NK细胞疗法治疗肝癌,晚期患者胸腹水完全消失,肿瘤显著缩小,生存期从4个月到超过4年　　肝癌是最著名的“穷人癌”，因为它在发展中国家，尤其是中国高发。据统计，我国原发性肝癌的发病和死亡例数占比分别占全球的54.6%和53.9%，毫不夸张地说，我国基本上以全球20%的人口认领了超过50%的肝癌患者。　　不幸的是，由于肝癌早期的症状十分隐匿，不易被患者察觉，等到症状明显时90%以上的肝细胞癌患者就已处于中期或终末期，尤其是晚期弥漫性肝癌预后极差，中位生存期不足3个月。　　目前肝细胞癌的主要治疗方法是手术(肝切除或肝移植)、放疗、经导管动脉化疗栓塞(TACE)和靶向治疗(如索拉非尼)。中晚期肝癌患者一般已经不具有手术移植的价值，而细胞免疫治疗方式能够帮助患者提升机体免疫力，同时对于肿瘤细胞存在极强的杀伤力，对于恶性肿瘤属于一种新的治疗方式。　　近年来，免疫疗法作为手术、放疗和化疗之后的“第四种疗法”，可谓是风头正盛!尤其是细胞免疫疗法在肝癌方面的临床研究一直都从未停歇，有望打破中国肝癌患者多年来的“枷锁”!　　其中作为细胞免疫治疗界的扛把子CAR-T疗法已证实在复发/难治性肝细胞癌患者中表现出良好的有效性和安全性。而近两年来，除了CAR-T疗法备受万众瞩目外，基于自然杀伤(NK)细胞的免疫疗法已成为治疗实体瘤和血液系统恶性肿瘤的一种有前途的治疗方法。研究人员说，NK细胞作为一种细胞抗癌疗法更具潜力，它可能会更安全、更便宜、更快速。　　生存期超4年,K疗法让肝癌患者胸腹水完全消失,瘤显著缩小　　随着科学界对免疫细胞更深入的探索，NK细胞的抗肿瘤性逐渐被挖掘。就连有“CAR-T之父”之称的Carl June教授也力挺NK细胞疗法。　　对于NK细胞疗法在肝癌治疗领域的效果，无癌家园小编今天从一则刊登在《oncotargets and Therapy》国外知名杂志上的自然杀伤细胞(NK)疗法治疗晚期肝细胞癌患者的病例报告入手，给各位癌友们介绍下NK细胞疗法的疗效及安全性。　　这位男性患者在2016年6月被诊断为晚期弥漫性肝细胞癌，T3N1M1[即根据肿瘤-淋巴结-转移(TNM)分期系统的IV期]。他有慢性乙型肝炎病毒(HBV)病史感染但无肺结核、肝炎、血吸虫病、慢性支气管炎、冠心病、肾病等病史;重大创伤;食物和药物过敏或输血反应。2016年7月在全身麻醉下接受TACE治疗，于2016年10~12月在全身麻醉下进行腹膜穿刺手术和药物注射。2017年3月接受了腹腔灌注。　　从2017年3月~2018年7月，他完成了17个疗程的NK细胞治疗，每个疗程每月进行一次，连续两天输注。值得一提的是，患者在NK细胞治疗期间未接受其他治疗。　　　　患者注入细胞的数量以及 NK 细胞注入的细胞纯度和细胞活力　　经过17个月的治疗后，该名患者的治疗效果格外令人惊喜，下面就让我们详细看看各项研究指标的变化吧!　　1、扩增后,者外周血中的NK细胞比例增加近7倍　　通过流式细胞术和荧光抗体染色对NK细胞群(CD3、CD56)进行分析，扩增前，患者外周血中的NK细胞群比例为13.7%;扩增第18天后，患者外周血中的NK细胞比例为87.6%，与扩增前相比，外周血NK细胞增加近7倍。　　　　患者扩增前后外周血中NK细胞比例　　2、淋巴细胞亚群的变化表明免疫功能有所改善或降低　　通过17个疗程的治疗，T抑制细胞/T细胞毒性淋巴细胞(CD8+T细胞)计数有很大提高，而T辅助细胞(CD4+T细胞)计数保持不变。