-16g饮液及乳饮料1.8-3.6g。

　　发展概述】钙盐法提取檸檬酸酸是目前化学清洗中用得较广的有机酸在水溶液中是一种三价酸。因为钙盐法提取柠檬酸酸本身与Fe304的反应较缓慢与Fe203反应所生成嘚钙盐法提取柠檬酸酸铁的溶解度较小，易产生沉淀用钙盐法提取柠檬酸酸作清洗剂时,要在清洗液中加氨,将溶液的pH调至3.5～4.0,在这样的条件丅，清洗溶液的主要成分是钙盐法提取柠檬酸酸单铵,与铁离子会生成易溶的络合物有很好的清洗效果。与Fe3+形成络合离子水中呈游离状態的Fe3+减少了,减轻其对金属的腐蚀。钙盐法提取柠檬酸酸清除附着物的能力比盐酸小,只能清除铁垢和铁锈,不能清除铜垢、钙镁水垢和硅酸盐沝垢等清洗时要求温度较高和流速较大，价格也较贵清洗废液中有大量的胶态钙盐法提取柠檬酸酸铁的络合物，勿将清洗废液直接排赱只能用热水将其排挤掉。若直接排放胶态络合物会附着在金属表面，经过干燥或焙烤形成很难冲洗掉的膜状物。钙盐法提取柠檬酸酸通常在不宜使用盐酸的情况下才使用

　　【制取】工业上钙盐法提取柠檬酸酸由蔗糖发酵制得。

　　【燃爆危险】本品可燃具刺噭性。

　　【危险特性】粉体与空气可形成爆炸性混合物遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险

　　【毒性及防护】未见毒性报道。在工业使用中接触者可能引起湿疹。使用现场自然通风；作业人员穿工作服戴手套。

　　【包装及储运】净重50kg木桶(内襯塑料袋)或编织袋内衬塑料袋装储于阴凉、干燥处，远离火种、热源防止阳光直射。与氧化剂、油类及酸、碱类分开存放配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物严禁雨天搬运。搬运时要轻装轻卸防止包装损坏。

　　【用途】主要用于馫料或作为饮料的酸化剂在食品和医学上用作多价螯合剂，也是化学中间体

　　(1)锅炉化学清洗酸洗剂

　　钙盐法提取柠檬酸酸酸洗是茬锅炉大型化，盐酸酸洗引起奥氏体(不锈)钢应力腐蚀破裂的情况下发展起来的二种酸洗剂由于钙盐法提取柠檬酸酸不含氯离子，不会引起奥氏体的应力腐蚀破裂所以适用于结构复杂和系统很复杂的高参数、大容量锅炉，特别适用于奥氏体钢和蛇形管的清洗清洗时，清洗液浓度一般应控制在3％～4％之间温度为90～98％，pH值在3．5～4．0之间清洗流速为O．3～2．Om／s，清洗时问控制在3～5h钙盐法提取柠檬酸酸清洗存在的问题为钙盐法提取柠檬酸酸废液处理较复杂，它无溶解硅酸盐垢的能力机组启动时还应有洗硅措施，药品昂贵操作不当时还会產生钙盐法提取柠檬酸酸铁沉淀.使用钙盐法提取柠檬酸酸做清洗剂时应注意：

　　①在专用的溶液箱中将缓蚀剂搅拌溶解,用除盐水溶解钙鹽法提取柠檬酸酸,并加氨水调整清洗液pH为3.5～4.0.用蒸汽将配制好的清洗液加热至90℃以上。

　　②确认清洗系统无漏泄时用清洗泵将钙盐法提取柠檬酸酸送至被清洗的锅炉中。

　　③在清洗过程中每30min采样化验一次清洗液中钙盐法提取柠檬酸酸浓度、Fe2+浓度及pH值。在整个清洗过程Φ应保持清洗液pH始终在3．5～4．0之间(用氨水调节)

　　④当酸洗至既定时间后或清洗液中Fe2+含量基本稳定后，结束酸洗 ⑤酸洗结束后，用热嘚除盐水(90℃以上)排挤钙盐法提取柠檬酸酸液并进行冲洗为提高冲洗效果，尽量提高冲洗流速直到排出水pH为5～6，含铁量小于20～30mg／L时为止

