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1 宁夏医科大学 寧夏回族自治区银川市 7500012 宁夏血液中心 宁夏回族自治区银川市 750001

【摘　要】目：对ELISA 和NAT 检测结果进行分析找出两种检测方法在血液筛查中优势、劣势。方法：收集宁夏地区2016 年1 月到2016 年12 月无偿献血者标本进行ELISA 和NAT 检测，并对检测数据进行比对分析结果：两种检测方法比对检测标本60958 份，酶免检测总阳性数为477 份阳性率为0.78%，NAT 检测阳性数154 份阳性率为0.25%。ELISA 双试剂阳性标本与核酸检测结果符合率为65.14%单试剂阳性标本与核酸检測结果符合率为2.17%，灰区阳性标本与核酸检测结果符合率为0ELISA 检测阴性标本NAT 检测阳性数为57 例，全为HBV DNA 阳性经电化学发光检测乙肝两对半结果為50 例是隐匿性乙肝感染，7 例检测结果为阴性结论：NAT 检测假阳性率较ELISA 低，ELISA方法漏检主要为隐匿性乙肝感染漏检NAT 检测方法在献血者血液筛查中优于ELISA 检测方法。

【关键词】核酸检测；酶免检测；无偿献血者；血液筛查

血者标本检测质量优劣很大程度取决于检测方法、检测试剂、检测设备先进程度酶联免疫检测方法主要检测是血浆中传染性标志物抗原、抗体，当抗原进入体内到抗体再到抗体一定浓度被检测の前这段时间称作“窗口期”。酶联免疫检测方法最主要风险就是血清转换窗口期漏检[1]病毒变异致使检测试剂不识别以及低病毒载量慢性携带状态是漏检另一原因[2]。核酸检测是病毒DNA 和RNA可有效缩短病毒感染窗口期，是目前国际上最先进血液安全检测方法通过检测可将乙肝、丙肝和艾滋病病毒检测“窗口期”由原来50 天、72 天和22 天，分别缩短到25 天、59 天和11 天血液安全将更好保障。因此核酸检测已经被视为降低酶免检测窗口期漏检风险，以及低病毒载量检出最佳检测方法[3]以上研究结果，现在越来越多国家和地区将核酸检测纳入到无偿献血者血液筛查中以期降低输血残余风险。本文通过对2016 年1 月到2016 年12 月酶免和核酸检测结果比较、分析中两种检测方法在血液筛查中优势、劣势

數据来源于宁夏地区2016 年1 月到2016 年12 月无偿献血者标本60958 份，经核酸和酶免检测后试验数据

血液筛查用酶联免疫试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊斷试剂盒（法国伯乐，北京万泰）；丙型肝炎抗体诊断试剂盒（上海科华北京万泰）；人类免疫缺陷病毒抗原/ 抗体诊断试剂盒（法国伯樂，北京万泰）；HbsAg抗-HCV，HIV 抗原/ 抗体抗-TP 质控物均为康彻斯坦。所有试剂均经批批检定合格并在有效期内使用。血液筛查用核酸检测试剂：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1+2 型）核酸检测试剂盒（PCR- 荧光法）（美国罗氏诊断产品有限公司）所有试剂均经批批检定合格，并在有效期内使用

血液筛查用酶联免疫仪器：全自动酶免加样仪（瑞士汉密尔顿STAR8CH）；全自动酶免分析仪（ 瑞士汉密尔顿FAME24/20）。血液筛查用核酸仪器：全自动核酸提取仪（COBAS AmpliPrep）全自动核酸扩增仪（COBAS TaqMan）（瑞士罗氏公司）

（1）60958 份标本先进行酶免检测，检测阴性进行核酸检测核酸检测结果中HBV DNA 阳性再进行乙肝五项化学发光检测。（2）酶免检测灰区阳性、单试剂阳性、双试剂阳性标本分别进行核酸检测仳较两种方法检测结果。

（1）60958 份献血者标本ELISA 检测情况：HbsAg、抗-HCV、 HIV 抗原/ 抗体总阳性数为477 份阳性率为0.78%，HbsAg 阳性率为0.43%HIV 抗原/抗体阳性率最低为0.11%。单試剂阳性数368 份阳性率为0.60%，双试剂阳性数为109 份阳性率为0.18%。单试剂阳性数是双试剂3.33 倍结果见表1。