NK细胞(CD3、CD56细胞)计数增加，而B淋巴细胞(CD3、CD19细胞)计数没有变化。　　　　NK细胞治疗17个疗程前后的免疫细胞计数测试　　　　治疗期间淋巴细胞亚群的变化　　治疗后CD8+T细胞和NK细胞计数增加。CD4+T细胞和B细胞计数变化不显著　　3、患者的肝功能仍保持在参考范围内　　患者的肝功能无明显变化。治疗后ALT和AST水平缓慢升高，TBil和ALB水平保持在参考范围内。　　　　NK细胞治疗前后的肝功能指标变化情况　　4、除甲胎蛋白(AFP)外的所有肿瘤标志物水平均有所改善　　在NK细胞输注期间，除甲胎蛋白(AFP)外的所有肿瘤标志物水平均有所改善，治疗后癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA)15-3、CA19-9水平降低。　　　　NK细胞治疗前后的肿瘤标志物变化情况　　5、输血过程未见不良反应,常规保持在正常水平　　输血过程中未出现发热、呕吐、抽搐等不良反应。常规血液检测显示白细胞、血小板、中性粒细胞和淋巴细胞计数保持在正常水平。　　　　NK细胞治疗前后的血常规指标变化情况　　6、患者胸腹水完全消失,右叶多个肿瘤显著缩小　　研究人员在NK细胞治疗前后进行了计算机断层扫描 (CT)，以进行基于影像学的诊断，并评估临床效率。　　6个疗程后，患者的胸水和腹水明显减少。自治疗结束以来，患者一直保持这种状态。此外，在NK细胞治疗17个疗程后，右肝叶中的多个肿瘤体积减小。　　值得一提的是，迄今为主，该名患者的生存时间>48个月，即超过4年!　　　　NK细胞治疗前和治疗期间的CT扫描结果　　图A1~A5：CT扫描显示，6个疗程后胸腔积液完全消失;　　图B1~B5：CT扫描显示，6个疗程后腹水几乎完全消失;　　图C1~C5：CT:扫描显示，肝右叶多个肿瘤的大小在17 个疗程后显著缩小;　　7、患者的生活质量显著提高　　EORTC QLQ-C30(生活质量评分)显示，患者的功能维度和健康维度得分从≤20 增加到大约80。症状维度得分从 60下降到≤10，即功能和健康维度得分逐渐增加，症状维度评分略有下降，这表明患者的生活质量显著提高!　　　　NK细胞治疗期间的EORTC QLQ-C30评分　　上述各项临床指标表明，NK细胞治疗对于该患者没有不良反应，且能够增强免疫功能并改善肝癌患者的生活质量，延长其生存期。　　想寻求NK细胞疗法或CAR-NK细胞疗法及其他国内外治疗新技术帮助，且经济条件允许的情况下，患者可以先将病历提交至无癌家园医学部进行初步评估。　　疾病控制率达71.4%!NK细胞疗法对抗肝癌杀伤力强劲　　据近期科学家研究发现，在原发性肝癌组织中，NK细胞数量明显比其它正常组织中要低，且NK细胞的活性显著降低，而体外培养的 NK 细胞对肝癌细胞表现出明显的杀伤作用。这意味着，NK细胞免疫疗法在肝癌治疗中有着极大的应用价值。　　最近一篇发表在《Journal of Modern oncology(现代肿瘤医学)》杂志上关于自然杀伤细胞治疗肝癌的前瞻性研究中，来自暨南大学附属复大肿瘤医院肿瘤研究所的医学者们对2016 年2月~2017年9月收治的17例肝癌患者进行了NK细胞免疫治疗，向患者体内注射了在体外增殖的高活性NK细胞，并对患者病情进行了追踪观察和检测。　　　　治疗结果令人惊喜!经NK细胞免疫治疗后，所有患者的客观缓解率为14.3%，疾病控制率为71.4%;从短期临床疗效上看，接受疗程数多的患者疗效稍好于接受疗程数少的患者;且治疗前后，患者均无不良反应出现，充分说明了NK细胞免疫疗法的安全性、有效性。　　