　　(2)锅炉化学清洗漂洗剂

　　当用盐酸或钙盐法提取柠檬酸酸作酸洗剂时，在酸洗结束并用除盐水(或软化水)冲洗后一般要再用稀钙盐法提取柠檬酸酸溶液进行一次冲洗，通常称为漂洗是利用钙盐法提取柠檬酸酸有络合铁离子的能力，除去酸洗和水冲洗后残留在清洗系統内的铁离子以及水冲洗时可能在金属表面产生的铁锈。采用0.2％～0.4％的稀钙盐法提取柠檬酸酸溶液(含有0．05％的缓蚀剂)pH值为3．5～4．0，温喥60～90℃时间2～3h。在漂洗中应注意以下问题：

　　①漂洗液应用除盐水(或软化水)配制

　　②配制方法采用边循环边加药的方法进行，即先用清洗泵使漂洗水在清洗系统中进行循环并在循环的同时将水加热至60～90℃，然后连续地向漂洗水中加入已事先配制好的浓药品加药順序为漂洗剂、缓蚀剂，并用氨水调解pH为3．5～4．0

　　③在漂洗过程中应经常测定漂洗液温度及pH值。

　　④漂洗结束后用除盐水(或软化沝)冲洗干净系统后转入下道工序。

　　钙盐法提取柠檬酸酸是食品加工业中很重要的食品添加剂也广泛应用于医药、染料及其他工业。鈣盐法提取柠檬酸酸生产有两条途径一条是以淀粉及糖类为原料，用微生物发酵方法来制取；另一条是从含酸分丰富的原料中提取特別是在果品加工中进行综合利用如制梅胚后排出的咸酸汁液，其含酸量可达4—5%制柑橘胚后排出的咸酸汁液都是提取钙盐法提取柠檬酸酸佷好原料。其工艺为：

　　1. 原料澄清过滤：橘汁、梅汁中含有不少果胶及杂质需进行澄清，促进杂质沉淀然后用压滤机压滤。

　　2. 中囷：可用碳酸钙或石灰中和要预先调成浆状进行，最好加入15%碳酸钙中和具体做法是：把橘汁、梅汁等咸酸水加热至75摄氏度时，逐渐加叺碳酸钙乳浆继续加热2小时，初温控制在5摄氏度左右最后可升高到100摄氏度，至溶液呈青绿色时即表示已完成中和反应。然后静置沉澱此沉淀即为果酸钙（以钙盐法提取柠檬酸酸钙为主）。

　　3. 除盐：所得钙盐法提取柠檬酸酸钙含有盐分可用清水洗涤，加热至70—80摄氏度反复多次，直至盐分除净为止干燥备用。

　　4. 酸解脱色：钙盐法提取柠檬酸酸钙浆液加热至60—70摄氏度加入浓度为35 %的硫酸，沸腾3尛时左右待钙盐法提取柠檬酸酸钙分解完成，即静置沉淀上层清液为钙盐法提取柠檬酸酸溶液。将暗红色的钙盐法提取柠檬酸酸用1—2%活性炭脱色半小时则得无色清液。

　　5. 浓缩、晶析：将无色钙盐法提取柠檬酸酸液进行浓缩至固形物含量75%时，于结晶缸内静置结晶4—5天可完成晶析。

　　6. 离心、干燥：钙盐法提取柠檬酸酸结晶还含有一定水分和杂质需用离心机除去。然后在75摄氏度下干燥到含水量达1%鉯下最后通过过筛、分级、包装即为成品。

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本发明属于骨损伤修复医用材料領域具体涉及一种含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥的制备方法与应用。本发明提供一种含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥所述骨水苨由固相部分和液相部分组成，其中固相部分由钙盐法提取柠檬酸酸钙和磷酸钙盐复合而成，钙盐法提取柠檬酸酸钙和磷酸钙盐的质量仳为2～5︰1；并且液固比为0.5～1.5︰1。本发明所提供得含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥具有良好的可塑性、骨引导性、骨诱导活性、细胞活性和较好的降解率的综合生物医学性能适用于骨科、脑外科和颅颌面整形修复。

本发明属于骨损伤修复医用材料领域具体涉及一种含鈣盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥的制备方法与应用。

各种创伤及慢性疾病如骨质疏松症等使骨折及骨缺损的发生率显著增加如何使骨折忣骨缺损更好更快地愈合已成为骨科医生研究的热点问题之一。钙是骨组织的主要矿物质之一人体中99％的钙存在骨骼中，只有1％在细胞外液中循环骨折早期沉积在骨痂中的钙主要来自于骨组织处，而不是饮食摄取在骨折愈合的晚期阶段，饮食中的钙则成为主要来源洇此，需要在骨折及骨缺损早期愈合处填充骨移植生物材料向骨组织处释放提供愈合所需要的钙离子。目前临床应用的人工骨填充修复材料主要有羟基磷灰石(HA)、磷酸钙(CPC)、生物玻璃、半水硫酸钙等然而由于它们脆性大、力学性能不足、降解速度过慢或过快等因素，导致其茬临床应用上受到限制因此，有必要进一步开发新的骨填充修复材料

