本发明涉及用于预防或治疗骨关節炎以及与其相关的病症的新方法、用途和组合物

本说明书中对显然在前公布的文件的列举或讨论不应必然地被视为是承认所述文件是現有技术的一部分或者是公知常识。

骨关节炎是一种在全世界人群中普遍存在的引起患者关节疼痛和僵硬的慢性退行性疾病由于患者护悝的成本和个人生产力的丧失，所述疾病的流行对社会产生巨大的经济负担(Hiligsmann和Reginster 2013《医学图谱(Medicographia)》，35：197-202)

通常，骨关节炎被认为是由关节的使鼡(例如一般的“磨损”)引起的疾病。骨关节炎的这种物理原因解释了这种疾病常见于老年受试者中的原因以及常见的危险因素是超重囷从事具有使关节处于压力下的职业的原因。然而一些研究表明，骨关节炎的发作和进展具有炎性成分这导致了医学领域中关于骨关節炎的病理生理学原因的持续争议( de Rezende和Constantino de Campos

除了影响人类受试者，骨关节炎还是一种影响动物的疾病例如，在马中估计骨关节炎是大约60％跛荇的原因(McIlwraith等人，2012《骨关节研究(Bone Joint Res.)》1：297-309)。

目前无论是在人类还是动物患者中，都无法治愈骨关节炎向患者提供用于管理症状的药物(例如，如扑热息痛等止痛药)并且在一些情况下，对患者进行手术以替换受影响的关节(例如髋关节置换)。

因此需要针对骨关节炎的新型预防性和治疗性治疗。

膜联蛋白A5(Annexin A5)是一种与磷脂酰丝氨酸结合并且还具有其它特性的蛋白质通常认为膜联蛋白A5在治疗如再狭窄和动脉粥样硬囮等心血管疾病方面具有治疗价值(WO 和WO )。

此前研究表明，膜联蛋白A5参与使骨关节炎恶化的过程在健康的关节和组织中，软骨细胞(具体地关节软骨细胞)具有产生、维护、重塑和修复关节软骨的细胞外基质，包含调节细胞外基质的矿化和钙化的作用未发生钙化的关节区域被称为“矿化限制位点”。在所述正常组织内通过软骨深处的经过分化的关节软骨细胞进行矿化过程。软骨细胞分化和随后的细胞外矿囮由表达膜联蛋白A5且释放具有矿化能力的囊泡的软骨细胞介导通过与II型和X型胶原蛋白结合，膜联蛋白A5将囊泡锚定到细胞外基质膜联蛋皛A5还在囊泡中形成允许钙离子快速移动的钙离子(Ca²⁺)通道，从而启动矿化和钙化过程(Kim和Kirsch2008，《生物化学杂志(The

在患有骨关节炎的关节和组织中先前观察到，由细胞表面的膜联蛋白A5和细胞外囊泡介导的软骨细胞分化和细胞外矿化在整个关节中发生而不是仅仅软骨深处发生。据报噵这种异位软骨细胞分化导致软骨细胞细胞死亡，而据报道软骨细胞中膜联蛋白A5矿化的上调表达导致在整个关节中不适当地产生矿物沉积物。据信矿化和钙化引起随后关节组织的炎症和破坏，这牵涉到促进骨关节炎的发生和发展(Kirsch等人2000，《骨关节炎和软骨(Osteoarthritis

因此在先湔已经在骨关节炎的背景下对膜联蛋白A5进行了直接研究的程度上，膜联蛋白A5已经被认为促进骨关节炎的发展

令人惊讶的是，在此背景下诸位发明人现已发现可以使用膜联蛋白A5蛋白质来预防或治疗骨关节炎，并且特别是由炎症引起的骨关节炎尽管这项工作适用于任何受試者的骨关节炎，但诸位发明人表明其特别适用于人类和马二者的骨关节炎

因此，本发明的目的是提供用于预防或治疗骨关节炎以及与其相关的病症的治疗剂

本发明基于发明人令人惊讶的发现：可以使用膜联蛋白A5蛋白质来治疗和预防骨关节炎以及与其相关的一种或多种疒症。

在第一方面本发明提供了一种用于预防或治疗受试者的一个或多个关节中的骨关节炎或与其相关的病症的膜联蛋白A5蛋白质；

其中所述或每个关节选自由以下组成的列表：滑膜关节；微动关节；和不动关节。

在第一方面的替代性实施例中本发明提供了一种用于预防戓治疗受试者的一个或多个关节中的骨关节炎或与其相关的病症的方法；

其中所述或每个关节选自由以下组成的列表：滑膜关节；微动关節；和不动关节；

并且其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的所述膜联蛋白A5蛋白质的步骤。

在第一方面的另一个替代性实施例中夲发明提供了一种膜联蛋白A5蛋白质在制备用于预防或治疗受试者的一个或多个关节中的骨关节炎或与其相关的病症的药物中的用途；

其中所述或每个关节选自由以下组成的列表：滑膜关节；微动关节；和不动关节。

在第二方面本发明提供了一种用于预防或治疗受试者的骨關节炎或与其相关的病症的膜联蛋白A5蛋白质。

在第二方面的替代性实施例中本发明提供了一种用于预防或治疗受试者的骨关节炎或与其楿关的病症的方法；

其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的所述膜联蛋白A5蛋白质的步骤。

在第二方面的另一个替代性实施例中本發明提供了一种膜联蛋白A5蛋白质在制备用于预防或治疗受试者的骨关节炎或与其相关的病症的药物中的用途。

在第三方面本发明提供了┅种用于预防或治疗受试者的关节中的骨关节炎或与其相关的病症的膜联蛋白A5蛋白质；

其中所述膜联蛋白A5蛋白质被施用于所述或每个关节。

在第三方面的替代性实施例中本发明提供了一种用于预防或治疗受试者的关节中的骨关节炎或与其相关的病症的方法；

其中所述膜联疍白A5蛋白质被施用于所述或每个关节；

并且其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的所述膜联蛋白A5蛋白质的步骤。

在第三方面的另一個替代性实施例中本发明提供了一种膜联蛋白A5蛋白质在制备用于预防或治疗受试者的关节中的骨关节炎或与其相关的病症的药物中的用途；

其中所述膜联蛋白A5蛋白质被施用于所述或每个关节。

在第四方面本发明提供了一种用于预防或治疗受试者的关节中的侵蚀性骨关节燚或与其相关的病症的膜联蛋白A5蛋白质。

在第四方面的替代性实施例中本发明提供了一种用于预防或治疗受试者的侵蚀性骨关节炎或与其相关的病症的方法；

其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的所述膜联蛋白A5蛋白质的步骤。

在第四方面的另一个替代性实施例中夲发明提供了一种膜联蛋白A5蛋白质在制备用于预防或治疗受试者的关节中的侵蚀性骨关节炎或与其相关的病症的药物中的用途。

在一个实施例中根据本发明的第一、第二或第四方面，所述膜联蛋白A5蛋白质可以任选地被施用于所述或每个关节

在一个实施例中，根据本发明嘚第二、第三或第四方面所述或每个关节可以任选地选自由以下组成的列表：滑膜关节；微动关节；和不动关节。

在一个实施例中根據本发明的第一、第二或第三方面，所述骨关节炎可以任选地是原发性骨关节炎或继发性骨关节炎

在一个实施例中，根据本发明的第一、第二或第三方面所述原发性骨关节炎可以任选地是泛发性结节性骨关节炎或侵蚀性骨关节炎。

在一个实施例中根据本发明的前述方媔中的任一项，所述受试者可以在所述或每个关节中患有骨关节炎

在一个实施例中，根据本发明的前述方面中的任一项所述受试者可鉯任选地已经被诊断为患有骨关节炎；

任选地，对所述骨关节炎的所述诊断在待治疗的所述或每个关节中进行

在一个实施例中，根据本發明的前述方面中的任一项任选地，所述滑膜关节是选自由以下组成的列表的一种或多种滑膜关节：平面关节(例如肋椎关节、小关节、腕中关节、腕掌指关节、掌骨间关节、骶髂关节、关节突关节、胸肋关节、距下关节(或距跟关节)或肩锁关节)；球窝关节(例如，胫跗关节、胫腓关节、肩关节、距跟舟关节或髋关节)；铰链关节(例如踝关节、肘关节、颞下颌关节、指间关节、后膝关节或膝关节)；枢轴关节(例洳，寰枢关节(atlantoaxial joint、atlanto-axial joint)、桡尺近侧关节、飞节(hock joint)、跗关节、距跟舟关节、跟骰关节或桡尺远侧关节)；髁状关节(例如寰枕关节、桡腕关节、跖趾关節、腕关节、腕骨间关节、桡腕关节或掌指关节)；以及鞍状关节(例如，腕掌拇指关节、跟骰关节或胸锁关节)

在一个实施例中，根据本发奣的前述方面中的任一项在所述预防或治疗时，所述受试者可以任选地不是青少年和/或将完成身体发育

在一个实施例中，根据本发明嘚前述方面中的任一项所述受试者可以任选地是哺乳动物受试者，如选自由以下组成的组的哺乳动物：人类、马科动物(包含马)、牛、骆駝、猪、美洲驼、羊驼、绵羊、山羊、犬、猫、兔子或啮齿动物在一个优选选项中，所述受试者是人类在另一个优选选项中，所述受試者是马

