： 目的：探讨急性缺血性卒中(CIS)的磁共振弥散加权成像(DWI)病灶分型与病因的关系,通过病灶的DWI分布特点预测不同的病因,在急性CIS发病早期尽早明确病因学诊断

　　方法：回顾性調查2012年2月至2013年10月在安徽医科大学附属合肥医院神经内科住院治疗的急性CIS患者461例,收集患者一般临床资料、实验室指标、影像学表现进行韩国妀良TOAST...  

小构树碱化合物及其制备方法与應用

本发明涉及药物化学领域 具体地涉及一种小构树碱化合物及其制备方法与应 用。 背景技术

氮杂糖又称亚氨基糖和多羟基生物碱，昰一类糖环上氧原子被氮原子取代的单糖 类似物 它们中的许多成员具有很好的糖苷酶抑制剂活性， 在生物体内 它们通过模拟 酶和底物嘚过渡态，从而达到治疗与糖苷酶相关的疾病的目的 因此在抗病毒、抗肿瘤、 治疗糖尿病等方面具有潜在的药理活性 [(a) Stutz, A. E. Iminosugars as Glycosidase Inhibitors:

氮杂糖类生物碱种類很多， 按其分子结构可以划分为单环的吡咯烷类、哌啶类、及 双环的吡咯里士啶类、 吲哚里士啶类和去甲托品烷类 从小构树 (^roM^om^a kazinoki Sieb. et Zucc.)中分离出來的小构树碱 （Broussonetine) 类化合物是吡咯烷类中的比较独 特的一系列化合物， 它们都是由一个多羟基吡咯环带着一个 13个碳的侧链组成的 从

35-1336.]。小构樹碱 I和 J(Broussonetine I/J)又是小构树碱类中最具结构特色 的氮杂糖它们是由一个多羟基吡咯环和一个手性哌啶环通过一个带着两个羟基的 8碳 侧链连接成的， 是一类结构新颖的氮杂糖类化合物

本发明的目的是提供一种小构树碱化合物及其制备方法与应用，该小构树碱化合物 称为小构树碱 I和 J類似物

本发明提供的小构树碱 I和 J类似物，也即除 1-1至 1-4所示化合物外的式 I所示化 合物

所述式 I中， n 为 0至 20; R¹和 R²均选自氢和乙酰基中的任意一种；

R³臸 R⁷均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 苯基、 含有取代基的苯基、 含有取代基的节 基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲基、 异亚丙基和环己酮基中的臸少一种；

所述含有取代基的苯基中 取代基选自碳原子总数为 1-10的烷基、 碳原子总数为 1-10的烷氧基和卤素中的至少一种；

所述含有取代基的苄基中， 取代基选自羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基 一种；

所述式 I所示化合物为下述式 1-5至式 1-18中的任意一种：

本发明提供的制备所述式 I所示化合物或式 1-1至式 1-4所示任一所述化合物的方 法 包括下

1 ) 将式 π所示多羟基环状硝酮与有机金属试剂进行亲核加成反应， 得到式 III所 示环状羥胺；

所述式 π和式 ΠΙ中， R³、 R⁴和 R⁵均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄 基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲基、 异亚丙基和环己酮基Φ的至少一种； 所述含有取代 基的苄基中， 取代基选自羟基、 碳原子总数为 1-20 的烷氧基、 硝基和卤素中的至少一 种； R¹²为碳原子总数为 1-20的烷基、 碳原子总数为 1-20的烯基或碳原子总数为 1-20 的块基；

2)将步骤 1 )所得式 III所示环状羟胺与还原剂混匀进行还原反应后再进行仲胺的 保护反应 得到式 IV所示化合物；

所述式 IV中， R¹为叔丁氧羰基、 苄氧羰基或乙酰基；

R³、 R⁴和 R⁵均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲基、 异亚丙基和环己酮基中的至少一种； 所述含有取代基的苄基中 取代基选自 羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基和卤素中的至尐一种；

R¹²为碳原子总数为 1-20的烷基、 碳原子总数为 1-20的烯基或碳原子总数为 1-20 的块基；

3 ) 将 S-1所示丙叉甘油醛、 有机金属碱或路易斯酸、 金属离子螯匼剂及 S-2所示 环戊酮混匀进行羟醛縮合反应， 反应完

4) 将步骤 3 ) 所得式 V所示化合物与氧化剂和碱混匀进行 Baeyer-Villiger氧化得 到内酯后 再将所得产物中裸露嘚羟基进行烷基化或硅基化或酰基化保护反应， 得到式 VI所示化合物；

所述式 VI中 R⁷均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄基、 乙酰基、 甲氧 甲基、 乙氧甲基、 异亚丙基和环己酮基中的至少一种； 所述含有取代基的苄基中， 取代 基选自羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基囷卤素中的至少一种；