Medicine..)中的研究表明，钙盐法提取柠檬酸酸钙与骨形态发生蛋白2复合后具有良好的诱导成骨作用可促进骨形成，并且钙盐法提取柠檬酸酸钙和骨形态发生蛋白2的复合物有一个很显著的优势性能就是它能够茬植入兔子股骨踝骨2周后就能形成新骨，能够在骨折及骨缺损早期促进骨的愈合；Hu等在Strongly bound citrate stabilizes the apatite Sciences,):.)的研究中发现在鱼类、鸟类和哺乳动物的的骨头Φ，钙盐法提取柠檬酸酸盐是被高度束缚的COO-官能团与磷灰石的钙离子的强烈束缚对骨头中纳米磷灰石的稳定和增厚起关键作用，由此可見钙盐法提取柠檬酸酸钙的两个部分：Ca²⁺和C₆H₅O₇^3-都能在骨组织的修复中起到非常重要的作用。此外中国专利申请CN.6《含钙盐法提取柠檬酸酸钙嘚人体硬组织填充修复材料》中，将直接购买的钙盐法提取柠檬酸酸钙与纤维蛋白胶、基乙烯基吡咯烷酮、壳聚糖、藻酸盐等混合后在瑺温干燥情况下，采用压片法将混合粉末制成块状也证明了钙盐法提取柠檬酸酸钙具有具有良好的生物相容性、可降解性、药物缓释活性和较好的骨传导和修复作用，但是压片法制得的硬组织填充材料只是通过外界压力将粉末压到一起并没有考虑加入固化液制成骨水泥嘚形态，其抗溃散能力低、抗压强度低受压片机模具的限制不能任意成型，且由于市购的钙盐法提取柠檬酸酸钙颗粒较大其综合性能欠佳。

此外HA(羟基磷石灰)和TTCP/DCPA都属于磷酸钙盐，由于Ca/P比均为1.67所以又被称为羟基磷灰石型的自固化磷酸钙。HA由于其良好的生物相容性、生物活性、骨传导性及其与自然骨矿物相组分的相似性从而在众多的人工合成骨替代物中脱颖而出，倍受瞩目；TTCP/DCPA即是磷酸四钙和无水磷酸氢鈣按摩尔比1:1混合由于TTCP具有较高的反应活性，与DCPA等摩尔混合后作为骨水泥的固相可使体系pH值平衡，固化过程完全、彻底避免了采用单┅体系时会出现酸性副产物的情况，且固化产物为HA因此作为传统的骨修复材料已被应用于临床。

综上所述钙盐法提取柠檬酸酸钙、HA和TTCP/DCPA均可用于骨缺损修复材料。然而单一的钙盐法提取柠檬酸酸钙降解快，与自然骨的相似度不高仅以压片形式成型限制了其临床应用；單一的HA或TTCP/DCPA脆性大、降解速率低，骨诱导作用不显著所以单一材料很难满足骨修复领域对骨水泥的要求，因而采用不同性质的材料进行复匼来获得具有新性能的复合骨水泥材料将具有很大的应用价值

本发明的目的在于提供一种含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥，该骨水泥具有良好的可塑性、骨引导性、骨诱导活性、细胞活性和较好的降解率适用于骨科、脑外科和颅颌面整形修复。

本发明要解决的第一个技术问题是提供一种含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥所述骨水泥由固相部分和液相部分组成，其中固相部分由钙盐法提取柠檬酸酸鈣和磷酸钙盐复合而成，钙盐法提取柠檬酸酸钙和磷酸钙盐的质量比为2～5︰1；并且液固比为0.5～1.5︰1。

所述磷酸钙盐为磷酸四钙、磷酸氢钙、羟基磷灰石、α-磷酸三钙、磷酸八钙或二水磷酸二钙中的至少一种

优选的，所述磷酸钙盐为磷酸四钙、磷酸氢钙或羟基磷灰石中的至尐一种

更优选的，所述磷酸钙盐为磷酸四钙和磷酸氢钙的混合物其中，磷酸四钙与磷酸氢钙的摩尔比为1︰1

更优选的，所述磷酸钙盐為羟基磷灰石

优选的，上述含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥中磷酸钙盐为磷酸四钙和磷酸氢钙的复合物，钙盐法提取柠檬酸酸钙与複合物的质量比为2︰1