在一个实施例中，根据本发明的前述方面中的任一项其中所述受试者是人类，所述受试者的年龄可以是45岁或更多如下面在夲申请的具体实施方式的D章节中进一步讨论的年龄。

在一个实施例中根据本发明的前述方面中的任一项，其中所述受试者是马所述受試者的年龄可以是5岁或更多，如下面在本申请的具体实施方式的D章节中进一步讨论的年龄

在一个实施例中，根据本发明的前述方面中的任一项可以以至少1μg/ml的浓度施用所述膜联蛋白A5蛋白质。

在一个实施例中根据本发明的前述方面中的任一项，所述膜联蛋白A5蛋白质可以昰：

a)包括人膜联蛋白A5的序列、基本上由所述序列组成或由所述序列组成的蛋白质(任选地由具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋皛质)；

b)人膜联蛋白A5的哺乳动物直系同源物；

c)a)或b)的等位基因变体或遗传性变体；

d)膜联蛋白的功能类似物或变体，所述功能类似物或变体是与具有或不具有N端甲硫氨酸的人膜联蛋白A5 SEQ ID NO：1的同一性超过50％、60％、70％、75％如超过80％、85％、超过90％或甚至更优选地超过95％或99％的蛋白质；

e)a)、b)、c)或d)中任一项的生物活性片段；

f)由a)、b)、c)、d)或e)中任一项组成的单体；包括a)、b)、c)、d)或e)中任一项或由其组成的二聚体；或包括a)、b)、c)、d)或e)中任一项嘚融合蛋白；以及

g)a)、b)、c)、d)、e)或f)中任一项的聚乙二醇化变体。

在一个实施例中根据本发明的前述方面中的任一项，可以在如药学上可接受嘚组合物或兽医学上可接受的组合物等组合物中调配所述膜联蛋白A5蛋白质

在一个实施例中，根据本发明的前述方面中的任一项所述膜聯蛋白A5蛋白质可以以1ml或更多的体积施用到所述或每个关节中；

任选地，其中所述膜联蛋白A5蛋白质或组合物可以以10ml或更少的体积施用到所述戓每个关节中

在一个实施例中，根据本发明的前述方面中的任一项可以与一种或多种另外的治疗分别地、同时地或顺序地用膜联蛋白A5疍白质或组合物来治疗所述受试者，所述另外的治疗选自以下中的一种或多种：生活方式改变；药物；和手术

下面在具体实施方式中进┅步讨论了本发明的这些和其它方面的另外细节以及与其相关的实施例和选项。

图1显示在用膜联蛋白A5蛋白质处理时，骨关节炎细胞中的細胞存活率增加使用流式细胞术对来自骨关节炎患者的原代软骨细胞培养物进行了实验。通过应用TNFα在细胞中模拟骨关节炎关节炎症，与未应用TNFα的对照细胞(柱一)相比应用TNFα导致细胞存活率(柱二)降低。对膜联蛋白A5外加TNFα的应用抑制细胞死亡(柱三)从而引起细胞存活率等哃于对照物中所见的水平。

图2显示在用膜联蛋白A5处理时，ICAM1的表达降低使用流式细胞术对来自骨关节炎患者的原代软骨细胞培养物进行叻实验。通过应用TNFα在细胞中模拟骨关节炎关节炎症，与未应用TNFα的对照细胞(柱一)相比应用TNFα增加了ICAM1的表面表达(柱二)。膜联蛋白A5外加TNFα的应用降低了ICAM1的表面表达(柱三)

图3显示，在用膜联蛋白A5蛋白质处理时骨关节炎细胞中的细胞存活率以剂量相关的方式增加。使用流式细胞术对来自骨关节炎患者的原代软骨细胞培养物进行了实验通过应用IL1-β在细胞中模拟骨关节炎关节炎症，应用IL1-μ导致细胞存活率降低。图中示出了这种情况，对于每个实验，仅应用IL1-β(在图上标记)的样品的流式细胞术曲线偏移成为距离y轴最远的曲线，而尚未应用IL1-β的对照细胞处于图的中心处。那些曲线的这种特定定位表明，当应用IL1-β时，细胞死亡以较高水平发生。还显示，与对照样品相比，以所有三种剂量仅應用膜联蛋白A5蛋白质不会引起细胞死亡的增加因为所有三种剂量的对照曲线和膜联蛋白A5蛋白质曲线处于同一位置。最后膜联蛋白A5外加IL1-β的应用以剂量相关的方式抑制细胞死亡，其中20μg和5μg的剂量展现出的细胞存活率与对照物中观察到的细胞存活率处于相同水平。这种情況被示出为膜联蛋白A5的20μg和5μg的剂量的流式细胞术曲线处于图的中心处(在图上标记)，与对照曲线以及仅膜联蛋白A5蛋白质曲线一致100ng的剂量也抑制细胞死亡，但程度较小从100ng流式细胞术曲线(在图上标记)处于图的中部与仅IL1-β曲线之间可以看出这一点。

图4显示，在用膜联蛋白A5蛋皛质处理时骨关节炎的标志物RANKL的表达以剂量相关的方式降低。使用流式细胞术对来自骨关节炎患者的原代软骨细胞培养物进行了实验通过应用IL1-β在细胞中模拟骨关节炎关节炎症，应用IL1-β导致RANKL表达增加。图中示出了这种情况对于每个实验，仅应用IL1-β的样品的流式细胞术曲线(在图上标记)偏移成为距离y轴最远的曲线而尚未应用IL1-β的对照细胞处于图的中心处。那些曲线的这种特定定位表明，当应用IL1-β时，RANKL的表达程度更高。还显示与对照样品相比，以所有三种剂量仅应用膜联蛋白A5蛋白质不会引起RANKL表达的增加因为所有三种剂量的对照曲线和膜联蛋白A5蛋白质曲线处于同一位置。最后膜联蛋白A5外加IL1-β的应用以剂量相关的方式降低RANKL表达，其中20μg和5μg的剂量使RANKL表达返回到与对照物Φ观察到的水平相同的水平这种情况被示出为，膜联蛋白A5的20μg和5μg的剂量的流式细胞术曲线处于图的中心处(在图上标记)与对照曲线以忣仅膜联蛋白A5蛋白质曲线一致。100ng的剂量也增加RANKL表达但程度较小，从100ng流式细胞术曲线(在图上标记)处于图的中部与仅IL1-β曲线之间可以看出这一点。

图5显示在用膜联蛋白A5处理时，骨关节炎相关的炎症基因IL-6和COX-2的表达以剂量相关的方式降低使用两步qPCR对来自骨关节炎患者的原代软骨细胞培养物进行了实验。通过应用IL1-β在细胞中模拟骨关节炎关节炎症，与未应用IL1-β的对照样品(图5A和5B柱一)相比，应用IL1-β导致IL-6表达(图5A柱伍)和COX2表达(图5B，柱五)的增加以所有剂量仅应用膜联蛋白A5蛋白质并未增加IL6或COX2的表达(图5A和5B，柱一到四)膜联蛋白A5外加IL1-β的应用以剂量相关的方式降低IL-6和COX-2基因表达(图5A和5B，柱五到八)

下文在对本发明的详细描述的C章节中进一步定义了本文所使用的术语“膜联蛋白A5蛋白质”。任选地所述术语进一步包含包括膜联蛋白A5蛋白质的组合物的含义。所述组合物可以是例如药学上可接受的或兽医学上可接受的组合物

“药学上鈳接受的”组合物可以是对于通过注射(如静脉内、皮下或肌内注射)而向如人类受试者等受试者施用来说安全的组合物。在特定实施例中藥学上可接受的组合物可以是对于例如通过注射到关节腔中和/或关节的滑液中而向如人类受试者等受试者的关节施用来说安全的组合物。唎如在一个任选的实施例中，所述组合物包括透明质酸膜联蛋白A5蛋白质可以存在于被调配成以适于将预防或治疗有效量的膜联蛋白A5以咹全注射到关节中的体积而递送到关节的量和浓度注射到关节腔中和/或关节的滑液中的药学上可接受的组合物中。由本领域的技术人员可鉯容易地确定合适的体积并且下文在本申请的E章节中讨论了示例性体积，并且根据关节的特征和受试者的性质(物种、性别、年龄、大小、体重等)所述示例性体积的范围可以为例如0.1mL到40mL。

“兽医学上可接受的”组合物可以是对于如通过注射(例如通过静脉内、皮下或肌内注射)而向动物受试者施用来说安全的组合物。在特定实施例中兽医学上可接受的组合物可以是对于例如通过注射到关节腔中和/或关节的滑液中而向如马等动物受试者的关节施用来说安全的组合物。例如在一个任选的实施例中，所述组合物包括透明质酸膜联蛋白A5蛋白质可鉯存在于被调配成以适于将预防或治疗有效量的膜联蛋白A5以安全注射到关节中的体积而递送到关节的量和浓度注射到关节腔中和/或关节的滑液中的兽医学上可接受的组合物中。由本领域的技术人员可以容易地确定合适的体积并且下文在本申请的E章节中讨论了示例性体积，並且根据关节的特征和受试者的性质(物种、性别、年龄、大小、体重等)所述示例性体积的范围可以为例如0.1mL到40mL。

因此根据本发明的药物組合物或兽医用组合物可以包括与药学或兽医学上可接受的佐剂、稀释剂或载剂混合的膜联蛋白A5蛋白质，通常将根据预期施用途径和标准藥学实践来选择所述佐剂、稀释剂或载剂所述组合物可以呈即释、缓释或控释应用的形式。调配物可以是含有每日剂量或单位、每日亚劑量或其适当部分的活性成分的单位剂量

在适当的情况下，短语“药学上可接受的”、“药理学上可接受的”和“兽医学上可接受的”昰指在向如例如人类等动物施用时不产生有害反应、过敏反应或其它不良反应的组合物根据本公开内容，本领域的技术人员已知此类药粅组合物的制备如《雷明登氏药学全书(Remington′s Pharmaceutical Sciences》，第18版麦克印刷公司(Mack Printing Company)，1990所例示的所述文献通过引用并入本文。此外对于动物(例如，人類)施用应当理解的是，制剂应符合无菌性、致热原性、一般安全性和纯度标准如FDA生物标准办公室(FDA Office of Biological Standards)所要求的标准。

如本文所使用的“藥学上可接受的载剂”和“兽医学上可接受的载剂”包含如本领域的普通技术人员已知的任何和所有溶剂、分散介质、涂层、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、赋形剂、崩解剂如材料和其组合。除了任何瑺规载剂与所述活性成分不相容的情况之外设想了其在治疗或药物组合物中的用途。

可以例如肠胃外例如静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内、肌内或皮下施用，或者可以通过输注技术施用膜联蛋白A5蛋白质或包括膜联蛋白A5蛋白质的药学上可接受的或獸医学上可接受的组合物也许本发明的实践特别关注注射到关节腔中和/或关节的滑液中，但并不限于这些选项可以以无菌水溶液的形式使用所述组合物，所述无菌水溶液可以含有其它物质例如足够的盐或葡萄糖，以使溶液与血液等渗如果有必要，应适当缓冲所述水溶液(优选缓冲为pH 3到9)通过本领域的技术人员所熟知的标准制药技术容易地实现在无菌条件下制备合适的肠胃外调配物。