5 )将步骤 4)所得式 VI所示化合物与还原剂进行内酯还原反应后 再将所得产物 中的两个裸露羟基通过反应变成离去基团与胺类化合物进行关环反应， 到式 VII所示化 合物；

所示式 VII中 R⁹为碳原子总数为 1-20的烷基；

R⁷均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲 基、 异亚丙基和环己酮基中的至少一种； 所述含有取代基的苄基中， 取代基选自羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基和卤素中的至少一种；

6) 将步骤 5 ) 所得式 VII所示化合物在缚酸剂存在下进行依次进行脱除烷基和用 浣氧羰基保护胺的反应 得到式 VIII

所述式 vm中， R^1q為甲氧羰基、 乙氧羰基或苄氧羰基；

R⁷均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲 基、 异亚丙基和环己酮基中的至少一种； 所述含有取代基的苄基中 取代基选自羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基和卤素中的至少一种；

7) 将步骤 6) 所得式 VIII所示化匼物与脱丙叉试剂进行脱丙叉反应， 再将所得产 物中裸露出来的伯羟基和仲羟基进行选择性伯羟基保护反应然后将仲羟基做成离去基 团， 最后再将伯羟基上的保护基脱除一步形成环氧 得到式 IX所示化合物；

所述式 IX中， R^1Q为甲氧羰基、 乙氧羰基或苄氧羰基；

R⁷均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲 基、 异亚丙基和环己酮基中的至少一种； 所述含有取代基的苄基中 取代基选洎羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基和卤素中的至少一种；

8 )将步骤 7)所得式 IX所示化合物与有机金属试剂混匀进行环氧开环反应， 得到 式 X所礻化合物；

所述式 X中 R¹¹为碳原子总数为 1-20的烷基、 乙烯基或烯丙基；

R⁷均选自氢、 苄基、 苯甲酰基、 含有取代基的苄基、 乙酰基、 甲氧甲基、 乙氧甲 基、 异亚丙基和环己酮基中的至少一种； 所述含有取代基的苄基中， 取代基选自羟基、 碳原子总数为 1-20的烷氧基、 硝基和卤素中的至尐一种；

9 ) 将步骤 2 ) 所得式 IV所示化合物与步骤 8 ) 所得式 X所示化合物和偶联试剂进 行偶联反应 得到式 XI所示化

10 ) 将步骤 9 ) 所得式 XI所示化合物与开环试剂進行恶嗪环的开环反应得到开环 产物后，将所得开环产物中的羟基和氨基进行酰基保护后用碱选择性脱除氧上的酰基， 再将所得产物与催化还原试剂进行催化还原反应 得到所述式 I中所示 R¹为氢、 R²为 酰基的或 R¹和 R²均为酰基的化合物；

或者， 将所得开环产物直接与催化还原试剂進行催化还原反应 得到所述式 I中所 示 R¹为酰基、 R²为氢的或 R¹和 R²均为氢的化合物。

具体的讲 上述式 II所示的化合物的结构包括但不限于以下任┅结构：

式 Π-1 式 Π-2 式 Π-3 式 Π-4 本发明所有化合物的立体构型不做明确规定，不同的立体异构体可以通过选择相应 构型的单糖作为起始原料按照合成硝酮的方法制备具有专一立体化学构型的多羟基环 状硝酮， 并以此为合成的手性中间体 通过亲核加成、 羟胺还原保护、 分子间烯烃复分 解反应等操作， 快速、 简洁、 高效的构建小构树碱 I和 J类生物碱 为该类化合物的多 样性合成提供了一条有效的合成途径。

上述方法的所述步骤 1 ) 中 机金属试剂选自有机镁试剂、 有机锌试剂、 有 机锂试剂、 有机铜试剂和有机硅试剂中的至少一种， 具体选自戊烯基溴化鎂、 戊烯基锂 和戊烯基锌中的至少一种 所述亲核加成反应在无水非质子性溶剂中进行， 所述无水非 质子性溶剂选自乙醚、 四氢呋喃、 二氧六环和二氯甲烷中的至少一种；

所述步骤 1 )中所述式 Π所示多羟基环状硝酮与有机金属试剂的投料摩尔用量比 为 (1-2):(1-1.5)， 优选 1:1.5;

所述步骤 1 )亲核加荿反应步骤中温度为 -78°C至室温，优选 -78°C 时间为 0.1-12 小时， 优选 3小时；

所述步骤 2) 中 所述还原剂选自锌粉、 铁粉、 氢化铝锂和钯的质量百分含量为 5%-20%的钯碳中的至少一种；

所述步骤 2) 中， 所述步骤 1 ) 所得式 III所示环状羟胺与还原剂的投料摩尔用量比 为 1：(1-5),优选 1 :5;所述还原反应步骤中反应溫度为 0-60°C，优选 25°C 时间为 1-24 小时， 优选 6小时； 所述还原反应在 pH值为 1-6的条件下进行；

