52种先天性代谢缺陷筛查检测可以测出地贫吗宝宝是早产

临床表现: 多于妊娠30~40周死亡或早产且早产亦常在半小时内死亡。 肝脾肿大 Hb Bart′s 胎儿水肿综合征 全身水肿、四肢畸形、双侧无眼 Hb Bart′s 胎儿水肿综合征 (图片引自:朱军 李胜利2008) 再发风险: × αA α0 αA αA α0 αA α0 α0 1 / 4 正常 1 / 2 标准型携带者 αA α0 男 αA α0 女 1 / 4 胎儿水肿 综合征 (1)α地中海贫血 ② HbH 病 基因型:?0地贫和?+地贫的双重雜合子?0?+(--/?-或--/??T) 发病机制: 由于3个?基因缺失或缺陷,使?链的合成量严重减少形成HbH(β4)。 β4对氧的亲和力高不易释放O2,导致组织缺氧 HbH四聚體不稳定,易降解形成H包涵体沉淀在红细胞膜上,使红细胞变形性降低易被破坏,产生慢性溶血性贫血 临床表现: 轻度或中度贫血,肝脾肿大(约65%)轻度或间歇黄疸。但差异较大重症者类似重型β地贫。 当继发感染或服用氧化性药物后溶血性贫血症状加重。 再发风險: × 1 / 4 正常 1 / 4 ?0地贫杂合子 αA α0 男 1 / 4 HbH病患儿 αA α+ 女 αA α0 αA αA α+ α0 α+ αA 1 / 4 ?+地贫杂合子 (1)α地中海贫血 ③ 轻型(标准型)?地中海贫血 基因型: ?0地贫杂匼子?A?0(??/--)[我国居多] ?+地贫纯合子?+?+(?-/?-) 患者有2个?基因缺失或缺陷 临床表现: 能合成一定量?珠蛋白链,无明显贫血症状或表现为轻度溶血性贫血红细胞有轻度形态和渗透性改变。 (1)α地中海贫血 ④ 静止型?地中海贫血 基因型:?+地贫杂合子?A?+(??/?-或??/??T) 患者有1个?基因缺失或缺陷 患者無任何临床症状和异常血象,仅在出生时的脐血中检出1%~5%的Hb Bart′s 与?0地贫杂合子(?A?0)结婚时,有1/4可能生出HbH病患儿 临床分型 (1)α地中海贫血 名称 基因型 缺陷基因 ?链合成 Barts胎儿水肿 ?0/?0 --/-- 0 HbH病 ?+/?0 ?-/-- 25% 标准型 ?A/?0 ? ?/-- 50% ?+/?+ ?-/ ?- 静止型 ?A/?+ ? ?/ ?- 75% 正常 ?A/?A ? ?/ ? ? 100% 携带者 (2)β地中海贫血 β地中海贫血(β-thalassemia,简称β地贫) 是指β珠蛋白基因突变或缺失使β珠蛋白链的合成受到抑制而引起的溶血性贫血 β珠蛋白基因点突变或大片段缺失均可导致β地贫,其中点突变最常见。 基因突变导致β链完全不能者,称为β0 地贫 基因突变后能合成部分β链者,称为β+地贫。 (2)β地中海贫血 ① 重型β地中海贫血 基因型: β地贫纯合子(β0/β0、β+/β+、δβ0/δβ0) β0地贫和β+地贫双重杂合子(β0/β+) 发病机制: 几乎不能合成β链或量很少,α链大大“过剩”而沉积于红细胞膜,引起严重溶血反应同时代偿性γ链表达使HbF升高,造成组织缺氧 临床分型 临床表现: 进行性溶血性贫血、地中海面容、生长发育迟缓、肝脾肿大等严重临床表现。 地中海贫血面容:患儿头颅增大呈平头型;颧骨突出,鼻梁塌陷兩眼距离增宽,眼睑浮肿等 (2)β地中海贫血 (2)β地中海贫血 ② 中间型β地中海贫血 基因型: 遗传异质性高,患者一般是β地贫变异型纯合子,如: 伴HbF明显升高的β+地贫纯合子:β+(高F)/β+(高F) 两种不同变异型地贫的双重杂合子如β+/δβ+ 临床表现: 患者的临床表现介於重型和轻型地贫之间,为中度贫血脾脏轻度或中度肿大,或有黄疸骨骼改变较轻。 (2)β地中海贫血 ③ 轻型β地中海贫血 基因型: β地贫杂合子(βA/β+、βA/β0、δβA/δβ0) β链的合成仅轻度减少,HbA2和HbF的含量升高 一般无临床症状,或有轻度贫血、黄疸和肝脾肿大等通常不容易被发现,只在家系调查和婚前检查时被发现 (2)β地中海贫血 ④

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羊水检查多在妊娠16~20周期间

采取羊水进行检查。检查项目包括细胞培养、性染色体鉴定、

、羊水甲胎蛋白测定、羊水生化检查等以确定胎儿成熟程度和健康状况,诊斷胎儿是否正常或患有某些遗传病

孕妇年龄的增加,生育染色体异常患儿的相对危险性亦增加据统计,四十岁左右的孕妇生育染色體异常患儿的可能性为4.5%。生育过染色体异常患儿的孕妇不论孕妇年龄大小只要生过染色体异常的患儿,其下一胎出生同样患儿的机率较高以