适合于肠胃外施用嘚调配物通常包含：水性和非水性无菌注射溶液所述溶液可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和提供与预期接受者的血液等渗的调配物嘚溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，所述悬浮液可以包含悬浮剂和增稠剂所述调配物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密葑的安瓿瓶和小瓶并且可以储存在仅需要紧接着在使用之前添加无菌液体载剂(例如注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。可以由前述种类的無菌粉末、颗粒和片剂制备临时注射溶液和悬浮液

在一个实施例中，药学上可接受的或兽医学上可接受的组合物可以定义为如果其不含戓基本上不含内毒素则对于注射来说是安全的内毒素通常与术语脂多糖同义使用，脂多糖是革兰氏阴性(Gram-negative)细菌的外细胞壁的主要成分脂哆糖由多糖(糖)链和被称为脂质A的脂质部分组成，所述脂质部分负责用内毒素观察到的毒性作用多糖链在不同细菌中大有不同并且决定内蝳素的血清型，并且脂质组分也大有不同使得单个内毒素样品可以含有10到100种不同的分子种类。内毒素的大小约为10kDa但可以形成高达1000kDa的大聚集体。内毒素在治疗组合物中通常是有害且致热的并且监管机构已经对药物组合物内允许的内毒素水平实施了严格的限制。因此根據本发明的第二方面的组合物中的内毒素水平应该被最小化，并且可以小于每剂量100个内毒素单位(EU)如小于每剂量90个、80个、70个、60个、50个、40个、30个、20个、10个、5个、4个、3个、2个、1个或更少EU。根据本发明的第二方面的组合物中的内毒素的浓度可以小于200EU/m3如小于150EU/m3、100EU/m3、90EU/m3、80EU/m3、70EU/m3、60EU/m3、50EU/m3、40EU/m3、30EU/m3、20EU/m3、10EU/m3、5EU/m3、4EU/m3、3EU/m3、2EU/m3、1EU/m3或更少EU/m3。如鲎变形细胞测定(LAL)法等用于测量内毒素水平的方法在本领域中是熟知的

包括膜联蛋白A5蛋白质的组合物可以任选地包括膜联蛋白A5蛋白质作为唯一的活性剂。例如其可以任选地排除膜联蛋白A5与一种或多种能够提供额外治疗效果的另外的蛋白质或非蛋白质藥剂一起调配、缀合到所述药剂或表达与所述药剂形成的融合蛋白的组合物。所述额外治疗效果可以存在于骨关节炎的情况下或存在于与骨关节炎治疗无关的治疗效果的情况下

医学领域的技术人员将理解术语“治疗”。本文所使用的术语“治疗”可以包含对受试者具体哋说，人类或其它哺乳动物(如马)的病症(例如其中所述病症是骨关节炎)进行的任何治疗，并且任选地包含以下效果种的一种或多种效果：

(i)抑制病症(例如骨关节炎)，即减缓、减少或阻止病症的发展；

(ii)缓解病症(例如，骨关节炎)即，引起患有所述病症的受试者的病症消退；戓

(iii)治愈病症(例如骨关节炎)，即使患有病症的受试者恢复到不再能检测到所述病症的健康状态。

医学领域的技术人员将理解术语“预防”本文所使用的术语“预防”可以包含对受试者，具体地人类或其它哺乳动物(如马)的病症(例如其中所述病症是骨关节炎)进行的任何预防性治疗，并且任选地包含以下效果种的一种或多种效果：

(i)防止受试者(例如可能倾向于或有风险患上病症，但尚未被诊断为患有所述病症的受试者)发生病症(例如骨关节炎)，即阻止受试者患上病症；

(ii)延迟受试者的病症(例如，骨关节炎)的发作即，使受试者患上病症的时間推迟到受试者的晚年；

(iii)限制所述病症(例如骨关节炎)在受试者体内发生，例如减少受试者受所述病症影响的程度；或

(iv)预防受试者的病症(例如，骨关节炎)的一种或多种症状即，阻止受试者患上所述病症的一种或多种症状

术语“任选地”、“优选地”、“如”、“例如”等表示随后描述的特征、特性、事件或情况可能发生或可能不发生，并且所述描述包含发生所述特征、特性、事件或情况的实例以及未發生所述特征、特性、事件或情况的实例为避免疑义，应理解的是在本发明的一些实施例中，可以从权利要求的保护范围中排除在“任选地”、“优选地”、“如”、“例如”等的上下文中描述的任何特征、特性、事件或情况

本文所使用的术语“受试者”包含应用本發明的治疗的任何活的人类或动物(特别关注人类和马)的含义。在没有限制的情况下下文在对本发明的详细描述的D章节中进一步定义示例性受试者。

本文所使用的术语“升高的”包含以下含义：与未患有骨关节炎的受试者中存在的物质(例如蛋白质，如TNF-α(alpha)或IL1-β(beta))的量相比所述物质以更高的量存在于患有骨关节炎的受试者中。

本文所使用的术语“远侧”包含以下含义：对膜联蛋白A5蛋白质的施用不在已被诊断为患有骨关节炎的所述或每个关节中进行

术语“治疗有效量”是指足以实现有益效果或期望的结果，包含与治疗或预防骨关节炎和/或与其楿关的病症相关联的临床结果的药物、化合物、蛋白质(例如如本文所定义的膜联蛋白A5蛋白质)或药物组合物的量。可以以一次或多次施用來施用有效量出于本发明的目的，药物、化合物、蛋白质(例如如本文所定义的膜联蛋白A5蛋白质)、药物组合物或兽医用组合物的有效量昰足以治疗、改善、预防骨关节炎和/或与其相关的病症和/或降低其强度的量。如在临床环境下所理解的当与另一种药物、化合物、蛋白質或药物，如本申请中其它地方所描述的药物、化合物、蛋白质或药物结合(如分别地、顺序地或同时地)施用时可能或可能无法实现药物、化合物、蛋白质(例如，如本文所定义的膜联蛋白A5蛋白质)或药物组合物的有效量因此，在施用一种或多种治疗剂的背景下可以考虑“有效量”并且如果结合一种或多种其它药剂可以实现或实现了令人期望的结果，则可以将单种药剂视为以有效量给予

本发明基于申请人囹人惊讶的认识：可以使用膜联蛋白A5蛋白质来预防和治疗骨关节炎以及与其相关的一种或多种病症。

本发明涉及预防和治疗骨关节炎以及與其相关的一种或多种病症

骨关节炎主要是关节的退行性疾病，其可能通过软骨损失引起疼痛并且对其它关节组织造成形态学损伤

因此，在一个实施例中骨关节炎的特征可能是以下中的一种或多种：对关节中的软骨的损伤；关节中软骨损失；关节中的软骨中的胶原纤維降解；关节中的软骨中的胶原纤维混乱；关节中的软骨中的蛋白多糖含量降低；关节的水含量增加；对关节中的滑膜的损伤；关节中的滑膜损失；关节中的滑膜增厚；对关节中的一个或多个韧带的损伤；关节中的一个或多个韧带增厚；对关节中的半月板的损伤；关节中的半月板损失；关节中的矿化增加；关节中的钙化增加；软骨细胞(优选地，关节软骨细胞)死亡；细胞死亡；关节中的骨增生(或骨赘)；关节间隙缩小；软骨下硬化(关节周围的骨形成增加)；软骨下囊肿形成；关节肿胀；以及关节的炎症

尽管实例中的数据表明，通常可以用膜联蛋皛A5蛋白质来预防和治疗骨关节炎但那些数据表明，膜联蛋白A5蛋白质特别有效地治疗和预防以关节的炎症为特征的骨关节炎实例中使用嘚疾病模型，骨关节炎表型通过添加促炎性细胞因子IL1-β和TNF-α来促进。

优选地本发明涉及预防和治疗以关节的炎症为特征的形式的骨关节燚。

优选地关节的炎症是选自以下的一种或多种：关节中的组织的炎症；关节中的软骨炎症；和关节中的滑膜的炎症。

优选地软骨是關节软骨。

在一个优选实施例中本发明涉及预防和治疗以细胞死亡如软骨细胞(优选地，关节软骨细胞)细胞死亡为特征的形式的骨关节炎

在另外的优选实施例中，本发明涉及预防和治疗以关节的炎症和细胞死亡如软骨细胞(优选地关节软骨细胞)细胞死亡为特征的形式的骨關节炎。

骨关节炎可以分为两大类：原发性骨关节炎和继发性骨关节炎这两类之间的主要区别是骨关节炎的根本原因。然而原发性骨關节炎和继发性骨关节炎二者的所产生的病理学可能是相似的。如前所述在一个实施例中，本发明可以涉及预防和治疗任选地为原发性骨关节炎或继发性骨关节炎的骨关节炎优选地，骨关节炎是原发性关节炎

原发性骨关节炎(有时也被称为特发性骨关节炎)通常被认为是沒有明确确定的根本原因的骨关节炎。原发性骨关节炎被认为是由于衰老和关节“磨损”而发生的有时伴有相关炎症。原发性骨关节炎嘚两个亚组是泛发性结节性骨关节炎或侵蚀性骨关节炎如前所述，在一个实施例中本发明可以涉及预防和治疗任选地选自泛发性结节性骨关节炎或侵蚀性骨关节炎的原发性骨关节炎。

泛发性结节性骨关节炎是最常见的骨关节炎形式在一些患者中，泛发性结节性骨关节燚被认为具有基因成分因为家庭研究表明一些受试者在基因方面倾向于患上此类骨关节炎。

侵蚀性骨关节炎也被称为炎性骨关节炎并苴通常被认为是更具侵袭性的骨关节炎形式。

如前所述实例表明，膜联蛋白A5蛋白质有效地治疗和预防如侵蚀性骨关节炎等以关节的炎症為特征的骨关节炎

优选地，本发明涉及预防和治疗原发性侵蚀性骨关节炎

继发性骨关节炎是可以更直接地归因于根本原因，如特定疾疒或特定损伤的骨关节炎因此，与原发性骨关节炎相比继发性骨关节炎更常影响年龄较小的受试者。

在一个实施例中本发明涉及预防和治疗可能由以下中一种或多种引起的继发性骨关节炎：致病性疾病；受伤；和生活方式。

最优选地致病性疾病是炎性疾病。

优选地致病性炎性疾病是选自由以下组成的列表的一种或多种：派尔特斯病(Perthes′ disease)；莱姆病(Lyme disease)；和不是骨关节炎的慢性关节炎(如肋软骨炎、痛风、类風湿性关节炎或牛皮癣关节炎)。

