黄振勇& 罗永钊（暨南大学医学院第五附属医院清远市人民医院& 广东清远& 511500）
【中图分类号】R512.6+2【文献标识码】A【文章编号】（8-03
【摘要】目的 探讨外周血中电化学发光免疫分析法(ECLIA)定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量之间的相互关系。方法& 运用电化学发光法、荧光定量PCR法两种方法同时检测180份血清标本的HBsAg含量和HBV-DNA载量，并按HBV-DNA载量分成4组，对其结果应用统计学分析。结果& 在180份血清标本中，HBsAg阳性为161例，占89.4%，HBV-DNA阳性为101例，占56.1%，两者同时为阳性的有101例，占56.1%。经统计学分析HBsAg定量与HBV-DNA载量之间无统计学意义，没有相关性（r＜0.3，P＞0.05）。结论& 电化学发光法定量检测HBsAg与HBV-DNA载量无关，联合检测两者可以为临床提供诊断治疗依据。
【关键词】乙型肝炎表面抗原(HBsAg)& HBV-DNA& 电化学发光免疫分析法(ECLIA)& 荧光定量PCR(FQ-PCR)
The correlation between quantitative detection of Hepatitis B surface antigen by Electrochemi luminescene and Fluorescence quantitative PCR detection of Hepatitis B virus DNA load
HUANG Zhen-yong ，Luo yong-zhao&& （The Fifth Affiliated Hospital of Medical College Jinan University， Qingyuan city People&s HospitalGuangdong Qingyuan& 511500）
【Abstract】Objective& To explore the correlation between quantitative detection of Hepatitis B surface antigen (HBsAg) by Electrochemi luminescene immunoassay (ECLIA) and Fluorescence quantitative PCR detection of Hepatitis B virus DNA (HBV-DNA) load in peripheral blood. Method& Serum samples from 180 patients were measured simultaneously the quantitative of HBsAg and HBV-DNA with Electrochemi luminescence immunoassay and Fluorescent quantitative PCR, Pressing HBV-DNA to load into 4 groups all attained data were then undergone statistical analysis. Result& In the 180 serum samples,HBsAg was positive in 161 cases, accounting for 89.4%, HBV-DNA was positive in 101 cases, accounting for 56.1%, both positive in 101 cases, accounting for 56.1% .The relevant analysis is no statistical significance between HBsAg and HBV-DNA（r＜0.3，P＞0.05）. Conclusion& That is no correlation between the quantitative HBsAg and HBV-DNA load, Combined detection of both can be provided for clinical in diagnosis and treatment of foundation.
【Key words】HbsAg& HBV-DNA& Electrochemi luminescence immunoassay (ECLIA)& Fluorescent quantitative PCR(FQ&PCR)
&&&&&&& 乙型肝炎是一种由乙肝病毒(HBV)传播的慢性传染性疾病，是当今流行最广泛，危害最严重的病毒性肝炎之一。目前我国多以血清感染标志物(主要是HBsAg)及荧光定量PCR ( FQ-PCR)检测HBV-DNA作为临床分析和判断乙肝患者病情、疗效及预后的主要依据。但受到实验室要求的严格限制，荧光定量PCR难以普及应用和无法快速检查。本文运用电化学发光法定量检测180份血清标本的HBsAg，并结合HBV-DNA载量探讨两者之间的关系。希望能对临床诊断、治疗乙型肝炎及其预后提供有参考意义的依据。