优选的，上述含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥中磷酸钙盐为羟基磷灰石，钙盐法提取柠檬酸酸钙与羟基磷灰石嘚质量比为3︰1

所述钙盐法提取柠檬酸酸钙为四水钙盐法提取柠檬酸酸钙Ca₃(C₆H₅O₇)₂·4H₂O、二水钙盐法提取柠檬酸酸钙Ca₃(C₆H₅O₇)₂·2H₂O或无水钙盐法提取柠檬酸酸钙Ca₃(C₆H₅O₇)₂，或为微米级球状钙盐法提取柠檬酸酸钙、纳米级片状钙盐法提取柠檬酸酸钙及纳米级纤维状钙盐法提取柠檬酸酸钙

本发明中，液固比の所以限定为0.5～1.5︰1主要是由于当液固比为2︰1时，由于液相太多凝结时间需几个小时，时间太长

骨水泥中，所述液相部分可以为：KH₂PO₄和K₂HPO₄沝溶液的混合液KH₂PO₄和K₂HPO₄的摩尔比为1︰1。

进一步上述液相部分还含有海藻酸钠、壳聚糖或明胶中的至少一种。加入适量的海藻酸钠、壳聚糖戓明胶都能使骨水泥的抗压强度和可塑性提高且使骨水泥具有良好的抗菌消炎作用。

本发明中KH₂PO₄和K₂HPO₄水溶液的混合液的作用是向骨水泥中提供PO₄^3－，PO₄^3－能与固相中的Ca²⁺固化反应生成羟基磷灰石由于羟基磷灰石的溶解度比钙盐法提取柠檬酸酸钙和其他磷酸钙盐的溶解度都低，从洏加速骨水泥固化另外，本发明所得骨水泥与液相部分直接用水所得的骨水泥相比凝结时间大大缩短，抗压强度大大提高可塑性增強。

进一步骨水泥中，所述液相部分还可以为：钙盐法提取柠檬酸酸和钙盐法提取柠檬酸酸钾水溶液的混合液钙盐法提取柠檬酸酸和鈣盐法提取柠檬酸酸钾的质量比为5︰1。

进一步所述混合液由质量分数为25％的钙盐法提取柠檬酸酸、5％的钙盐法提取柠檬酸酸钾和质量分數为70％的去离子水组成。

本发明中用钙盐法提取柠檬酸酸和钙盐法提取柠檬酸酸钾水溶液的混合液作为固化液时，钙盐法提取柠檬酸酸根离子中的COO^-官能团能与固相中的钙离子螯合形成配位键直至颗粒间产生结晶并联，加速骨水泥的固化

本发明要解决的第二个技术问题昰提供上述含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥的制备方法，将钙盐法提取柠檬酸酸钙和磷酸钙盐按质量比2～5︰1均匀混合形成固相复合物洅按液固比0.5～1.5︰1将骨水泥用固化液与固相复合物搅拌混匀形成骨水泥膏体，然后将膏体在室温条件下自然固化成型得到含钙盐法提取柠檬酸酸钙的骨水泥

优选的，所述磷酸钙盐为磷酸四钙、磷酸氢钙或羟基磷灰石中的至少一种

进一步，所述固化液为KH₂PO₄和K₂HPO₄水溶液的混合液KH₂PO₄囷K₂HPO₄的摩尔比为1︰1。

进一步所述固化液还可以为：钙盐法提取柠檬酸酸和钙盐法提取柠檬酸酸钾水溶液的混合液。

本发明的骨水泥是在室溫条件下自然固化成型的对固化条件没有那么严格的要求，固化时间也是在室温下测定的

(1)本发明首次将钙盐法提取柠檬酸酸钙与磷酸鈣盐复合制成骨水泥的形态，并通过优化固相粉末的配比和液固比使制得的骨水泥与压片法制得的片状硬组织修复材料相比，抗溃散能仂显著提高可塑性良好，能够不受压片机模具的限制任意成型并且在保证骨水泥力学性能良好的条件下，可以通过改变固相粉末的配仳(2:1-5:1)和液固比(0.7-1.2ml/g)来调节凝结时间、抗压强度使其应用范围更广，如骨科、脑外科和颅颌面整形等

(2)与市购的医药级钙盐法提取柠檬酸酸钙制嘚的骨水泥相比，由自制的纳米级钙盐法提取柠檬酸酸钙制得的骨水泥强度大大提高可塑性和抗溃散能力大大提高，且具有一定的粘度这实现了纳米级钙盐法提取柠檬酸酸钙在生物材料方面的优越性能的应用。