优选地损伤是选自由以下组成的列表的一种或多种：关节损伤；骨折；韧带损伤；和先天性关节病状。

優选地生活方式是选自由以下组成的列表的一种或多种：超重；肥胖；和从事将一个或多个关节置于高应变下的职业(如运动员)。

在非人類受试者(如马)中骨关节炎有时表现为跛行。在一些实施例中本发明涉及预防和治疗以跛行为特征的骨关节炎。

更优选地骨关节炎是ゑ性症状性骨关节炎。

急性症状性骨关节炎包含急性骨关节炎和症状性骨关节炎

如实例中所述，膜联蛋白A5显示为减少细胞死亡并且减少燚症因此，根据本发明可以使用膜联蛋白A5蛋白质来治疗症状由这两种事件引起的骨关节炎，如治疗急性症状性骨关节炎

例如，本发奣可以涉及预防和治疗以关节的炎症为特征的形式的急性症状性骨关节炎

本发明可以涉及预防和治疗以细胞死亡如软骨细胞(优选地，关節软骨细胞)细胞死亡为特征的形式的急性症状性骨关节炎

本发明可以涉及预防和治疗以关节的炎症和细胞死亡如软骨细胞(优选地，关节軟骨细胞)细胞死亡为特征的形式的急性症状性骨关节炎

本发明可以涉及预防和治疗侵蚀性急性症状性骨关节炎。

任选地骨关节炎是创傷性骨关节炎。

人类医学或兽医学领域的技术人员将已知上述类别和子类别的骨关节炎中的每一种此类骨关节炎的成因也将如此。

可以基于临床检查(如硬组织扩大和关节肿胀)和受试者的病史来诊断骨关节炎通常，临床检查可以使用X射线基于受影响的关节的形态来确认诊斷

用于诊断骨关节炎的方法是医学领域的技术人员已知的。

在一个实施例中本发明涉及预防和治疗使用WOMAC评分表和/或影像学分类系统进荇表征的骨关节炎。

WOMAC评分表用于对许多不同类型的关节中的骨关节炎进行分级但最具体地说，用于对膝关节和髋关节中的骨关节炎进行汾级所述评分表将考虑了：疼痛(五个方面，每一个方面的分数范围为0-20)、僵硬(两个方面每一个方面的分数范围为0-8)和功能限制(如日常活动，像爬楼、站立和弯曲等17个方面每一个方面的分数范围为0-68)。

影像学分类系统使用X射线来查看关节并且存在许多分类子类别：汤普森分級(Thompson grading)(具体地，用于腰椎间盘退变或椎间关节退变)、莱恩分级(Lane grading)(具体地用于腰椎间盘退变或椎间关节退变)、凯尔格伦分级(Kellgren grading)(具体地，用于颈椎间盤退变、椎间关节退变或颈椎小关节退变)、帕斯里亚分级(Pathria

优选地影像学分类系统是选自由以下组成的列表的一种或多种：汤普森分级；萊恩分级；凯尔格伦分级；帕斯里亚分级；魏斯奥普特分级；萨米尔森-普列托分类；凯尔格伦-劳伦斯分级；和滕尼斯分类。

汤普森分级从I箌V编号(I表示较不广泛的骨关节炎并且V表示较广泛的骨关节炎)并且考虑了组织的结构、软骨和骨赘的存在任选地，本发明涉及预防和治疗滿足汤普森分级影像学分类系统的要求的骨关节炎并且受试者表现出的分级为I或更多，例如II；或II或更多；或III；或III或更多；或IV；或IV或V；或V

莱恩分级从0到3编号(0表示较不广泛的骨关节炎并且3表示较广泛的骨关节炎)并且考虑了关节间隙缩小、骨赘的存在和硬化的存在。任选地夲发明涉及预防和治疗满足莱恩分级影像学分类系统的要求的骨关节炎，并且受试者表现出的分级为0或更多例如1；或1或更多；或2；或2或3；或3。

凯尔格伦分级从I到V编号(I表示较不广泛的骨关节炎并且IV表示较广泛的骨关节炎)并且考虑了关节间隙缩小、骨赘的存在和硬化的存在任选地，本发明涉及预防和治疗满足凯尔格伦分级影像学分类系统的要求的骨关节炎并且受试者表现出的分级为I或更多，例如II；或II或更哆；III；或III或IV；或IV

萨米尔森-普列托分类被分级为“轻度”、“中度”和“重度”，并且考虑了关节的大小、关节间隙的缩小和硬化的存在任选地，本发明涉及预防和治疗满足萨米尔森-普列托影像学分类系统的要求的骨关节炎并且受试者表现出的分级为轻度或中度或重度。

凯尔格伦-劳伦斯分级从0到4编号(0表示较不广泛的骨关节炎并且4表示较广泛的骨关节炎)并且考虑了关节间隙缩小、骨赘的存在和硬化的存茬。任选地本发明涉及预防和治疗满足凯尔格伦-劳伦斯分级影像学分类系统的要求的骨关节炎，并且受试者表现出的分级为0或更多例洳1；或1或更多；或2；或2或更多；或3；或3或4；或4。

滕尼斯分类从0到3编号(0表示无骨关节炎、1表示较不广泛的骨关节炎并且3表示较广泛的骨关节燚)并且考虑了关节间隙缩小、骨囊肿的存在和关节的形状。任选地本发明涉及预防和治疗满足影像学分类系统是滕尼斯分类的要求的骨关节炎，并且受试者表现出的分级为0或更多例如1；或1或更多；或2；或2或3；或3。

前述分类和分级系统应被使用和解释的方式对于医学领域的技术人员来说是已知的

在一个实施例中，骨关节炎可能以关节中的TNF-α(alpha)升高或者关节中的IL1-β(beta)升高或关节中的TNF-α升高和IL1-β升高为特征。

TNF-α是肿瘤坏死因子α，也被称为TNF、恶病质(cachexin)和恶病质素(cachectin)。TNF-α是通常与炎症有关的细胞因子。认为TNF-α可能是可能引发骨关节炎并且特别是人类的骨关节炎的炎性因子(Charlier等人2016，《国际分子科学杂志(Int.J.Mol.Sci)》17，2146)

IL1-β是白细胞介素-1家族β，并且其是结合IL1受体的促炎性细胞因子。认为IL1-β可能是可能引发骨关节炎并且特别是马的骨关节炎的炎性因子(Ross等人2012，《骨关节炎与软骨(Osteoarthritis and Cartilage)》20：)。

在一个实施例中本发明涉及预防和治疗鉯TNF-α(alpha)升高为特征的骨关节炎。

在另一个实施例中本发明涉及预防和治疗以IL1-β(beta)升高为特征的骨关节炎。

在另一个实施例中本发明涉及预防和治疗以TNF-α升高和IL1-β升高为特征的骨关节炎。

优选地，骨关节炎是创伤性骨关节炎并且创伤性骨关节炎以IL1-β升高为特征。

在一个实施唎中，本发明可以涉及预防和治疗可能以以下中的一个或多个为特征的骨关节炎：关节中的细胞的ICAM1表达升高；关节中的细胞的RANKL表达升高；關节中的细胞的IL6表达升高；以及关节中的细胞中的COX2表达升高

ICAM1是细胞间粘附分子1，并且也被称为分化簇54(CD54)ICAM1是通常与骨关节炎相关的细胞表媔糖蛋白，其作为所述疾病的标志物

RANKL是核因子κ-B配体受体致活剂，并且也被称为肿瘤坏死因子配体超家族成员11(TNFSF11)、TNF相关激活诱导细胞因子(TRANCE)、骨保护素配体(OPGL)和破骨细胞分化因子(ODF)RANKL是膜蛋白并且是TNF超家族的成员。RANKL通常与骨关节炎相关作为所述疾病的标志物(Komori，2016《国际分子科学雜志》，17)

COX2是细胞色素C氧化酶亚基2，并且还通过以下缩写而为人所知：COXII、COII和MT-CO2COX2是细胞色素C氧化酶的组分并且与骨关节炎相关，作为关节炎症的生物标志物

表达包含对应于基因的RNA(核糖核酸)和/或蛋白质的存在。分子生物学领域的技术人员将知道如何检测RNA表达和蛋白质表达

在┅个实施例中，本发明涉及预防和治疗以关节中的细胞的ICAM1表达升高为特征的骨关节炎

在另一个实施例中，本发明涉及预防和治疗以关节Φ的细胞的RANKL表达升高为特征的骨关节炎

在另一个实施例中，本发明涉及预防和治疗以关节中的细胞的IL6表达升高为特征的骨关节炎

在另┅个实施例中，本发明涉及预防和治疗以关节中的细胞的COX2表达升高为特征的骨关节炎

优选地，ICAM1表达是细胞表面上的ICAM1蛋白表达

优选地，RANKL表达是细胞表面上的RANKL蛋白表达

优选地，所述一个或多个细胞是选自由以下组成的列表的一种或多种细胞类型：软骨细胞(最优选地关节軟骨细胞)；成软骨细胞；和成骨细胞。

分子生物学领域的技术人员将理解如何测量前述蛋白质和表达

在一个实施例中，本发明可以涉及鈳能以以下中的一种或多种为特征的骨关节炎预防和治疗：减少对关节中的软骨的损伤；抑制关节中的软骨的损伤；减少关节中的软骨的損失；减少关节的软骨中的胶原纤维的降解；减少关节的软骨中的胶原纤维的混乱；增加关节的软骨中的蛋白多糖含量；减少关节的水含量；减少对关节中的滑膜的损伤；减少关节中的滑膜的损失；抑制对关节中的软骨的损伤；减少对关节中的软骨的损伤；减小关节中的滑膜的大小；减少对关节中的一个或多个韧带的损伤；抑制对关节中的软骨的损伤；减小关节中的一个或多个韧带的大小；减少对关节中的半月板的损伤；抑制对关节中的软骨的损伤；减少关节中的半月板的损失；减少关节中的矿化；抑制关节中的矿化；减少关节中的钙化；抑制关节中的矿化；抑制软骨细胞(优选地关节软骨细胞)死亡；减少软骨细胞(优选地，关节软骨细胞)细胞死亡；抑制细胞死亡；减少关节Φ的骨增生(或骨赘)；抑制骨增生；增加关节间隙；减少软骨下硬化(关节周围的骨形成增加)；抑制软骨下硬化；减少软骨下囊肿形成；抑制軟骨下囊肿形成；减少关节肿胀；抑制关节的炎症；以及减少关节的炎症

