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四色流式细胞术检测造血干细胞移植后急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型及临床意义分析
摘　要：目的探讨流式细胞术（FCM）检测造血干细胞移植（HSCT）后急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）的白血病相关免疫表型（LAIP）及意义。方法采用以抗CD10／CD34／CD19／CD45为主的两组四色荧光标记抗体组合，对2005年1月至2007年1月北京大学人民医院44例急性B淋巴细胞白血病患者的133份骨髓标本进行多参数残留白血病细胞（MRD）检测。29例患者至少检测2次。结果CD45^-和CD45dim是移植后B-ALL患者最常见的LAIP，占36％，其他常见的LAIP表达依次为CD34st，CD10dim，CD10st。LAIP与发病不一致或两次检测不一致的6例患者中无一例复发，与LAIP阴性组复发率差异无统计学意义，余下的LAIP阳性组复发率（5／9）明显高于LAIP阴性组的复发率（1／14）（P=0．018）。6例复发患者中5例均在复发前1—2个月内检测到LAIP。5例患者发生Ⅱ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病，2例患者经过注射白介素-2后观察到LAIP由阳性转为阴性。1例复发患者在供者淋巴细胞输注（DLI）后获得完全缓解。结论与初诊B．ALL相似，CD45^-和CD45dim是移植后最常见的LAIP。移植后LAIP阳性受到移植物抗白血病和免疫治疗的影响可以转阴。移植后早期单次LAIP阳性不一定预测复发，连续检测2次LAIP阳性表达一致对预测复发更有意义。
优质期刊推荐流式细胞术干祖细胞分类计数在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中的应用,造..
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流式细胞术干祖细胞分类计数在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中的应用
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3秒自动关闭窗口联合多药耐药基因-1转染骨髓造血干细胞移植防治肝癌肝移植术后肿瘤复发的实验研究--《重庆医科大学》2009年博士论文
联合多药耐药基因-1转染骨髓造血干细胞移植防治肝癌肝移植术后肿瘤复发的实验研究
【摘要】：目的（1）通过研究Ad-EGFP-MDR1转染的骨髓造血细胞能否在体外有多药耐药基因1（multidrug resistance gene-1, mdr1）的功能性表达，是否能耐受大剂量霉酚酸脂（mycophenolate mofetil, MMF）的冲击，为下一步的体内实验提供参考和依据；（2）通过建立荷瘤的大鼠肝癌（liver cancer， LC）肝移植（liver transplantation，LT）急性排斥反应（acute rejection, AcR）动物模型，检测携带mdr1基因的受体骨髓造血细胞能否在体内有持续稳定的mdr1基因的功能性表达；（3）证实荷瘤的肝移植术后AcR大鼠，在接受携带mdr1基因的受体骨髓造血细胞移植后，能耐受短期大剂量MMF的冲击治疗，其肿瘤生长及AcR被明显遏制，为今后的临床工作提供实验参考。