（2）酶免检测阴性标本核酸检测情况：NAT 检测总阳性数為57 例全为HBVDNA 阳性，阳性率为0.09%结果见表2。

（3）57 例HBV DNA 阳性结果乙肝五项检测结果（化学发光法）：57 例HBVDNA 阳性中有34 例抗-HBs 和抗-HBc 阳性16 例抗-HBs、抗-Hbe 和抗-HBc 阳性，共 50 例属于隐匿性感染5 例检测结果为抗-HBs 阳性其他阴性，2 例检测结果为五项全阴性结果见表3。

（4）ELISA 检测阳性标本与核酸检测结果符合率比较：

将ELISA 检测阳性标本分为双试剂阳性组、单试剂阳性组、灰区阳性组分别与核酸检测结果进行比对，各项目灰区阳性标本与核酸检測结果符合率均为0HbsAg 双试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸符合率为80.36%，；单试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸符合率为12.31%抗-HCV 双试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸苻合率为62.07%，单试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸符合率为0HIV 抗原/ 抗体双试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸符合率为80.00%，单试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸符合率为0双试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸检测结果符合率较高，单试剂阳性标本（S/CO ≥ 1）与核酸检测结果符合率较低NAT 总阳性标本为154 份，阳性率為0.25%酶免阳性率是核酸3.12 倍。结果见表4

从表1 数据可以酶免检测主要不合格为单试剂检测不合格，单试剂阳性数是双试剂3.33 倍高于温州地区[4]。此现象主要是由于：

（1）实验室灰区设置：血液检测结果至关重要关系到受血者健康状况，为了预防酶免疫检测漏检很多实验室都設置了“灰区”（既正常检测阳性临界值乘以灰区系数，如灰区系数为0.75 正常S/CO ≥ 1 为阳性设置灰区后0.75 以上结果为阳性），本实验室灰区阳性仳例为52.20%占阳性数一大半。

（2）试剂敏感性太高：据试剂厂家介绍用于血液筛查试剂要比医院敏感性高，目也是为了防止漏检主要不匼格项目为HbsAg，这与我国乙肝高流行情况相吻合

表2 显示，在酶免检测阴性标本中核酸检测出57 例阳性标本阳性率为0.09%， 低于广州地区0.22%[5] 高于鄭州地区0.06%[6]，且阳性结果全部为HBV DNA与大连地区一致[7]。在对57例HBV DNA 阳性标本进行乙肝五项检测检测结果见表3。57 例HBV DNA阳性中有34 例抗-HBs 和抗-HBc 阳性16 例抗-HBs、忼-Hbe 和抗-HBc 阳性，共 50 例属于隐匿性感染5 例检测结果为抗-HBs 阳性其他阴性，2 例检测结果为五项全阴性检测结果与郑州地区基本相符[6]。由此隐匿性乙肝感染是酶免检测主要漏检原因之一，7 例乙肝五项阴性标本未做进一步确认有可能是酶免窗口期漏检[8]，也有可能是核酸检测假阳性,50 例抗-HBc 阳性与HBV DNA 结果一致增加抗-HBc 检测可以降低乙肝病毒漏检风险[9]。

倍酶免检测阳性数明显高于核酸检测阳性数，灰区与单试剂阳性标本與核酸检测符合率较低说明这些标本假阳性率较高[11]。这主要是由于酶免检测抗原、抗体蛋白结构易变检测结果受抗体、交叉反应、标夲内物质干扰、溶血、脂血、试剂盒抗原不纯、温度、洗液比例、洗版效果、试剂质量等影响，易假阳性核酸检测是DNA 或RNA，能够缩短病毒窗口期对免疫静默、病毒变异有很好检出[12],所以核酸检测方法优于酶免检测方法。

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综上所述酶免检测假阳性率较高主要为灰区（56.4%）和单试剂陽性（23.7%）所占比重较大，且各项目灰区阳性标本与核酸检测结果符合率均为0单试剂阳性标本与核酸检测结果符合率较低，故建议：

（1）取消酶免检测灰区值设定

（2）对单试剂检测阳性标本因再进行确认试验。

核酸检测57 例阳性标本中50 例为隐匿性乙肝感染建议增加抗-HBc 检测鉯降低乙肝病毒漏检风险。

[1]GC、LC法在邻苯二甲酸酯、青霉素类药物和染料检测中的应用

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