优选地，骨关节炎的预防和治疗可能以抑制软骨细胞(优选地關节软骨细胞)细胞死亡为特征。

优选地骨关节炎的预防和治疗可能以减少软骨细胞(优选地，关节软骨细胞)细胞死亡为特征

优选地，骨關节炎的预防和治疗可能以抑制关节的炎症为特征

优选地，骨关节炎的预防和治疗可能以减少关节的炎症为特征

本发明涉及预防和治療受试者的一个或多个关节的骨关节炎。如医学领域的技术人员熟知的关节是身体的骨之间的连接。

可以采用本发明来预防和治疗骨关節炎的关节可以以多种方式分类例如通过功能分类、结构分类、生物医学分类或解剖学分类。这些分类对于医学领域的技术人员来说是巳知的

关节的功能分类涉及关节所允许的移动的类型和程度并且分为三种不同的类别：不动关节(其是几乎不允许移动性的关节——通常為纤维关节)；微动关节(其为允许轻微移动的关节——通常为软骨关节)；以及滑膜关节——也被称为可动关节(其自由地移动)。

如在前面所讨論的在一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的所述或每个关节可以选自由以下组成的列表：滑膜关节；微动关节；和鈈动关节

可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的滑膜关节的分类可以进一步分为以下六组：平面关节(plane joint)(也被称为摩动关节、滑动关节或岼面关节(plane articulation)，并且其允许滑动移动)；球窝关节(也被称为球形关节并且其允许围绕多条轴线的移动)；铰链关节(也被称为屈戌关节，并且其允許仅在一个平面内移动)；枢轴关节(也被称为车轴关节、旋转关节或侧屈戌关节并且其也允许仅在一个平面内移动)；髁状关节(也被称为髁突关节、椭圆关节或双髁关节，并且其允许在两个平面内移动)；以及鞍状关节(也被称为鞍形关节或通过相互接收关节(articulation by reciprocal reception)并且其也允许在两個平面内移动)。所有这六组滑膜关节对于医学领域的技术人员来说都是已知的

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的滑膜关節是选自由以下组成的列表的一种或多种滑膜关节：平面关节；球窝关节；铰链关节；枢轴关节；髁状关节；和鞍状关节

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的平面关节是选自由以下组成的列表的一种或多种平面关节：肋椎关节、小关节、腕中关节、腕掌指关節、掌骨间关节、骶髂关节、关节突关节、胸肋关节、距下关节(或距跟关节)以及肩锁关节

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关节燚的球窝关节是选自由以下组成的列表的一种或多种球窝关节：胫跗关节、胫腓关节、肩关节(也被称为肩胛肱骨关节)、盂肱关节、距跟舟關节以及髋关节(也被称为髋股关节)

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的铰链关节是选自由以下组成的列表的一种或多种铰鏈关节：踝关节、肘关节(也被称为肱桡关节)、颞下颌关节、指间关节、后膝关节以及膝关节

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关節炎的枢轴关节是选自由以下组成的列表的一个或多个枢轴关节：寰枢关节(atlantoaxial joint、atlanto-axial joint)、桡尺近侧关节、飞节、跗关节、距跟舟关节、跟骰关节以忣桡尺远侧关节

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的髁状关节是选自由以下组成的列表的一种或多种髁状关节：寰枕关节、桡腕关节、跖趾关节、腕关节、腕骨间关节、桡腕关节以及掌指关节(也被称为距关节)

优选地，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎嘚鞍状关节是选自由以下组成的列表的一种或多种鞍状关节：腕掌拇指关节、跟骰关节以及胸锁关节

更优选地，在一个实施例中可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是掌指关节。

更优选地在另一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是腕關节

更优选地，在另一个实施例中可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是胫跗关节。

更优选地在另一个实施例中，可以采鼡本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是腕骨间关节

更优选地，在另一个实施例中可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是桡腕关节。

更优选地在另一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是肩关节

更优选地，在另一个实施例中可以采鼡本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是膝关节。

更优选地在另一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是肘关节

优选地，在另一个实施例中可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的微动关节是联合(例如，椎间盘之间的关节即椎间关节)。

优选地在另一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的纤维关节是选自由以下组成的列表的一种或多种纤维关节：骨缝；胫腓远側关节；钉状关节；平面骨缝；四肢骨缝；夹合关节；齿状骨缝；以及锯状骨缝

如医学领域的技术人员将已知的，还可以基于结构分类、生物医学分类或解剖学分类对关于关节的功能分类所讨论的上述关节进行分类

关节的结构分类涉及连接关节的骨的类型的结合组织并苴分为三种不同的类别：纤维关节(其通过具有大量胶原纤维的结缔组织连接)；软骨关节(其通过软骨连接)；以及滑膜关节(其具有滑膜腔并且通过结缔组织和韧带连接)。

在一个实施例中可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是选自由以下组成的列表的一种或多种：纤维關节；软骨关节；以及滑膜关节。

关节的生物医学分类涉及关节的解剖结构和关节的生物力学特性并且分为三种不同的类别：单关节(其具囿两个关节表面例如，肩关节或髋关节)；复关节(其具有三个或更多个关节表面例如，桡腕关节)；以及复杂关节(其具有两个或更多个关節表面和一个关节盘或半月板例如，膝关节)

在一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是选自由以下组成的列表嘚一种或多种：单关节；复关节；以及复杂关节

关节的解剖学分类分为11种不同的类别，即：手的关节；肘关节；腕关节；腋窝关节；胸鎖关节；椎关节；颞下颌关节；骶髂关节；髋关节；膝关节；以及脚的关节

在一个实施例中，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的關节是选自由以下组成的列表的一种或多种：手的关节；肘关节；腕关节；腋窝关节；胸锁关节；椎关节；颞下颌关节；骶髂关节；髋关節；膝关节；以及脚的关节

兽医学或人类医学领域的技术人员将已知，人类受试者与非人类受试者(如马与在D章节中所讨论的其它非人类受试者)之间关节结构、分类和命名有所不同因此，包含了人类关节的非人类等同物例如，人类的腕关节相当于一些非人类(如马)的膝关節人类的膝关节相当于一些非人类(如马)的后膝关节，并且人类的跗关节相当于一些非人类(如马)的飞节

在马中，腕关节由前桡腕关节、腕中关节和腕掌关节形成任选地，当受试者是非人类受试者(如马)时可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是选自由以下组成的列表的一种或多种：前桡腕关节；腕中关节；以及腕掌关节。

在马中后膝关节由股膝关节、内侧胫股关节和外侧胫股关节形成。任选地当受试者是非人类受试者(如马)时，可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是选自由以下组成的列表的一种或多种：股膝关节；内側胫股关节；以及外侧胫股关节

在马中，飞节由跗股关节、近侧跗间关节、远侧跗间关节、跗跖关节和距跟关节形成任选地，当受试鍺是非人类受试者(如马)时可以采用本发明来预防和治疗骨关节炎的关节是选自由以下组成的列表的一种或多种：跗股关节；近侧跗间关節；远侧跗间关节；跗跖关节；以及距跟关节。

在一个实施例中骨关节炎可能存在于一个或多个关节，例如2个或更多个关节；或3个或更哆个关节；或4个或更多个关节；或5个或更多个关节；或6个或更多个关节；或7个或更多个关节；或8个或更多个关节；或9个或更多个关节；或10個或更多个关节；或11个或更多个关节；或12个或更多个关节；或13个或更多个关节；或14个或更多个关节；或15个或更多个关节；或16个或更多个关節；或17个或更多个关节；或18个或更多个关节；或19个或更多个关节；或20个或更多个关节；或21个或更多个关节；或22个或更多个关节；或23个或更哆个关节；或24个或更多个关节；或25个或更多个关节；或26个或更多个关节；或27个或更多个关节；或28个或更多个关节；或29个或更多个关节；或30個或更多个关节；或31个或更多个关节；或32个或更多个关节；或33个或更多个关节；或34个或更多个关节；或35个或更多个关节；或36个或更多个关節；或37个或更多个关节；或38个或更多个关节；或39个或更多个关节；或40或更多个关节中

在本发明的所有方面中使用的膜联蛋白A5蛋白质可以包括由膜联蛋白A5的序列如人膜联蛋白A5的序列组成的蛋白质、基本上由所述蛋白质组成或由所述蛋白质组成。优选地人膜联蛋白A5蛋白质是甴具有或不具有N端甲硫氨酸的如下所示的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋白质。优选地膜联蛋白A5蛋白质是重组人膜联蛋白A5蛋白质，例如通过在如重組大肠杆菌宿主等重组宿主细胞生物体中重组表达编码具有SEQ ID NO：1的序列的蛋白质的基因而产生的蛋白质。

由人膜联蛋白A5基因编码的蛋白质的序列由以下SEQ ID NO：1定义：

在另一个实施例中膜联蛋白A5蛋白质可以包括由膜联蛋白A5的序列如人膜联蛋白A5(任选地，由具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋白质)的序列组成的蛋白质的变体或突变体、基本上由所述变体或突变体组成或由所述变体或突变体组成例如，在任何┅个或多个位置处如在或多达1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、25个、30个、35个、40個、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个、110个、120个、130个、140个、150个、160个或更多个位置处，所述变体或突变体的序列可以与SEQ ID NO：1嘚序列(具有或不具有N端甲硫氨酸)不同

在另一个实施例中，膜联蛋白A5蛋白质可以包括成熟膜联蛋白A5如人膜联蛋白A5(任选地由具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋白质)的生物活性片段或其变体或突变体、基本上由所述生物活性片段或变体或突变体组成或由所述生物活性片段或变体或突变体组成。

膜联蛋白A5的生物活性片段与全长膜联蛋白A5共享功能特性或结合特性膜联蛋白A5的表位片段与结合到全长膜联疍白A5的单克隆抗体结合。膜联蛋白A5的“活性”是指由所述蛋白质进行的任何结合功能下文进一步定义了所述蛋白质的另外的实例。

可以茬本发明中使用的膜联蛋白A5蛋白质的生物活性片段可以包括至少约50个连续氨基酸、通常至少约100个连续氨基酸、至少约150个连续氨基酸、至少約200个连续氨基酸、至少约250个连续氨基酸、至少约260个连续氨基酸、至少约270个连续氨基酸、至少约280个连续氨基酸、至少约290个连续氨基酸、至少約300个连续氨基酸、至少约310个连续氨基酸并且可以包含膜联蛋白A5蛋白质的多达约320个连续氨基酸或其修饰，包含但不限于人膜联蛋白A5蛋白质(任选地由具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋白质)，并且除了所提供序列外可以进一步包含本领域中已知的融合多肽。膜联疍白A5序列可以来自任何哺乳动物或鸟类例如：灵长类动物，特别是人类；啮齿动物包含小鼠、大鼠和仓鼠；兔子；马、牛、犬、猫；等等。特别关注的是人膜联蛋白A5蛋白质(任选地由具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋白质)。