(3)与用纯的钙盐法提取柠檬酸酸钙作为固相相比加入了TTCP/DCPA制得嘚复合骨水泥更有利于细胞的增殖、分化，具有更加优异的细胞活性还可通过钙盐法提取柠檬酸酸钙与磷酸钙相的比例调节复合骨水泥嘚降解速率。

(4)尤其当固相粉末的配比和液固比为特定值即当钙盐法提取柠檬酸酸钙与HA的质量比为3:1，液固比为1:1钙盐法提取柠檬酸酸钙与TTCP/DCPA嘚质量比2:1，液固比为0.8:1且均用固化液A时，制得的两种复合骨水泥的综合性能最好

图1为实施例1-5骨水泥的凝结时间图。

图2-5为实施例1-5骨水泥的忼压强度图

图6为实施样品1骨水泥的XRD衍射图谱。

图7为实施样品10骨水泥的XRD衍射图谱.

图8为细胞在对照组和实施样品10骨水泥表面粘附的SEM照片；其Φa是细胞在对照组样品上培养1天的SEM照片b是细胞在实施样品10上培养1天的SEM照片，c是细胞在对照组样品上培养4天的SEM照片d是细胞在实施样品10上培养4天的SEM照片。

提供一种制备工艺简单的以钙盐法提取柠檬酸酸钙和磷酸钙盐多元复合的骨水泥及其制备方法制得的骨水泥具有一定的忼压强度，且抗压强度可调凝结时间可控(7-30min)，具有良好的可塑性、骨引导性、骨诱导活性、细胞活性和较好的降解率适用于骨科、脑外科和颅颌面整形修复。

本发明的具体方案如下：

(1)本发明提供一种以钙盐法提取柠檬酸酸钙和磷酸钙盐多元复合的骨水泥此骨水泥由固相粉末及液相两部分组成，其中液相是浓度为0.5mol/L的磷酸二氢钾和磷酸氢二钾水溶液或者质量分数为25％的钙盐法提取柠檬酸酸、5％的钙盐法提取柠檬酸酸钾水溶液，液相中还可以含有海藻酸钠、壳聚糖、明胶等固相粉末由钙盐法提取柠檬酸酸钙和羟基磷灰石(HA)或磷酸四钙/磷酸氢鈣(TTCP/DCPA)按质量比2:1-5:1混合组成，液固比为0.5～1.5︰1；

(2)所述的钙盐法提取柠檬酸酸钙为市购的医药级钙盐法提取柠檬酸酸钙或自制的市购的医药级钙盐法提取柠檬酸酸钙为四水钙盐法提取柠檬酸酸钙【Ca₃(C₆H₅O₇)₂·4H₂O】、二水钙盐法提取柠檬酸酸钙【Ca₃(C₆H₅O₇)₂·2H₂O】或无水钙盐法提取柠檬酸酸钙【Ca₃(C₆H₅O₇)₂】，自制的钙鹽法提取柠檬酸酸钙为微米级球状、纳米级片状及纳米级纤维状；所述的羟基磷灰石(HA)为共沉淀法制备的纳米羟基磷灰石；所述的磷酸四钙/磷酸氢钙(TTCP/DCPA)为两者按摩尔比1:1混合

本发明还提供钙盐法提取柠檬酸酸钙、磷酸钙盐多元复合骨水泥的制备方法，其具体步骤如下：

(1)制备微米級球状、纳米片状以及纳米纤维状钙盐法提取柠檬酸酸钙：分别按照中国申请专利CN.9《球形钙盐法提取柠檬酸酸钙及其制备方法和应用》、Φ国申请专利CN.2《纳米钙盐法提取柠檬酸酸钙的制备方法》和中国申请专利CN.8《纤维状钙盐法提取柠檬酸酸钙及其制备方法和应用》中所述的淛备方法来制备球状、片状及纤维状钙盐法提取柠檬酸酸钙作为骨水泥的粉末相备用

(2)制备HA：按照文献《纳米羟基磷灰石的制备及表征》(迋宇明，刘志辉程凤梅，等.纳米羟基磷灰石的制备及表征[J].化工科技2010，18(6):13～16)制备纳米羟基磷灰石备用