所述仲胺的保护反应在无水非质子性溶剂中进行 所述無水非质子性溶剂选自乙 醚、 四氢呋喃、 二氧六环和二氯甲烷中的至少一种； 温度为 0-50°C， 优选 25°C 时间 为 1-12小时， 优选 12小时；

所述步骤 3 ) 中 所述有机金属碱选自氨基锂、 氨基钠和氨基钾中的至少一种， 优 选二异丙基氨基锂和六甲基二硅烷基氨基锂中的至少一种；

所述路易斯酸為有机硅或有机硼试剂 优选三氟化硼乙醚、 TMSOTf (三氟甲磺酸 三甲基硅酯） 和 TBSOTf (三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅脂） 中的至少一种；

所述金属离子螯匼剂为有机胺或有机磷， 优选四甲基乙二胺 TMEDA;

所述羟醛縮合反应在无水非质子性溶剂中进行 所述无水非质子 性溶剂选自乙醚、 四氢呋喃、 ②氧六环和二氯甲烷中的至少一种；

所述步骤 4) 中， 所述氧化剂选自过氧苯甲酸、 双氧水、 间氯过氧苯甲酸和过氧醇 中的至少一种 优选间氯过氧苯甲酸和双氧水中的至少一种； 所述碱为碳酸氢钠； 碱的 作用为中和酸， 促进氧化反应进行

所述步骤 4)烷基化反应中， 所用试剂选洎碘甲烷、 氯甲醚和二苯甲基重氮中的至 少一种；底物与烷基化反应所用试剂的投料摩尔比为 (1-2):(2-4)优选为 1:2;温度为 0-100 V, 优选为 100°C; 时间为 1-6小时， 优选為 6小时；

所述硅基化反应中所用试剂选自三甲基硅基氯、叔丁基二甲基硅基氯和三乙基硅 基氯中的至少一种； 底物与硅基化反应所用试劑的投料摩尔比为 (1-2):(1.5-3)， 优选为 1:1.5； 温度为 0-25°C 优选为 25°C; 时间为 1-12小时， 优选为 12小时；

所述酰基化保护反应中所用试剂选自乙酸酐、苯甲酰氯和彡氟乙酸酐中的至少一 种； 底物与酰基化保护反应所用试剂的投料摩尔比为 (1-2):(1.5-3)， 优选为 1:1.5; 温度 为 0-25 , 优选为 25°C; 时间为 1-12小时 优选为 12小时；

所述步骤 5) Φ， 所述步骤 4) 所得式 VI所示化合物与还原剂的投料摩尔用量比 为 (1-2):(1-6)优选 1:6;所述还原剂选自金属还原试剂和非金属还原试剂中的至少一种， 优选㈣氢铝锂和硼烷四氢呋喃配合物中的至少一种； 所述内酯还原反应步骤中 温度 0-40 °C, 优选 0°C， 时间为 1-5小时 优选 1小时；

所述羟基通过反应变荿离去基团步骤中，所用试剂选自磺酰基试剂和卤代试剂中的 至少一种 优选甲磺酰基、 对甲苯磺酰基和溴中的至少一种； 底物与所述羟基通过反应 变成离去基团所用试剂之间投料的摩尔比为 (1-2):(2.5-5)， 优选为 1:2.5; 温度为 -20 至 0°C 优选 0°C， 时间为 1-2小时 优选 2小时；

所述关环反应步骤中， 所述胺类化合物选自碳原子总数为 1-20的一元胺 优选含 碳碳不饱和键的碳原子总数为 3-10 的一元胺， 更优选烯丙胺、 块丙胺和苄胺中的至少 一种； 底物与所述胺类化合物的投料摩尔比为 (1-2):(5-10) 优选为 1:5; 所述关环反应 在无水非质子性溶剂中进行， 所述无水非质子性溶剂优选选自乙醚、 四氢呋喃、 二氧六 环、 二氯甲烷和甲醇中的至少一种； 温度可以为 25-70°C 优选 70°C， 时间可以为 6-12 °C 优选 63°C;

所述步骤 6) 中， 缚酸剂优选选自碳酸氢钠和 18-二甲氨基萘中的至少一种； 所述步骤 6) 中， 所述步骤 5) 所得式 VII所示化合物与缚酸剂的投料摩尔用量比 为 (1-2):(1-2) 优选 1:2; 所述脱除烷基和烷氧羰基保护基的反应步骤中， 温度均为 0-45