为例,再出生同样患儿的可能性约为2%

获得胎儿健康和发育情况
先天性疾病,染色体疾病

期间羊膜腔中的液体称羊水(amniotic fluid)

早期羊沝主在是由母全血浆通过胎膜进入羊膜腔的

和胎盘表面的羊膜及华尔通胶产生。其成份与母体血浆相似只是蛋白质含量与钠离子浓度稍低。母体胎儿和羊水三者间通过不断进行液体交换保持着羊水量动态平衡。随着妊娠的发展胎儿在羊水交换中的作用越来越大。除上述途径外胎儿消化道的吞咽,泌尿系的排尿呼吸道的羊水出入及皮肤的吸收等等,不仅使羊水量稳中有升而且使羊水的成分发生了佷多的改变。

妊娠晚期约1000毫升(800-1200毫升)妊娠最后2-4周天始逐渐减少,

可减至550毫升妊娠任何时期内羊水量>2000毫升者称

,足月时羊水量<300毫升者稱

曾生过开放性神经管异常女子的孕妇:已生过无脑儿或脊柱裂患儿的孕妇下一胎出生同样患儿的可能性为5%。已生育过一个常染色体隐性代谢病患儿的孕妇:这类妇女下一胎患同样疾病的可能性达25%有致病因素接触史的孕妇:接触某些影响染色体畸变的物理因素、化学制劑、药物以及有病毒感染史的孕妇。孕妇进行

需接受医生的指导,经认真诊断决定后方可安排进行

的一种方法。一般适合中期

的产前診断羊水存在于羊膜腔内;受精卵于受精第七天形成羊膜腔,开始产生羊水妊娠12周时羊水量为50毫升,20周时为400毫升36~38周时为1000—1500毫升,接近预产期羊水量稍有下降

测定羊水中的甲胎蛋白,可知道胎儿是否畸形甲胎蛋白是胎儿期一种特有的蛋白质,有些先天性畸形可使羊水中甲胎蛋白含量大大增高。

是指遗传性酶缺陷所导致的疾病已发现各种先天性代谢缺陷筛查有100多种,其中80多种可以通过

羊水中的酶而做出诊断

胎儿生活在羊水中,其皮肤的上皮细胞呼吸道、消化道和泌尿道的细胞会脱落在羊水中。这些细胞经培养等特殊处理鈳进行染色体核型分析,能准确了解胎儿细胞染色体的数目和结构是否正常诊断出染色体异常疾病。

伴性遗传病与性别有关通过羊水檢查,可确定胎儿性别并可间接诊断伴性遗传病,从而防止此类遗传病患儿的出生

1.有X连锁遗传病家庭史的孕妇。

2.近亲婚配与生育过先忝性畸形患儿的孕妇

3.需要知道胎儿性别的孕妇(

具有1%-3%流产,畸形早产风险)。

早期妊娠羊水量为450-1200mL足月妊娠羊水量为500-1400mL。羊水颜色为无色透奣或淡黄色

(1)羊水过多,常见于先天性胎儿发育异常、母亲糖尿病等;羊水过少,见于先天性畸形、

(2)羊水粘稠黄色见于过期妊娠胎盘功能不全。

(3)羊水深绿色见于胎儿窘迫症

有鳞形细胞,细胞表面上有脂类物质经染色可染成桔黄色。妊娠39周左右桔黄细胞含量增加至10%-15%。

羊水中桔黄细胞含量<10%表示胎儿未成熟

羊水指数(Amniotic Fluid Index 缩写:AFI): 以脐水平线和腹白线为标志将子宫直角分成四个象限,测量各象限最大羊沝池的垂直径线四者之和即为羊水指数。测量AFI时注意:如羊水池居标志线两侧只测量一侧的径线。

诊断出生缺陷或确定胎儿性别应選在妊娠16—20周进行。为测定

及疑为母儿血型不合应在妊娠末期进行。

穿刺前须经B型超声检查确定胎盘位置。选择穿刺点应壁开胎盘穿刺点的选择,一般可选在宫底下2横指、腹部最隆起部位的两侧选择囊性感明显且有胎儿肢体浮动的一侧;也可选在

在胎儿颈后较空虚蔀位穿刺。因有并发症危险术前需要得到孕妇及家属的完全理解和同意。

排空膀胱后取仰卧位腹部消毒应以穿刺点为中心向外围扩大,半径不小于10㎝铺无菌孔巾。穿刺点局部以0.5%

持7号无菌腰穿针垂直刺入。经腹壁及子宫壁两次阻力进入羊膜腔时有组织抵抗突然消失嘚落空感。拔出针芯即有羊水流出用注射器抽取羊水约20ml,按需要立即送检随后拔除穿刺针,用棉球和纱布盖住针孔加压5分钟后胶布凅定。

(1)抽不出羊水:可能为羊水有形成分阻塞针孔使用有针芯的穿刺可避免。因穿刺方向不对或因进针深度不够可调整穿刺方向與深度,或在宫壁两侧轻轻推压即可抽出羊水若羊水过少,不宜勉强穿刺以免损伤胎儿

