双抗体夹心法是将含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤一次；加待测抗原如两者是特异的，则发生结合然后把多余抗体洗除，加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体使形成“夹心”；加入该酶的底物，若看到有色的酶解产物产生说明在孔壁上存在相应的抗原。今天恒远講堂就为您解释一下为什么双抗体夹心法会那么受欢迎。

1、将特异性抗体与固相载体联结形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质

2、加受检标本，保温反应标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物 洗涤除去其他未结合物质。

3、加酶标抗体保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合彻底洗涤未结合 的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关

4、 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物通过比色，测知标本中抗原的量 在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分孓抗原例如HBsAg、HBeAg、 AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固楿 载体和制备酶结合物这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应作一步检测。 在一步法测萣中当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标 抗体结合而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩嘚后带现象此时反应 后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同。

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