认识人体抗癌第一道防线——NK细胞　　人体有两种免疫系统：先天免疫和适应性免疫。适应性免疫的“主力军”包括B细胞和T细胞，能对“敌人”形成长期记忆，再次遇到则激发出强大杀伤力，而先天免疫主要依靠NK细胞。　　NK细胞被定义为CD3-CD16+CD56+的淋巴细胞，是人体第三类淋巴细胞，又被誉为天然免疫的核心细胞，约占淋巴细胞循环数的5%~15%。其表面缺少T细胞和B细胞的特异性标志如TCR和Smlg，曾称为裸细胞。NK细胞最厉害的地方是，不需要抗原递呈过程，不用别人通风报信，就可以直接、快速将外来异物(病毒细菌感染细胞、癌细胞、衰老细胞等)就地正法。　　　　右图中绿色框中红色面积明显大于左图，代表CD16+/CD56+细胞含量多，即经过12天的培养，NK细胞越来越多　　NK细胞免疫疗法在实体瘤中大放异彩　　MD安德森癌症中心的免疫治疗专家Katy Rezvani说，NK细胞是集功效、安全性和相对易用性为一体理想细胞疗法。　　第一，NK细胞不需要抗原呈递，起效更快速。　　第二，NK细胞具有更广谱的抗肿瘤作用。　　第三，没有严重的副作用。上述诸多特点都无不在彰显，对抗实体瘤，NK细胞可能比T细胞更具优势!　　1、肺癌:内首个NK细胞联合PD-1治疗非小细胞肺癌成绩斐然　　除了上述疗效外，人类自然杀伤NK细胞也会表达PD-1，并且也具有延长晚期NSCLC患者生存的潜力，那么，将PD-1或者其他抗体药物和NK联合起来会不会组成抗癌的王炸呢?　　如抗EGFR的西妥昔单抗，西妥昔单抗可以激活NK细胞的ADCC效应(抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)，并启动NK细胞的适应性免疫应答。　　目前这项猜想已被实锤!研究证实检查点治疗与其他NK指导的免疫治疗相结合，可以针对目前对现有疗法无反应的多种类型的肿瘤。　　近期，一项由广东省蛋白质组学重点实验室姜勇教授团队带领开展的研究，证实了派姆单抗加同种异体NK细胞在先前接受过治疗的晚期NSCLC患者中安全有效。　　　　这项研究的结果非常振奋人心，输注扩增的NK细胞后，患者的NK细胞数量显着增加，抗癌效果倍增。　　1.派姆单抗联合NK细胞疗法的治疗效果是单纯采用派姆单抗治疗组近1倍(客观缓解率：36.5% vs 18.5%)，并且肿瘤显著缩小。　　2.血液中的循环肿瘤细胞显著减少，肿瘤生物标记物下降，这说明NK细胞能够通过靶向血液中的肿瘤细胞清除体内残余的肿瘤细胞，来防止癌症的复发转移，这对于所有的肿瘤患者都是意义重大的。　　3.总生存期和无进展生存期显著延长。　　　　此外，公认的循环肿瘤细胞(CTC)减少能够反映NK细胞通过靶向血液中的CTC来防止转移并减轻残余肿瘤负荷。此研究是目前所知的第一个研究派姆单抗和NK细胞输注联合使用的安全性和有效性试验，派姆单抗联合NK细胞在先前接受过治疗的PD-L1+晚期非小细胞肺癌患者中提高了生存率。　　该研究结果表明，将抗PD-1或抗PD-L1抗体与NK细胞联合使用可增强抗肿瘤作用，并为先前接受过PD-L1+晚期治疗的非小细胞肺癌患者提供潜在的治疗策略。　　2、结直肠癌:带血NK细胞,结直肠癌患者带来新的治疗选择　　随着精准医学的不断发展，癌症治疗已由“一刀切”转变为个性化治疗，而医学研究者们也纷纷向NK细胞疗法下手，希望能够给结直肠癌患者带来新的治疗选择，而脐带血NK细胞疗法就是其中的一个。　　　　