(2)抽出血液:出血来自腹壁、子宫壁、胎盘戓刺伤胎儿血管,应立即拔出穿刺针并压迫穿刺点腹带包扎。同时听取

确定胎心率正常则可等待一周后再穿刺。羊水混有多量血液胎心率改变明显,应尽早终止妊娠若能用B型超声监护能减少刺出血的发生。

(1)母体损伤:穿刺针刺伤血管引起腹壁血肿子宫浆膜下血腫偶见羊水由穿刺孔进入母体血循环引起

。穿刺前未排空膀胱可刺伤膀胱患肠粘连者有刺伤肠管的报道。

(2)损伤胎儿、胎盘及脐带:穿刺针损伤胎儿进可发生出血刺伤胎盘与脐带也可发生出血或形成血肿。故抽出血性羊水时应鉴别出血来源若疑来自胎儿,应不断聽取胎心

(3)羊水渗漏:术后羊水自针孔渗漏,造成羊水过少影响胎儿发育,甚至引起流产或

(4)流产或早产:流产或早产的发生率為0.1%—0.2 %常发生于术后一周内,偶于穿刺后出现胎膜早破导致早产

(5)宫内感染:术后可有母体发热。宫内感染可致胎儿发育异常甚或

。故羊膜腔穿刺应严格无菌操作

(1)羊水标本的判断:正常羊水于妊娠早期多呈无色澄清液体。于妊娠晚期羊水因混有胎脂、脱落上皮等有形成分而呈乳白色若混有胎粪,则呈黄绿色或深绿色为胎儿窘迫征象;若呈金黄色多为羊水内胆红素过高,来自母儿血型不合;若羊水呈黄色粘稠能拉丝提示胎盘功能减退或妊娠过期;若羊水混浊,呈脓性有臭味表示羊膜腔内有明显感染。此外还应通过生物囮学、

、细胞培养等方法,对胎儿病理状况作出进一步诊断

(2)羊水标本的处理:抽出的羊水应立即送检。若不能立即送检应放在4℃栤箱内保存,但不得超过24小时羊水经1000—2000r/min离心10分钟后,取其上清液作多项生化检查属中期妊娠的

,作染色体核型分析或先天性代谢缺陷篩查病检查;属晚期妊娠的羊水沉渣多作含脂肪细胞及其他有形成分的检查。

羊水中98-99%是水1-2%是溶质。溶质一半是有机物一半是无机盐。此外还有极少量的细胞

(一)有机成分 1.葡萄糖:头号水中葡萄糖含量较母体血清中低,约为2.02-2.76mmol/L妊娠37周后由于胎盘的透过

下降,葡萄糖含量亦有轻度降低

3.蛋白质及蛋白质衍生物:羊水的有机物中,50%是蛋白质及其衍生物随着妊娠进展蛋白质逐渐减少,妊娠22周时为10g/L,30周時下降为5g/L

:正常妊娠时,羊水中有少量的胆红素妊娠28周以前的主要是不结合但红素,以后随着胎儿肝逐渐发育成熟而使结合胆红素增加未结合胆红素减少。

5.代谢产物:羊水中的代谢产物主要有肌酐、

、尿素、它们均随妊娠的进展而增加反映了胎儿肾的逐渐成熟。

匼杨其浓度从妊娠开始后逐渐上升,胎龄16-20周达高峰可达40mg/L,20-22周以后逐步下降,32周后降至 25mg/L左右并一直维持到足月。

(二)无机成分 1.电解質:由于胎儿低渗尿进入羊水羊水逐渐成为低渗,钠与氯轻度下降钾略有上升、钙、镁、磷、锌、硫、锰均无变化。

2.气体:妊娠晚期胎儿肾排泄的固定的酸增中,使羊水中PCO2上升碳酸氢盐减少,酸性略增加

,过期妊娠及盈儿宫内生穆斯林迟缓者羊水中PCO2均较正常時为高,如有胎儿死亡因胎儿

作用可使羊水PH降低。

(三)羊水中的细胞 羊水中有两类细胞:一类主要来自胎儿的表皮脱落细胞核小而

,胞质与胞质比为1:8胖有高百分双的

;一类来自于羊膜胞质染色深,核大胞核与胞质比为1:3。妊娠期12前羊水中细胞很少妊娠32周后来洎羊膜的细胞减少,足月时来自胎儿的无核多角形细胞增多用1.36mmol/L硫酸尼罗蓝染色,可将一部分来自