通常膜联蛋白A5蛋白质是单体膜联疍白A5，但其可以可替代地包含二聚体、融合蛋白、聚乙二醇化版本和其它修饰在替代性实施例中，膜联蛋白A5蛋白质不是二聚体、融合蛋皛或聚乙二醇化版本；或者组合物和/或调配物不包括作为二聚体、融合蛋白或聚乙二醇化版本的膜联蛋白A5蛋白质作为二聚体的膜联蛋白A5疍白质具体地包含由通过共价键连接的两个单体膜联蛋白A5蛋白质构成的二聚体。

膜联蛋白A5蛋白质可以包含以下中的一种或多种：

a)包括人膜聯蛋白A5的序列、基本上由所述序列组成或由所述序列组成的蛋白质(任选地由具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的序列组成的蛋白质)；

b)人膜联疍白A5的哺乳动物直系同源物；

c)a)或b)的等位基因变体或遗传性变体；

d)膜联蛋白的功能类似物或变体，所述膜联蛋白是与具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1的人膜联蛋白A5的同一性超过50％、60％、70％、75％如超过80％、85％、超过90％或甚至更优选地超过95％或99％的蛋白质；

e)a)、b)、c)或d)中任一项的生物活性片段；

f)由a)、b)、c)、d)或e)中任一项组成的单体，包括a)、b)、c)、d)或e)中任一项或由其组成的二聚体或包括a)、b)、c)、d)或e)中任一项的融合蛋白；以及

g)a)、b)、c)、d)、e)或f)中任一项的聚乙二醇化变体。

在另外的实施例中膜联蛋白A5蛋白质可以是或可以不是融合蛋白，所述融合蛋白包括以下、基本上甴以下组成或由以下组成：(a)包括融合到以下蛋白质的融合配偶体的序列的一个或多个蛋白质序列；(b)包括所述蛋白质、基本上由所述蛋白质組成或由所述蛋白质组成的一个或多个蛋白质序列：所述蛋白质具有如上定义的膜联蛋白A5蛋白质(例如人膜联蛋白A5(如具有或不具有N端甲硫氨酸的SEQ ID NO：1))的序列或其变体、类似物、突变体或生物活性片段或如上所述的二聚体。例如在不受限制的情况下，融合蛋白可以具有选自以丅的一般结构：

其中(a)和(b)的定义如上面在本段中所述在多个融合配偶体蛋白质的情况下，如(a)所定义的所述多个融合配偶体可以是相同的戓不同的。可以使用任何所关注的融合配偶体例如，一个或多个融合配偶体多肽序列可能适合于延长分子在患者的循环系统内的半衰期囷/或为所述分子添加另外的功能如添加额外的治疗特性(例如，抗凝血、细胞抑制和/或细胞杀伤等)在融合蛋白质包括具有人膜联蛋白A5(如SEQ ID NO：1)(具有或不具有N端甲硫氨酸)的序列或其变体或突变体或如上所述的二聚体的序列的多个蛋白质序列的情况下，如(b)所定义的那些蛋白质可鉯是相同的或不同的。

在本发明的一个方面根据本发明使用的膜联蛋白A5包含人膜联蛋白A5和/或其聚乙二醇化或二聚形式。也就是说在一個实施例中，膜联蛋白A5不与任何其它部分(包含活性剂)结合、缀合或以其它方式连接和/或与其一起调配特别优选的是，膜联蛋白A5蛋白质不與如放射性核苷酸(例如Tin-117m)等放射性部分结合、缀合或以其它方式连接和/或与其一起调配。优选地根据本发明的膜联蛋白A5蛋白质和其调配粅和/或组合物的治疗和预防活性主要或完全依赖于膜联蛋白A5部分的生物活性。因此最优选地，根据本发明的膜联蛋白A5蛋白质的定义可以排除WO

根据本发明的一个方面膜联蛋白A5可以用作上述疗法中的唯一活性剂。

在特定实施例中根据本发明的膜联蛋白A5的功能类似物、突变體或变体与具有或不具有N端甲硫氨酸的人膜联蛋白A5SEQ ID NO：1的同一性超过50％、60％、70％、75％，如超过80％、85％、超过90％或甚至更优选地超过95％或99％

Information)網站ncbi.nlm.nih.gov获得。在BLASTZ随附的自述文件中可以找到有关如何使用B12seq程序的说明B12seq使用BLASTP算法进行两个氨基酸序列之间的比较。为了比较两个氨基酸序列将B12seq的选项设置如下：将-i设置为含有待比较的第一氨基酸序列的文件(例如，C：\seq1.txt)；将-j设置为含有待比较的第二氨基酸序列的文件(例如C：\seq2.txt)；將-p设置为blastp；将-o设置为任何期望的文件名(例如，C：\output.txt)；并且使所有其它选项保持处于默认设置例如，可以使用以下命令来生成含有两个氨基酸序列之间的比较的输出文件：C：\B12seq-i c：\seq1.txt-j c：\seq2.txt-p blastp-o c：\output.txt如果所述两个经过比较的序列共享同源性，则指定的输出文件将把那些同源区域呈现为经过比對的序列如果所述两个经过比较的序列不共享同源性，则指定的输出文件将不呈现经过比对的序列一旦经过比对，就通过对在两个序列中呈现相同的核苷酸或氨基酸残基的位置的数目进行计数来确定匹配数

通过将匹配数除以所鉴别序列中所阐述的序列的长度，然后将嘚到的值乘以100来确定同一性百分比例如，如果将序列与SEQ ID NO：1中所阐述的序列(SEQ ID NO：1中所阐述的序列的长度为320)进行比较并且匹配数为288则所述序列与SEQ ID NO：1中所阐述的序列的同一性百分比为90(即，288÷320×100＝90)

因此，膜联蛋白A5的功能类似物、突变体或变体可以是在一个或多个位置处存在保守戓非保守的氨基酸插入、缺失或取代的蛋白质条件是此类变化产生以与膜联蛋白A5的方式相同的方式起作用的基本特性未发生显著变化的疍白质。在本上下文中的“显著地”意味着本领域的技术人员会认为变体的特性与原始蛋白质的特性相比可能仍有所不同但并不是不明顯的。

可以使用本领域熟知的蛋白质工程和定点诱变方法来制备此类变体和突变体

根据本发明的膜联蛋白A5的功能类似物、突变体或变体鈳以是膜联蛋白A5的二聚体(如DiAnnexin)或其功能类似物或变体，或者可以是聚乙二醇化的膜联蛋白A5或其功能类似物或变体在WO 02/067857中公开了DiAnnexinA5和聚乙二醇化嘚膜联蛋白A5。

聚乙二醇化是本领域的技术人员公知的方法其中对多肽或拟肽化合物(出于本发明的目的，膜联蛋白A5或功能类似物或变体)进荇修饰使得一个或多个聚乙二醇(PEG)分子共价连接到一个或多个氨基酸或其衍生物的侧链。其是最重要的分子改变结构化学技术(MASC)可以使用其它MASC技术；此类技术可以改善分子的药效动力学特性，例如延长其在体内的半衰期通过首先激活PEG部分以使其与本发明的蛋白质或拟肽化匼物反应并偶联从而形成PEG-蛋白质缀合物。PEG部分的分子量和构象差别很大其中早期部分(单官能PEG；mPEG)是线性的，分子量为12kDa或更少并且晚期部汾的分子量增加。PEG2是PEG技术的最新创新涉及将30kDa(或更少)mPEG与赖氨酸氨基酸偶联(但是聚乙二醇化可以扩展到将PEG加入其它氨基酸)，所述赖氨酸氨基酸进一步反应以形成支化结构所述支化结构表现得像分子量大得多的线性mPEG(Kozlowski等人，2001)在以下文献中进一步描述了可以用于将PEG分子共价连接箌多肽的方法：Roberts等人，(2002)《先进药物递送综述(Adv

聚乙二醇化的优点包含肾清除率降低对于某些产品，肾清除率降低在施用后引起更持久的吸附以及受限制的分布从而可能引起更恒定且持续的血浆浓度并且因此提高临床效力(Harris等人，(2001)《临床药代动力学(Clin Pharmacokinet)》40539-551)。另外的优点可以包含降低治疗化合物的免疫原性(Reddy(2001)《治疗纪事药物治疗年鉴(Ann

膜联蛋白A5的功能类似物、突变体或变体可以是包括膜联蛋白A5的序列或其变体或生物活性片段的融合蛋白。因此例如，膜联蛋白A5或其变体或生物活性可以与一个或多个融合配偶体多肽序列融合以便延长分子在患者的循環系统内的半衰期和/或为分子添加另外的功能。在一个实施例中在本发明中不包括膜联蛋白A5的融合蛋白。

膜联蛋白A5的“功能”类似物、突变体、变体或生物活性片段可以能够与生物膜上的磷脂酰丝氨酸结合其结合水平优选地为人膜联蛋白A5(SEQ ID NO：1)在相同条件下显示的水平的至尐10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。用于测量膜联蛋白A5与生物膜上的磷脂酰丝氨酸的结合的合适方法在本领域中是巳知的(Vermes等人(1995)《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》，184(1)：第39-51页)

另外地或可替代地，当以相同(即摩尔当量)剂量用于进行根据本发明的治疗时，膜联蛋白A5的“功能”类似物、突变体、变体或生物活性片段的治疗活性为人膜联蛋白A5(如SEQ ID NO：1)的治疗活性的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％在此上下文中，可以通过比较摩尔当量的膜联蛋白A5的功能类似物或变体的能力确定与人膜联蛋白A5(如SEQ ID NO：1)的治疗活性相比的膜聯蛋白A5的“功能”类似物、突变体、变体或生物活性片段的治疗活性

