前几天突然对生产的疫苗有了兴趣，想知道这些病毒、疫苗到底是怎么回事，然后就动手找找找，花了近一周的业余时间，终于算搞懂了大概。

2019年年报披露相关生产的疫苗：

以下均为网上百度及既往研报上找到的相关资料（都是白嫖的那种）：

口蹄疫病毒属于，口蹄疫病毒属，口蹄疫病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3（即南非1、2、3型）和Asia1（亚洲1型）7个血清型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病。

其实就是七种不同病毒。亚洲1型基本已被消灭，现在主要是O、A型。

是由口蹄疫病毒感染引起的共患的急性、热性、接触性传染病，最易感染的动物是黄牛、水牛、、骆驼、羊、鹿等；黄羊、麝、野猪、野牛等野生动物也易感染此病。本病以牛最易感，羊的感染率低。口蹄疫在亚洲、非洲和中东以及南美均有流行，在非流行区也有散发病例。国际上欧美等发达国家已全面消灭口蹄疫，在发展中国家中，中国走在牲畜防疫的前列。

危害：发病后一般不致死，但会使病兽的口、蹄部出现大量水疱，高烧不退，使实际畜产量锐减。另外，有个别口蹄疫病毒的变种可给人。因此，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、难于防治、补救措施少，被称为畜牧业的“头号杀手”。

这也是为什么口蹄疫苗是个大单品的原因。

防治：我国对口蹄疫的防治，预防主要通过疫苗注射接种，发生口蹄疫的则捕杀。

传染源：发病或处于潜伏期的动物是主要的传染源。

唯二的解决办法，当然首选疫苗预防。

传染途径：口蹄疫传染途径多、速度快。病毒可通过空气、灰尘、病畜的水疱、、、、、等分泌物和排泄物，以及被污染的饲料、褥草以及接触过病畜的人员的衣物传播。口蹄疫通过空气传播时，病毒能随风散播到50－100公里以外的地方。牛、羊、猪等高易感动物，感染发病率几乎为100%。一般来说，成年动物患口蹄疫的死亡率在5%－20%之间，幼畜的死亡率50%－80%。口蹄疫病毒血清类型多，易变异。

简直就是防不胜防，必须给猪戴口罩，那画面……想靠生物防控不打疫苗，成本更高更麻烦。

2018年我国肉羊出栏31685.5万只，2019与2018基本持平（未找到明确数据）

2018年我国肉牛出栏总数为4397.5万头

我国口蹄疫强制免疫种类及区域

对于口蹄疫市场苗的空间测算，我们认为目前主要的客户群体是种猪场和规模化猪场，他们对于免疫效果要求较高。2013 年我国能繁母猪存栏量有 5068 万头，年出栏万头以上规模猪场有 6197 万头，如果按照能繁母猪每头免疫 2.5 次，生猪每年免疫 1.5 次，加上牛羊每个生长周期打 2.5 次，我们预计口蹄疫市场苗空间达 38 亿！ 

白嫖自2014年研报《金宇集团：中国动保产业的“” 腾飞在即！》

按照2017年口蹄疫市场苗销售规模，我们估算全国口蹄疫市场苗市场空间约88 亿元，2017年口蹄疫市场苗整体渗透率约23.79%。随着生猪养殖规模化继续提升，口蹄疫市场苗整体渗透率仍有提升空间。

白嫖自2018年研报《二价苗上市份额再提升，动保平台全面开花可期待》

您好，2019年，公司口蹄疫市场苗收入占全国口蹄疫市场苗收入的比例约为50%。

这是公司回复的网友提问。2019年金宇营收75,131万元，就算全是口蹄疫苗，那市场苗的大小也只有15亿，但2019年受猪瘟影响。用2018年数据。2018年金宇营收151,786，市场苗市场不会超过30亿。2020年市场大小估计不会比2018年更大。但预计随着规模化养殖占比的提升，实际口蹄疫市场规模会接近研报的88亿上限。口蹄疫对净利润的贡献按40%净利率算，50%市占率，天花板17亿，不能再高了。打个折扣，未来有望贡献10个亿净利润，不能再高了。 

2019年全球口蹄疫疫苗市场总值达到了57亿元，预计2026年可以增长到109亿元，年复合增长率(CAGR)为9.6%。

摘自《全球及中国口蹄疫疫苗行业发展现状调研及投资前景分析报告》。报告明显忽略了一个风险，就是如果口蹄疫被疫苗消灭了呢…话说我国散户还很多，估计消灭需要点时间。从投资者的角度，我希望永远不要被消灭…

不知道哪里来的研报，也不知道是哪一年的市场数据，反正未来多半会更高。猪圆环和禽流感市场也不小。恰好这三个板块都有布局。金宇-口蹄疫，优邦-圆环，益康-禽流感。生物股份管理层的格局没的说…

来自研报《二价苗上市份额再提升，动保平台全面开花可期待》。从占比看，市场苗竞争在加剧！结合上图可见市场苗和招采苗市场大小差不多。

从今年我国农业农村部的公告看，国外卢旺达7月发生牛口蹄疫情，我国7月广州发生口蹄疫疫情，其他国家还有多起口蹄疫情，可见口蹄疫短期内被完全消灭是不太容易的，疫苗还是不能停。

口蹄疫总结：口蹄疫危害大，疫苗是最好的防控手段，市场容量也大。这里只分析口蹄疫苗的必要性和市场大小，未来大致的前景。其他分析看专业人士的研究报告。

圆环病毒：引起畜禽感染及死亡，比较重要的病毒包括：猪圆环病毒、鸡贫血病毒。猪圆环病毒（PVC）：已知最小的动物病毒之一。分PVC1和PVC2，PVC1非致病性病毒，PVC2为致病性病毒。2008年第20届国际猪病大会将猪圆环病毒2型列为危害养猪业的头号疾病。圆环病毒还在基因不断变异导致PVC2毒株多样性。