&&&&&&& 1 材料与方法
&&&&&&& 1.1标本来源& 2011年6月至10月间清远市人民医院门诊及住院患者180例，其中男123例，占68.3%，女57例，占31.7%，年龄10&65岁，诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南》，抽静脉血分离血清，检测后留取标本-20℃冷冻保存备复查。
&&&&&&& 1.2检测方法& HBsAg定量采用电化学发光法，仪器为罗氏全自动电化学发光免疫分析系统罗氏E170，检测试剂由罗氏诊断产品（上海）有限公司提供。HBV-DNA定量检测采用荧光定量PCR法，仪器为ABI 7000荧光定量PCR仪，检测试剂由上海克隆生物高技术有限公司提供。样本检测严格按照说明书进行操作。
&&&&&&& 1.3统计学处理& 用Microsoft Excel软件建立数据库，整理后用SPSS13.0统计软件进行Pearson相关分析和处理。
&&&&&&& 2 结果
&&&&&&& 2.1 HBsAg定性与HBV-DNA定性检测结果比较& 180例标本中，HBsAg阳性同时HBV-DNA阳性为101例，占56.1%（101/180）；HBsAg阳性而HBV-DNA阴性的为60例，占33.3%（60/180），HBsAg阴性同时HBV-DNA阴性为19例，占10.6%（19/180），HBsAg阴性而HBV-DNA阳性的为0例。见表1。
&&&&&&& 表1& 180例标本HBsAg定性与HBV-DNA定性检测结果比较
&&&&&&&&&&&&&&
&&&&&& &注：以HBsAg&1.0s/co为阳性，HBV-DNA&1000IU/ml为阳性作为定性判断标准。
&&&&&&& 2.2 按HBV-DNA值分组& 阴性组:HBV-DNA&1000IU/ml；低载量组: 103&105 IU/ml；中载量组: 105&107IU/ml；高载量组:＞1.0&107IU/ml，HBsAg定量与HBV-DNA载量检测结果比较见表2。
&&&&&&& 表2& 40例HBV-DNA载量与HBsAg定量检测结果平均值比较
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&n&&&&&&&&&&HBV-DNA(IU/ml)&HBsAg定量（s/co）
&&&&&&& 阴性&&&&&&&&&&&&&&&&&&&79&&&&&&&&&&&&&1000&&&&&&&&&&&&&&&&&&&3684.74
&&&&&&& 低载量组&&&&&&&&&&35&&&&&&&&&&4.84E+03&&&&&&&&&&&&&&&&&&&5614.96
&&&&&&& 中载量组&&&&&&&&&&39&&&&&&&&&&1.43E+06&&&&&&&&&&&&&&&&&&&4207.34
&&&&&&& 高载量组&&&&&&&&&&27&&&&&&&&&&&&1.43E+06&&&&&&&&&&&&&&&&&&&4052.74
&&&&&&& 2.3 HBsAg定量与HBV-DNA相关性分析& 根据 HBV-DNA载量不同分为四组,分别与相应的HBsAg进行 Pearson相关分析发现两者之间r值均在0.3以内，P值均& 0.05（见表3），说明HBsAg定量与HBV-DNA载量缺乏相关性。
&&&&&&& 表3& 四组不同HBV-DNA载量与HBsAg定量的相关性分析
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&R值&&&&&&&&&&&&&&&&&&&P
&&&&&&&&&&&&&&&&&阴性&&&&&&&&&&&&&&&&&&&/&&&&&&&&&&&&&&&&&&&/
&&&&&&&&&低载量组&&&&&&&&&&0.16&&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.36
&&&&&&&&&中载量组&&&&&&&&&&0.01&&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.94
&&&&&&&&&高载量组&&&&&&&&&&0.27&&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.17
&&&&&&&&&3 讨论
&&&&&&&&&乙型肝炎是一种由乙肝病毒(HBV)引起的,经血液、母婴及性接触等途径传播的慢性传染性疾病。乙肝的临床表现呈多样化，早期无明显症状，易发展成慢性肝炎和肝硬化，少数患者可转变为原发性肝癌。本病在我国广泛流行，是严重危害人民健康的乙类传染病之一。
&&&&&&&&&近年随着荧光定量PCR技术在临床上的广泛应用，定量测定HBV-DNA已经成为临床乙肝诊断的有效手段。乙肝病毒在宿主体内复制是慢性HBV感染的主要决定因素。血清HBV-DNA水平是病毒复制活动最直接和最可靠的标志，也是目前评价HBV复制情况的&金标准&[1]。定量测定HBV- DNA为研究病毒水平与病情严重程度与传染性的关系，监测疾病进展和评价抗病毒药物的疗效等提供了可靠依据。但是，PCR操作技术较复杂，费用相对较高，对实验条件和操作人员的要求比较严格，易受在提取标本DNA时容易受到污染等多种因素影响，因此，在技术不成熟的医院难以推广应用。此外，相当比例的慢性乙型肝炎患者，在应用抗病毒药物治疗段时间后，血清 HBV-DNA常降至较低水平，难以检测到。因此，它作为何时停用抗病毒药物的评价指标有一定局限性。