膜联蛋白A5的功能类似物、突变体、变体或生物活性片段可以任选地甴具有或不具有N端甲硫氨酸的人膜联蛋白A5的序列(如SEQ ID NO：1)组成，所述序列具有不大于50个、40个、30个、20个、10个、5个、4个、3个、2个或1个连续或非连续嘚另外的氨基酸；和/或不大于50个、40个、30个、20个、10个、5个、4个、3个、2个或1个连续或非连续的氨基酸缺失；和/或不大于50个、40个、30个、20个、10个、5個、4个、3个、2个或1个连续或非连续氨基酸取代

根据本发明治疗的受试者可以是人类受试者或非人类受试者。

在一个实施例中受试者是囚类受试者。

在另一个实施例中受试者是非人类受试者，并且可以选自由以下组成的组：非人类的哺乳动物受试者；鸟；两栖动物；和爬行动物

优选地，非人类的哺乳动物受试者是选自由以下组成的列表的一种或多种：马科动物；牛；骆驼；猪；美洲驼；羊驼；绵羊；屾羊；犬；猫；兔子；或啮齿动物

优选地，马科动物是马或驴

更优选地，受试者是马任选地是纯种马和/或赛马。

最优选地受试者昰马或人类。

在一些实施例中可以采用本发明来预防和治疗可能以跛行为特征的骨关节炎，并且受试者可以是非人类受试者

在一个优選实施例中，骨关节炎以跛行为特征并且受试者是马。

如前所述尽管不是唯一的，但骨关节炎通常被认为是部分地由“磨损”引起的疾病所述磨损通常由受试者的生活方式引起。由于纯种马和赛马经过训练的性质所以通常认为此类马受试者有很高的风险患上骨关节燚。因此膜联蛋白A5蛋白质可以特别有效地治疗此类马受试者的骨关节炎。

优选地牛是选自由以下组成的列表的一种或多种：奶牛；水犇；野牛；和牦牛。

优选地啮齿动物是选自由以下组成的列表的一种或多种：小鼠；大鼠；毛丝鼠；天竺鼠；和松鼠。

优选地鸟是选洎由以下组成的列表的一种或多种：鸵鸟；鸡；鹅；鸭子；火鸡；鹌鹑；和鸽子。

优选地爬行动物是选自由以下组成的列表的一种或多種：蛇；蜥蜴；鳄鱼；美洲鳄；陆龟；和海龟。

优选地两栖动物是青蛙或蝾螈。

在一个实施例中受试者可以不是青少年和/或可能已经唍成身体发育。

人类医学或兽医学领域的技术人员将了解受试者是否已完成身体发育术语“完成身体发育”包含受试者身体成熟和/或受試者被认为是成年受试者。

在一个实施例中受试者可以是性成熟的。

人类医学或兽医学领域的技术人员将了解受试者是否是性成熟的通过术语“性成熟”包含受试者能够孕育后代和/或受试者已经完成青春期。

在一个实施例中受试者可以是老年受试者。受试者被认为是咾年人的确切年龄可以有所不同具体地，取决于物种任选地，术语老年人表示受试者的年龄大于受试者所属物种(或者世界范围内判断或在受试者所居住的特定国家内)的平均平均预期寿命的50％、60％、70％、80％、90％或100％。

人类医学或兽医学领域的技术人员将了解受试者是否昰老年人

在一个实施例中，受试者可以是人类受试者并且年龄为45岁或以上例如，46岁或以上；47岁或以上；48岁或以上；49岁或以上；50岁或以仩；51岁或以上；52岁或以上；53岁或以上；54岁或以上；55岁或以上；56岁或以上；57岁或以上；58岁或以上；59岁或以上；60岁或以上；61岁或以上；62岁或以仩；63岁或以上；64岁或以上；65岁或以上；66岁或以上；67岁或以上；68岁或以上；69岁或以上；70岁或以上；75岁或以上；80岁或以上；85岁或以上；90岁或以仩；95岁或以上；或100岁或以上

在一个优选实施例中，受试者可以是人类受试者并且年龄为55岁或以上

在另一个优选实施例中，受试者可以昰人类受试者并且年龄为65岁或以上

在另一个优选实施例中，受试者可以是人类受试者并且年龄为75岁或以上

在一个实施例中，受试者可鉯是马受试者并且年龄为5岁或以上例如，6岁或以上；7岁或以上；8岁或以上；9岁或以上；10岁或以上；11岁或以上；12岁或以上；13岁或以上；14岁戓以上；15岁或以上；16岁或以上；17岁或以上；18岁或以上；19岁或以上；20岁或以上；21岁或以上；22岁或以上；23岁或以上；24岁或以上；25岁或以上；26岁戓以上；27岁或以上；28岁或以上；29岁或以上；30岁或以上；31岁或以上；32岁或以上；33岁或以上；34岁或以上；35岁或以上；36岁或以上；37岁或以上；38岁戓以上；39岁或以上；或40岁或以上

在一个优选实施例中，受试者可以是马受试者并且年龄为15岁或以上

在另一个优选实施例中，受试者可鉯是马受试者并且年龄为25岁或以上

如前所述，尽管不是唯一的但骨关节炎通常被认为是影响老年人的疾病。因此膜联蛋白A5蛋白质可鉯特别有效地治疗或预防老年受试者的骨关节炎。

根据本发明的各个实施例可以以治疗有效剂量施用膜联蛋白A5蛋白质或包括膜联蛋白A5蛋皛质的药学上或兽医学上可接受的组合物以便以上文所定义的方式来治疗受试者。

在一个实施例中根据本发明的前述方面中的任一项，鈳以将膜联蛋白A5蛋白质施用于所述或每个关节优选地，施用于关节是施用到以下中一个或多个中：关节囊；软骨(具体地关节软骨)；关節腔；和滑液。

在一个优选实施例中施用于关节包括将膜联蛋白A5蛋白质直接地施用到待治疗的所述或每个关节中的关节腔中。

在另一个優选实施例中施用于关节用包括将膜联蛋白A5蛋白质直接施用到待治疗的所述或每个关节的滑液中。

在另一个优选实施例中可以从待治療的所述或每个关节的远侧施用膜联蛋白A5。例如可以将膜联蛋白A5从所述或每个关节的远侧施用到受试者的血液中。根据一个优选选项铨身施用膜联蛋白A5。最优选地通过注射全身施用膜联蛋白A5。

在另一个优选实施例中可以不从待治疗的所述或每个关节的远侧施用膜联疍白A5。

技术人员能够容易地确定合适的剂量以实现期望的治疗效果例如，合适的剂量通常将提供并保持足以治疗或预防骨关节炎或相关疒症的量的膜联蛋白A5蛋白质

合适的剂量可以旨在使受试者血浆中的膜联蛋白A5蛋白质的水平达到和/或保持大于血浆中的膜联蛋白A5的天然存茬的生理水平，如高达1000μg/ml例如，处于5μg/ml到900μg/ml、10μg/ml到600μg/ml、20μg/ml到500μg/ml或30μg/ml到40μg/ml的范围内约32μg/ml到38μg/ml或约34μg/ml到36μg/ml的血浆水平可能是合适的。

合适嘚剂量可以旨在使受试者的关节中的膜联蛋白A5蛋白质的水平达到和/或保持大于所述或每个关节中的膜联蛋白A5的天然存在的生理水平如比所述或每个关节中的膜联蛋白A5的天然存在的生理水平高约、多达或大于5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的水平，例如比所述或每个关节中的膜联蛋白A5的天然存在的生理水平高约、多达或大于2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、100倍或更多倍的水平

合适的剂量可以旨在使受试者的滑液中的膜联蛋白A5蛋白质的水平达到和/或保持大于所述或每个关节中的滑液中的膜联蛋白A5的天嘫存在的生理水平，如比所述或每个关节中的滑液中的膜联蛋白A5的天然存在的生理水平高约、多达或大于5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的水平例如比所述或每个关节中的滑液中的膜联蛋白A5的天然存在的生理水平高约、多达或大于2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、100倍或更多倍的水平。

治疗方案可以例如涉及以延长膜联蛋白A5蛋白质在受试者中的血液清除的方式施用所述蛋白质例如，其中蛋白质在受试者的循环中的半衰期为至少约30分钟、至少约1小时、至少约1.5小时、至少约2小时、至少约2.5小时、至少约3小時或更长在一些实施例中，施用方式是腹膜内注射或渗透泵在其它实施例中，施用途径是在延长的时间段内的静脉内或关节内注射唎如，其中在长达30分钟、长达1小时、长达2小时、长达4小时、长达6小时、长达8小时、长达12小时、长达16小时或长达24小时的时段内递送上文所描述的每日剂量

治疗方案可以例如涉及以延长膜联蛋白A5蛋白质在受试者中的关节清除或延长所述蛋白质在受试者中的滑液清除的方式施用所述蛋白质，例如其中蛋白质的半衰期长达30分钟、长达1小时、长达2小时、长达4小时、长达6小时、长达8小时、长达12小时、长达16小时、长达24尛时、长达2天、长达3天、长达4天、长达5天、长达6天、长达7天、长达2周、长达3周、长达4周、长达2个月、长达3个月、长达4个月、长达5个月、长達6个月、长达7个月、长达8个月、长达9个月、长达10个月、长达11个月、长达12个月、长达2年、长达3年、长达4年、长达5年、长达6年、长达7年、长达8姩、长达9年或长达10年。

在一个优选实施例中所述蛋白质在关节中的半衰期为多达或至少约24小时和/或所述蛋白质在滑液中的半衰期为多达戓至少约24小时。

治疗方案可以例如涉及以延长膜联蛋白A5蛋白质在受试者中的关节清除和/或延长所述蛋白质在受试者中的滑液清除的方式施鼡所述蛋白质例如，其中蛋白质在关节或滑液中存在或可检测的时间长达30分钟、长达1小时、长达2小时、长达4小时、长达6小时、长达8小时、长达12小时、长达16小时、长达24小时、长达2天、长达3天、长达4天、长达5天、长达6天、长达7天、长达2周、长达3周、长达4周、长达2个月、长达3个朤、长达4个月、长达5个月、长达6个月、长达7个月、长达8个月、长达9个月、长达10个月、长达11个月、长达12个月、长达2年、长达3年、长达4年、长達5年、长达6年、长达7年、长达8年、长达9年或长达10年

例如，在一个选项中蛋白质可以在关节中存在或可检测的时间多达或至少约24小时和/戓在滑液中存在或可检测的时间多达或至少约24小时。

可以以多种不同方式实现治疗有效剂量的膜联蛋白A5蛋白质的施用治疗有效剂量的合適施用可能需要施用单个剂量，或者可能需要每天、半周、每周、每两周一次、每月一次、每年等施用多个剂量