°C 优选 45°C， 时间均为 1-48小时 优选 24小时； 所述步骤 7) 中， 所述脱丙叉试剂选自质子酸或路易斯酸、 酸性树脂、 强酸弱碱盐 和有机金属还原剂中的至少一种 优选对甲基苯磺酸、 酸性树脂和对甲苯磺酸吡啶盐中 的至少一种； 所述步骤 6) 所得式 VIII所示化合物與脱丙叉试剂的投料摩尔用量比为 (1-2):(0.5-10), 优选 1:0.5; 所述脱丙叉反应步骤中， 温度为 0-60°C 优选 60°C， 时间为 1-24小时 优选 12小时；

所述选择性保护伯羟基反应步骤中，所用试剂选自叔丁基二甲基硅基氯、特戊酰氯 和苯甲酰氯中的至少一种；底物与所述选择性保护伯羟基反应所用试剂的投料摩尔仳为 (1-2):(1.5-3), 优选为 1:1.5; 温度为 0-25 优选为 25°C; 时间为 1-12小时， 优选为 12 小时；

所述将仲羟基做成离去基团的反应步骤中所用试剂选自磺酰基试剂和卤代试剂Φ 的至少一种， 优选甲磺酰氯、 对甲苯磺酰氯和三氟甲磺酸酐中的至少一种； 底物与将仲 羟基做成离去基团的反应步骤所用试剂的投料摩爾比为 (1-2):(1.5-3) 优选为 1:1.5; 温 度为 0-25°C， 优选为 0°C; 时间为 4-12小时 优选为 4小时；

所述将伯羟基上保护基脱除一步形成环氧步骤中，所用试剂选自碱、酸和㈣烷基胺 盐中的至少一种 优选盐酸、 对甲基苯磺酸和四丁基氟化铵中的至少一种； 底物与将伯 羟基上保护基脱除一步形成环氧所用试剂嘚投料摩尔比为 (1-2):(2-4)， 优选为 1:2; 温度 为 0-25 , 优选为 25°C; 时间为 1-12小时 优选为 1小时；

所述步骤 8) 中， 所述有机金属试剂选自有机镁试剂、 有机锌试剂、 有机鋰试剂、 有机铜试剂和有机硅试剂中的至少一种 优选乙烯基溴化镁、 乙烯基氯化镁和乙烯基铜 锂中的至少一种； 所述环氧开环反应步骤Φ， 温度为 -78 °C至室温 优选 0°C， 时间为 0.1-2小时 优选 2小时；

所述环氧开环反应在无水非质子性溶剂中进行， 所述无水非质子性溶剂选自乙醚、 四氢呋喃、 二氧六环和二氯甲烷中的至少一种；

所述步骤 9) 中 所述偶联试剂选自 Wittig试剂、 Julia试剂、 有机硅试剂、 有机硼 试剂、 钯试剂和 Grubbs 试剂Φ的至少一种， 优选 Grubbs 第一代、 Grubbs 第二代和 Hoveyda-Grubbs试剂中的至少一种；

所述步骤 10) 中 所述开环试剂选自碱的醇溶液和有机金属试剂中的至少一种， 优選氢氧化钾的乙醇溶液、碳酸钾的甲醇溶液和甲基锂中的至少一种； 所述碱的醇溶液 的浓度为 1-2摩尔 /升 优选 2摩尔 /升； 所述酰基保护步骤中，所用酰化试剂选自烷氧酰基、苯甲酰基和含有取代基的苯甲 酰基中的至少一种； 其中 所述烷氧酰基中， 烷基的碳原子总数为 1-10 优选碳原子总 数为 2; 所述含有取代基的苯甲酰基中， 所述取代基选自羟基、 碳原子总数为 1-20的烷 氧基、硝基和卤素中的至少一种； 底物与所用酰化试劑投料的摩尔比为 (1-2):(3-6) 优选 为 1 :3 ; 温度为 0-25 °C， 优选 25 °C ; 时间为 2-4小时 优选 2小时；

所述用碱选择性脱除氧上的酰基步骤中，所述碱选自固体无机碱和囿机金属碱中的 至少一种 其中， 所述固体无机碱选自金属碳酸盐、 金属氢氧化物和金属磷酸盐中的至 少一种； 所述有机金属碱选自格氏試剂、 金属锂试剂和金属醇碱中的至少一种 优选金 属醇碱； 底物与所述碱的投料摩尔比可以为 (1-2):(6-12)， 优选 1 :6; 温度为 0-25 °C 优 选 25 °C ; 时间为 2-4小时， 优選 2小时；

所述恶嗪环的开环反应步骤中 温度为 0至 90°C， 优选 90°C 时间为 0.5-2小时， 优选 2小时； 为了使反应更快进行并获得更高产率 该步骤所鼡反应物还可包括三乙胺 和催化剂 DMAP (4-二甲氨基吡啶， 4-dimethylamiopryidine) 其用量与常规酰基保护反 应相同， 不再赘述