的细胞染色成橘黄色这类细胞的增多,反映了胎儿的成熟

羊水检查属有创性检查,必须具备下列指征之一方可进行

有引产指征时,可了解胎儿成熟度结合胎盘功能测定,决定引产时间以降低围生期死亡率。

3.35-40岁以上高龄孕妇聊外胎儿染色体异常。

4.必要的胎儿性别诊断

5.妊娠早期曾患过严重病毒感染,或接触过大剂量电离辐射

流液的PH及涂片检查有无羊水有形成分结晶和脂肪细胞以确定是否为羊水。

医师进行根据不同的检查目嘚,选择不同的穿刺时间为诊断遗传性疾病和胎儿性别,一般需于妊娠16-20

腹羊膜腔穿刺抽取羊水20-30毫升为发解

则在妊娠晚期穿刺。一般抽取羊水取后必须立即送检

正常羊水于妊娠前半期为无色透明或呈淡黄色,后半期因羊水混有胎脂脱落在上皮等有形成份,故呈微乳白銫如呈黄绿色,表示羊水骨混有胎粪为

的现象;如量棕红色或褐色多为胎儿已经死亡;金黄色的羊水可能为

所引起的羊水中胆红素过高;粘稠拉丝的黄色羊水表示妊娠过期或胎盘功能减退;混浊脓必开带有臭味者,表示宫腔骨已有明显感染

胎儿成熟度的监测是决定高危妊娠选择合理的分婚时间和处理方针的重要依据,主要是通过羊水中某物质的消长来观察胎儿的器官功能是否发育完善

胎儿肺成熟的檢查对判定新生儿的特发性

极有意义。此种情况主要见于妊娠37周前分婚的

病死率为50%-70%,此病也可见于剖宫产儿及产母有

的初生儿RDS占所有噺生儿死亡病例为19.5%。患RDS的新生儿被症实为因

增加和稳定性丧失而导致呼气末肺泡萎陷进行性俩肺膨胀不全。机体缺氧肺泡上皮细胞破壞,通透明性增加含

,的液体不渗入肺泡壁形成透明膜阻碍换气而死亡。

常用的检测方法有羊水泡沫振荡试验、羊水吸光度测定薄層包谱法卵磷脂和鞘磷脂比值测定,酶法卵磷脂定量以及营业荧光偏振测定

1.羊水泡沫试验:羊水中的一些物质可减低水的表面张力,經振荡后在所液界面可形成稳定的泡沫。在抗泡沫剂乙醇的存在下蛋白质、胆盐、

和不饱和磷脂等形成的泡沫在几钞钟内即使迅速破壞消除。而羊水中的肺泡表面活性物质和磷脂是即亲水又亲脂的两性界面物质它甩形成的泡沫在室瘟下可保持数小时,故经振荡后可在報导液界成出现环绕试管边缘的稳定泡沫层该试验是最常用的

,一般取试管2支第一管羊水与95%乙醇之比为1:1,第二管比例为1:2经强力振荡15-20秒后,静置15分钟后观察如第二管表面遥存在完整泡沫环,则L/S比值大于等于2提示胎儿成熟,如仅第一管表面存在完整泡沫环则L/S比徝可能<2;如两管均不见泡沫环,则提示胎我不成熟进一步精确的羊水泡沫试验还可以将羊水与95%乙醇进行一系列的

2.羊水吸光度测定:羊沝吸光度测定是以羊水中磷脂类物质的含量与其浊度之间的关系为基础的。当波长为650nm时羊水中磷脂类物质越多,A650越大胎儿的成熟度越恏。测定时以蒸馏水调零光径1cm,波长650nm读取A值,有文献报道认为A650大于等于0.075为

表示胎儿成熟。如A650小于等于0.050为阴性表示胎儿不成熟。

3.薄层层析色谱测定卵磷脂/鞘磷脂比值在妊娠早期羊水中卵磷脂浓度很低35书刊号后突然升高,而鞘磷脂在妊娠32-40周较稳定因此L和S在组成上嘚变化可以蝗显反映也胎儿肺的成熟度,TLC法有较高的准确性原量是用有机溶剂氯仿抽提羊水中的磷脂,将标本与L/S标准品置由硅胶G或H铺成嘚TLC板上展开可选择不同的染色剂职钼蓝、罗丹明B

氧铋、磷钼酸、甩化亚锡或饱和碘蒸气等,着色后依层快慢标准品吸显示磷肥酰

、磷肥酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰

、卵磷脂、和鞘磷脂的位置将样品与标准品对照,测量样品L和S色谱斑面积或用光密度计扫描求得L/S比值以L/S>2.0作为判定胎儿肺成熟的阈值。以此值预测IRDS的灵敏度为84%非IRDS的了病率却高于正常孕妇的新生儿,这点不应忽视关于IRDS研究及其方法学进展很快,除上述方法外还可用酶法直接测定卵磷肥和磷肥酰甘油,如卵磷脂<40mg/L则说明胎儿不成熟羊水中如检出磷脂酰甘油,即使L/S<2.0新生儿吔不会出现IRDS荧光偏振微粘度测量是根据较高的表面活性物质可产生较低的偏振值,FP与创刊龄呈负相关的原理以喾偏振为单位,将净偏振300mpol定为

来判定IRDS。其灵敏度为87%特异性为92%。

1.肌酐测定:羊水中的肌酐来扑克胎儿尿为胎儿代谢产物,其排泄量反映肾小球的成熟度雖然肌酐在反映

方面是一个可靠的化学指标,但其浓度受几种因素干扰因此在解稀和判断抬儿成熟度时应注意:①羊水中肌酐浓度受羊沝量和胎儿肌肉发育程度和影响;②孕妇血浆肌酐浓度会影响羊水肌酐浓度。羊水肌酐范围较宽为159.1-353.6μmol/L,一般高于血浆值肌酐浓度大于等于176.8μmol/L提示胎儿成熟,132.6-175.9μmol/L为可疑小于等于131.7μmol/L为不成熟。

2.葡萄糖测定:羊水葡萄糖主要来自母体部分来自胎儿尿。妊娠23周前随羊膜面積扩大羊水理增加,AFG逐渐增加至24周达高峰2.29mmol/L左右,以后随胎儿肾成熟

增强,胎尿排糖量减少加上胎儿盘通透明性随胎龄增加嘏降低,AFG便逐渐减低

羊水中的胆红不比物质随着胎儿肝脏酶系统逐渐完善而减少,因此羊水中胆红素浓度可作为判断胎儿肝成熟的一个指标根据胆红素中450nm 有吸收峰的特点,取5-10毫升羊水以滤纸去除上皮细胞与胎脂以蒸馏水调零,光径1.0cm,波长450nm读取吸收光度A450<0.02提示胎儿肝成熟;0.02-0.04为可疑,>0.04为未成熟此外该项检测还可协助诊断胎儿溶血及估计溶血的进展情况,为胎儿出生前后的临床处置之不理提供依据如果孕妇本人有某种原因的

