东南大学博士学位论文工作电极，通过氨基功能化使工作电极表面形成一层富含氨基的膜，进一步将PB和 东南大学博士学位论文 工作电极，通过氨基功能化使工作电极表面形成一层富含氨基的膜，进一步将PB和 TB修饰的金纳米树脂复合微球分别固定到工作电极上，随后anti．CEA和神经烯醇化酶 抗体(NSE antibody，anti-NSE)共价吸附在工作电极上，制得一种同时检测CEA和NSE 的电化学免疫传感器。本实验对制备PB和TB修饰的金纳米树脂复合微球及其标记的 免疫传感器做了电化学表征，并对免疫传感器的实验条件进行优化。在最优化条件下， 该免疫传感器检测CEA和NSE的最低检测限分别是O．11 ng／mL和0．08 ng／mL。 4．为了避免信号分子发生氧化还原反应和提高检测的稳定性，基于纳米结构的SERS效应， 利用拉曼信号分子在金纳米树脂复合微球表面吸附，发展一种基于SERS技术检测一种 或两种肺癌标志物的新方法。本研究将生物相容性好的壳聚糖稳定的金纳米颗粒固定在 基底表面，用于捕获抗体的固载，可有效保持其生物活性。利用金纳米树脂复合微球的 大比表面积，可提高标记抗体的固载量及其与识别抗原的结合效率，将信号分子(尼罗 蓝A，Nile blue A，NBA)和标记抗体修饰到金纳米树脂复合微球表面形成标记探针。 本研究成功构建了一个双抗夹心式SERS免疫探针来检测溶液中CEA的浓度。同时， 利用两种具有可区分SERS特征峰的拉曼信号分子(4一巯基苯甲酸和NBA)，构建一个 可以同时检测两种肺癌标志物的SERS免疫探针。 5．提出了一种基于金纳米树脂复合微球双模式、高通量检测肺癌标志物的方法，并用电化 学和SERS系统地表征检测信号的变化。经过一系列的筛选，选择两种具有可区分的电 化学和SERS特征峰的硫堇和NBA，将其标记到金纳米树脂复合微球上构建一个电化学 和SERS双模式的免疫传感器，实现了对CEA和细胞角蛋白19片段(Cytokeratin 19 fragment，CK．19)的定量检测。采用双抗夹心法，标记探针、目标抗原和捕获探针通过 抗体一抗原一抗体特异性免疫反应形成免疫复合物。当免疫复合物形成后，就可以将其放 置于电化学工作站或者拉曼光谱仪下进行电化学或SERS检测。免疫传感器在电化学模 式下可以检测到CEA和CK一19的最低浓度分别为0．01 ng／mL和0．04 ng／mL；在SERS 模式下检测到CEA和CK-19的最低浓度分别为0．62 ng／mL和1．01 ng／mL。该双模式免