感染原及传播途径：感染猪鼻液、粪便等，经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪。

按这种描述，传播半径比口蹄疫那种方圆百里的传播要小。

PVC对外界抵抗力较强，PH3酸性环境很长时间不能被灭活，对氯仿不敏感，56℃-70℃处理一段时间不能被灭活，高温环境也能存活一段时间。

病毒生命力顽强，不容易消灭

PVC2主要发生在5-16周龄的猪，极少感染乳猪。急性发病猪群中，致死率可达10%，耐过猪后期发育明显受阻。但常常因为并发或继发细菌或病毒感染使死亡率大增（因为会导致免疫缺陷），可达25%以上。PVC世界范围内流行。

致死率虽然不高，但即便不死也不长肉，所以不得不防。

预防和治疗：世界各国的经验是对共同感染源作适当的主动免疫和被动免疫，做好猪场猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、气喘病和蓝耳病等疫苗的免疫接种，确保胎儿和允乳期仔猪安全是关键。因此对母猪实施合理的免疫程序至关重要。

加强饲养管理和兽医防疫卫生措施。发现病猪及时隔离，切断传播途径。注射猪圆环病毒灭活疫苗。

主动免疫：打疫苗或类毒素（即减力毒素，指经一些变性或经化学修饰而失去毒素而仍保留其免疫原性的毒素）。被动免疫：天然被动免疫：如母体抗体经胎盘或乳汁传给胎儿，人工被动免疫：打抗体。

简单理解就是最好搞好卫生，接种疫苗预防吧，已经发生了再处理成本更高。

我国猪圆环市场大小：大概20亿+（不知道是哪一年的数据，也许是17或18年的数据）。

另外的调研表明2020年猪圆环疫苗潜在市场规模在36-38亿左右，但该报告于2017年按7.1亿头出栏计算，但非洲猪瘟来了，而且研报常常就是高估，所以打个折，2020年20亿差不多了。

竞争格局：竞争激烈，有几十家。

2016年：市场规模16亿。勃林格：47.3%青岛易邦（9.3%）南农高科（8.7%）（8%）武汉中博（7.3%）（6.7%）（2.3%，2020年上半年优邦0.7亿收入，估计市占率已超5%）

猪伪狂犬病毒：猪伪狂犬病病毒在病原分类上属疱疹病毒科，伪狂犬病是一种以多种家畜和野生动物发热，奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。猪是伪狂犬病的唯一自然宿主，对其危害大。

猪伪狂犬病：是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PrV）引起的猪的急性传染病。该病在猪呈暴发性流行。可致妊娠母猪流产，产死胎及胎儿干尸化。对初生仔猪则引起神经症状，出现运动失调，麻痹，衰竭死亡，病死率100%。成年猪多呈隐性感染，但可引起呼吸道症状。是危害全球养猪业的重大传染病之一。

神经症状则代表病毒对脑细胞有损伤，这和狂犬病类似。主要危害是母猪不育和仔猪死亡，基本就是你怕啥来啥。

防治：本病无特效治疗药物，对感染发病猪可注射猪伪狂犬病高免血清，它对断奶仔猪有明显效果，同时应用黄芪多糖中药制剂配合治疗。对未发病受威胁猪进行紧急免疫接种。 本病主要应以预防为主。

中招就用免疫血清，亡羊补牢，为时不晚。疫苗免疫接种是预防和控制伪狂犬病的根本措施。这和人狂犬病治疗也很相似。

下图来自智研咨询发布的《》，我是觉得预测和实际肯定出入很大。下图是不同规模猪场的免疫比例。

1.减毒活疫苗：弱毒株分离，反复传代，我国现广泛应用的基因缺失病毒。价格低廉，良好免疫原性等优点。2.灭活疫苗：将PR病毒接种到敏感细胞，增殖后收获、杀毒、予以佐剂制成疫苗。缺点是免疫时间短，需反复接种，成本高。3.新型疫苗（基因苗）：将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。抗原基因在一定时限内的持续表达，不断刺激机体免疫系统，使之达到防病的目的。

就是gE基因缺失活苗，应该属于减毒活疫苗。

猪伪狂犬疫苗市场竞争格局：

上图是2016年的数据

武汉科前的在伪狂犬疫苗的地位和在口蹄疫的地位相似，一支独大。因扬州优邦是2017年12月获得的批文，故网上生物股份的数据有限。但从网上伪狂犬病疫苗价格算，大概3-5元/头，从2019年销量算，大概有2500万-4000万收入，故生物股份市场份额最高也不超过5%。但生物股份伪狂犬疫苗2019逆势增长，说明销售产品还是给力的。

推的一针多防“2=5”：两针“金OA+伪狂宁+瘟康（首免）”，“金OA+伪狂宁（二免）”=5针“伪狂首免、猪瘟二免、口蹄疫首免、伪狂二免、口蹄疫二免”.

这是官方微信公众号对一针多防的解释。抱上口蹄疫苗大腿，看起来伪狂宁前景可期啊。2020年年报出了就知道到底一针多防有多好。

看了下今年优邦伪狂犬疫苗的批签情况，今年批签30批（1-8月），去年同期12批，前年同期25批。而前年并没有猪瘟，今年生猪产能肯定没有 前年高，所以提升还是很明显。不过这种提升和一针多防是否有因果关系，就很难去判断了。

猪蓝耳病毒：本病曾称为“神秘猪病”、“新猪病”、“猪流行性流产和呼吸综合征”、“猪繁殖与呼吸综合征”、“蓝耳病”、“猪瘟疫”等，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种以感染猪发热、厌食,妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎,各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。

可以理解为猪界的SARS病毒吗...