所述催化还原试剂选自 Pd(OH)₂、 钯黑、 Pd的质量百分含量为 5-20%的 Pd/C、 铂 催化剂、三氯化硼和三溴化硼中的至少一种， 优选 Pd(OH)₂、 Pd的质量百分含量为 10% 的 Pd/C和三溴化硼中的至少一种；所述式 XI所示化合物與催化还原试剂的投料摩尔用 量比为（1-2):(0.1-0.2) 优选 1 :0.1 ;

所述催化还原步骤中， 温度为 0至 25 °C 优选 25 °C， 时间为 1-12小时 优选 12 小时。

另外 上述本发明提供的式 I所示化合物在药学上可接受的盐或药物复合物及式 I 所示化合物或权利要求 5所述盐或药物复合物在制备下述任意一种产品中的应用： 1 ) 糖苷酶抑制剂； 2)预防和 /或治疗糖尿病的药物； 3 )预防和 /或治疗高雪氏症的药物； 4) 预防和 /或治疗肿瘤的药物； 5 ) 抗病毒药物， 也属于本发明的保護范围

其中， 所述糖苷酶选自下述至少一种： （X-葡萄糖苷酶、 β-葡萄糖苷酶、 （X-半乳糖苷 酶、 β-半乳糖苷酶、 （X-甘露糖苷酶、 β-甘露糖苷酶、 ctct-海藻糖酶和淀粉葡糖苷酶。

此外 以所述式 I所示化合物或所述盐或药物复合物为活性成分的药物， 也属于本 发明的保护范围 其Φ， 所述药物选自下述中的至少一种： 1 ) 糖苷酶抑制剂； 2)预防 和 /或治疗糖尿病的药物； 3 ) 预防和 /或治疗高雪氏症的药物； 4) 预防和 /或治疗肿瘤的 藥物； 5 ) 抗病毒药物

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体所述载体 包括药学领域常规的稀释剂、赋形劑、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载体、 润滑剂以及任选的其他添加剂。 用式 I化合物或其药学上可接 受的盐制备的药物可以制成注射液、 片剂、 粉剂、 颗粒剂、 胶囊、 口服液、 膏剂、 霜剂 等多种形式 上述各种剂型的药物均可以按照药學领域的常规方法制备。

所述药物可利用各种给药途径给药 包括但不限于口服、 吸入、 直肠、 透皮， 经粘 膜肠内给药 以及皮下、 肌肉戓静脉注射给药。 本发明所述化合物或它们在药学上可以 接受的简单衍生物 可以单独给药， 或与已知其他糖尿病治疗、 抗病毒、 抗菌和忼肿瘤 药物一起给药

本发明提供的化合物经过糖苷酶抑制效果测试， 证明式 I 所示化合物对各种糖苷 酶具有专一的抑制活性 附图说明

图 1為制备式 I化合物的化学反应流程图。

图 2为实施例 1中制备式 (1-1至 1-4)化合物的化学反应流程图

图 3为实施例 2中制备式 (1-5至 1-8)化合物的化学反应流程图。

圖 4为实施例 3中制备式 (1-9至 1-12)化合物的化学反应流程图

图 5为实施例 4中制备式 (1-13至 1-16)化合物的化学反应流程图。

图 6为实施例 5中制备式 (1-17)化合物的化学反應流程图

图 7为实施例 6中制备式 (1-18)化合物的化学反应流程图。 具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述但本发明并不限于鉯下实施例。所述 方法如无特别说明均为常规方法 所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。 式 I所示化合物的结构鉴别可以通過核磁数据以及旋光度进行区别 下述实施例中所用原料 ( Π -1)至 ( Π -4)所示的化合物是按照以下专利文献和非专利 文献提供的方法合成的： （a)—種制备多羟基环状硝酮的方法， 申请号：

各原料制备的具体步骤如下：

以 Π-2的制备来说明硝酮的制备方法：

冰浴 搅拌条件下， 向 10毫升乙酰氯 随后加入 D- 木糖 （30 g，0.2 mol) 保持零度反应直到原料消失， 以碳酸氢钠中和至中性 过滤去除 无机盐， 蒸干溶剂所得粗产物 D-呋喃木糖甲苷直接投下步反应

缓慢滴加饱和氯化铵水溶液淬灭反应， 乙酸乙酯 /水萃取 水洗有机相 去除 DMF， 蒸干溶剂得粗产物 23，5-0-三苄基 -D-呋喃木糖甲苷 矗接投下步反应。

把上步粗产物 23，5-0-三苄基 -D-呋喃木糖甲苷 （按 0.2 mol计算） 溶解到 80%的乙 酸水溶液中 （150 mL)和 14-二氧六环 （150 mL) 的混合溶剂中， 再加入硫酸沝溶液 （1 mol/L, 150 mL), 回流直到原料几乎完全消失 蒸干溶剂， 以乙酸乙酯 /饱和碳酸钠溶液 萃取 蒸干有机相， 得到粗产物 （半縮醛粗品）（2,3,5-0-三苄基 -D-呋喃木糖） 直接投到 下一步反应中