&&&&&&&&&乙型肝炎病毒表面抗原是HBV的外膜蛋白，为一条由病毒S基因编码的多肽，在病毒感染肝细胞过程中起重要作用。人感染HBV后4&7天，血清中出现HBsAg，在免疫耐受期、慢性乙型肝炎期(免疫清除期)、非活动携带状态期和再活动期，HBV感染以及部分肝硬化和肝癌患者的血清中均可检测到HBsAg；此外，在HBV感染的潜伏期后期、急性期也可检测到HBsAg，所以HBsAg检测一直是临床诊断HBV感染的传统手段[2]。以往检测HBsAg多以酶联免疫吸附法（ELISA）的方法，血清中的HBsAg定量是经过酶标仪比色得出，有学者以该方法作研究，认为血清HBsAg水平与HBV-DNA效价呈正相关，可反映病毒在宿主体内的活动程度[3，4，5]。但也有学者认为两者之间缺乏相关性。
&&&&&&&&&国际上近年兴起以HBsAg定量作为慢性乙肝或干扰素、核苷类似物抗病毒疗效及治疗终点的评估指标的研究，但HBsAg定量检测方法并不是传统的ELISA,而是电化学发光法（ECLIA）。本文运用 ECLIA定量检测180例血清标本中的HBsAg。根据表1可知在180份血清标本中，HBsAg阳性同时HBV-DNA阳性为101例，占56.1%（101/180）；HBsAg阳性而HBV-DNA阴性的为60例，占33.3%（60/180），HBsAg阴性同时HBV-DNA阴性为19例，占10.6%（19/180）。由此可见，HBsAg和HBV-DNA的阳性检出率是有区别的：HBsAg阳性，HBV-DNA不一定是阳性；HBV-DNA阴性，HBsAg也不一定是阴性。根据表2结果可知四组HBsAg定量与HBV-DNA载量检测结果比较并没有明显的线性关系，但HBsAg定量随着HBV-DNA载量的增多而稍微减小。这是由于ECLIA定量检测 HBsAg存在钩状效应(hook effecl)，在现阶段的检测技术中是不可避免的。在低、中、高载量组中HBsAg含量有一定的数值，而且在HBV-DNA阴性组中HBsAg含量也有比较高的数值。造成这样结果的原因可能如下：FO-PCR只能检测血中游离的 HBV-DNA，当病毒整合到肝细胞染色体上，随同肝细胞一起复制、表达时， HBsAg可出现阳性反应，但血清中已没有HBV颗粒存在，此时FQ-PCR为阴性反应；在应用抗病毒药物治疗有效时，血清 HBV-DNA常降至较低水平，有时会低于检测下限而显示为阴性。
&&&&&&&&&一些学者认为，血清HBsAg水平与HBV-DNA效价呈正相关。但本研究并不支持该观点，表3数据显示，r值均在0.3以内，P均& 0.05，说明HBsAg定量与HBV-DNA载量缺少正相关性。导致研究结果不同可能与下列因素有关：研究对象不同所导致，不同地区的每一个病人感染的乙肝情况会有所不同,包括不同病人自身免疫力所致；检测方法不同所致，其他学者大多数都是采用ELISA方法检测HBsAg，而本研究所采用的是ECLIA。
&&&&&&&&&综上所述，HBsAg定量与HBV-DNA载量两者之间是缺少相关性的。ECLIA检测HBsAg存在钩状效应，虽然未降低HBsAg定性结果的准确性，但使HBsAg定量结果缺少提示乙肝病人传染性强弱的作用，所以ECLIA定量检测HBsAg是难以取代荧光定量PCR检测HBV-DNA的意义。但电化学发光定量检测法具有灵敏度高、检测快速、无放射性危害等优点，在追求高效率&&快而准&的现代化检测方法中，ECLIA定量检测HBsAg相比较于一般的ELISA法有一定的优越性。在临床治疗诊断中，联合检测HBsAg和HBV-DNA有助于乙肝患者的疾病观察、用药、提高疗效及判断预后。
参 考 文 献
[1] 付蕾.HBV-DN荧光定量PCR检测的临床意义[J].检验医学与临床,): 960-961.
[2] 卢锋,廖雪雁,石爽等.乙型肝炎病毒表面抗原定量检测的临床意义[J].中国肝脏,): 64-68.
[3] Erhardt A, Reineke U, Blondin D, et al. Mutations of the corepromoter and response to interferon treatment in chronic replicative hepatitis B. Hepatology,6-725.
[4] 刘灿,翁义锐,陈永东.乙肝患者HBsAg定量与HBV-DNA及乙肝标志物模式的比较分析[J].福建医药杂志,): 124-126.
[5] 陈祥胜,廖雯君.乙肝HBsAg定量检测的临床诊断意义[J]. 湖北中医学院学报,): 21-23.
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Apache/2.2.4 (Unix) DAV/2 Server at .cn Port 80HBV-DNA定量正常值_HBV-DNA检查-武警北京市总队医院
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