我国的研究团队发表在《Human Gene Therapy》杂志上的一篇论文中，研究者成功地将脐带血(UCB)中的NK细胞通过膜结合白细胞介素(IL)- 21进行扩增，命名为eUCB-NK细胞。在动物试验中，证明了脐带血NK细胞具有较强的体内抗肿瘤活性，适用于晚期结直肠癌患者。联合贝伐单抗可以增加 NK细胞浸润，发挥更好的治疗效果。　　3、胃癌:癌NK疗法CYNK-101潜力巨大!FDA授予双重认定　　CYNK-101是由特定类型的免疫细胞 NK 细胞制成的一种同种异体、现成的 NK 细胞产品，来源于人胎盘造血干细胞，经过基因修饰以表达高亲和力和抗切割的 CD16 (FCGRIIIA) 抗体来增加NK细胞杀伤活性。　　2022年1月，FDA授予全新的细胞疗法-基因修饰、冻存人胎盘造血干细胞衍生自然杀伤(NK)细胞CYNK-101疗法快速通道资格。　　2022年2月15日，FDA再次授予CYNK-101疗法孤儿药资格，与标准化疗、抗HER2抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)和PD-1抑制剂Keytruda联用，一线治疗局部晚期不可切除或转移性晚期 HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者!　　CYNK-101建立在独特的胎盘来源的NK细胞基础上，与其他细胞来源相比，它具有自然增强的增殖潜力，已被证明是持久性和功效潜力的决定因素，有望改善G/GEJ癌症患者，以及其他癌症患者的生活。　　NK细胞治疗前景广阔,来可期　　经过几十年的临床研究，世界上已经实现了既增强了NK细胞活性，又成功增加了NK细胞的数量，完成了NK细胞回输体内对抗癌细胞必备的两项基本要求。目前，无论是中国、日本还是美国，NK细胞培养技术都已经非常成熟。　　除了采用体外活化的自体或异体NK细胞治疗外，CAR-T疗法的成功激发了人们对用CAR基因修饰NK细胞来增强其杀肿瘤能力的热情。CAR-NK就是利用基因工程给NK细胞加入一个能识别肿瘤细胞，并且同时激活NK细胞杀死肿瘤细胞的嵌合抗体。　　CAR-NK疗法在胰腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤、肝癌等实体瘤方面的疗效颇佳，还能特异性识别和高效杀伤乳腺癌肿瘤细胞，对多发性骨髓瘤疗效显著。　　CAR-NK细胞疗法是一个很有前途的临床研究领域，对某些癌症患者具有良好的安全性和初步疗效。与CAR-T细胞相比，CAR-NK细胞具有自己独特的优点，但仍面临着一些挑战。这些挑战包括细胞增殖的改善，使细胞毒性的激活更有效，以及最终找到NK细胞的最佳重建方法。相信解决好这些问题，基于NK细胞优秀的抗肿瘤血统，极有可能在CAR修饰的武装下为肿瘤治疗带来新的突破。　　鉴于CAR-T的成功、CAR-NK的快速发展，将CAR工程技术沿袭用于其他类型免疫细胞的工程化改造引起了研究者们极大的兴趣。　　根据这种基因工程技术，CAR-NKT、CAR-巨噬细胞(CAR-M)、CAR-Treg、CAR-γδT等异军突起，在肿瘤的免疫治疗中展现出广阔的前景。之前无癌家园小编就给各位癌友们介绍过以CAR技术为核心的各大新型细胞疗法的研究进展。　　总之，小编坚信，在未来将会有越来越多的细胞免疫技术和药物联合使用的试验不断涌现，只要不放弃任何一点希望，攻克癌症指日可待!紧急通知！如果您有相关基因靶点突变,例如有
