ARDS)是常见的临床危重症,是多器官功能衰竭的最常见形式严重创伤、严重烧伤、失血性休克、败血症、急性胰腺炎和重症肺炎等疾病是造成ALl的常见原因。目前临床上ALl的病死率很高,而有效的治疗方法仍旧缺乏,因此深入研究ALI的必要性和紧迫性不言而喻目前研究认为,ALI的本质是一种炎症反应,由多种炎症介质和细胞洇子共同参与其发病过程。ALI的发生发展是一个复杂的过程,涉及许多信号转导通路,细胞外调节蛋白激酶(extraceeluar MAPK)等均参与了机体炎症反应的发生和发展,其中p38MAPK被认为是炎症反应中最重要的激酶,参与了炎症反应的发展与调控脂多糖(LPS)可以激活p38MAPK激酶,促进内皮细胞激活,分泌细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的等燚症因子。 丝裂原活化蛋白激酶激活蛋白激酶-2(MAPK-activated protein kinase-2, MK2)是1992年发现并纯化的第一个MAPK激活蛋白激酶,主要被p38蛋白磷酸化而激活,MK2在炎症方面的生物学功能日益重视,但它是否参与ALI以及其是否调节炎症通路的下游底物尚不十分清楚人组织抗原R (HuR)是人胚胎致死视觉异常家族的成员之一,与多种炎症因孓有着密切的关系。本实验室前期在体外研究中发现,MK2及HuR均参与了肿瘤坏死因子-α (TNF-α)诱导肺微血管内皮细胞表达炎症因子IL-8及ICAM-1的调控同时国外有作者应用转染MK2激活体等技术的研究显示：MK2可以促进HuR在细胞浆内聚集,并且HuR与mRNA的ARE的结合力增高,提高了目标mRNA的稳定性。 但是,到目前为止MK2和HuR是否参与了ALI的发生与发展尚未在体内得到证实,我们通过建立动物ALI模型来观察MK2和HuR是否参与了ALI的炎症反应通路,并通过体外实验来探索MK2与HuR的相互关系及对炎症因子IL-6的调控作用 第一部分急性肺损伤时小鼠肺组织MK2和HuR表达的变化 目的：采用小鼠ALI模型,观察肺脏MK2和HuR蛋白的表达变化,以及p-MK2和细胞核、细胞质中HuR表达的变化,探讨MK2和HuR在LPS致ALI时的作用。 方法：采用腹腔注射LPS的方法复制ALI小鼠模型,将30只ICR小鼠随机分为2组：正常对照组(n=15)和LPS组(n=15)LPS组腹腔內注射LPS (5mg/kg),对照组腹腔内注入等量的生理盐水(0.5ml),于注射后6小时处死,取肺组织。①观察肺组织病理HE染色、湿/干重比(wet/dry weight, W/D);②用免疫组化观察肺组织MK2和HuR的改變；③用Western bolt法检测总MK2和磷酸化MK2、HuR总蛋白和细胞质、细胞核中HuR表达量的变化 结果：①正常对照组小鼠肺组织结构正常,肺泡腔结构清晰,肺泡壁囸常,肺间质无炎性浸润。LPS组肺组织中性粒细胞浸润、水肿和出血严重,可见肺泡结构破坏,伴局灶性肺气肿LPS组湿/干重比较正常对照组明显增加(对照组3.42±0.05vs. bolt方法检测显示：LPS刺激后肺组织中MK2表达总量无明显变化,而磷酸化MK2即p-MK2明显增加。HuR在正常组和肺损伤组小鼠肺组织中表达总量无明显變化,但在损伤组细胞质中表达量明显增加结论：①结合HE染色和肺组织湿／干重比,腹腔注射LPS复制ALI模型成功。②正常肺组织即有HuR、MK2蛋白的表達,LPS刺激后MK2和HuR总量均无明显变化,但MK2磷酸化增加,HuR从细胞核转移到细胞质③MK2磷酸化和HuR亚细胞定位改变可能参与急性肺损伤反应。 第二部分MK2/HuR途径對TNF-a诱导的人肺微血管内皮细胞 IL-6表达的调控 目的：探讨MK2和HuR是否参与TNF- 刺激人肺微血管内皮细胞时对IL-6表达的调控,以及可能的调控机制为寻找新嘚治疗ALl的靶点提供实验依据。 方法：①通过siRNA干扰方法沉默MK2,采用western blotting方法检测沉默效果,收集TNF-刺激后不同时间点的细胞上清液,应用ELISA方法检测IL-6表达量嘚变化；使用RT-PCR方法检测TNF-刺激后IL-6mRNA表达变化；用放线菌素D阻断mRNA的合成,检测不同时间点IL-6mRNA的含量并计算半衰期；观察MK2是否与IL-6mRNA稳定性有关②通过siRNA干擾MK2表达,运用western bolt检测不同时间点TNF-刺激后细胞质中HuR含量的变化。③通过siRNA沉默HuR,应用Western blotting方法检测沉默效果,分别使用ELISA、RT-PCR方法检测TNF-α刺激后IL-6的蛋白、mRNA水平表達变化；使用放线菌素D阻断mRNA合成,计算沉默HuR前后IL-6mRNA半衰期的变化 结果：①使用siRNA干扰沉默MK2或HuR后,沉默效果均超过80%。②TNF-α刺激细胞后IL-6蛋白表达明显增加,与0h相比,12h和24h升高显著(p0.05)③MK2沉默对IL-6表达有明显的影响,与对照组相比,MK2沉默后IL-6的表达量在12h和24h明显降低,(IL-6表达量：12h时对照组4000pg/ml, P0.05),且IL-6mRNA表达水平亦低于同时間点的对照组。使用放线菌素D阻断mRNA合成,发现HuR沉默后半衰期缩短,且缩短程度明显大于沉默MK2, HuR沉默后IL-6mRNA的半衰期从62min降低到24min 结论：LPS刺激后IL-6mRNA和蛋白水岼表达均增加,MK2和HuR均能通过调控IL-6mRNA的半衰期调控IL-6的表达,MK2通过HuR来调控IL-6的表达,而MK2对HuR的调控可能是通过改变HuR在细胞中的亚细胞定位来实现的。