该病于1987年最早发现于。发病率可达100%，死亡率可达50%以上；母猪流产率可达30%以上，继发感染严重时成年猪也可发病死亡。猪群突然发病，初期发病猪表现为发烧，体温41℃左右，以40.5℃的体温为最多。精神沉郁，不吃；眼、；咳嗽、气喘，呼吸困难，鼻孔流出泡沫或浓等分泌物；皮肤发红，耳部发紫，腹下和四肢末梢等处皮肤呈紫红色斑块状或样；部分病猪出现后躯无力、不能站立或等神经症状。

传播方式：包括口腔、鼻腔、肌肉、腹腔和生殖道。传染常常发生于猪只之间的密切接触。猪只直接接触极易造成PRRSV的传播，因此，猪场内和猪场间猪只的移动成为最主要的传播方式。

真是病如其名。杀伤还是很强的，要不然06年我国爆发也不会那么惨烈。

防控与疫苗：除了常规的防控也可以疫苗。

关于，总的来说如今尚无十分有效的免疫防制措施，如今国内外已推出商品化的PRRS和灭活苗，国内也有正式批准的灭活疫苗。然而，PRRS弱毒疫苗的毒力增强的现象和安全性问题日益引起人们的担忧。国内外有使用弱毒疫苗而在猪群中引起多起PRRS的暴发，因此，应慎重使用活疫苗。虽然灭活疫苗的免疫效力有限或不确定，但从安全性角度来讲是没有问题的，因此在感染猪场，可以考虑给母猪接种灭活疫苗。

网上各种专家的言论都是有争议，活疫苗有效，但可能中招，灭活疫苗又可能无效，所以蓝耳疫苗市场大不了。蓝耳疫苗：蓝立优：猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒活疫苗（PC株）

市场大小：七八个亿吧。

勃林格一支独大，好像没什么事儿，但明明2017年又有生产销售那么多，但从公司近几年财报披露看，2017年报上披露蓝耳疫苗有585万ml，2018年252万ml，2019年59万ml，销量直线下降，可能原因是蓝耳病疫苗市场变小（近两年没查到免费数据），或者放弃（毕竟效果不好）。

可见蓝耳病市场小不是因为蓝耳病被消灭，只是疫苗效果不好导致。

病毒种类还不少，疫苗防控有困难。

如果未来出现效果很好的疫苗，那蓝耳病疫苗市场大小不会比口蹄疫小，毕竟蓝耳病杀伤力还是很大的。但若没有有效疫苗，那蓝耳疫苗市场也就这样了。

猪瘟病毒：猪瘟的病原，危害猪和野猪，其他动物不发病。是一种急性、热性、高度接触传染病。主要特征是高温、微血管变性引起的全身出血、坏死、梗塞、瘟疫细菌传染。危害严重，对养猪业造成巨大损失。1833年首先发现于美国。

表现就像人的出血热。又一个接触才传染的病毒，如果没有疫苗，那不接触就行了呗，也有很多国家已经宣布猪瘟病毒已被消灭。但注射疫苗是最有效的预防措施。

2007年开始对猪瘟实行全面强制免疫，2017年蓝耳、猪瘟退出强制免疫。猪瘟抗原阳性检出率逐渐降低，2015年只有0.16%，抗体阳性率88%，说明疫苗有效，病毒少了。有被净化的趋势。不过从研报看，2017年我国依然有多起猪瘟疫情事件。

市场规模：退出强免前市场规模约7-8亿，取消后下降到6亿左右。研报表示市场苗价格高，取消强免后市场规模可达到15亿（信不信由你…），不过只要不是被净化，疫苗效果也不错的话，就是应该打的，这个风险大猪场扛不起。

竞争格局：没有查到具体份额，只知道竞争的公司有、、、、、、、广东永顺、等。

非洲猪瘟病毒（ASFV）：100多年前，在肯尼亚被首次确定，我国2018年8月3日首例报告，之后就是浩浩荡荡的非洲猪瘟大爆发。生命力顽强，普通猪瘟病毒DNA只有10组，而非洲猪瘟DNA成分150组。故疫苗研发慢，且DNA成分约复杂，变异概率越高，做好一辈子没有效疫苗的准备。

传染源：带病猪，带毒软蜱。

传播途径：1.污染的泔水、剩饭、饲料、水。2.污染的猪肉及制品。3.与带病猪接触。4.带毒动物及易感的蜱、壁虱等虫媒。5.污染的圈舍。6.污染的衣、鞋、工具设备、运输设备等。7.病猪尸体。8.生殖系统排泄。等等等。

真是防不胜防。如果没有疫苗，散户就放弃吧。

易感动物：家猪、野猪。

致病性：潜伏期2-19天，感染期40天，超强毒株致死率100%，中等毒力株30%-50%死亡，低毒力株仅呈现轻微或亚临床症状。

防控措施：简单说就是上面的传播途径全部掐死。

市场大小：不用说，如果有好的疫苗，那肯定全部都要打，按保底6亿头算（2017年有7亿出栏），最低1元头/份，打1次，就是6亿，如果打2次，5元头/份，7亿出栏，就是70亿。取个中间值，不少于40亿吧。网上有说上百亿的，我觉得做人还是保守点好。市场是很大的，关键是你有能力生产出有效的疫苗么。

竞争格局：不知道，肯定是可以的。

什么时候疫苗可以上市？农业部官方消息指出，中农科哈尔滨兽医研究所自主研发的非洲猪瘟疫苗进展顺利，即将进入扩大临床试验和生产性试验阶段。

我就大胆的猜了，应该进入临床试验中后期，一旦临床试验通过，后面也就个把月的时间，我相信这种疫苗只要有效，肯定审批是很快的。大胆预计，2021年上市，最迟不超过2022年，其实那时大猪场生物防控基本都已经到位了，完全可以不打疫苗，要打多半只有一种原因，疫苗成本更低。当然小散户是一直需要有疫苗的，打疫苗对小散户而言，显然成本更低。不过有了疫苗大家一起跟着暴跌的猪价进退两难吧。

禽类疫苗种类多，主要是鸡的，关键是网上的信息很少，只能大概研究一下关于鸡的疫苗。而且写到后面，一看几十种，看着就头疼。

鸡场主要疾病：1.新城疫2.禽流感3.传染性支气管炎4.传染性法氏囊病5.曲霉菌病6.大肠杆菌病7.败血支原体病8.鸡白痢9.禽霍乱等等。就只大致了解下前面四个吧。