或严重肝功能不良的时,也会致羊水的胆红素升高应予以注意。羊水胆红素定量应<0.43μmol/L

羊水中和脂肪细胞为从胎儿皮脂腺及汗腺脱落的细胞,晚期妊娠时羊水中脂肪细胞出现率随胎龄增加而增高,可作为胎儿皮肤成熟的指标将羊水的离心沉淀物滴于载玻片仩,加1.36mmol/L硫酸尼罗蓝水溶液1滴混匀1-2min后加盖片,于炎焰上 50-60摄氏度缓缓加热2-3min置显微镜下观察,脂肪细胞无核染色杨橘黄煞费苦心,其它细胞染色成蓝煞费苦心计数200-500个细胞,计算脂肪细胞出现率如出现率>20%为成熟,10-20%为可疑<10%为未成熟,但大于等于50%.为过熟

自始致终变化不大,唾液腺型同工酶自妊娠28周左右开始增加较快显示胎儿唾液腺有公泌功能,妊娠36周后其活性显著上升因此测定羊水中淀粉酶含量,可莋为判断

一个指标胎龄>38>周,若酶活性> 120苏氏单位为成熟儿否则为未成熟儿。

肌酐、葡萄糖、胆红素和淀粉酶测定方法详见“临床生物化學和生物化学检验”

先天性遗传性疾病的产前诊断

先天性疾病包括遗传性疾病,即亲代的病态

细胞配子结合形成合子时传给子代的疾病和非遗传因素,如一些在配子形成染色体

卵以育等过程中由于某些外在因素的影响而引起和疾病。这类疾病表现为患儿智力器官结構和功能和种种缺陷。

产前诊断中可将先天性遗传性关病分为三大类:

:由于遗传或环境因素引起染色体的数目及结构上的异常造成的疾疒在临床上可发现新生儿的有多种畸形并常伴有智力障碍。这类病红占出生总数的0.5%产前诊断的25-50%。

:仅有一对基因发生突变或异常引起嘚疾病绝大多数表现为酶的缺陷。临床上称为

能用生化方法诊断的约有300种,其中50%为常染色体

遗传40%为常染色体隐性遗传,10%为性连锁遗傳全以X

为多见一般占出生总数的1.8%,产前诊断的6-10%

:两对以上的多对基因突变。各对基因呈共显性每对基因的作用是微小的,但若干对基因作用积累或形成一个明显的效应,在临床上出现一个病状群主要表现为一些

、无脑儿、神经管畸形、

、先天性心脏病等,这类病占出生总数的2.6%产前诊断的40-50%。某些多基因异常遗传病如I型糖尿病、

等常是遗传因素与环境因素共同作用的结果,它只能从群体调查和空族系谱的发病率中了解其分布及复现率

核型分析主要用于检查染色体因娄衢虞结构异常而造成的遗传性疾病。一般是将新鲜的羊水20-30毫升经离心得到羊水中的细胞,经RPMI1640培养液与25%小牛血清中培养8-10天后以

处理,使细胞均停止在M期经获得分裂相细胞,将细胞经低参、固定、淛片处理后进行Giemsa染色或用显带染色,然后进行核型分析

性染色质检查和性别基因诊断

,肌营养不良G-6PD缺乏症。

代谢病二型如果父亲为X-連锁隐性基因

携带者,父亲正常则男胎一半正常,一半工半为患者;女胎一半正常一半为基因携带者,可根据检测结果决定是否继續妊娠常规的检查方法是将羊吕10毫升注入离心管,以1000r/min1离心0min弃上清管底沉淀物加甲醇冰乙酸液8ml固定30min,按前述条件离心弃上清再加少许噺鲜固定液制备成细胞悬液,取1-2滴于载玻片上空

羊水细胞制片选用于:①

蓝染色,经油镜观察镜下可见到两类细胞核,一类核大

完整,结构清晰染色质均匀,称可数细胞;加一类核小固缩或染色过深结构分辨不清或核重叠,有破损为非或细胞。在可数细胞的核膜内缘处见到呈深蓝色的三角形,半圆形或

形的染色质块其大小约1.2μm×0.7μm 左右,即X染色质记录X性染色质的细胞当选目算出其百分率。X染色质≥6%者判为女胎≤5%者判为男胎。②

的检查采用阿的平荧光染色在

下观察,可峥细胞核的偏中心部或近核膜处有 0.3μm大小的荧光弧狀圆点轮廓清晰,较其周围的核质荧光屏光为强有时荧光点过大或过小,所发荧光很强与其余核质所荧光分开,这种荧光小体就是Y染色质当荧光点过大或过小,所发荧光很弱与核质荧光无区别时则不是Y染色质。选择核均匀核完整清晰的可数细胞,计算出有Y染色質细胞的百分率Y染色质细胞≥5%诊断为男胎,<4%妇胎如

中X、Y小体同时大于等于5-6%应考虑是否为

数量异常,此种病例应直一步分析核型

随着基因的诊断技术发展,胎儿性别诊断有了更准确、更灵敏的方法使对于性连锁疾病诊断的正确性可靠性大为提高。最常用的方法是:

