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管碟法测定抗生素效价中的注意事项
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管碟法对抗生素药品效价的微生物检定
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管碟法测定抗生素效价|
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你可能喜欢　　素是一种生理活性物质，它对生命现象很敏感，可以用抗生素的生物效能表示它的效价，其最小效价单元就叫做“单位”(U)。经由国际协定出来的标准单位，称为“国际单位”(IU)o通常各种抗生素的单位，是根据国家抗生素标准品测定出来的，是衡量药物有效成份的一种尺度。
　　抗生素的剂量常用重量和效价来表示。化学合成和半合成的抗菌药物都以重量表示，生物合成的抗生素以效价表示，并同时注明与效价相对应的重量。 效价是以抗菌效能(活性部分)作为衡量的标准，因此，效价的高低是衡量抗生素质量的相对标准。效价以“单位”(U)来表示。
抗生素效价 -
　　理论效价是指抗生素纯品的重量与效价单位的折算比率。一些合成、半合成的抗生素多以其有效部分的一定重量（多为1μg）作为一个单位，如链霉素、土霉素、红霉素等均以纯游离碱1μg作为一个单位。
　　少数抗生素则以其某一特定的盐的1μg或一定重量作为一个单位，例如金霉素和四环素均以其盐酸盐纯品1μg为1单位。青霉素则以国际标准品青霉素G钠盐0.6μg为1单位，参见表2-2。
　　表2-2一些常用抗生素的理论效价表
　　链霉素碱 1000单位/mg 链霉素硫酸盐 798单位/mg
　　土霉素碱 1000单位/mg 土霉素碱（含二分子结晶水） 927单位/mg
　　土霉素盐酸盐 927单位/mg 红霉素碱 1000单位/mg
　　红霉素碱（含二分子结晶水） 953单位/mg 红霉素乳糖酸盐 672单位/mg
　　金霉素盐酸盐 1000单位/mg 四环素盐酸盐 100O单位/mg
　　四环素碱 1082单位/mg 青霉素钠 1670单位/mg
　　青霉素钾 1598单位/mg 普鲁卡因青霉素 1009单位/mg
　　苄星青霉素（长效西林） 1211单位/mg 新霉素 1000单位/mg
　　卡那霉素 1000单位/mg 多粘菌素B 10000单位/mg
　　庆大霉素 1000单位/mg 巴龙霉素 1000单位/mg
　　说明：表中各抗生素的理论效价系折算的标准。各抗生素的盐类的理论效价是根据标准计算出来的。
　　非合成的抗生素通常采用特定的单位来表示效价，如制霉菌素等，不采用重量单位。
抗生素效价 -
管碟法（二剂量）测定抗生素的效价
　　抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法（cylinder plate method）。管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0&0.lmm，外径8.0&0.lmm，高10&0.lmm），管内放入标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，抗生素扩散的有效范围内则产生透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈（图实验-18）。抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。抗生素效价常采用二剂量法。将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入检品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
　　(1) 求出W和V：
　　(2) W=（SH+UH）-（SL+UL）
　　(3) V=（UH+UL）-（SH+SL）
　　式中： UH：供试品高剂量之抑菌圈直径
　　UL：供试品低剂量之抑菌圈直径
　　SH：标准品高剂量之抑菌圈直径
　　SL：标准品低剂量之抑菌圈直径
　　求出θ：（2） θ=D&antilog（IV/W）式中：
　　θ：供试品和标准品的效价比
　　D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1
　　I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
　　求出Pr ： (5) Pr = Ar&θ 式中：
　　Pr：供试品实际单位数
　　Ar：供试品标示量或估计单位1．材料和仪器　　（1）细菌：短小芽胞杆菌[CMCC（B）63202]的芽胞悬液。
　　（2）培养基：效价检定用培养基（上层、底层）。
　　（3）抗生素：抗生素检品及标准品（高剂量、低剂量，高剂量与低剂量之比为2:1）。
　　（4）试剂与器材：灭菌生理盐水，无菌平皿，牛津杯，无菌吸管，镊子，滴管，直尺。2．实验方法　　（1）取无菌平皿，加入20ml底层培养基，凝固后作为底层。
　　（2）用灭菌生理盐水将短小芽胞杆菌的芽胞悬液稀释至一定浓度以能得到清晰的抑菌圈，且标准品高浓度所得抑菌圈直径在18~22mm为基准。用无菌吸管吸取1ml芽胞悬液，加入到200ml恒温于50℃的上层培养基中摇匀，迅速以无菌吸管吸取5ml，注入到底层培养基上，铺平待凝。
　　（3）在平板底部四边，分别对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记。
　　（4）镊子火焰灭菌3次，然后夹取4个牛津杯垂直放置在平板中标志附近（注：勿使钢管陷入培养基内，各小杯之间尽量等距）。
　　（5）以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外，且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。
　　（6）将平皿置于37℃恒温培养箱培养16~18 h，量取各抑菌圈直径（SH、SL、UH、UL），以毫米为单位，误差不超过0.1mm。
　　（7）计算抗生素效价
　　（8）查放线图计算抗生素效价
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