方法（1）将重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染预行肝移植术的受体Brown Norway（BN）大鼠骨髓单个核细胞（bone marrowmononuclear cell，BMMC），通过台盼蓝拒染判断骨髓细胞存活情况；采用RT-PCR法和Western-blot法分别从基因及蛋白质水平检测mdr1基因在大鼠骨髓单个核细胞中的功能性表达；柔红霉素（daunorubicin，DAM）排出试验从功能水平检测mdr1基因在大鼠骨髓单个核细胞中的功能性表达情况；MTT法检测不同浓度MMF处理后转染的骨髓单个核细胞的存活情况。（2）于肝移植术前3天，分两次从中央尾静脉注入将转染mdr1基因3天的骨髓单个核细胞注入肝移植受体的BN大鼠体内；回输前受体大鼠接受压制死剂量的60Co-γ射线照射，腾空龛位；并同时分别以携空载及骨髓单个核细胞回输为对照组。（3）骨髓细胞回输后3天，按“二袖套法”建立以Lewis大鼠为供体，BN大鼠为受体的大鼠原位肝移植急性排斥反应动物模型；肝移植的同时，在左侧腋部皮下注入H22鼠源性肝癌细胞，建立荷瘤的大鼠肝移植急性排斥反应动物模型。（4）将受体BN大鼠随机分为未治疗组（未骨髓移植＋未化疗）、常规剂量化疗组（未骨髓移植＋常规剂量化疗）、超剂量化疗组（未骨髓移植＋超剂量化疗）、骨髓移植超剂量化疗组（未转染的骨髓移植＋超剂量化疗）、转染骨髓移植超剂量化疗组（转染骨髓移植＋超剂量化疗）。（5）采用RT-PCR法、Western-blot法和柔红霉素排出实验分别从基因、蛋白质和功能水平检测mdr1基因在骨髓移植后1月尚存活的受体大鼠骨髓细胞中的功能性表达。（6）于化疗前、化疗中1周，2周，3周及化疗结束后，取各组大鼠外周静脉血，计数红细胞（red blood cell, RBC）、白细胞（white blood cell, WBC）、和血小板（platelet，PLT），判断骨髓造血功能。（7）观察各组大鼠的存活情况，绘制生存曲线图；每周以游标卡尺计算肿瘤的最长径和最短径，计算瘤重。（8）于术后3、5和7天取各组存活大鼠，取静脉血及新鲜肝脏中叶组织标本，分析血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天冬氨酸转移酶（aspartate aminotransferase，AST）和总胆红素（total bilirubin，TBIL）行肝功检测；肝脏标本做HE染色后光镜下观察其病理改变，判断有无急性排斥反应；计算急性排斥反应指数(rejection activity index, RAI)，并以Banff标准判定急性排斥反应严重程度。
结果（1）流式细胞仪（flow cytometer，FCM）检测病毒转染率为30.14%，台盼蓝拒染检测细胞存活率为89.25%。（2）RT-PCR和Western-blot法检测到大鼠骨髓单个核细胞中转染的mdr1基因在基因、蛋白质水平都存在功能性表达，而未转染组没有mdr基因的表达；柔红霉素排出试验证实导入的mdr1基因表达产物P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）有药物外排泵功能，而未转染成功的细胞中出现大量柔红霉素聚集。（3）MTT法证实经过不同剂量的MMF处理后，转染mdr1基因的大鼠骨髓单个核细胞存活率没有明显差异（P0.05）。（4）携mdr基因的骨髓单个核细胞移植后1个月受体骨髓中仍有外源性mdr1基因的功能性表达，而其它各组大鼠未见其表达。（5）LEW到BN大鼠组合方式的原位肝移植（orthotopic liver transplantation，OLT），联合腋部皮下肿瘤细胞接种，能够建立确切稳定的荷瘤大鼠肝移植急性排斥反应模型。（6）转染骨髓移植超剂量化疗组的大鼠的平均生存时间（42.20±12.44天）远较其它各处理组长（P0.05），超剂量化疗组和骨髓移植超剂量化疗组的平均生存时间最短（8.60±5.72，10.20±4.28天）。