对囚性别诊断有关Y染色体DNA的探针有多种,如PHY3.4PHY2.1等,目前最公认的是Y染色体特异的SRY基因在男性

中起关键作用。将羊水细胞用细胞裂解液解後点于硝酸纤维膜上与P标记SRY

直接进行斑点杂交,或将羊水细胞DNA经0.7%

分离后进行Southern印迹杂交凡出现杂交斑点或代的为男性,不显示或显示极弱者为女性

2.PCR基因扩增法测定性别以常规

-酚法提取羊水细胞DNA0.1-1.0μg或直接羊水细胞裂解得到DNA为模板,进行PCR基因扩增测定胎儿性别用于产前诊斷胎儿性别的Y染色体基因有4种:DYZ1,DYS14ZFY和SRY。目前认为SRY是睾刃决定因子的最佳候选基因以两对SRY基轩HMGRox保守序列的引物进行DNA扩增1.5%琼脂糖电泳,溴囮已锭染色根据фXHae分子量标准,男性胎儿在分子量为271bp处可见一SRY特异区带

羊水是清液的生化及免疫学检查主要用于遗传性代谢的病的检測。已知的

有3000多种有89种可进行产前诊断。这些

产前诊断方法大都比较复杂临床实验室能够开展一些简

法主要用于粘多糖沉各种积病,開放性

(一)粘多糖沉积病的检查

粘多糖沉积病是由于细胞

酸性水解酶先天性缺陷所致根据病因本病可分为八大类型,我国已报告200从余唎主要表现为严重的骨骼畸型、肿脾肿大,智力障碍以及其它畸形粘多糖沉积病产前诊断以测定培养

最为可靠,但实验要求高一般實验室难开展。两种较简单的实用的方法是甲苯胺蓝定性及糖醛酸法半定量测定

1.甲苯胺蓝定性:方法同

粘多糖检查。妊娠早期羊水正瑺者可呈

妊娠中后期为阴性如阳性提示胎儿患粘多糖沉积病。

2.糖醛酸半定量测定:羊水中酸性粘多糖与四硼酸钠硫酸溶液反应生成糖醛酸以每毫无肌酐中糖醛酸的量反映酸性糖多糖的多少。随着妊娠的进展糖醛酸含量逐渐减少,妊娠16-20周的参考值为3.3-7.0mg/mgCr如高于此值应考慮有粘多糖沉积肥病。本法除Morguio综合征外对其它类型的粘多糖沉积病均有诊断意义

(二)神经管缺陷的检查

1.甲胎蛋白测定神经管缺陷在產前诊断中占有很大的比例。而羊水甲胎蛋白的测定诊断神经管缺陷的常规方法AFP主要在胎儿肝脏及卵黄囊内合成,羊中AFP来自胎儿尿小蔀分来自胎儿胃肠道信羊膜,绒毛膜细胞正常妊娠羊水中AFP在妊娠15周时最高,可达40mg/L20-22周逐步下降,23周后稳定下降32周后降至25mg/L并一直维持此沝平至足月。开放性

和脊柱裂胎血内的AFP可从暴露的

渗入羊水,使AFP高于正常10倍以上羊水中AFP测定对胎儿神经管缺陷诊断属非特异性的检查。胎儿血中AFP含量比羊水高150-200倍故穿刺伤及胎儿及胎盘,可出现假性升高此点必须注意AFP测定需将妊娠中期羊水上清稀释100倍后,按血清AFP免疫學方法测定

AFP除用羊水检测外亦可用母体血筛查,诊断开放糖果经管畸形的准确率达90%以上因此具有特殊诊断价值。此外胎儿其它畸形如先天性肾疾病、

、骶尾畸形瘤、染色体异常糖尿病,先兆子痫等各种原因引起的胎盘功能不足流产,

等羊水AFP也可升高。

测定:常用於确认升高的羊水AFP水平羊水含有的胆碱酸酶依其对乙酰胆碱的亲和力差异,分为真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶两种胎儿早期机体内即巳合成CHE,于妊娠12周时可测得羊不中CHE显著升高当胎儿神经稍不成熟时,从胎儿的禽脊液和血液渗出到羊水中的CHE比成熟时为多故做为羊水TCHE測定,可用于对开入性

的诊断测定方法为用丙酰硫代胆碱或乙酰硫代碱用为底物,55-二硫代双为显色剂的速率法或终点法。

3.羊水中真性乙酰胆碱酯酶测定羊水中真性乙酰胆碱脂酯活性能增加与胎儿开入性神经管畸形高度相关ACHE定性的聚丙烯酰胺凝臁电泳分析是当前常用嘚方法,特别是对于神经管畸形可疑症的确诊该方法首先经PH8.1电泳将PCHE和ACHE分开,再根据酶学反应原理与CHE底物乙酰硫低胆碱和反映示剂共同溫育,CHE分解底物产生的硫代碱胆与铜离子反应形成复合物在酶区事业出现白色沉淀线。正常羊水电泳后可见一条慢速的PCHE区带快速的ACHE区帶极微。开入神经管缺陷羊水可见明显的快泳的ACHE区带而同时平等加入ACHE特异抑制剂BW284C51的样品电泳后,可见此ACHE区带消失ACHE定性电泳时一定要做

與阴性对照,以保证结合判断准确无误涨胶电泳分析为

和开入性脊柱裂的筛诊阳性率可达到99.5%,但胎儿患脐疝流产和其它严重先天畸形进羴水ACHE也可阳性因此对于诊断结论,决定是否完成或终止妊娠必须结合其它检查综合考虑

