鸭副黏病毒病诊断与同源疫苗的研制及初步应用--CNKI机构馆在线
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鸭副黏病毒病诊断与同源疫苗的研制及初步应用
作&&&&者：
来&&&&源： 吉林大学
摘&&&&要： 新城疫是由新城疫病毒引起的一种高死亡率高传染性的疾病，为世界卫生组织公布的必报类动物疫病之一，每年都给养禽业造成严重的经济损失。虽然新城疫病毒只有一个血清型，但根据种系发生的重建，新城疫病毒被分成两个组，classI和class II，class I有9个基因型而class II有10个基因型，并且随着外界环境中的种种压力因素，新城疫病毒也在不断进化。实践中，鸡源新城疫疫苗用来预防鸭源新城疫效果不理想，亟需同源疫苗的创制。所以通过临床及病理解剖等综合诊断来提前快速确诊新城疫非常必要，可以有效的控制新城疫的发展，做到尽早预防，防止新城疫病毒的进一步扩散，把损失降到最低点。
由于新城疫疫苗种类繁多，疫苗使用操作方法不一，往往会因疫苗的选择和使用不当造成免疫失败，给养禽业带来极大的经济损失。DNA疫苗是一种基因工程的疫苗，是通过肌肉注射或者皮下注射含有目的基因的质粒。这个转基因编码来自一个病原的目的蛋白的序列，并存在于真核表达启动子的控制下。基因工程类疫苗比传统的疫苗有很多优势，包括安全性，制作简单，稳定性等方面。DNA疫苗可以诱导长效的细胞免疫应答和体液免疫应答，并且不恢复成强毒株，在安全性上有了保障，所以DNA疫苗是今后疫苗发展的一个重要方向。
本研究以吉林省吉林市经济技术开发区四方养殖场饲养的1500只蛋鸭临床病例为基础，首先通过临床剖检来进行新城疫的初步诊断，然后将疑似病料进行系统的实验室检测，包括细菌学鉴定和病毒学鉴定。对新城疫的初步临床诊断结果显示，该病例为新城疫。通过细菌学鉴定，该病例混有大肠杆菌感染。通过病毒学鉴定，新城疫病毒被分离出来，该病例为新城疫病毒同致病性大肠杆菌混合感染。由于分离毒株与本实验室保存的DP1/02株鸭源副黏病毒株遗传距离相近，均为强毒株，本试验研制了DP1/02株鸭源副黏病毒灭活疫苗，并进行了初步应用研究。
根据本实验室分离的鸭源副黏病毒DP1/02株F基因序列，设计引物，克隆F基因到真核表达载体pCI-neo中，构建重组真核表达质粒pCI-F，并进行分子生物学相应的鉴定。结果表明，表达鸭源副黏病毒F基因的重组真核表达质粒构建成功。将构建好的重组真核表达质粒进行动物免疫试验，通过攻毒保护性试验，运用血凝抑制试验和酶联免疫吸附试验来分别测定体液免疫应答水平和细胞免疫应答的水平，进而来评价免疫效果。血凝抑制试验结果显示，pCI-F重组质粒诱导机体产生较高水平的体液免疫应答反应，ELISA试验结果显示，pCI-F重组质粒可以诱导机体产生较高的细胞免疫应答反应。攻毒保护性试验结果显示，pCI-F重组质粒对NDV强毒的攻击具有一定的保护作用，其保护率为73%。
综上所述，根据实验室诊断证实了临床诊断的有效性，通过临床症状可以提前对感染新城疫的病禽进行隔离、扑杀，对新城疫的早期诊断和防控有非常重要的意义。成功构建的重组真核表达质粒pCI-F可以有效的诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，攻毒保护性试验证明该质粒可以有效的保护NDV的攻击。研制了DP1/02株鸭源副黏病毒灭活疫苗，该疫苗免疫保护率为100%。该研究为防控鸭新城疫体系的完善提供了理论基础。
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中文摘要4-6? Abstract6-12? 前言12-14? 第一篇 文献综述14-34?
第一章 新城疫病毒及新城疫的发生14-23?
1.1 新城疫病毒14-15?
1.2 新城疫病毒的致病性15-17?
1.3 新城疫的临床症状和病理学变化17-23?
第二章 DNA 疫苗23-34?
2.1 DNA 疫苗的构建23-25?
2.2 目前所应用的疫苗种类25-26?
2.3 DNA 疫苗的作用机理26?
2.4 DNA 疫苗的优势26-27?
2.5 提高免疫原性的方法27-28?
2.6 DNA 疫苗的关键技术28-34? 第二篇 研究内容34-82?
实验一 鸭副黏病毒病的诊断与病毒分离鉴定34-51?
1.1 材料34-37?
1.2 方法37-44?
1.3 结果44-49?
1.4 讨论49-50?
1.5 小结50-51?
实验二 鸭 I 型副黏病毒 DP1/02 株同源灭活疫苗的制备51-57?
2.1 材料51-52?
2.2 方法52-54?
2.3 结果54-55?
2.4 讨论55-56?
2.5 小结56-57?
实验三 DP1/02 株鸭源副黏病毒核酸疫苗的制备及动物免疫试验57-80?
3.1 材料58-60?
3.2 方法60-68?
3.3 结果68-73?
3.4 讨论73-78?
3.5 小结78-80?
结论80-82? 参考文献82-94? 导师简介94-96? 作者简介及在学期间所取得的科研成果96-98? 致谢98
中国学术期刊网络出版总库[1] 李魁彪;张晓光;马晶;贾晓俊;王敏;董婕;张晓梅;徐红;舒跃龙;;;病毒学报;2008年02期[2] 胡慧珍;思汗;;;当代畜禽养殖业;2009年12期[3] 刘秀梵;胡顺林;;;中国家禽;2010年21期[4] 楚琰;吴兴安;;;中国医药生物技术;2010年04期
中国硕士学位论文全文数据库[1] 焦旭;;吉林大学;2007年
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京公网安备75号中国农科院成功研制 “鸭坦布苏病毒病活疫苗”
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来源：作者：责任编辑：
□据新华社消息
近日，中国农业科学院上海兽医研究所科研人员率先从发病鸭场分离鉴定出引起雏鸭高热、食欲不振、生长迟缓、产蛋下降乃至停止新发鸭传染病的病原，将之命名为“坦布苏病毒”，并成功研制出“鸭坦布苏病毒病活疫苗”。
据科研人员介绍，这种病毒与登革热病毒、西尼罗河病毒、乙型脑炎病毒均为黄病毒科黄病毒属的病毒。目前发现鸭坦布苏病毒不仅可以感染引起鸭、鹅等水禽发病，而且可以从鸡、麻雀等陆禽中分离到该病毒，表明这种新病毒宿主范围广泛，潜在危害巨大。自2010年春季以来，我国主要养鸭地区相继爆发由该病毒引发的疫情。
据了解，研究人员还将分离到的鸭坦布苏病毒分离株在鸡胚成纤维细胞上连续传代、纯化，获得一株对鸭无致病性的毒株，该毒株不能经鼻腔感染易感鸭，也不能在鸭之间进行水平传播，但经肌肉接种却具有良好的免疫原性，低剂量即可激发出高滴度中和抗体。目前，“鸭坦布苏病毒病活疫苗”临床试验申请获农业部批准，为该疫苗申请一类新兽药证书迈出关键的一步，同时也为有效防治鸭坦布苏病毒病带来曙光。
[责任编辑:yfs001]
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