1、新城疫病毒（NDV）：又称亚洲鸡瘟病毒。ssRNA病毒，对外界环境抵抗力较强。新城疫病毒的所有毒株都能凝集多种禽类和哺乳类动物的红细胞。

传播途径：呼吸道和消化道。

防疫措施：应以预防接种为主要的措施。

2、禽流感病毒（AIV）：属于甲型流感病毒，多发于禽类，有些也可感染猪、马、海豹和鲸等各种哺乳动物。依据其外模血凝素（H）和神经氨酸酶（N），分为16个H亚型（H1-H16）和9个N亚型（N1-N9）.感染人的主要有H5N1、H9N2、H7N7。研究表明，原本为低致病性禽流感毒株（H5N1、H9N2、H7N7），可经过6-9个月禽间流行的迅速变异而成为高致病性毒株。感染表现：急性败血型，急性呼吸道型和非典型。急性发病，往往导致死亡。高致病性禽流感死亡率50%-100%。

可见禽流感的种类之多，疫苗不可能一种就解决问题。也正因为太多，打什么疫苗也成了问题。

传播方式：水平传播，如空气、粪便、饲料和饮水等。而垂直传播（母婴传播）很少。WHO认为，病禽粪便是传播的主要渠道（随地大小便嘛，当然会出问题）。我国禽流感“不喜”晴热天气，除鸡群中的禽流感主要发生在冬春季外，没有其他明显的规律性。

与人的关系：除非禽流感病毒与人类流感病毒发生基因重组，否则它很难侵犯人类，导致人与人之间的传播。

话虽如此，在网上搜索禽流感，全是关于人的，给我的研究造成巨大的困难。

防治：隔离、科学化养殖、严格免疫。对于高致病性禽流感目前尚无治疗办法，所以大型养鸡场企业防治高致病性禽流感的策略，首先要强调预防为主。当大面积发生禽流感时，采用灭活疫苗进行紧急免疫，对于大型养鸡场来说，也是一种有效的预防措施。肉鸡注射一次，种鸡可注射3-4次。

3、鸡传染性支气管炎病毒：抵抗力弱，常规消毒方法和消毒液均能杀灭。经空气飞沫传染给易感鸡，也可经污染的饲料、饮水经消化道传染。死亡率不高，但种鸡引起产蛋量降低、蛋品质下降，小鸡生长发育不良而经济损失。在幼雏表现症状严重，死亡率可达25%。

预防：弱毒疫苗接种对预防本病十分重要。

4、传染性法氏囊病毒（IBD）：传染性法氏囊病是由双RNA病毒科禽双RNA病毒属病毒引起的一种急性、高度接触性和免疫抑制性的禽类传染病。法氏囊为禽类特有的免疫器官，该病引起免疫抑制（让我想起了艾滋病），对法氏囊造成不可逆病变，故对马立克氏病和新城疫疫苗接种的反应能力下降，也使鸡对球虫、大肠杆菌、腺病毒、沙门氏杆菌更易感，造成鸡业的巨大损失。病毒抵抗力强，耐酸不耐碱。强毒株死亡率高达55%以上。自然宿主只有火鸡和鸡，但从火鸡和鸡分离出的病毒不会互相感染。病鸡是主要传染源，可经呼吸道及消化道感染。发生该病的鸡场，往往有马立克氏病和新城疫等疫苗接种失败。

防治：选择健康的雏鸡，严格鸡舍消毒，制度科学的免疫制度（接种疫苗）和药物治疗（建议直接打抗体）。

禽类疫苗市场大小：2015年市场超过30亿，其中禽流感H5类疫苗市场规模约15亿。2017年禽类疫苗市场规模约40亿，高致病性禽流感（H5+H7）疫苗市场规模约10-20亿。2020年预计高致病性禽流感疫苗市场规模达到29亿。（以上数据均来自各公司研报）

市场竞争格局：市场企业数量相对其他疫苗而言较少。高致病性禽流感可生产的企业如下图：

其中（华南农大）比较奇葩，H5N2，其他都是H5N1。主要的公司、均可以生产。

其他的禽类疫苗没找到数据，好在高致病性禽流感疫苗占比较高，部分反映了禽类疫苗的竞争格局。

同禽流感疫苗一样，网上找到的免费数据很少，很多都是与人相关的信息。

布鲁氏菌：革兰阴性、细胞内寄生菌（估计是我研究的唯一一种细菌，但细胞内寄生，和病毒又相识），主要感染牛、羊、猪、狗及骆驼、鹿等。接触感染动物或被感染食物以及实验室接触可传播给人类。为人畜共患病。人类普遍易感。1814年首次描述为地中海弛张热。我国最近一次感染人事件为2019年12月6日，甘肃兽医研究所96人感染。布鲁氏菌对光、热、常用化学消毒剂均很敏感。对家畜的影响最明显为流产、公畜失去配种能力等。

预防措施：简单理解就是接触感染就是不要接触带病毒的动物、食物。没有人类特效的疫苗，但有适用于动物的疫苗。对牲畜主要采用免疫注射（疫苗）和捕杀牲畜为主的综合防治措施。 

治疗：使用抗生素是治疗布鲁氏病的主要方法（对人）。对牲畜没有有效的治疗方法。

常见布病疫苗主要有3种：S2、A19、M5。

S2菌株：可口服可注射，为毒力最弱布病毒株，也是免疫谱最广布病毒株。

A19菌株：是牛布病专用疫苗，对牛产生良好持久免疫力，最长6年，是牛布病最佳疫苗。

M5菌株：由我国从羊种布鲁氏菌中分离培养，对牛羊产生较好免疫力，但该菌株毒力较强且存在毒力返强风险，该产品市场现已不生产。

市场大小：真没找到，可能在几个亿。

竞争格局：网上数据据说只有中牧、、有生产资格（2014年数据），中牧2019年兰州时间还被取消布病生产资格。据生物股份董秘说法（2020年）是生物股份的布病疫苗主要是政府采购为主（90%以上），价格有提升，但和国外价格依然差距较大，在行业内相对较大优势，定价参考同类产品市场定价。