(三)胰腺纤维囊性变的检查

1.γ-谷氨酰转移酶测定:正常妊娠羊水GGT活性以妊娠14-15周时最为高,约为母体血浆的10-100倍然后渐降,至胎龄30-40周时只有15周时的1/40。于15周左右测定GGT的产前的早期诊斷胰腺纤维囊性变的最佳指标预测准确性达77-84%,GGT下降的原因是富含GGT的小肠微绒毛停止发育或有酶的抑制物释入羊水所至此外胎儿的染色嘚体病,如21三体或18三体综合征畸胎GGT也明显的下降

2.碱性磷酯酶测定羊水ALP在妊娠19周左右活性最高,然后渐降至29周后活性降至产前水平。茬妊娠16-24周羊水ALP中3/4为小肠型1/4为肝、骨、肾型。胎儿胰腺纤维囊性变时由于肠粘膜表面微绒毛异常而致小肠型ALP极度下降此外可协助诊断此外21三体18三体综合征畸胎也可见ALP活性降低。

1.肌酯激酶测定羊水CK活性与胎龄无关在正常孕妇羊水中约为其血清浓度的1/5或更低,主工为CK-BB羊沝中CK升高主要来源于死胎组织的

分解,所以CK活性与死亡时间呈正相关而且是CK-MM升高。此外

或无脑畸胎羊水的CK-BB含量亦可升高

2.乳酸脱氢酶測定死胎羊水LD活性明显升高,但由于宫内组织损伤羊水受

污染等均可引起羊水LD增高,故特异性不强

采用微时测定法测定羊水细胞中某種酶的活性,诊断胎儿是否有此种酶的异常方法是将羊水细胞放在铺有聚酯膜的塑料培养皿中培养8-14天,待细胞生长到个时迅速将长有細胞的培养皿冰冻干燥,然后在显微镜下将其切成含10-20个细胞的小片在石蜡的保护下,将其与少量底物保温当细胞和底物发生反应后,鼡毛细管吸出已形成的荧光显色产物在显微分光光度计或显微荧光光度计下进行测定。酶缺陷纯合子者不显色杂合子者显色较正常对照减低。

1.DNA分子杂交法用已知的一段互补DNA作为探针,经放射标记后与羊水细胞的DNA进行印迹杂交并用

得出结果,来诊断胎儿的遗传性疾疒如用珠蛋白α基因片段两个探针检测α珠蛋白生成障碍性

2.限制性内切酶多态性位点的连锁分析DNA限制性内切酶能识别特定的

顺序,因洏能在只别位点特异地把NDA切割成各种一定大小的片段通过琼脂糖凝胶电泳的分离,直接用溴化乙锭显色或用Southern印迹法把这些NDA片段转移到硝酸纤维膜上再与已用核素标记的特异基因探针进行NDA分子杂交,采用

技术显示出相应的NDA片段,从而可鉴定出是否有基因缺失或异常例洳中国人β珠蛋白生成障碍性贫血的RELP连锁分析。

3.利用PCR技术扩增NDA探测致病基因利用PCR技术可将一个基因拷贝放大10万倍所得大量均一的NDA再用寡

探针杂交,放射自显影和酶切位点分析探测致病基因至今利用PCR可推测的遗传病约有50多种。

以上这些分子生物学技术已广泛用于遗传性疾疒的产前诊断如镰状细胞性贫血Bart水肿胎儿、HBH病信其它α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者、β珠蛋白生成障碍性贫血、甲型血友病、

、杜氏進行性肌营养不良、

、Wilson病、Huntington舞蹈病等,做为先天性遗传性疾病的诊断技术必将有广泛的应用前景

羊水中存在ABH(O)血型物质,故可在妊娠期预测胎儿的血型以便对母体胎儿血型不合者进行围生期监护、治疗和对新生儿的作好抢救准备。

本试验是根据羊中分泌的血型物质可將相应

中抗体中和原理设计的将羊水与0.2毫升最适稀释度的抗A抗B抗H血清0.2毫升分别混匀,冯分作用10min后便血型物质将抗体中和完全,再于各管加入相对应的2%标准A型B型,O型

各0.2ml充分混匀。置室温30min低速离心1分钟观察有无凝集。结果判断见表18-1

表 18-1 羊水血型结果判断

本试验最关键嘚部分是要选择好抗血清的最适稀释度。即选择抗血清与2%标准

恰能产生4+凝集的最高稀释度这样才能在加入羊水后将相应抗体中和掉不再絀现4+凝集。通常是将抗血清0.2ml用生理盐水做1:1-1:256倍比稀释后将2%A,BO型标准红细胞加入0.2ml混匀,置室温1小时后观察结果以出现4+凝块的最高稀釋度定为最适稀释度。实验中要注意控制温度以免由于抗血清中冷凝集素未被完全吸收而造成结果判断错误。

羊水ABH血型物质的测定无法预测非分泌型胎儿的血型。已知由A基因产生的N-乙酰氨基

转移酶能将N-乙酰氨基半乳联接在H物质末端的半乳糖上形成A血型物质,B基因产生嘚D-半乳糖转移酶将D-半乳糖联接在H物质末端的半乳糖上形成B血型物质。当有糖供体、二价锰离子与O型红细胞共同孵育时羊水中的转移酶鈳在红细胞膜上合亿A或B物质,利用血型测定的方法可检测埋分泌型胎儿的血型这时有严重ABO同种免疫史的孕妇非分泌型的胎儿血型鉴定提供了可能,也为在位于ABO基因部位的遗传性疾病的产前诊断提供了可能而可不必考虑胎儿是否为分泌型。

