副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定--《中国预防兽医学报》2014年05期
副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定
【摘要】：为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)单克隆抗体(MAb),本研究采用H.parasuis 5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了一株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有H.parasuis标准菌株;免疫共沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别的蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬菌体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有"KTPAE-R"保守序列,对应于H.parasuis SH29755株和SH0165株的469位~475位的氨基酸残基。对OppA氨基酸序列比对结果表明H.parasuis与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1%~74.5%,本研究结果为进一步研究H.parasuis感染的病原学诊断建立了良好的基础。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：S852.61【正文快照】：
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属,NAD依赖型、革兰氏阴性细小杆菌,能够引起猪格拉泽氏病(Glasser's disease)[1],该病已经成为导致仔猪死亡率高的一个重要原因,给世界养猪业造成严重的经济损失[2-4]。目前H.parasuis的病原学诊断方法包括细菌分
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副猪嗜血杆菌的防治方案
作者：蒲昌滿
（四川南充郵編：637300）
& &格莱西氏是由一种称为副猪嗜血杆菌Haemophilusus
purasuis(HPS)的细菌引起的。这种细菌在环境中普遍存在，世界各地都有，甚至是健康的猪群中也能发现。对于采用无特定病原（SPF）或用药早起断奶（MEW）技术而没有副猪嗜血杆菌群，初次感染到这种细菌时后果相当严重。这种病菌在大部分猪群中都是地方性的。母猪分娩时为新生仔猪提供了很强的母源免疫，仔猪体内的母源抗体通常可以维持到8-12周龄。因此，这种病原对断奶阶段的仔猪影响不大或没有影响。随母源抗体水平下降，仔猪乃然受到母源抗体一定程度的保护，次时会出现亚临产感染，仔猪自身的免疫应答反应将被激活，从而保证以后得这种疾病。但是，如果仔猪在母源抗体完全消失之后才感染到这种病原，就会出现严重病情。这种情况通常出现在断奶之后的某一时期。
这种细菌也会作为激发的病原伴随其他主要病原混合感染，尤其是支原体肺炎（气喘病）。有时哺乳仔猪群也会发病，尤其是免疫水平较低的青年母猪产下的仔猪。
该病原攻击关节表面、肠系膜、肺、心和脑，会造成肺炎、心包感染、腹膜炎和胸膜炎。经呼吸系统传播可以成为副猪嗜血杆菌肺炎。
猪的多发性浆膜炎和关节炎曾一度被认为应激引起的仔猪散发性疾病，而如今证实是感染了副猪嗜血杆菌所致，它感染率高，死亡率高。部分猪场最初发病从断奶仔猪开始，慢慢蔓延至中猪甚至成年猪，有的猪场种猪都有感染甚至死亡。该病已成为全球范围内影响养猪业发展的典型细菌性疾病之一。
副猪嗜血杆菌一年四季均可感染，尤其感染2周龄到4周龄的仔猪和青年猪居多，但以3周龄到8周龄的仔猪和保育猪最易感，发病率达10%-50%,严重时死亡率高达50%。
副猪嗜血杆菌的特点