疫苗防止病毒感染须需要看防疫效果，效果好则好，效果不好则可能是灾难，并不是所有疫苗效果都很好，如蓝耳疫苗就有争议。

根据MarketsandMarkets提供的数据，2016年全球动物疫苗市容量约为60.8亿美元，预计到2022年将达86.6亿美元，年均复合增速约为5.9%。全球动物疫苗市场主要为欧美等发达国家控制，其中前5大巨头、赛诺菲-巴斯德、默克、制药、占据全球80%市场份额。近年来，基于产品质量安全、技术高度成熟等因素，欧美动物疫苗市场增长放缓，中国、印度等新兴国家动物疫苗市场的快速增长成为全球动物疫苗市场的新亮点。我国动物疫苗市场规模由2000年的约10亿元增长至2016年的203亿左右，年均复合增长率高达20%，预计未来五年动物疫苗行业仍将维持较快增长，到2022年将增长到325亿元左右。

营收最高的年份19亿营收，成长空间很大。

总结心得：通过对生产疫苗的研究，差点把自己逼成兽医，才基本将生物股份的主要疫苗有了初步了解。看起来，生物股份主要的疫苗都有生产，这点是我开始没想到的。这个赛道很长，产品随时有扩容减容的可能，当然长期看是扩容。

同时发现这个赛道还有其他优秀的公司，如、、等。这个赛道的各个企业并没有太多直接的竞争，大多在自己擅长的领域很有话语权。未来随着企业的做大做强，难免会有更多激烈的竞争。

还有一点就是通过梳理，知道了哪些疫苗市场大，哪些疫苗没市场，公司研究的方向是不是有前途就容易理解了，一些突发事件的影响会对企业有多大影响心中就有大致判断了。比如去年布鲁氏菌疫苗车间被关停，其实影响不大，市场砸出的就是黄金坑，可惜当时就看不懂，一心认为最牛，其他的疫苗公司都不值一提，其实这是不对的。

虽然生物专一做疫苗是好事，但对于立志成为国际化动保公司来说，还需要有口蹄疫苗以外的重磅疫苗产品，以及疫苗以外的其他产品，产品单一意味着业绩波动大，抗风险能力弱。这让我在读公司财报时会更注意公司投入的方向是否符合其制定的目标。

参照国际动保龙头，公司外延成长的空间非常巨大。而硕腾成长中靠不断并购。也在并购、成立新公司等扩张产品矩阵，以及剔除无关业务，基本是符合自己提出的公司发展目标的。

对于专业人士写的研报而言，我这就是满足我的求知欲而已，网上搜索各种资料其实完全没有深度，且不一定数据正确。不过即便是草草的研究，也将我对的理解以及整个动保行业提升了一个台阶，这完全是意料之外的，我压根没想到研究病毒和疫苗本身会对我的认知有那么大的影响。

这是我第一次自己提问题自己找答案。我想以后我会给自己提更多问题，解决问题。今天早晨听精英日课突然又想到个好问题，就是“市场什么时候会失效”，虽然知道个大概，但想着寻找这个问题答案的过程必然会很有启发，我就手心发痒，忍不住要开始去寻找问题答案了。

启衡星高灵敏探针法q Mix

Starlighter HS Probe qPCR Mix(Universal） 是基于超高性能热启动工程改造Taq Pro 聚合酶研发的即用型高灵敏探针法qPCR Mix。优化的缓冲液反应体系可有效降低非特异性扩增，大大增加qPCR的扩增效率，适用于超高灵敏的qPCR检测。该产品已通过动物单细胞胚胎性别检测进行验证，可高效扩增低至fg级模板的DNA。该qPCR Mix中的聚合酶使用进行封闭，90℃ 以上30 s可激活酶活性。该产品中的DNA聚合酶催化5’→3＇方向合成DNA，有5’ →3’ 外切酶活性，无 3’→5’ 校正外切酶活性。在扩增产物具有3’dA突出末端时，扩增1kb仅需1-l0 s。可兼容不同 qPCR仪器的标准及快速模式。由于该具有超高的检测灵敏性以及抗抑制剂扩增，使其更适用于动物疫病及等方面的应用。

一种抗非洲猪瘟病毒的特异性IgY抗体及制备方法和用途
【专利摘要】本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性IgY抗体及其制备方法，及利用该方法生产的IgY抗体在特异性检测非洲猪瘟病毒抗体中的应用。该特异性IgY抗体可以通过以下方法制备：利用基因重组表达的方法制备p54蛋白抗原，免疫23周龄海兰蛋鸡，共进行4次免疫，收集鸡蛋，利用饱和硫酸铵沉淀法提取和纯化卵黄免疫球蛋白(IgY抗体)。基于该特异性IgY抗体所建立的检测非洲猪瘟血清抗体的竞争ELISA方法，效果良好，只有非洲猪瘟的阳性血清检测结果呈阳性，与商品化ASFV抗体检测ELISA试剂盒的平行检测结果一致。该竞争ELISA方法可用于非洲猪瘟的血清流行病学普查和监测，防控该病经出入境口岸传入国内。
【专利说明】一种抗非洲猪瘟病毒的特异性IgY抗体及制备方法和用途

[0001]本发明涉及动物病毒抗体检测领域，特别是涉及一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白特异性IgY抗体及制备方法和用途。