（7）超剂量化疗组的大鼠肿瘤体积远较常规剂量化疗组和未治疗组大鼠的肿瘤较小，其差异有显著性（P0.05）。（8）化疗开始后，转染骨髓移植超剂量化疗组大鼠的外周静脉血血白细胞、红细胞和血小板的计数远较其它未转染化疗组高（P0.01），并且随着化疗的终止，有逐渐恢复正常的趋势。（9）各化疗药物组大鼠静脉血的ALT、AST和TBIL较未化疗组高（P0.05），超剂量化疗的ALT、AST和TBIL较常规剂量组高（P0.05）。（10）术后3天，各组RAI值无明显区别（P0.05），术后5天及7天，转染超剂量化疗组和常规剂量组均较未治疗组RAI值为低（P＜0.05）；相比之下，超剂量化疗组RAI值较B组降低（P＜0.05）；随着时间的延长，未治疗组RAI值呈进行性升高的趋势，而转染超剂量组RAI值呈进行性降低的趋势。
结论（1）体外研究发现采用携带目的基因的腺病毒载体转染体系，能成功将外源性mdr1基因转导入BN大鼠骨髓单个核细胞中，并存在mdr1基因的功能性表达；转染mdr1基因的大鼠骨髓单个核细胞能够在体外耐受大剂量乃至超大剂量的MMF。（2）程序性的骨髓移植法能成功的将转染mdr1基因的骨髓单个核细胞移植入BN大鼠；LEW到BN大鼠组合方式的原位肝移植，联合皮下肿瘤细胞接种，能够建立确切稳定的荷瘤大鼠急性排斥反应模型；骨髓单个核细胞移植后1个月受体骨髓中仍有外源性mdr1基因的功能性表达。（3）移植入荷瘤肝移植供体大鼠的mdr1基因的骨髓单个核细胞，能够保护骨髓造血功能，从而使受体能够耐受短期、超剂量的MMF冲击治疗，延长存活时间；短期、超剂量的MMF冲击治疗对大鼠肝移植术后肿瘤复发有明显的治疗效果，并能显著减轻受体大鼠肝移植术后的急性排斥反应。
【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2009【分类号】：R735.7【目录】：
英汉缩略语名词对照5-7摘要7-12ABSTRACT12-17前言17-20第一部分 多药耐药基因 1（MDR1）转染 BN 大鼠骨髓单个核细胞的体外研究20-41 前言20-21 1. 材料与方法21-31 2. 结果31-35 3. 讨论35-39 4. 结论39-41第二部分 MDR1 转染骨髓单个核细胞移植联合大剂量化疗防治 BN 大鼠肝癌肝移植后肿瘤复发的体内研究41-70 前言41-42 1. 材料与方法42-52 2. 结果52-62 3. 讨论62-69 4. 结论69-70全文总结70-71参考文献71-77附图77-84文献综述一84-92 参考文献90-92文献综述二92-104 参考文献100-104致谢104-105攻读学位期间发表的学术论文105
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京公网安备74号造血干细胞移植后流式细胞400多 是个什么情况？？？_百度知道
造血干细胞移植后流式细胞400多 是个什么情况？？？
2010年10月 发现白血病M2
2011年4月做了造血干细胞移植 供体是患者妹妹想得到怎样的帮助、主要症状等)、遗传病史患者信息：请问 10月10号做出检查 流式细胞有400多 是个情况 刚移植好后才16个曾经治疗情况及是否有过敏：女 42岁 浙江 杭州 病情描述(发病时间
表示不清楚，但是听过一个地方的肾病医院专门用的是干细胞治疗什么的。
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货号：人天105___4
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书名：临床造血干细胞移植