由于长期以来我们都把猪场疾病复杂化的主题化的主要病原，归结为蓝耳病和圆环病毒病，而把副猪嗜血杆菌病，仅仅当作是猪场一种常见的普通疾病，以致副猪嗜血杆菌病在猪场潜在的巨大影响，也被忽视了。与其他疾病相比，副猪嗜血杆菌病有以下特点：
2.1血清型多样。副猪嗜血杆菌分为15种血清型，号有20%以上的分离株不能分型。由于血清型多样，而且各血清之间交叉免疫力差，为副猪嗜血杆菌病的疫苗预防，带来很大的困难。
2.2耐药性产生快。可能是当前猪场所有致病菌中，耐药性产生速度最快的一种细菌。从我们多年防治猪副嗜血杆菌病的经过看，一种敏感的抗生素，使用半年后就开始耐药（需要加大剂量），一年后完全失效。2002年，敏感的药物是磺胺六甲与其他药物的组合，相应地，2003年是阿莫西林，2004年是氟苯尼考，2005年是先锋类。2006年开始，先锋类及其他药物的使用也很快失效，从而造成副嗜血杆菌的又以次大流行，而且症状和危害，比以前的任何一次都要严重。
2.3对猪场危害巨大。由于感染或潜伏感染副嗜血杆菌的病猪，容易造成免疫失败，副嗜血杆菌虽不是免疫性疾病，但猪场副嗜血杆菌流行严重时，免疫效果都很差，通过控制副嗜血杆菌后，由于群体性体温长期高热不退(大多数体温都在41.5度以上)，嗜病毒在体内被灭活，一些弱毒苗（如猪瘟、伪狂犬疫苗）在体内无法定植，因而造成免疫失败。此外，副嗜血杆菌造成循环衰竭，新陈代谢障碍，也可能是造成免疫应答能力降低的一个重要原因，从而导致其他疾病在猪场混合感染流行，使猪场疾病复杂化。
3、猪副嗜血杆菌的主要表现
普遍都认为，猪副嗜血杆菌病对猪场的影响，仅仅限于小猪，而对中大猪或公母猪的影响不大，但从经验看，猪副嗜血杆菌病，同样对中大猪及公母猪存在巨大影响。其他在猪场的表现，主要体现在下列几个方面：
小猪和中大猪。发病初期病猪高烧，且持续不退（从发病一直到死亡，病猪持续性高烧），体温40.5—42度（严重的可达43度），体表皮肤发红，严重者被烧成酱红色，个别甚至皮肤坏死脱落。病猪精神萎顿，食欲、饮欲废绝，畏寒，打堆而卧，昏睡不醒。呼吸急促，呈腹式呼吸。发病后期，病猪进行性消瘦，皮肤逐渐苍白，发青，变紫。关节肿大，被毛粗乱（典型的毛毛猪，如刺猬），耳沿发绀，全身淋巴结，特别是腹股沟淋巴结严重肿大。剖解这类病猪，几乎都有心包积水和纤维素渗出性肺炎特征性病理变化。严重者肺脏和胸腔粘液，心肌与心包粘连呈绒毛心。心源性水肿，在离心脏较远，血液循环较慢的后肢关节腔及关节腔附近皮下，多可见浅黄色冻胶状水肿液。
容易继发沙门氏菌。发生副嗜血杆菌病的病猪，很容易继发沙门氏杆菌，表现出又拉又喘的症状。用抗生素抑制住住副嗜血杆菌后，一旦停止抗生素治疗，60%以上的康复猪继发沙门氏杆菌。若不及时用药，病猪将逐渐消瘦，拉糠麸状带渣的黄色（后期暗红色至黑色）粪便，皮肤苍白，衰竭死亡。这类病猪大都可见腹股沟皮下密集的紫色出血斑点，有的腹股沟皮下浅表静脉扩张突出，颜色变蓝或发紫。解剖可以见到典型的沙门氏杆菌症状，从结肠到直肠，肠内膜遍布圆形，乳白色，火山样突出的溃疡结节，越往后段越密集。切开病灶，有脓小型分泌物排出。
公母猪的副嗜血杆菌病症状常被人忽视，或误以为是其他疾病。其实，以下所描述的症状，都与副嗜血杆菌有关，经过复式血杆菌疫苗免疫，并结合敏感抗生素治疗后，将很快消失。主要表现为流产，死胎、木乃伊增多，产后无奶。便秘粪便干硬，常见粪球表面附着一层粘液，严重者粘液带血。个别母猪产后高烧，呼吸急促，急性死亡。严重病例表现为神经症状，步态不稳，横冲直撞，最后全身抽搐，衰竭死亡特征性的表现是母猪产期延迟，有的超预产期7天以上。小猪初生体重小，产后精神状态差。产后小猪见最早3天发病，常整窝高烧，复式呼吸，呼吸急促，昏睡不醒，继而顽固性腹泻，后相继死亡（这类小猪单纯型抗生素治疗效果很差，但进行副嗜血杆菌免疫，并结合抗生素治疗，80%以上可以康复）。发病母猪解剖几乎都可以看到纤维素渗出性肺炎变化，心肌表面点状出血，偶见心包积水。妊娠后期母猪负担重，由于心肌炎症（或心包积水）及肺部炎症，发生循环障碍，脑部血液供应不足，缺氧、酸中毒，从而导致痉挛性抽搐。
猪副嗜血杆菌的防治