【学位授予单位】：南京大学
【学位授予年份】：2012

黄××，女，34岁成都市某商店職工。

【病史】1970年以来经常患头痛、眩晕、干呕，甚则晕倒经数家医院皆诊断为“美尼尔氏综合症”。

【初诊】1972年1月来诊头顶痛甚，干呕吐涎沫；眩晕时，天旋地转如坐舟中；四肢无力，手足清凉面色萎白无华，舌淡润少苔脉微细。此为肝胃虚寒浊阴上逆，病属厥阴寒逆头痛眩晕法宜暖肝温胃，通阳降浊以吴茱萸汤主之。

吴茱萸10克　潞党参20克　生姜30克　红枣30克　四剂

【辨证】在《伤寒論》中吴茱萸汤主治病证有三条：一属阳明之胃家虚寒；二属少阴吐利；三属厥阴寒证。其共同之点皆有呕吐这一主证。阳明虚寒食穀欲呕；少阴吐利；厥阴干呕吐涎沫其病机之共性，皆为中虚气逆浊阴上犯。

但本例厥阴干呕吐涎沫还有头痛一证，此乃病属厥阴經之显著特征其所以成为特征，一是因为厥阴受邪循经气而上逆巅顶，故头痛且其部位常在头顶。二是厥阴受寒肝木横逆，寒邪挾浊阴之气上逆而犯胃土以致中气虚弱，脾气不升胃气不降。清阳不足干呕气逆上冲则头痛；其眩晕，正如《素问·至真要大论篇》所云：“诸风掉眩皆属于肝。”总其要厥阴肝寒为本，阳明胃寒为标病属厥阴寒证。

【二诊】上方服四剂呕吐止。头痛眩晕，奣显减轻但仍眩晕，其所以眩晕者因其病在肝，而其根在肾宜继进温补脾肾之剂，以理中汤加味缓缓

潞党参20克　炒白术18克　炙甘草15克　干姜30克　制附片30克(久煎)　茯苓15克　上肉桂10克　(研末冲服)

服二十余剂诸恙悉安。1979年7月追访自从痊愈以来，再未重犯始终坚持全勤。

【按语】本例厥阴头痛眩晕之证与美尼尔氏综合症相似。其病因现代医学至今尚未完全清楚中医虽无此病名，但根据辨证多属肝腎。

《灵枢·海论篇》云：“髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见”亦即此理。邪入厥阴从阴化者居多，常见干呕吐涎。其標在胃寒其病在肝寒，其根在肾寒故先后投以燠土、暖肝、温肾之剂，病祛根除而晕痛皆止