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七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响
点击量： 6114
时间： 2021-03-16 10:59:25
作者： 南文龙，巩明霞，陆游，等
来源： 2021年第3《中国动物检疫》为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响，基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的，按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度，分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20 ℃条件下作用30 min后，采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示，与对应的阳性对照组相比，含氯类（二氯异氰尿酸钠）、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂，消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著，检测Ct值显著上升或检测不到；戊二醛类、含碘类（主要成分聚维酮碘）消毒剂，核酸降解能力相对较弱，检测Ct值稍有上升；酚类、季铵盐类、含碘类（主要成分碘、磷酸、硫酸）类消毒剂，检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响，可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。The Influence of Seven Categories of Disinfectants on the Test Results of ASFV by the Fluorescent Quantitative PCRIn order to evaluate the influence of common disinfectants including glutaraldehyde，phenol and iodine on the test results of African swine fever virus（ASFV），the disinfectants with different concentrations were used according to the corresponding instructions and based on the purpose of disinfecting pens，vehicles，instruments and skin mucous membrane to react respectively with the cultures of ASFV with different titers at 20 ℃ for 30 min，then the products were tested by fluorescent quantitative PCR. The results showed that，compared to the positive control group，test results of using chlorine（sodium dichloroisocyanurate），potassium bisulfate and chlorine dioxide compound disinfectants were significantly affected，the Ct value significantly increased or failed to be detected；for glutaraldehyde and iodine compound disinfectants（mainly contained povidone iodine），the capability of nucleic acid degradation was relatively lower，and the Ct value slightly increased；for phenol，quaternary ammonium and iodine compound disinfectants（mainly contained iodine，phosphoric acid and sulfuric acid），the Ct value generally remained the same. In conclusion，the influence of seven categories of disinfectants on the test results of ASFV by fluorescent quantitative PCR was evaluated，which could provide some technical references for scientific and objective evaluation and analysis of disinfection effect in practice.全文下载链接：https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDAUTO&filename=ZGDW202103018&v=2vpJqQNi66F8aSTvSBXTPV1Y3MmmScXJxElc9z63bfIKqOPCK4wm6NDvdOQjdWxT
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2019-06-10 15:31
来源:
执业兽医
非洲猪瘟病毒进入机体到血液中产生足够量的、并能用检测方法从血液中查出非洲猪瘟毒之间的这段时期，称之为窗口期（Window Period）。在窗口期内虽然检测不到血液中的非洲猪瘟病毒，但体内已存在该病毒，主要集中在口腔等粘膜组织内，处于局部感染（local infection）阶段，属于局限性的隐性感染（silent infection）过程。窗口期的感染者同样具有传染性，但传染性不强。
非洲猪瘟的窗口期长短不一，短者1～3天，长者2个月左右，平均为28天。抓住窗口期的有利时机是净化和控制非洲猪瘟的唯一必要手段。
