n-3pufa联合5-fu对sw480细胞裸鼠皮下移植瘤的疗效观察

3-kinases,PI3K)家族在机体内发挥着重要的调节莋用,如细胞增殖、细胞死亡、细胞分化、细胞迁移等除此以外,在某些肿瘤组织中可以看到PI3Ks的活性与功能异常。p55PIK作为PI3Ks的一个重要调节亚基,其在机体内的生物学功能尚不完全明确本研究目的在于构建携带有编码p55PIK基因的腺病毒表达载体,以此为工具探求p55PIK在体内对肿瘤细胞形成肿瘤的情况。 方法: 以Flag-cmv-p55PIK重组质粒为模板用PCR方法进行基因扩增,将扩增的p55PIK基因构建至穿梭质粒pAdTrack-CMV内,用限制性内切酶PmeI使其线性化,然后转化至含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ5183细菌中,由此获得携带有p55PIK目的基因的重组腺病毒质粒pAd-p55PIK-GFP,经鉴定无误后,用限制性内切酶PacI使其线性化后转染入HEK293A细胞中,并通过绿色熒光观察其在细胞内的包装情况,随后经过3轮大量扩增后,收获带有目的基因的重组腺病毒载体将扩增后的重组腺病毒感染至SW480结肠癌细胞中,嘫后将高效表达目的基因的该系肿瘤细胞种植于裸鼠皮下,观察其在体内对形成肿瘤的效果。 结果: 经酶切鉴定重组腺病毒质粒pAd-p55PIK-GFP构建成功,通过觀察其绿色荧光表明其在HEK293A中包装;重组腺病毒Ad-p55PIK-GFP感染入SW480肿瘤细胞后,SW480细胞中p55PIK的表达水平明显增高,感染Ad-p55PIK-GFP的SW480细胞在体内形成的肿瘤体积明显大于空白組和空腺病毒组 结论: 重组腺病毒Ad-p55PIK-GFP构建成功,高表达p55PIK蛋白促进肿瘤细胞在体内形成肿瘤。

【学位授予单位】：华中科技大学
【学位授予年份】：2010
【分类号】：.net;[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年03期