ASF)是猪的一种烈性病毒病，自1909年首次在非洲发现以来，目前已蔓延扩散到整个非洲、欧洲、南美洲和亚洲等国家和地区，发病国家因此蒙受了巨大的经济损失，该病被国际动物卫生组织(OIE)列为重要动物疫病。我国虽然还没有发现非洲猪瘟疫情，但根据周边国家的发病情况，以及2006年以来我国部分省市暴发的猪流行性疫病给我们敲响了警钟，我国已面临ASF传入和流行的严重威胁。
K205R)，其中针对p54、K205R、A104R和B602L这4种蛋白的抗体滴度较高，维持时间也较长。p54是ASFV重要的结构蛋白，由E183L基因编码，分子质量约为25Ku，具有很好的抗原性，参与病毒中和反应。在弱毒攻毒后7d?1d即可检测到抗体，用该蛋白建立的ELISA抗体检测方法，具有很高的敏感性、特异性和稳定性，是目前综合评价最好的ELISA检测抗原。
[0004]鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)作用等同于哺乳动物的IgG，但与其他哺乳动物制备多克隆抗体相比，特异性IgY抗体制备具有抗原用量少、制备周期短、成功率高、动物创伤小、产量大等优势。IgY与IgG相比，其稳定性较强:室温保存适宜温度下可保存较长时间(6个月后中和病毒的活性没有太大的改变)，但浓度较低时(低于0.lmg/mL)放置5个月其活性开始下降，耐高温、耐酸，从而方便IgY抗体的运输和使用。目前纯化的IgY抗体已广泛在免疫沉淀反应、免疫电泳、ELISA、免疫电镜、免疫吸附和Western-blot等检测技术上应用。
[0005]非洲猪瘟属于一种外来疫病，目前我国还没有该病的报道，但近邻俄罗斯曾多次发生该病，最近的一次爆发于2014年8月，因此做好实验室技术储备，对于监测和防控该病的传入具有重要作用。目前关于ASFV p54蛋白的研究，主要集中在原核表达和鼠源单克隆抗体的制备以及基于此建立的ELISA方法，还未见特异性抗ASFV p54蛋白的鸡IgY抗体制备的报道。本发明旨在建立抗ASFV-p54蛋白的特异性IgY抗体的制备方法及基于IgY抗体的检测非洲猪瘟抗体的竞争ELISA方法。

[0006]本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种抗ASFV p54蛋白的特异性卵黄免疫球蛋白(抗体)及其制备方法，并进一步提供基于抗ASFV p54蛋白IgY抗体的检测非洲猪瘟血清抗体的竞争ELISA方法。
[0007]本发明提供了一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性IgY抗体的制备方法，包括以下步骤:
[0008](I)制备非洲猪瘟病毒重组p54抗原，所述p54抗原是用连接有所属重组p54蛋白基因的原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC在大肠杆菌BL21(DE3)中表达得到的；
[0009](2)应用(I)所述重组p54抗原免疫产蛋鸡；所述免疫产蛋鸡的方法如下:
[0010]第一次免疫:将免疫抗原与等量弗氏完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200 μ g/只；
[0011]第二次免疫:第一次免疫后14d，将免疫抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200 μ g/只；
[0012]第三次免疫:第二次免疫后14d，将免疫抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200 μ g/只；
[0013]第四次免疫:第三次免疫后30d，直接注射免疫抗原，不使用佐剂，抗原免疫剂量为 200 μ g/ 只；
[0014](3)收集鸡蛋，分离蛋黄，提取卵黄免疫球蛋白，所述卵黄免疫球蛋白中即含有特异性的抗非洲猪瘟病毒P54蛋白的IgY抗体。
[0015]本发明的内容还包括按照上述方法制备的抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性IgY抗体。
[0016]进一步的，本发明的内容还包括所述的抗非洲猪瘟病毒P54蛋白在检测非洲猪瘟病毒抗体的应用。
[0017]具体的，本发明是通过以下技术方案实现的:
[0019]根据pET_52b (+) 3C/LIC质粒试剂盒说明，设计引入特定序列的p54基因的上下游引物，从含有ASFV-p54基因的pMD 18-T-p54质粒模板中PCR扩增该基因，通过T4DNA聚合酶的作用，将末端粘性化的P54基因克隆入pET-52b原核表达载体，转化感受态细胞E.coli BL21(DE3)菌株，挑取单菌落经PCR和测序鉴定；阳性克隆以lmmol/L的异丙基硫代-β -D-半乳糖苷(IPTG)诱导2h，提取表达产物用SDS-PAGE检测；用蛋白纯化试剂盒(N1-NTA Fast Start Kit, Qiagen公司)纯化表达的重组蛋白，Western-blot检测蛋白的免疫原性，用BAC法测定蛋白浓度，以此纯化蛋白作为抗原备用。
[0021]将400 μ g/mL重组蛋白与等体积的弗氏完全佐剂乳化，对23周龄的海兰蛋鸡进行首免，0.5mL/只，即200 μ g/只；分别间隔2周进行二免、三免，免疫原为400 μ g/mL p54纯化蛋白与弗氏不完全佐剂等体积乳化后的乳剂，免疫剂量为200 μ g/只；间隔一个月后用不加佐剂的纯化蛋白(200 μ g/只)进行第四次加强免疫；第一次免疫后开始收集鸡蛋，编号4 [0023]卵黄水提液的制备:将收集的鸡蛋以75%酒精消毒，破壳，流出蛋清，收集卵黄，用蒸馏水充分冲洗后在无菌滤纸上滚动，除去残留的卵白蛋白，刺破卵黄膜，加卵黄液9倍体积pH5.2的蒸馏水稀释，充分搅匀后4°C静置过夜(12h)，次日取上清液以12 OOOrpm,4°C离心30min，取上清液备用。
[0024]硫酸铵沉淀法进一步提纯:将上述制备的卵黄水提液分别以w/v终浓度为50%、33%的硫酸铵盐析，4°C静置过夜；12 000rpm，4°C离心30min，弃上清，沉淀用少量0.01M、PH7.2的PBS溶解，并用透析袋除盐。
[0025]本发明进一步提供了基于上述抗ASFVp54蛋白的IgY抗体建立检测ASF血清抗体的竞争ELISA方法，包括:
[0026]用pH值9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液稀释ASFV-p54蛋白抗原至工作浓度，100 μ L/孔包被酶标板(2.5yg/孔蛋白粗提物)，37°C包被2h或4°C过夜，甩干，备用；取酶标板，加入1:10稀释的ASFV阳性猪血清、阴性血清和待检血清，100 μ L/孔，37°C作用Ih,洗涤液洗板5次；加入一定稀释度的纯化ASFV特异性鸡IgY抗体，100 μ L/孔，37°C作用45min，洗涤液洗板5次；加入1:5000稀释的酶标抗体(HRP标记的兔抗鸡IgY)，100 μ L/孔，37°C作用45min，洗涤液洗板5次；加入底物，100 μ L/孔，室温避光显色10分钟；加终止液终止反应，50 μ L/孔，酶标检测仪测0D450的值。
[0027]本发明以重组ρ54蛋白为抗原免疫鸡获得了特异性的抗ASFV ρ54的IgY抗体，制备的特异性IgY抗体可用于ASF竞争ELISA检测。与鼠源等动物的抗体相比，IgY物理性质稳定，具有不激活哺乳动物补体，不结合哺乳动物Fe受体或细菌，不与类风湿因子发生非特异反应，易于保存和运输等优点，可明显降低检测的假阳性率。
[0028]为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。