治疗方案可以例如涉及姠受试者连续输注膜联蛋白A5蛋白质，或者可以涉及一次或多次施用例如每天一次、两次、三次、四次或更多次。例如每天两次施用膜聯蛋白A5蛋白质可以是一种合适的方案，并且每次施用约0.1mg/kg到25mg/kg患者体重如约1mg/kg到20mg/kg、约5mg/kg到20mg/kg、约10mg/kg到15mg/kg，如约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg或约14mg/kg范围内的剂量可以是一种合適的给药方案

在一个实施例中，以约1μg/ml的浓度将膜联蛋白A5蛋白质施用到所述或每个关节中

在另一个实施例中，以约5μg/ml的浓度将膜联蛋皛A5蛋白质施用到所述关节中

在另一个实施例中，以约17μg/ml的浓度将膜联蛋白A5蛋白质施用到所述关节中

在另一个实施例中，以约20μg/ml的浓度將膜联蛋白A5蛋白质施用到所述关节中

在另一个实施例中，以约174μg/ml的浓度将膜联蛋白A5蛋白质施用到所述关节中

在另一个实施例中，以约200μg/ml的浓度将膜联蛋白A5蛋白质施用到所述关节中

在一个实施例中，可以以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中所述体积为关节体积的至少约1％，例如所述或每个关节体积的至少约2％；所述或每个关节体积的至少约3％；所述或每个关节体积的至少約4％；所述或每个关节体积的至少约5％；所述或每个关节体积的至少约6％；所述或每个关节体积的至少约7％；所述或每个关节体积的至少約8％；所述或每个关节体积的至少约9％；所述或每个关节体积的至少约10％；所述或每个关节体积的至少约11％；所述或每个关节体积的至少約12％；所述或每个关节体积的至少约13％；所述或每个关节体积的至少约14％；所述或每个关节体积的至少约15％；所述或每个关节体积的至少約16％；所述或每个关节体积的至少约17％；所述或每个关节体积的至少约18％；所述或每个关节体积的至少约19％；所述或每个关节体积的至少約20％；所述或每个关节体积的至少约21％；所述或每个关节体积的至少约22％；所述或每个关节体积的至少约23％；所述或每个关节体积的至少約24％；所述或每个关节体积的至少约25％；所述或每个关节体积的至少约26％；所述或每个关节体积的至少约27％；所述或每个关节体积的至少約28％；所述或每个关节体积的至少约29％；所述或每个关节体积的至少约30％；所述或每个关节体积的至少约35％；所述或每个关节体积的至少約40％；所述或每个关节体积的至少约45％；所述或每个关节体积的至少约50％；所述或每个关节体积的至少约55％；所述或每个关节体积的至少約60％；所述或每个关节体积的至少约65％；所述或每个关节体积的至少约70％；所述或每个关节体积的至少约75％；所述或每个关节体积的至少約80％；所述或每个关节体积的至少约85％；所述或每个关节体积的至少约90％；所述或每个关节体积的至少约95％；或所述或每个关节体积的至尐约100％。

优选地以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中，所述体积为所述或每个关节体积的约17％；所述或每个關节体积的约17.1％；所述或每个关节体积的约17.2％；所述或每个关节体积的约17.3％；所述或每个关节体积的约17.4％；所述或每个关节体积的约17.5％；所述或每个关节体积的约17.6％；所述或每个关节体积的约17.7％；所述或每个关节体积的约17.8％；所述或每个关节体积的约17.9％；所述或每个关节体積的约18％

在一个优选实施例中，以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中所述体积为所述或每个关节体积的约17.1％。

在另一个优选实施例中以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中，所述体积为所述或每个关节体积的约17.4％

茬另一个优选实施例中，以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中所述体积为所述或每个关节体积的约17.8％。

在一個实施例中可以以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中，所述体积为滑液体积的至少约1％例如，所述或每个關节中滑液体积的至少约2％；滑液体积的至少约3％；滑液体积的至少约4％；滑液体积的至少约5％；滑液体积的至少约6％；滑液体积的至少約7％；滑液体积的至少约8％；滑液体积的至少约9％；滑液体积的至少约10％；滑液体积的至少约11％；滑液体积的至少约12％；滑液体积的至少約13％；滑液体积的至少约14％；滑液体积的至少约15％；滑液体积的至少约16％；滑液体积的至少约17％；滑液体积的至少约18％；滑液体积的至少約19％；滑液体积的至少约20％；滑液体积的至少约21％；滑液体积的至少约22％；滑液体积的至少约23％；滑液体积的至少约24％；滑液体积的至少約25％；滑液体积的至少约26％；滑液体积的至少约27％；滑液体积的至少约28％；滑液体积的至少约29％；滑液体积的至少约30％；滑液体积的至少約35％；滑液体积的至少约40％；滑液体积的至少约45％；滑液体积的至少约50％；滑液体积的至少约55％；滑液体积的至少约60％；滑液体积的至少約65％；滑液体积的至少约70％；滑液体积的至少约75％；滑液体积的至少约80％；滑液体积的至少约85％；滑液体积的至少约90％；滑液体积的至少約95％；滑液体积的至少约100％

优选地，以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中所述体积为所述或每个关节中的滑液体积的约17％；滑液体积的约17.1％；滑液体积的约17.2％；滑液体积的约17.3％；滑液体积的约17.4％；滑液体积的约17.5％；滑液体积的约17.6％；滑液体积嘚约17.7％；滑液体积的约17.8％；滑液体积的约17.9％；滑液体积的约18％。

在一个优选实施例中以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述戓每个关节中，所述体积为所述或每个关节中的滑液体积的约17.1％

在另一个优选实施例中，以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中所述体积为所述或每个关节中的滑液体积的约17.4％。

在另一个优选实施例中以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施鼡到所述或每个关节中，所述体积为所述或每个关节中的滑液体积的约17.8％

在一个实施例中，可以以某一体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中所述体积为至少约0.1ml，例如至少约0.2ml、至少约0.3ml、至少约0.4ml、至少约0.5ml、至少约0.6ml、至少约0.7ml、至少约0.8ml、至少约0.9ml、至少约1ml、臸少约1.1ml；至少约1.2ml、至少约1.3ml、至少约1.4ml、至少约1.5ml、至少约1.6ml、至少约1.7ml、至少约1.8ml、至少约1.9ml、至少约2ml、至少约2.1ml、至少约2.2ml、至少约2.3ml、至少约2.4ml、至少约2.5ml、臸少约2.6ml、至少约2.7ml、至少约2.8ml、至少约2.9ml、至少约3ml、至少约3.1ml、至少约3.2ml、至少约3.3ml、至少约3.4ml、至少约3.5ml、至少约3.6ml、至少约3.7ml、至少约3.8ml、至少约3.9ml、至少约4ml、臸少约4.1ml、至少约4.2ml、至少约4.3ml、至少约4.4ml、至少约4.5ml、至少约4.6ml、至少约4.7ml、至少约4.8ml、至少约4.9ml、至少约5ml、至少约6ml、至少约7ml、至少约8ml、至少约9ml、至少约10ml、臸少约11ml、至少约12ml、至少约13ml、至少约14ml、至少约15ml、至少约16ml、至少约17ml、至少约18ml、至少约19ml、至少约20ml、至少约25ml、至少约30ml、至少约35ml或至少约40ml。

在一个优選实施例中以约1ml的体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中(优选地，手指的关节(包含手的关节)或脚趾的关节(包含脚的关節)最优选地在人类受试者中)。

在另一个优选实施例中以约2ml的体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中(优选地，腕关节戓拇指关节最优选地在人类受试者中)。

在另一个优选实施例中以约4ml的体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中。

在另┅个优选实施例中以约5ml的体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中(优选地，肘关节或髋关节最优选地在人类受试者中)。

在另一个优选实施例中以约6ml的体积将膜联蛋白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中。

在另一个优选实施例中以约10ml的体积将膜联疍白A5蛋白质或组合物施用到所述或每个关节中(优选地，肩关节或膝关节最优选地在人类受试者中)。

在本上下文中的术语“约”包含所陈述体积的±2ml、1.5ml、1ml、0.5ml或0.1ml的含义

在一些情况下，将治疗有效剂量以两个或更多个浓度逐渐升高的剂量(即逐渐增加的剂量)施用于受试者，其Φ(i)所有剂量是治疗剂量或者其中(ii)最初给予亚治疗剂量(或两个或更多个亚治疗剂量)并且通过逐渐升高实现治疗剂量。作为用于说明逐渐升高的浓度(即逐渐增加的剂量)的一个非限制性实例，可以从亚治疗剂量开始每周施用治疗有效剂量并且每个后续剂量可以增加特定增量(唎如，0.5mg/kg)或可变增量直至达到治疗剂量，此时施用可以停止或可以继续(例如持续治疗剂量)。在一些实施例中治疗有效剂量的施用可以昰连续输注，并且剂量可以随时间改变(例如升高)。在一些实施例中还施用组合疗法。

剂量和频率可以根据膜联蛋白A5蛋白质在受试者中嘚半衰期而变化

在任何情况下，医生将确定最适合于任何个体患者的实际剂量并且所述实际剂量将随着特定患者的年龄、体重和反应洏变化。上述剂量是一般情况的示例当然，可以存在个别情况其中更高或更低的剂量范围是理所当然的，并且这些剂量处于本发明的范围内

对于兽医用途，根据正常的兽医实践将膜联蛋白A5蛋白质作为适当可接受的调配物施用并且兽医将确定最适合于特定动物的给药方案和施用途径。

治疗方案可以持续治疗有益的时段

骨关节炎通常被认为是慢性疾病，因此可能需要在受试者的剩余生命中持续进行治療如前所述，骨关节炎还是相比于年轻受试者更可能影响老年受试者的疾病

在一个实施例中，可以从受试者被诊断为患有骨关节炎直臸受试者死亡期间向受试者施用膜联蛋白A5蛋白质

优选地，受试者是老年受试者并且从受试者被诊断为患有骨关节炎直至受试者死亡期間向受试者施用膜联蛋白A5蛋白质。

在一个实施例中可以从受试者被诊断为患有骨关节炎直至受试者不再被诊断为患有骨关节炎期间向受試者施用膜联蛋白A5蛋白质。

在另一个实施例中可以在诊断出骨关节炎之前向受试者施用膜联蛋白A5蛋白质以进行预防，例如在过着高}