原价：98.00元
作者：吴德沛,孙爱宁
出版社：时代出版传媒股份有限公司，安徽科学技术出版社
出版日期：
装帧：精装
开本：16开
商品重量：0.4kg
《临床造血干细胞移植》分为基础篇、技术篇和临床篇，从造血调控的基础研究、免疫调节写起，冉转入临床使用，最后分述常见各类需要行造血干细胞移植疾病，力求方便参考，紧扣应用，体现技术进展。
上篇 基础篇第一章 造血干细胞的来源、发育和生物学特性第一节 正常造血系统的发生发育第二节 造血干细胞的生物学第三节 造血系统发生发育过程中基因表达的调控第四节 造血干细胞“可塑性”的争论第二章 造血调控第一节 造血的细胞因子调节第二节 造血微环境第三节 各系列造血细胞定向分化的相关基因第四节 与造血细胞的形成、发育和命运相关的基冈表达调控第五节 造血干细胞定向分化中的基因诱导转录第三章 造血干细胞移植免疫学_第一节 主要组织相容性抗原与HLA配型第二节 次要组织相容性抗原第三节免疫耐受第四节 移植物抗宿主病第五节 移植物抗肿瘤／白血病作用第六节 红细胞血型抗原第四章 全身放射治疗第一节 临床放射生物学第二节 全身放射治疗的实施第三节 全身放射治疗技术的质量保证(QA)／质量控制(QC)第四节 正常组织的反应与损伤第五章 造血及免疫重建第一节 造血重建第二节 免疫重建第六章 造血干细胞移植免疫抑制剂第一节 糖皮质激素第二节 抗代谢药第三节 T细胞抑制剂第四节 抗T细胞抗体第五节 其他药物第七章 造血干细胞与基因治疗第一节 基因转移第二节 目的基因的表达第三节 造血干细胞基因转染的临床应用第八章 异基因抗肿瘤疫苗策略第一节 肿瘤的免疫逃逸和免疫耐受第二节 肿瘤免疫诱导第三节 异基因造血干细胞移植中的抗肿瘤疫苗策略中篇 技术篇第九章 造血干细胞移植分类及适应证第一节 概述第二节 单倍型造血干细胞移植第三节 非亲缘供体造血干细胞移植第四节 非清髓性造血干细胞移植第十章 造血干细胞的来源第一节 外周血造血于细胞动员第二节 正常供体造血干细胞动员第三节 脐带血造血干细胞第四节 造血干细胞动员采集及保存第十一章 异基因造血干细胞移植第一节 HLA组织配型和供体的选择第二节 异基因造血干细胞移植前供、受体的选择和评估第三节 异基因造血干细胞移植的预处理方案选择第十二章 自体造血干细胞移植第一节 概述第二节 自体造血干细胞移植的预处理第三节 自体造血干细胞移植治疗恶性血液病第四节 自体造血干细胞移植治疗实体瘤第五节 自体造血干细胞移植在自身免疫性疾病中的应用第十三章 造血干细胞移植的护理第一节 造血干细胞移植前的各项准备第二节 预处理的护理第三节 造血干细胞输注的护理第四节 不良反应及并发症的护理第五节 饮食护理第六节 心理护理第十四章 营养及支持治疗第一节 营养支持治疗第二节 造血生长因子支持治疗第十五章 输血技术第一节 成分输血第二节 血小板无效输注第三节 ABO血型不合的造血干细胞移植输血第四节 ABO血型不合的allo-HSCT的并发症及预防第十六章 谴血干细胞移植合并感染第一节 细菌感染第二节 侵袭性真菌感染第三节 巨细胞病毒感染第十七章 肝静脉闭塞病第十八章 移植物抗宿主病第一节 急性移植物抗宿主病第二节 慢性移植物抗宿主病第三节 T细胞去除在移植物抗宿主病中的应用第十九章 异基因造血干细胞移植后嵌合体的检测第二十章 出血性膀胱炎第二十一章 移植相关肺部并发症第一节 感染性肺部并发症第二节 间质性肺炎第三节 非感染性肺部并发症第二十二章 神经系统、肌肉及骨骼并发症第一节 神经系统并发症第二节 肌肉组织并发症第三节 骨骼并发症第二十三章 移植相关出凝血异常第一节 血栓性微血管病第二节 导管与输注相关性血栓病变第三节 深静脉血栓第四节 肺栓塞第五节 其他动脉并发症第二十四章 移植晚期相关并发症第二十五章 微小残留病的检测第一节 概述第二节 