[0030]其中M:蛋白质分子质量标准；1:阴性对照；2:空白对照；3:重组表达蛋白。
[0032]其中M:蛋白质分子质量标准；1:大肠杆菌超声裂解上清对照；2:纯化的p54蛋白。
[0035]其中M:预染蛋白质分子质量标准；1，2:纯化的IgY抗体。
[0037]其中M:预染蛋白质分子质量标准；1:纯化的p54蛋白与IgY的杂交结果。

[0038]以下实施例是为了进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0039]实施例1:非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达和纯化
[非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达
BL21(DE3)菌株，在含100mg/L氨苄青霉素(Amp)的LB平板上培养，挑取单个菌落，接种于2mL含100mg/L氨苄青霉素的LB培养液中，37°C，200rpm恒温摇床振荡培养至0D600值为0.6左右，加入终浓度为ImM的异丙基硫代-β -D-半乳糖苷(IPTG)，诱导培养2h。将上述菌液4°C离心15min，去上清，收集菌体。用PBS重悬沉淀，40C 1000rpm离心15min，去上清。用破菌缓冲液重悬菌体，冰上超声破碎，4°C离心15min，收集上清和沉淀。将沉淀用细菌细胞蛋白裂解液处理，用变性不连续的12% SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色，观察电泳结果，光密度扫描分析抗原纯度。
[0042]诱导表达产物的SDS-PAGE结果如图1所示，在分子量大小约为25Ku处出现一条特异性条带，与理论推测结果一致，说明含有重组表达载体的大肠杆菌在IPTG的诱导下表达出了目的蛋白。
[非洲猪瘟病毒p54蛋白的纯化
[0044]取出甘油菌，在20mL含氨苄青霉素的LB中扩大培养后，取出lmL，4400rpm离心1min,将上清倒掉，用500 μ L新鲜无菌LB重悬菌体。取100mL锥形瓶，加入200mL灭菌含氨苄青霉素的LB培养液，将重悬的菌体加入到LB培养液中，370C，225rpm进行扩大培养，当菌液的OD值达到1.0左右时加入IPTG诱导表达2h。利用蛋白纯化试剂盒(N1-NTA [0045]I)纯化柱准备:取出纯化柱，上下轻轻颠倒几次，使柱中的树脂颗粒重悬。将纯化柱竖直放置，打开纯化柱的盖子，移去柱子底部的密封帽，使柱中的液体在重力作用下自然过柱。
[0046]2)菌液收集:将诱导培养后的菌液加入到50mL的离心管中，常温下4000 X g，离心1min,弃上清,收集菌体。
[0049]5)结合:将上清液加入到纯化柱中，让上清液在重力作用下自然过柱。
[0050]6)洗漆:加入4mL native Wash Buffer到纯化柱中，重力作用下过柱,弃洗液。用该洗涤缓冲液重复洗涤一次。
[0051]7)洗脱:在纯化柱下放置新的灭菌15mL离心管,加入2mL Elut1n Buffer,重力作用下过柱，收集洗脱液，此洗脱液即含有纯化的表达蛋白。
[0054]采用Western-blot方法对纯化后的蛋白进行抗原性分析,具体步骤如下:
[0058]4)封闭:转膜后，将NC膜在转膜缓冲液内浸泡5min，转移到TBST洗液中浸泡3min，然后在1% BSA的TBST中，4°C过夜封闭。弃封闭液，用TBST洗膜3次，5min/次。
[0059]5)加阳性血清:将膜浸在1:200稀释的非洲猪瘟阳性血清中，37°C孵育lh。将膜取出，用TBST洗涤3次，5min/次。
[0061]7)底物显色:将膜浸在DAB显色液中，室温避光显色5min。然后将膜取出，浸在双蒸水中，观察结果。
[0062]结果如图2所示，重组表达蛋白p54可以和非洲猪瘟标准阳性血清反应，阴性对照的蛋白不与非洲猪瘟标准阳性血清反应，试验结果表明原核重组表达的P54蛋白具有很好的抗原性。
[0065]实验动物分组:健康的23周龄待开产的海兰蛋鸡，共12只，随机分为3组，每组4只。实验分组如下:A组为p54抗原免疫组；B组为pET-52b (+) 3C/LIC阴性质粒抗原对照组；C组为PBS对照组。
[0067]首免的免疫原为p54抗原和阴性质粒抗原分别与等体积的弗氏完全佐剂乳化后的乳化液，二免和三免的免疫原为P54抗原和阴性质粒抗原分别与等体积的弗氏不完全佐剂乳化后的乳化液，四免为不加佐剂的P54抗原和阴性质粒抗原。
[0068]⑴A组(p54抗原免疫组):每只鸡分别在第0、2、4、8周经胸肌三点肌肉注射p54抗原，0.5mL/次，即200 μ g/只。
[0069](2)B组(阴性质粒对照组):每只鸡分别在第0、2、4、8周经胸肌三点肌肉注射经BL21诱导后的阴性质粒，0.5mL/次，即200 μ g/只。。
[0072]分别于每次免疫前(即0、2、4周)、末次免疫后2周翅静脉采血，置室温自然凝固后,剥离血块,2000rpm离心lOmin，分离血清，100 μ L/管分装，_20°C保存备用。
[0074]—免后开始收集鸡蛋，编号4 C保存备用。
[0075]用间接ELISA方法检测血清中ASFV_p54蛋白抗体滴度的变化，以推测鸡蛋中特异性抗ASFV-p54蛋白的IgY抗体的产生情况。
[特异性IgY抗体的提取
[0078]采用水稀释法进行IgY的初步分离:免疫鸡所产鸡蛋的外壳用清水洗干净(或用消毒过的湿布擦净)后，用75%的酒精擦拭，打一小孔，流出蛋清，从小孔内加入无菌去离子水，以尽量去除残留蛋清，重复3次，尽量去除蛋清，取出卵黄，蒸馏水漂洗，将蛋黄在滤纸上滚动，除掉表面的蛋清，或用滤纸轻轻擦拭卵黄表面，尽可能去除卵黄表面残余的蛋清，去除卵黄膜得到纯的卵黄液(或刺破蛋黄膜，收集蛋黄液)，并量其体积，用蒸馏水稀释9倍后调节pH至5.2，4°C静置过夜(12h)，次日取其上清液以12 OOOrpm，4°C冷冻离心30min，去除沉淀取其上清液，其中上清液中包含所要提取的IgY，即卵黄水提液(WSF)。