(3)制备TTCP/DCPA：将磷酸四钙和无水磷酸氢钙按摩尔比1:1分别装入球磨机中，以无水乙醇为介质湿磨24h后抽滤在80℃下烘干后研磨，最后再过200目筛即得到等摩尔混合的磷酸钙粉末，将其裝入样品袋中备用

(4)制备固化液：称量0.5mol的KH₂PO₄和0.5mol的K₂HPO₄·3H₂O加入到一定量的去离子水中，用玻璃棒搅拌使之完全溶解后将混合溶液移入100ml容量瓶中定嫆即得到0.5mol/L的磷酸二氢钾和磷酸氢二钾水溶液，记为固化液A；称量25g钙盐法提取柠檬酸酸和5g钙盐法提取柠檬酸酸钾将其加入70ml去离子水中，得凅化液B；将配制好的固化液放入4℃冰箱中备用

(5)制备复合骨水泥：按一定的比例分别称量固相粉末放入小研钵中混合均匀，再按一定的液凅比加入固化液迅速搅拌均匀后填入长宽高均为1cm的磨具中固化成型，即制得复合骨水泥

本发明中，由于钙盐法提取柠檬酸酸钙具有早期促进骨折愈合的活性且具有骨诱导作用、降解快，而HA具有良好的生物活性与自然骨无机矿物质组成相似，TTCP/DCPA最终水化产物为HA且TTCP水化反应较慢，能够提高材料水化后期强度且钙盐法提取柠檬酸酸钙与HA或TTCP/DCPA复合后，降解慢的HA或TTCP/DCPA的颗粒在复合材料中可以起到弥散增强的作用从而提高复合骨水泥的强度。当用PH中性的0.5mol/L的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾水溶液作为固化液时骨水泥中就同时含有Ca²⁺和PO₄^3－，在人体成骨细胞嘚调控作用下有利于快速的形成羟基磷灰石；当用质量分数为25％的钙盐法提取柠檬酸酸(C₆H₈O₇)和5％的钙盐法提取柠檬酸酸钾(C₆H₅K₃O₇·H₂O)水溶液时，钙盐法提取柠檬酸酸根离子中的COO^-官能团与磷灰石的钙离子的强烈束缚可对骨头中纳米磷灰石的稳定和增厚起关键作用因此，本发明将钙盐法提取柠檬酸酸钙与HA或TTCP/DCPA复合加入固化液，以制得性能优良的骨水泥作为骨缺损填充、修复植入、骨质疏松修复、颅颌面整形修复等医用材料。

称量0.5mol的KH₂PO₄和0.5mol的K₂HPO₄·3H₂O加入到50ml的去离子水中用玻璃棒搅拌使之完全溶解后，将混合溶液移入100ml容量瓶中定容即得到0.5mol/L的磷酸二氢钾和磷酸氢二鉀水溶液记为固化液A；将配制好的固化液放入4℃冰箱中备用。

按表1中的配方制备实施例1其制备方法为：将钙盐法提取柠檬酸酸钙和HA按質量比3:1在小研钵中均匀混合，再按液固比为1:1精确量取固化液A将固化液加入固相粉末中，迅速搅拌均匀后填入长宽高均为1cm的磨具中固化成型即可(注：当所用钙盐法提取柠檬酸酸钙为市购医药级钙盐法提取柠檬酸酸钙时，由于加入固化液与固相粉末的比为1:1时凝结时间过长所以将样品4的液固比调整为0.5)

编号钙盐法提取柠檬酸酸钙类型固化液液固比钙盐法提取柠檬酸酸钙/HA样品1纳米级片状A13：1样品2纳米级纤维状A13：1样品3微米级球形A13：1样品4市购医药级A0.53：1

按表2中的配方制备实施例2，其制备方法为：将纳米级片状钙盐法提取柠檬酸酸钙和HA按质量比3:1在小研钵中均匀混合再按表2中的液固比精确量取固化液A，将固化液加入固相粉末中迅速搅拌均匀后填入长宽高均为1cm的模具中固化成型即可。

编号鈣盐法提取柠檬酸酸钙类型固化液液固比钙盐法提取柠檬酸酸钙/HA样品5纳米片状A0.73：1样品6纳米片状A0.93：1样品7纳米片状A1.23：1

按表3中的配方制备实施例3其制备方法为：将纳米级片状钙盐法提取柠檬酸酸钙和TTCP/DCPA分别按表3中的质量比在小研钵中均匀混合，再按液固比为0.8:1精确量取固化液将固囮液加入固相粉末中，迅速搅拌均匀后填入长宽高均为1cm的模具中固化成型即可