EGFR/ALK/NTRK/HER2/claudin18.2/等靶点突变，
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与免疫增强策略类似，免疫细胞疗法的疗效受到肿瘤微环境TME的严重限制。因此，克服这种免疫抑制环境对于晚期结直肠癌患者的持久临床反应至关重要。最近，间质转化生长因子-β信号的抑制阐明了这一概念。转化生长因子-β除了激活肿瘤相关成纤维细胞CAF外，还是一种有效的免疫抑制因子，因此被认为在免疫逃避中起着积极的作用--这可能解释了它与不良预后的联系。在建立了一种遗传的、可移植的、具有免疫活性的类似CMS4的MSS
CRC转移小鼠模型后，对这一假设进行了检验。事实上，转化生长因子TGF-β在转移起始中的关键作用是抑制抗肿瘤免疫反应：抑制该通路以T细胞依赖的方式有效地阻断转移肝的定植。还有其他几种免疫调节细胞因子与大肠癌的疾病进展有关；其中包括IL-6和IL-33。在小鼠中，IL-6缺乏减少了肝转移，伴随着DC和细胞毒性T细胞活性的增加。IL-33是IL-1家族的新成员，是炎症反应和免疫偏倚的重要调节因子之一，通过受体ST2活化Th2辅助性T细胞。L-33可激活COX2的表达，增加PGE2的产生，而COX2选择性抑制剂和PGE2中和抗体可阻断IL-33的促增殖作用。ST2阻断、ST2阴性分选、NF-κB特异性抑制剂和NF-κB特异性shRNA(ShP65)可阻断IL-33对COX2的诱导作用。有趣的是，注射可溶性的IL-33受体(在mCRC中下调)可以使小鼠的TME恢复正常，并抑制肿瘤转移。图为mCRC免疫抑制性TME的一些参与者、靶点和策略，目的是促进抗肿瘤免疫。中间是表达IDO1的上皮性CRC细胞(灰色)趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4, CXCR4）属于 Ｇ 蛋白偶联受体超家族，具有趋化免疫细胞、维持免疫细胞的动态平衡等生物学作用。在已发现的趋化因子受体中
CXCR4 与肿瘤细胞的关系最为密切。该受体首先被发现为 HIV
的共同受体之一，此后也被发现在多种癌症中表达，包括乳腺癌，前列腺癌，肺癌，结肠癌和多发性骨髓瘤。据研究，CXCR4在结直肠癌组织中的表达率约为53.6%，伴肝转移者的表达率较不伴肝转移者为高，分别为58.7%vs22.1%。在临床前，趋化因子(受体)抑制剂已被证明通过减少未成熟的髓系细胞和CAF的积聚来抑制大肠癌肝转移的形成和肿瘤的生长。最近的研究证实癌症中
CXCR4
高表达与预后不良和化疗抵抗相关联，部分是通过增强癌症和基质之间的相互作用。例如，CXCR4拮抗剂通过减少TME对CAF和MDSCs的浸润来抑制转移。临床数据支持这一前提，即趋化因子有助于塑造免疫抑制格局，突出了大肠癌肝转移浸润边缘髓系细胞和T淋巴细胞之间的炎症串扰机制。CCL5具有介导免疫细胞定向趋化的作用，能增强肿瘤细胞浸润与转移的能力，肿瘤的浸润与转移是恶性肿瘤生物学行为中的主要特性，研究表明CCL5血清水平和胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤分期及疾病进展相关，可能成为预测相关肿瘤预后的分子标志。CCL5介导的促肿瘤信号级联反应可被CCR5拮抗剂在治疗上阻断。