窗口期过后，猪只开始出现临床症状，主要表现为精神沉郁、厌食、呕吐、腹泻、皮疹、关节痛、出血等。此时，无论是大群控制，还是个体监控，都已经失去了生产上的操作意义，非洲猪瘟窗口期处于关闭状态。
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窗口期的检测和监测
确定猪只是否处于窗口期的方法很多，如病毒培养法、免疫组织荧光法、抗原检测法等，但当前最成熟的方法还是定性或定量的聚合酶链式反应（PCR）法。
1.1 检测样本的选择根据研究数据，口腔拭子、鼻腔拭子都可以作为窗口期的检测样本，但是新鲜分泌的唾液往往具有更大的检测优势，其病毒含量远远高于口腔拭子和鼻腔拭子。新鲜分泌的唾液中非洲猪瘟病毒CT值比口鼻拭子中的非洲猪瘟病毒CT值平均低5左右。
1.2 唾液样本处理处于窗口期的猪只，尚具备较强的特异性免疫能力和非特异性免疫能力，机体对病毒的清除作用较强，两者处于激烈对抗状态，尤其是唾液中的酶（溶菌酶、核酸酶、碱性磷酸酶等）活性较高，收集到唾液中的非洲猪瘟病毒如果含量过低，病毒很快将被唾液降解。因此，采集的唾液必须立即进行核酸保护（即抑制唾液中的酶活性）。
1.3 唾液样本检测由于处于窗口期内唾液样本中非洲猪瘟病毒含量较低，对检测条件的要求较为苛刻。建议对检测环境（温度、空气、水、操作台面）、检测试剂套装、检测仪器进行比对和考核，慎重选择。为了取得优质的唾液样本，采样之前需要对动物进行禁食处理（12小时）。
研究证实，试管唾液中的病毒在静置或离心状态下，底部的非洲猪瘟病毒含量远远高于试管上清中的病毒含量（CT值相差1～3），所以建议从试管底部取样进行检测。
实施实验室检测工作之前，建议对操作人员进行科学采样和取样培训，培训合格后才允许从事检测工作。
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影响窗口期检测效果的因素
影响窗口期检测效果的因素很多，如操作人员、试剂、检测设备，等等。
2.1操作人员不同的操作人员，核酸检测的结果差异很大。自从国家鼓励养殖主体自主检测以后，很多猪场购置了仪器和试剂盒。由于操作人员不熟练或错误操作，既浪费了资源，也贻误了控制时机。操作人员上岗之前的操作熟练程度培训显得尤为重要。
2.2 核酸纯化目前常用的核酸提取方法是加热裂解法、膜提取法和磁珠提取法。总体来看，加热提取法（俗称的免提法）因为核酸纯度不高、核酸提取量较低，不适合做唾液学检测。国内市场上的膜提取法的效果也存在较大差异，请进行比较后谨慎选择。
磁珠法的自动提取也是相当不错的选择，磁珠法对实验室操作人员有较高的技术要求，防止交叉污染现象的出现。
2.3 核酸扩增 核酸扩增试剂需要进行试验性比对选择，争取实现单拷贝扩增。请注意：那些适合临床检测的试剂盒大部分不适合窗口期检测。
2.4荧光数据读取 核酸检测仪对荧光数据的读取和分析也是重要的考察指标，防止出现误判现象的出现。
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窗口期检测结果的生产性应用
非洲猪瘟进入中国以后，国家公布的检测方法仅仅适用于临床检测，生产指导意义不大，其中规定的采样方法在实际操作中促进了病毒的扩散和疫情的传播，建议进行紧急修正。
我国养猪业中非洲猪瘟病毒的污染面较大，尤其是来自疫区的种苗应该成为窗口期监控的重点；处于疫区的种猪企业中的种公猪和母猪应该成为窗口期监控的重点，监测频率为按周随机抽样。
科学的非洲猪瘟窗口期检测对于我国非洲猪瘟的控制具有重要的科学意义和生产实践意义，建议有关部门和科研机构高度重视窗口期检测和监测政策的制定实施和方法学研究，尽快实现我国非洲猪瘟的有效控制。
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非洲猪瘟多少数值就是阳性,非洲猪瘟标准
发布于：2023-07-18 11:25
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分类：非洲猪瘟检测27.6是什幺意思
非洲猪瘟检测数值多少为阳性非洲猪瘟ct值36.5是阳性吗 —— 非洲猪瘟ct值36.5是阳性。据非洲疾控中心官方公开2022年1月1日报道信息显示，非洲猪瘟检测样本Ct值大于或等于35为阳性，故可判断实验样品的非洲猪瘟病毒为阳性。非洲猪瘟数值26严重吗 —— 非洲猪瘟数值26是严重的。当被检样品出现典型的扩增曲线且Ct值≤38.0时，判为非洲猪瘟病毒核酸阳性。被检样品无Ct值，判为非洲猪瘟病毒核酸阴性。对于Ct值＞38.0的样品且出现典型的扩增曲线，应重检，重检仍出现上述结果...非洲猪瘟ac数值多少正常 —— 非洲猪瘟ac数值正常标准如下。1、质控标准：阴性对照的Ct值应大于38或无Ct值。阳性对照的Ct值小于等于35，并出现典型的扩增曲线。2、酶联免疫吸附试验。酶联免疫吸附的A值大于0.3时，则表明为非洲猪瘟。非洲猪瘟ct值40以上严重吗 —— 在非洲猪瘟的检测中，通常将ct值小于或等于40定义为阳性结果，大于40为阴性结果。在非洲猪瘟的检测中，如果CT值高于40，通常意味着病毒载量很低，但仍然需要进一步确认是否感染。非洲猪瘟的防范措施主要包括加强场所卫生和保持...同一样品非洲猪瘟核酸检测结果阳性复检又是阴性是什么原因? —— 阳性CT在30—35，是可以判断弱阳性，复测。阳性非洲猪瘟ct值20.24严重吗,是强性还是弱性? —— 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。非洲猪瘟对人不致病，不是人畜共患病。但猪感染后，发病率和病死...非洲猪瘟ct值36.5是阳性吗 —— 是。猪瘟俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染传染病，当Ct值≤35，故可判断实验样品的非洲猪瘟病毒为阳性，应立即采取有效措施以保证不会带来更多的损失。非洲猪瘟ct值20.24严重吗? —— Ct值>40，且出现典型扩增曲线，判定为可疑，应重检。重检后，Ct值≤40且出现典型扩增曲线者判为阳性，其他情况均判定为阴性。非洲猪瘟怎么检测,潜伏几天才发现 —— 4、酶联免疫吸附试验：对照成立后，若待检样品的吸收值大于0.3，则可以判定为阳性。一、非洲猪瘟怎么检测 1、免疫电泳试验 若抗原于待检血清间出现白色沉淀线，则为阳性。2、直接免疫荧光试验 在荧光显微镜下观察细胞，如果...非洲猪瘟检测ct值为25 —— 非洲猪瘟检测ct值为25是没有猪瘟。非洲猪瘟发病致死的猪，血液样品Ct值基本都在25以下，严重者低于15，ct值为25是没有感染猪瘟。}