称量25g钙盐法提取柠檬酸酸和5g钙盐法提取柠檬酸酸钾，将其加入70ml去离子水中得固化液B。将配制好的固化液放入4℃冰箱中备用

按表4中的配方制备实施例4，其制备方法为：将纳米级片状钙盐法提取檸檬酸酸钙和TTCP/DCPA按质量比2:1在小研钵中均匀混合再按液固比为0.8:1精确量取固化液B，将固化液B加入固相粉末中迅速搅拌均匀后填入长宽高均为1cm嘚模具中固化成型即可。

按表5中的配方制备实施例5其制备方法为：按将钙盐法提取柠檬酸酸钙和HA按质量比3:1在小研钵中均匀混合，再按液凅比为1:1精确量取固化液B将固化液B加入固相粉末中，迅速搅拌均匀后填入长宽高均为1cm的模具中固化成型即可

编号钙盐法提取柠檬酸酸钙類型固化液液固比钙盐法提取柠檬酸酸钙/HA样品12纳米片状B13：1

实施例1-5凝结时间和抗压强的测定：

1、凝结时间测试方法如下：

采用吉尔摩双针法測定骨水泥膏体的凝结时间，用一支较轻且具有较大横截面积的针(m＝113.4gd＝2.13mm)测定初凝时间；用较重且具有较小横截面积的针(m＝453.6g，d＝1.06mm)测定终凝時间测定时，将样品置于底板上使试针与样品膏体表面刚好接触，突然松开挡板试针自由沉入膏体，每15s让试针自由下落一次从加叺固化液时起，到轻针落入样品膏体的深度不超过1mm为初凝时间终凝时间的标准是重针落到试样上无明显痕迹，每组数据由3个平行实验得箌

结果如图1所示，由图可以看出制备的12种骨水泥中，除了样品4其他骨水泥的初凝时间均在7-10min，终凝时间均在23-29min符合骨修复的临床要求；当骨水泥的原料用纳米级钙盐法提取柠檬酸酸钙时，与市购医药级钙盐法提取柠檬酸酸钙相比骨水泥的初凝时间由31min降到了7.5min，这可能是洇为钙盐法提取柠檬酸酸钙颗粒变小后其溶解加快导致骨水泥膏体pH值升高，而HA的溶解度在碱性环境下随膏体的pH值升高而减小从而促进Ca²⁺茬碱性环境中与固化液中的PO₄^3－反应生成羟基磷灰石，水化速率加快表现出凝结时间的显著缩短。

从图中还可看出当骨水泥液固比增大時，凝结时间逐渐变大；当骨水泥固体粉末中TTCP/DCPA的量增加时凝结时间减小；与用固化液A相比，当用固化液B时骨水泥凝结时间稍微增大；泹在一定的范围内，骨水泥的液固比、两种固相粉末的比例以及两种不同固化液对骨水泥的凝结时间影响不大

2、抗压强度测试方法如下：

待骨水泥样品在模具中固化成型后放入37℃，100％湿度培养箱内孵育分别在1、3、5、7、14天时取出，将两端用细砂纸磨至水平然后用万能试驗机测量固化体的抗压强度，施加载荷速度为1mm/min最大压力2000N，每组数据由5个平行实验得到

结果如图2-5所示，由图2-5可以看出制备的12种骨水泥Φ，随着固化时间的延长抗压强度均逐渐增大。除了样品4其他骨水泥孵育两周后抗压强度均在30MPa以上，尤其是样品2孵育两周时的强度为43MPa比样品4的抗压强度高很多，这可能是因为钙盐法提取柠檬酸酸钙颗粒变小后与固化液的接触面积变大，骨水泥水化反应充分并且钙鹽法提取柠檬酸酸钙与HA或TTCP/DCPA的颗粒粒度相匹配，晶体接触点多达到紧密的堆积，减小了孔径和孔隙率故抗压强度高。而过粗的粉体不利於材料形成细密的结构

从图2-5还可以看出，用固化液A要比固化液B制备的骨水泥强度高一些这可能是因为使用两种固化液时，复合骨水泥嘚固化机理不同从图3可以看出，当液固比在0.7-1.2ml/g范围内时抗压强度随着液固比的增加先增大后减小；从图4可以看出，由钙盐法提取柠檬酸酸钙与TTCP/DCPA复合的骨水泥在一定范围内，随着TTCP/DCPA比例的增加复合骨水泥强度逐渐增大；从图5可以看出，使用固化液B时与钙盐法提取柠檬酸酸钙/(TTCP/DCPA)复合骨水泥相比，钙盐法提取柠檬酸酸钙/HA复合骨水泥的早期强度相对较低随着孵育时间的延长，两种骨水泥的抗压强度都是先迅速增大后趋于平稳，而钙盐法提取柠檬酸酸钙/HA复合骨水泥在两周时的强度相对较高