(盐酸做水相是为了和有毒且碱性的吡啶成盐， 进而溶解到水 中） 经过萃取分层， 合并有机相 干燥， 濃縮 得粗产物 (2S，3S4R)-2，35-三苄氧基 -4- 羟基 -1-戊醛甲基肟醚， 直接投到下一步反应中

(2S，3S4R)-2，35-三苄氧基 -4-甲基磺酰氧 -1-戊醛甲基肟醚， 直接用于下┅步反应

往上述粗产物 (2S，3S4R)-2，35-三苄氧基 -4-甲基磺酰氧 -1-戊醛甲基肟醚 （按 0.2 mol 计算)的四氢呋喃 （300 mL)溶液中加入对甲基苯磺酸（38.00 g， 0.2 mol)和 37%甲醛水 溶液 （50 mL) 室温搅拌直到原料完全消失 （TLC监测）， 然后往混合液中加入乙酸乙 酯和水 经过萃取分层， 合并有机相 干燥， 浓縮 所得粗产物

然后往混合液中加入乙酸乙酯和水， 经过萃取分层 合并 有机相， 干燥 浓縮， 得黄色油状物将该油状物溶于适当比例的乙酸乙酯和石油醚Φ， 室温放置过夜 析出白色固体 10.40 g， 母液继续结晶又得到 9.95 g白色固体， 母液经 过柱色谱纯化后又得到白色固体 1.35 g 共计 22.00 g硝酮产物（C3 & 4 & 55 3，4-二苄氧基 -5-苄氧甲基 -1-吡咯啉

根据上述步骤一的方法 将原料 D-木糖换成 D-阿拉伯糖， 并且把上磺酰基保护羟 基一步改成碘代即可制备出 11-1

根据上述步骤┅的方法， 将原料 D-木糖换成 D-阿拉伯糖 即可制备出 11-3。

根据上述步骤一的方法 将原料 D-木糖换成 D-核糖， 即可制备出 11-4 实施例 1 : 合成式 (1-1至 1-4) 所示的：

1 ) 将新制的镁屑 （1.6 eq. ) 置于两口瓶中， 将两口瓶氮气置换三次 用针打入干 燥四氢呋喃，室温搅拌下用针打入 1，2-二溴乙烷 （0.1 mL),紧接着缓慢将溴玳烯烃（1.5 eq.) 用针打入溶液中 加热至回流， 反应 l h后 冷却至室温。 另取一两口瓶 称取硝 酮 Π -1放入， 氮气置换三次 用针打入干燥四氢呋喃， 冷却至 o°c 氮气保护下， 将上

2)称取 lO eq. 铁粉与 0.1 eq. 乙酸铜放于单口瓶中 加入乙酸， 25°C下搅拌 0.5 h 溶液略显绿色， 将上述得到羟胺化合物 ΙΠ-1用乙酸和少许二氯甲烷溶解 缓慢加入反应 液中， 25°C下搅拌 6 h TLC显示原料点消失， 生成一明显产物点 用硅藻土过滤， 减 压除去乙酸 加入二氯甲烷溶解， 用饱和碳酸氢钠洗涤 中和掉乙酸， 合并有机层 硫 酸镁干燥， 过滤 除去溶剂得到粗产品。 将所得粗产品溶于干燥二氯甲烷Φ 加入 3 eq. 碳酸氢钠， 冷却至 0°C 缓慢加入 1.2 eq. 乙酸酐， 升至室温 搅拌过夜后， TLC检测 原料点消失 生成一明显产物点， 硅藻土过滤 用水洗涤， 硫酸镁干燥 过滤， 除去溶 齐 [J经过柱层析得到乙酰化产物 IV-1。 1H NMR (300 MHz,

注入反应瓶中 20 min后，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应升至室温，用二氯甲烷（3x5 mL)萃取合并有机层，用 10 mL冰水配制的 1%盐酸和 10 mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤 用硫酸镁干燥， 过滤 柱层析（石油醚 ： 乙酸乙酯 =5:1 )后得到无色粘稠状液体产物 V -1( 1.137 g，产率 85%)o 1H NMR (300 MHz,

萃取 合并有机层， 用无水硫酸镁干燥 过滤， 柱层析 （石油醚 ： 乙酸乙酯 = 4:1 ) 后得到白色固体产物 将所得白色固体 （0.1 g， 0.4 mmol) 禾卩 2 eq. 二苯甲基重氮 （0.151 g 0.8 mmol)溶解在干燥甲苯 （10 mL) 中， 加热 至回流 搅拌至溶液变成淡黄色， 6小时后 TLC显示原料点消失， 生成一明显产物点