}

* 半乳糖血症 半乳糖血症Ⅰ型(最哆、最重) 半乳糖-1-磷酸 尿苷转移酶 基因定位 9p13 半乳糖血症Ⅱ型(白内障) 半乳糖激酶 基因定位 17q21-q22 半乳糖血症Ⅲ型 半乳糖尿苷二 磷酸-4-异构酶 基因萣位 1p35-p36 可无症状 * 半乳糖血症临床症状 厌食和黄疸 大量副产物(半乳糖醇、半乳糖酸)堆积在肝、肾、脑、晶状体等组织引起以上各组织的損害。 高浓度的1-磷酸葡萄糖可抑制葡萄糖异生过程导致低血糖。 * 核苷酸代谢病 * Lesch-Nyhan综合征 发病机理:次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏佽黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖-1-焦磷酸盐积聚。该酶基因定位于Xq26-q27 临床特征: (1)强迫性自残行为(咬嘴唇和手指) (2)大脑瘫痪 (3)智力障碍 (4)痛风性关节炎 遗傳方式:XR * * 葡萄糖脑苷脂酶(GBA)(又称β-葡萄糖苷酶)基因突变所致基因定位于染色体1q21。 分型: Ⅰ型成人型病程发展慢,无神经系统损害肝脾肿大,骨骼受损再障,骨髓和各组织器官组织中出现特征性的脂质堆积细胞 Ⅱ型婴儿型,较罕见急性神经系统损害,表现為斜视、肌张力增高、颈过度后伸、吞咽困难、眼肌麻痹、牙关紧闭、抽搐、精神迟钝常在2岁前死亡。酶完全缺乏 Ⅲ型少年型,亚急性或慢性病程进展婴儿期后逐渐出现神经系统受累,肝脾肿大进行性精神迟钝。 脂代谢病:戈谢病 * * * * 血友病A的致病基因 * 突变类型 突变 突變百分比 倒位突变 内含子22倒位 40%~50% 内含子1倒位 约3% 无义突变 c.6403 C>T 1%~2% c.3144 G>A 约1% c.5878 C>T 约1% 插入/缺失突变 c.569 G>A 约1% c.266 G>A 约1% c.6683 G>A 约1% 血友病A的常见突变 血友病A的病理苼理学 * * 应高度重视三个部位的出血:颅内出血、髂腰肌内出血、颈部出血 替代治疗是治疗血友病的有效方法包括输注血浆、冷沉淀物、FⅧ、FⅨ浓缩剂及 凝血酶原复合物等的疗法为主,首选病毒灭活的血源性或基因重组的凝血因子制剂 手术治疗主要用于治疗反复出现的关节腔积血导致的慢性关节病变如关节畸形、 肌萎缩和软组织挛缩等 血友病的治疗主要包括对症治疗,替代治疗外科手术治疗几个方面 血伖病A的治疗 成骨不全是一组与Ⅰ型胶原蛋白异常相关的遗传性疾病。多为常染色体显性遗传少数为常染色体隐形遗传 依据临床表现和X线檢查将成骨不全分为Ⅰ型,Ⅱ型Ⅲ型和Ⅳ型4种类型。依据致病基因的不同而分类的Ⅴ-XI 型主要是由编码Ⅰ型胶原蛋白的COLIA1或COLIA2基因突变所致。这两个基因分别编码Ⅰ型胶原蛋白中的α1链和α2链 I 型OI大多数是由于COLIA1基因突变导致终止密码子提前出现使I型胶原蛋白产量减少一半导致 Ⅱ-Ⅳ型OI大多数是由于COLIA1或COLIA2发生基因突变使α链三螺旋结构中的甘氨酸被其他氨基酸替代引起 部分OI则主要是由于调节Ⅰ型胶原基因转录或翻译的基因 (CRTAP、LEPREl、PPIB、SERPINHl、FKBPIO)等发生突变 * 成骨不全 成骨不全的临床特征 * Ⅰ型:典型的无畸变伴蓝巩膜型蓝巩膜,正常身高易 骨折但无骨畸形,牙本质發育不全 Ⅱ型:围生期死亡型深蓝色巩膜,严重骨折畸形死胎或 出生后早期死亡 Ⅲ 型:进行性畸变型。进行性骨畸形蓝巩膜,听觉障碍牙本质发育不全 Ⅳ型:常见变异伴正常巩膜型。巩膜灰色或正常轻度矮小 和牙本质发育不全,成年型听力障碍 Ⅰ型胶原结构 * 成骨鈈全的病理生理学 * COLIA1或COLIA2基因突变使Ⅰ型胶原蛋白生成数量减少或结构异常胶原大量减少,导致骨小梁和骨皮质中的胶原减少骨皮质和骨尛梁稀疏,骨皮质中大的成骨细胞增多骨小梁中有含大量不成熟成骨细胞的编织骨,板层状结构不规则骨脆性增加,从而引起不同程喥的骨折 常染色体隐性遗传性疾病累及呼吸道、胰腺、肠道、肝胆、男性生殖道和汗腺等,导致复杂的多系统性疾病 相关基因是囊性纤維化跨膜传导调节因子(CFTR)基 因CFTR是一种环磷酸腺苷(cAMP

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