实施样品1和样品10的X射线衍射分析：

分别将固化1天和7天時的骨水泥用研钵磨成细粉，通过X射线衍射仪对样品进行分析研究两种骨水泥的固化机理，X射线衍射仪的工作条件：CuKa管电压40KV，管电流25mA

样品1固化1d、7d时的XRD衍射图谱见图6，可以看出图a、b中各峰的位置和PDF：28-2003的标准卡片【Ca₃(C₆H₅O₇)₂·4H₂O】和09-0432的标准卡片【Ca₅(PO₄)₃(OH)】很相似，这是因为骨水泥的主要荿分是钙盐法提取柠檬酸酸钙和羟基磷灰石对比图a，图b中钙盐法提取柠檬酸酸钙的特征峰有所宽化而羟基磷灰石的特征峰更尖锐一些，这说明随着骨水泥固化时间的延长骨水泥中的固相与液相发生水化反应，生成少量的羟基磷灰石

样品10固化1d、7d时的XRD衍射图谱见图7，可鉯看出图a、b中各峰的位置和PDF：28-2003的标准卡片【Ca₃(C₆H₅O₇)₂·4H₂O】、25-1137的标准卡片【Ca₄(PO₄)₂O】和09-0080的标准卡片(CaHPO₄)很相似，这是因为骨水泥的主要成分就是钙盐法提取柠檬酸酸钙、磷酸四钙和磷酸氢钙对比图a，图b中最明显的变化是钙盐法提取柠檬酸酸钙在5.8°、12.1°和17°的特征峰都减弱，而在32°时出现了很明显的羟基磷灰石的特征峰，这说明随着骨水泥固化时间的延长，骨水泥中的固相与液相发生水化反应，生成少量的羟基磷灰石。

样品1和10嘚X射线衍射分析结果表明两种复合骨水泥水化反应的最终产物都是羟基磷灰石，这说明两种骨水泥都具有良好的生物相容性和骨引导性

效果实施样品10细胞生物相容性实验：

将纳米级片状钙盐法提取柠檬酸酸钙与TTCP/DCPA按质量比2:1混合均匀，加入固化液A液固比为0.8:1，调和搅拌后将所得膏状物置入模具脱模后将其切片为圆片作为实验组；以纳米级片状钙盐法提取柠檬酸酸钙为骨水泥固相，加入固化液A液固比为1:1,调囷搅拌后将所得膏状物置入模具，脱模后将其切片为圆片作为对照组。

将两种样品用超声清洗1d环氧乙烷灭菌2h后烘干备用。在无菌条件丅将样品放于24孔板底部，加入MG63细胞悬浮液(2×10⁴个/孔)以90％F12+10％小牛血清作为培养基，将样品置于37℃100％湿度，5％CO₂浓度的恒温孵箱中培养每兩天换一次培养基(每组5个平行样)。

将MG63细胞与样品材料共培养1d和4d时弃去培养板孔内的培养基，加入0.1mol/LpH 7.2-7.4的PBS(无Ca²⁺、Mg²⁺)，清洗样品2次各1min。在2.5％戊二醛/PBS溶液中固定2h用梯度乙醇溶液脱水：30％，50％75％，80％各10min100％乙醇3次，每次10min醋酸异戊酯替换30min，临界点干燥喷金后于扫描电镜下观察细胞在样品表面的形貌及粘附和铺展情况。

结果如图8所示由图8可以看出，共培养1天时(图a、b)细胞在材料表面以细胞突起伸入到材料表面颗粒之间，牢固地黏附于材料表面此时细胞外基质较少，细胞分布分散呈单个生长，细胞间界线很清楚与对照组相比，实验组细胞铺展较好部分可见相互之间通过伪足连接，而对照组细胞很多还呈球状没有铺展开。共培养4天时(图c、d)材料表面细胞分裂增殖，细胞数量增多细胞排列致密连成片，形状多样化含有多角星形细胞并伴有更多的丝样伪足，胞外基质也很多细胞外基质中有丝状纤维链接。与对照组相比实验组细胞排列更为致密，并呈现多层细胞分布的现象这说明钙盐法提取柠檬酸酸钙与TTCP/DCPA的复合骨水泥更有利于细胞的增殖分化，具有更加优异的细胞活性