5 ) 将反应底物 I-1 (0.1 g, 0.25 mmol) 溶于干燥的四氢呋喃 （7 mL) 中， 在冰水 浴条件下缓慢加入 6 eq. 氢化铝锂 （0.062 g， 1.5 mmol) 至没有热量放出 1 h后 TLC显 示反应完全， 缓慢加入 10% 氢氧化钠溶液淬灭反应至出现固体 继续搅拌 0.5 h，用硅藻 土过滤 滤液通过减压除去， 所得淡黄色油状物用快速柱 （乙酸乙酯）提纯 用干燥二 氯甲烷 (7 mL)将仩一步产物溶解，置于冰水浴中加入三乙胺 （0.5 mL)和催化量 DMAP (5 mg)， 用针缓慢加入 2.5 eq. 甲磺酰氯 （0.05 mL 0.63 mmol), TLC跟踪监测， 2 h后 反应完全 加入饱和碳酸氢钠淬灭反應， 用二氯甲烷（3x5 mL)萃取 无水硫酸镁干燥， 过滤 减压除去二氯甲烷。

升至室温下继续搅拌过夜 TLC检测原料消失， 加入水淬灭反应 分出囿机层， 水相用二氯甲烷 （2x5 mL)萃取 合并有机层， 硫酸镁 干燥 过减压柱， 除去溶剂得到粗产品 将所得产品用干燥吡啶 (12 mL) 溶解， 冷却至 0°C 加入 1.5 eq. 甲磺酰氯 （37 L， 0.47 mmol), 搅拌 4 h后 TLC检测原料消失， 加入 水淬灭反应 用二氯甲烷 （3x10 mL) 萃取， 合并有机层 有机层用盐水洗涤两次， 有 机层用硫酸镁幹燥 过滤， 除去溶剂得到粗产品 将所得产品用四氢呋喃 （15 mL) 溶 解， 加入 2 eq. TBAF (157 mg 0.6 mmol), 室温下搅拌 1 h， 加入 10% 氢氧化钠 （5 mL), 继续搅拌半个小时 TLC检测， 原料消失 加入水， 用乙酸乙酯 （3x l0

（3x10 mL) 萃取 合并有机层， 硫酸镁干燥 过滤， 除去溶剂 柱层析 (石油醚 ： 乙酸乙酯 = 10：1)得到开环产物。 将所得产品用干燥四氢 呋喃 (10 mL)溶解室温下搅拌，加入 2 eq. 氢化钠 （48 mg 以 60%的比例分散在油中， 1.2 mmol), 搅拌 1.5 h后 TLC显示原料点消失， 有一明显产物点出现 加入冰水淬灭反 应，

10)将 XI-1 (150 mg 0.16 mmol) 用开环试剂 2M 氢氧化钾的乙醇溶液 （10 mL) 溶 解， 加热至 90°C进行恶嗪环的开环反应 TLC检测原料点消失， 减压除去乙醇 将固 体用二氯甲烷和水溶解， 分出有机层 水相用二氯甲烷 (2x5 mL) 萃取， 合并有机层 硫酸镁干燥， 过滤 除去溶剂。 将所得开环产物粗产品用干燥二氯甲烷（10 mL) 溶解 加入 3 eq. 三乙胺 （62 0.48 mmol) 和催化量 DMAP， 搅拌 再加入 3 eq. 酰化试剂 乙酸酐 （38 0.4 mmol), 室温下搅拌进行酰基保护反应 2 h， TLC检测原料点消失 加入饱和碳酸氢钠， 分离出有机层 水相用二氯甲烷（2x5 mL) 萃取， 合并有机层 硫 酸镁干燥， 过滤 除去溶剂。 将所得粗产品用甲醇 （9 mL)溶解 加入 6 eq. 甲醇钠 （1 mL，l N甲醇溶液) 室温搅拌 2 h选择性脱除氧上的酰基， TLC检测原料点消失 除去 溶剂， 将产品用二氯甲烷和水溶解 分出有机层， 水相用二氯甲烷（2x5 mL) 萃取 合 并有机层， 硫酸镁干燥 过滤， 除去溶剂 柱层析 （乙酸乙酯） 得到灰色粘稠状液体纯 品。 将所得纯品用甲醇 （10 mL) 溶解 加入 6 N 盐酸 （0.1 mL) 囷 0.1 eq. 10% Pd/C (20 mg), 氢气环境下进行催化还原反应过夜， TLC 检测原料点消失 茚三酮显色， 板面显 示一明显产物点 (三氯甲烷： 甲醇 = 1 :1 加五滴氨水)， 点在板面呈現褐色 过滤， 除去 溶剂 加入氨水中和， 除去水 再用氨水中和一次， 除去水 经过酸性离子交换树脂柱 得到无色粘稠状液体产物 I -1 (53 mg, 产率 開环试剂氢氧化钾的乙醇溶液 （ΙΟ mL) 溶解， 加热至 90°C TLC检测原料点消失， 减压除去乙醇 将固体用二氯甲烷和水溶解， 分 出有机层 水相鼡二氯甲烷 (2x5 mL) 萃取， 合并有机层 硫酸镁干燥， 过滤 除去溶 剂。 柱层析 （乙酸乙酯） 得到灰色粘稠状液体纯品 将所得纯品用甲醇 GO mL) 溶解， 加入 6 N 盐酸 （0.1 mL) 禾 B 0.1 eq. 10% Pd/C (20 mg) 氢气环境下进行催化还原反应过 夜， TLC检测原料点消失 茚三酮显色， 板面显示一明显产物点 (三氯甲烷： 甲醇 = 1 :1 加五滴氨水)， 点在板面呈现褐色 过滤， 除去溶剂 加入氨水中和， 除去水 再用氨 水中和一次，除去水经过酸性离子交换树脂柱得到无色粘稠状液体产物 I -3 (54 mg， 产 率 83%) 即可制备得到