CCR5拮抗剂主要通过阻断CCL5/CCR5生物学轴级联信号通路，使巨噬细胞发生转化，刺激肿瘤生长的细胞因子下调，肿瘤周围的炎性微环境得到改善。因此，利用CCR5拮抗剂特异地干预CCL5/CCR5转导通路，可能为特定肿瘤患者提供更加个性化的治疗方案。这种疗法在I期研究中引起了治疗反应，包括TAMs的复极化和重新分布，以及随后T细胞的激活。马拉韦罗为CCR5受体拮抗剂，在一个只有14个病人的初期临床试验中，病人接受抗艾滋病药马拉韦罗Maraviroc的治疗，每人每天给药两次，每次300毫克。所有的病人都是MSS型的结直肠癌患者，而且都对化疗出现了耐药症状。然而，这个小小的初期临床试验显示了不俗的治疗效果：３个病人出现部分响应，至少30％的肿瘤消减；而另外的５个病人虽然没有出肿瘤消减，但所有人的临床指标都出现好转的迹象。肿瘤相关巨噬细胞（TAM细胞）是浸润或邻近肿瘤组织区域内，从属巨噬细胞系的一类肿瘤相关免疫细胞。TAMs可通过三种不同的机制直接抑制细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应，表达PDL-1等免疫检查点，产生抑制性细胞因子，IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)，改变代谢活性，包括代谢产物耗竭和活性氧(ROS)的产生等。CSF-1R主要在单核巨噬细胞系表达，CSF-1是其主要促生长、分化因子，所以针对CSF-1/CSF-1R轴可以直接作用于TAM或其前体细胞。PI3Kγ是一个可以通过关闭TAM免疫调节活性消除TAM免疫抑制功能的分子开关。研究发现PI3Kγ失活的巨噬细胞会高表达主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ类分子及如白介素12（IL-12）的炎前细胞因子，同时低表达免疫抑制分子IL-10、精氨酸酶等。在一系列肿瘤模型中，抑制TAM的PI3Kγ活性可以激活适应性免疫、增强细胞毒性T淋巴细胞的招募及活性，从而显著抑制癌细胞生长及转移。Eganelisib (IPI-549)为一类创新药，口服的PI3K-γ抑制剂，具有独特的作用机制。临床前的研究表明，PI3K-γ在肿瘤微环境中维持肿瘤相关巨噬细胞的免疫抑制状态中起到非常重要的作用，靶向PI3K-γ的Eganelisib能够重编程肿瘤微环境内关键的免疫抑制性巨噬细胞（M2）向抗肿瘤巨噬细胞（M1)转换，下调免疫抑制，增加免疫活性，最终导致杀伤性T细胞的活化与增殖 。由于TME中的代谢重编程也可能是免疫逃避的驱动因素，免疫代谢已成为一个新的治疗前沿。一个例子是必需氨基酸色氨酸：对T细胞激活很重要，被IDO1(吲哚胺2，3-双加氧酶)分解成抑制性免疫调节剂。这种酶的表达在TIL较少的大肠癌和预后较差的患者中升高。在大肠癌模型中用IDO1抑制剂进行的临床前研究证实了它作为免疫抑制因子的作用。但是，早期临床试验显示选择性小分子IDO1抑制剂(Epacadostat)作为实体恶性肿瘤单一疗法并未见到疗效。然而，最近一项针对具有短发夹状RNA的IDO1的小鼠的研究发现，强大的先天免疫反应阻碍了肿瘤的生长-表现优于epacadostat。此外，新的ICI策略已经在大肠癌的临床前模型中取得了良好的效果，包括阻断抑制性受体，如LAG-3和TIM-3。最后，调节性T细胞的耗尽也可能有助于否定肿瘤诱导的免疫抑制。}