[.2硫酸铵沉淀法进一步提纯
[0080]在上述制备的卵黄水提液中滴加等体积饱和硫酸铵溶液使其饱和度达到50%，4°C静置过夜后，12 OOOrpm, 4°C离心30min，弃上清，离心得到沉淀物。用等体积蒸馏水溶解后滴加饱和硫酸铵溶液使其饱和度达33%，4°C静置Ih后，12 OOOrpm，4°C离心30min得到沉淀物，沉淀用少量0.01M、pH7.2的PBS溶解，并用透析袋除盐。
[卵黄中IgY抗体效价的测定
[0083]采用ELISA方法测定卵黄中特异性IgY抗体的效价变化，具体操作步骤如下:
[0085]2)取出96孔板，弃去包被液，加入封闭液，37°C温育2h，用PBST洗涤5次。
[0086]3)用抗体稀释液(0.1 % BSA的PBST)将鸡IgY抗体从1:200开始做倍比稀释，每孔加入100 μ L，每个样品做3个重复，同时设阳性对照、阴性对照和空白对照，37°C孵育lh，用PBST洗涤5次。
[0089]6)每孔加入50 μ L终止液终止反应，酶标仪测定并记录各孔0D450值，计算每个样品的平均值。
[0091]结果如图3显示，在首免后7d的鸡蛋中即可检测到抗ASFV p54蛋白的特异性IgY抗体，抗体滴度约为1:256，即1:28，而后随着免疫次数的增加，抗体滴度也随之升高，在三免后1d特异性IgY抗体滴度达到最高水平(1:4096，1:212);此后抗体滴度略有下降(1:1024，1:210)，四免后抗体滴度略有升高，接近1:4096，四免后一个月抗体滴度仍维持在该水平。因此采用三免后1d的鸡蛋提取并纯化特异性的IgY抗体后用于竞争ELISA检测的研究。
[特异性IgY抗体的鉴定
[0093]采用SDS-PAGE方法分析提纯的IgY抗体的纯度，结果如图4所示，还原后的IgY抗体电泳可见2条带，相对分子质量约为68Ku和25Ku，分别为IgY的重链和轻链。
[0094]采用Western-blot方法对初步提纯后的特异性IgY抗体进行免疫原性分析，具体步骤参见实施例1中的1.3 (纯化p54蛋白的Western-blot鉴定),只需将一抗更换为特异性IgY抗体，二抗更换为HRP标记羊抗鸡IgY即可。
[0095]Western-blot结果显示(图4),制备的特异性IgY抗体可与表达的p54蛋白反应，在大小约为25Ku处形成特异性的反应条带，结果表明制备的IgY抗体是特异性针对ASFVP54蛋白的，且具有免疫活性，可用于后续的非洲猪瘟抗体的竞争ELISA检测的研究。
[0096]实施例3:p54蛋白特异性IgY抗体在检测非洲猪瘟抗体竞争ELISA中的应用
[0097]利用原核表达的P54蛋白和特异性抗ASFV-p54蛋白的IgY多抗建立了检测非洲猪瘟抗体的竞争ELISA方法，具体步骤如下:
[0099]2)取出96孔板，弃去包被液，加入封闭液，37°C温育2h，PBST洗涤5次。
[0104]7)每孔加入50 μ L终止液终止反应，酶标仪测定并记录各孔0D450值。
[0106]竞争ELISA结果显示，该方法除了对非洲猪瘟阳性血清检测结果为阳性外，对猪传染性胸膜肺炎阳性血清、猪瘟阳性血清、猪伪狂犬病阳性血清、猪口蹄疫阳性血清及猪蓝耳病阳性血清的检测结果均为阴性，与商品化ASFV抗体检测ELISA试剂盒的平行检测结果一致，说明特异性的IgY抗体可用于竞争ELISA方法检测ASF抗体。
[0107]本发明未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现。
[0108]以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
1.一种抗非洲猪瘟病毒P54蛋白的特异性IgY抗体的制备方法，包括以下步骤: (1)将非洲猪瘟病毒P54蛋白基因连接在原核表达载体pET-52b(+) 3C/LIC上，将所述表达载体转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中，并诱导其表达，获得所述非洲猪瘟病毒重组p54蛋白抗原； (2)应用(I)所述重组p54抗原免疫产蛋鸡；所述免疫产蛋鸡的方法如下:第一次免疫:将免疫抗原与等量弗氏完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200 μ g/只； 第二次免疫:第一次免疫后14d，将免疫抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200 μ g/只； 第三次免疫:第二次免疫后14d，将免疫抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200 μ g/只； 第四次免疫:第三次免疫后30d，直接注射免疫抗原，不使用佐剂，抗原免疫剂量为200 μ g/ 只； (3)收集鸡蛋，分离蛋黄，提取卵黄免疫球蛋白，所述卵黄免疫球蛋白中即含有特异性的抗非洲猪瘟病毒P54蛋白的IgY抗体。
2.根据权利要求1所述的方法制备获得的抗非洲猪瘟病毒P54蛋白的特异性IgY抗体。
3.权利要求2所述的抗非洲猪瘟病毒p54蛋白在检测非洲猪瘟病毒抗体的应用。
【发明者】张彩虹, 花群义, 刘建利, 曹琛福, 陶虹, 宗卉, 杨俊兴, 吕建强, 高又文, 孙洁, 曾少灵, 廖立珊, 唐金明, 黄超华 申请人:深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心