目前在猪场普遍存在，猪群发病时，往往是副猪嗜血杆菌与其他细菌、病毒的混合感染，特别是当其与蓝耳或主瘟等病毒性疾病混合感染时，使用药物治疗的效果不理想，甚至无效。因此，对临床上症状较严重的病猪坚决淘汰，在防治上应树立“防重于治、养重于防、养防相结合”的理念，采取环境的控制、管理、疫苗和药物的预防相结合的综合防控措施。
实践证明要全面控制猪群发生猪副嗜血杆菌病，在母猪分娩前后和猪群在断奶、转群、免疫接种前后对整个猪群用药是非常必要的，如果猪群零星出现并表现症状，也一定要早期群体性药物防治，可采取三针保健及在饲料中添加“新恩”等进行预防。
副嗜血杆菌病的药物防治方案：
（1）、免疫接种：由于副猪嗜血杆菌的血清型太多，用同一血清型制备的灭活苗，接种后不一定能提供对其他血清型的亚型。而使用自家组织灭活苗或自家灭活疫苗风险很大，如蓝耳病，散播猪瘟等。用进口苗有效，（副猪嗜血杆菌灭活疫苗z-1517），进行肌肉注射每头/1头份，规格50头份/瓶。勃林格殷格翰动物保健有限公司生产。母猪仔猪都进行接种，但不能安全避免感染。
（2）、药物预防
在发病前用药如下：
断奶后连续添加：
A:新恩1kg+赛富龙100g
B:氟诺奇800g+强力美300g
C：氟诺奇800g+硫酸粘杆菌素500g
主要成分：恩诺沙星&
生产厂家：浙江康德权科技有限公司。
赛富龙& 主要成分：
阿莫西林可溶性粉&
生产厂家：河北远征动物药业有限公司。
主要成分：氟苯尼考&&
生产厂家： 杭州爱力迈动物药业有限公司。
强力美主要成分：盐酸多西环素可溶性粉&
生产厂家：杭州爱力迈动物药业有限公司。
（3）、一旦发病，治愈的可能性小。可以选用以下药物对症治疗：
A:赛福龙+双黄连: 赛福龙10mg/kg+双黄连0。1-0.2mg/kg 混合肌肉注射
C:氟苯尼考+硫酸庆大霉素：氟苯尼考0.1mg/kg+硫酸庆大霉素0.2mg/kg混合肌肉注射.
硫酸庆大霉素+磺胺间加氧嘧啶钠：硫酸庆大霉素0.1mg/kg +磺胺间加氧嘧啶钠0.2mg/kg混合肌肉注射.
主要成分： 头孢赛呋钠&
生产厂家：河北远征动物药业有限公司。
主要成分：黄芩& 连翘&&
生产厂家：洛阳惠中药业有限公司。
氟苯尼考&&
主要成分; 氟苯尼考&
生产厂家：北京日泰兽药有限公司。&&&&
硫酸庆大霉素&
主要成分：硫酸庆大霉素&
河北远征动物药业有限公司。
磺胺间加氧嘧啶钠&
主要成分:磺胺间加氧嘧啶钠&
河北远征动物药业有限公司。
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来源：　　作者：王晨燕林裕胜车勇良周伦江邵良平;
副猪嗜血杆菌病诊断方法研究进展　 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪Glasser病的病原体,在仔猪群体中具有很高的发病率和病死率,临床表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。副猪嗜血杆菌的菌株呈多样性,且毒力各不相同,作为一种猪常见的上呼吸道定植菌,与机体的免疫机能保持着动态平衡的关系,当机体受到应激或感染时易发此病。随着规模化养猪业的发展,副猪嗜血杆菌的发病率呈现递增趋势,给养猪业带来了较大的经济损失。因此,有必要对副猪嗜血杆菌病的诊断方法做全面的了解。1病原分离培养副猪嗜血杆菌病的经典诊断方法是根据临床症状、剖检病变和细菌分离。副猪嗜血杆菌培养条件苛刻,生长过程需要额外的NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸),常规操作就是将临床病料接种到血琼脂平板进行纯化培养。副猪嗜血杆菌病的临床特征与猪链球菌病、支原体肺炎和传染性胸膜肺炎易出现混淆,因此采用细菌分离培养是一种比较可靠的诊断方法。副猪嗜血杆菌的唯一自然宿主是猪,该菌在自然条件下无法生存,主要通过易感动物与宿主间相互接触而感染此菌。正常情况下,从猪的上呼吸道中可以分离到副猪嗜血杆菌[1],但实际操作过程中常出现分离率低的情况。Blan(本文共计5页)　　　　　　　　　　
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