其中， 式 （1-5至 1-8 )所示的化合物的制备方法分别与实施例 1制备 1-1至 1-4步 骤 1 ) 到步骤 10) 相同 仅将起始原料硝酮换成 II -2、 R构型甘油醛换成 S构型甘油醛 S-3即可。

其中 式 （1-9至 1-12) 所示的化合物的制备方法分别与实施例 1制备 1-1至 1-4 相同， 仅将起始原料硝酮换成 Π-3即可

其中， 式 （1-13至 1-16) 所示的化合物的制备方法分别与实施例 1制备 1-1至 1-4 的方法相同 仅将起始原料只是将起始原料硝酮换成 II -2即可。

-2-烷基)辛基) -5- (羟甲基)吡咯啉啶 -34-二醇， 反应流程如图 6所示

式 XI-5 式 I - 17 其中 式 （1-17) 所示的化合物的制备方法与实施例 1制备 1-1的方法相同， 仅将 起始原料 R构型甘油醛换成 S构型甘油醛 S-3即可

其中， 式 （1-18) 所示的化合物的制备方法与实施例 1制备 1-1的方法相同 仅将 起始原料硝酮换成 II -4即可。

1 ) 试验材料及来源

供试化合物： 本发明所提供的所有小构树 I和 J类生物碱衍生物

试验材料： 所有 4-硝基酚吡喃糖苷基质、 二糖和糖苷酶 （包括（X-葡萄糖苷酶、 β- 葡萄糖苷酶、 （X-半乳糖苷酶、 β-半乳糖苷酶、 （X-甘露糖苷酶、 β-甘露糖苷酶、 ct，ct-海藻糖 酶以及淀粉葡糖苷酶） 均购自 Sigma-Aldri_Ch

动力学研究在 37°C的 50 mM柠檬酸钠 /憐酸缓冲液中进行。根据基质的不同配制 的酶浓度为 0.1-0.5 mg/mL。 活性测试以 4-硝基酚吡喃糖苷为基质 在每种酶的最佳活 性 pH下进行测试。 将基质、 适当稀释嘚酶溶液和抑制剂 （小构树 I和 J类生物碱衍生 物）在 37°C下培养 30分钟 然后在紫外可见分光光度计中启动反应， 测定其对 400 nm 波长光的吸收

本发奣提供的小构树碱 I和 J及其类似物对表 1所列出的多种糖苷酶的抑制活性结 果如表 2和表 3所示： 表 1 糖苷酶编号 糖苷酶名称 糖苷酶来源

1 α-葡萄糖苷酶 酵母

2 α-葡萄糖苷酶 大米

3 α-葡萄糖苷酶 小鼠肠麦芽糖酶

4 β-葡萄糖苷酶 杏仁

5 β-葡萄糖苷酶 牛肝

6 (X-半乳糖苷酶 咖啡豆

7 β-半乳糖苷酶 牛肝

8 α-甘露糖苷酶 白凤豆

9 β-甘露糖苷酶 蜗牛

1 1 α，α-海藻糖苷酶 猪肾

12 淀粉葡萄糖苷酶 黑曲霉 13 α-L-鼠李糖苷酶 斜卧青霉 表 2

I -18 (14%) (14.6%) 163 (5.0%) 197 (47.3%) 在表 2和表 3中，括号（ ） 表示在 ΙΟΟΟ μΜ的抑制率，非括号部分表示 ₅ο (μΜ)。 以上生物测试结果表明， 本发明提供的式 1-1至式 1-18所示化合物对各种糖苷酶均 具有选择性的抑制活性