荧光原位杂交技术(FISH)检测微小残留病第三节 应用PCR技术检测白血病的微小残留病第四节 流式细胞技术检测微小残留病第二十六章 造血干细胞移植后复发及治疗第一节 造血干细胞移植后复发第二节 造血干细胞移植后复发的治疗第二十七章 造血生长因子在造血干细胞移植中的应用第一节 G-CSF、GM-CSF与造血干细胞移植第二节 促红细胞生成素与造血干细胞移植第三节 血小板生长因子与造血干细胞移植第四节 其他细胞因子在造血干细胞移植中的作用下篇 临床篇第二十八章 成人急性白血病第一节 急性髓系白血病第二节 急性淋巴细胞白血病第二十九章 儿童急性淋巴细胞白血病第三十章 慢性白血病第一节 慢性粒细胞性白血病第二节 慢性淋巴细胞性白血病第三十一章 重型再生障碍性贫血第一节 重型再生障碍性贫血的综合治疗第二节 重型再生障碍性贫血的免疫抑制治疗第三节 异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血第三十二章 骨髓增生异常综合征第三十三章 多发性骨髓瘤第三十四章 造血干细胞移植治疗淋巴瘤第一节 造血干细胞移植治疗霍奇金淋巴瘤第二节 造血干细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤第三十五章 造血干细胞移植治疗实体瘤第一节 自体造血干细胞移植第二节 异基因造血干细胞移植第三十六章 造血干细胞移植治疗自身免疫病第一节 自身免疫病的发病机制第二节 自身免疫病的治疗机制第三节 不同类型的自身免疫病的造血干细胞移植第三十七章 其他疾病的造血干细胞移植治疗第一节 造血干细胞移植治疗重症联合免疫缺陷第二节 造血干细胞移植治疗血红蛋白病第三节 造血干细胞移植治疗遗传性骨髓衰竭综合征第四节 自体造血干细胞移植治疗儿童实体肿瘤第五节 造血干细胞移植治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症
临床工作中另外一些病症也有胸闷、气短、咳嗽，并伴有低氧血症等表现，这与IP的临床表现相似，需要加以鉴别： （一）成人呼吸窘迫综合征（ARDS） ARDS是指心源性以外的各种肺内外致病因素引起的肺泡一毛细血管炎症损伤为主的急性呼吸衰竭，属于急性肺损伤的严重阶段。ARDs的病因众多，如各种原因的休克、肺创伤、溺水、各种原因的感染、药物过量、代谢紊乱等。肺受损的早期数小时可无明显症状，随后表现为胸闷、气促，并逐渐加重，出现发绀、低氧血症。胸片两肺广泛浸润，甚至呈“白肺”表现。起病72小时后可见肺泡内血浆蛋白凝结与细胞碎片、纤维素混合形成透明膜改变。其预后与原发病、抢救措施时机、并发症及对治疗的反应等有关。感染性IP严重者可发生ARDS。 （二）肺水肿 肺水肿原因众多，由于某些原因（如HSCT前应用大剂量环磷酰胺预处理）最终导致肺血管外液体量过度增多甚至渗入肺泡，影响肺正常的呼吸功能即称之为肺水肿。临床表现为呼吸困难、咳嗽、咳白色或血性泡沫痰、发绀；两肺布满湿哕音，胸片示以肺门为中心的蝶状或片状模糊阴影。本病的预后与基础疾病、肺水肿的程度、有无并发症及治疗是否得当关系密切，个体差异很大。 （三）肺出血 肺出血是指由于感染、免疫、物理及化学因素等导致的肺泡内出血的一组疾病。有研究认为有吸烟病史、血小板减少、肾功能不全及补液过多是移植后发生肺出血的高危因素。HSCT后肺出血的发生绝大多数是由于感染及免疫损伤所致。移植后感染导致的IP（如CMV肺炎）同时可以伴有肺出血，两者可以同时存在。超大剂量的放化疗预处理也可以导致肺泡出血。有报道在自体HSCT后由于各种原因发生肺出血的患者达10％～20％。异基因造血干细胞移植后如果发生肺出血，应特别警惕有无隐匿的肺部曲霉菌感染存在。
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