肝细胞癌病人外周血中循环肿瘤细胞的检测和临床意义--《复旦大学》2007年博士论文
肝细胞癌病人外周血中循环肿瘤细胞的检测和临床意义
【摘要】：
原发性肝癌(主要是肝细胞癌，hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤发病率的第5位，发病率仍持续升高。目前已成为我国第二位癌症死亡原因。尽管近几十年以来在肝癌诊治和基础研究方面均取得了长足的进步，但总体而言，肝癌的预后并没有得到显著的改善，5年生存率仅为5％左右。手术切除仍是最主要的治疗方法，转移复发已成为阻碍HCC病人长期生存的关键。因此，临床上迫切需要探索肝癌转移复发的相关预测指标来优化治疗方案。对病人预后的准确评估可对高危转移复发病人增强辅助治疗或采用侵袭性较小的治疗方案，对低危转移复发病人避免过度治疗，从而使实现治疗个体化，提高病人的生活质量。传统意义上的预后预测指标为肿瘤的临床病理分期和肿瘤细胞分化分级，该分期和分级能大致反映不同病人术后生存率的差别。但这些临床病理特征并不能准确预测转移复发和病人预后。生物标记物可提供更多信息，有望准确预测转移复发。
与肿瘤侵袭转移相关的因素均有望成为转移复发的预测标记物。生物标记可在组织和体液中检测，体液(特别是血液)检测不需肿瘤组织标本、技术相对简单、便于在同一患者多次重复进行，易于被患者接受，对于预测转移复发的可能性更为重要。外周血中癌细胞“特异性”标记(如AFP，MAGE、CK19等)mRNA和蛋白检测，以及外周血循环DNA及其遗传学异常等均已被用于转移复发的预测。另一重要方面——外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTC)的检测也已成为近年来研究的热点。已发现CTC与多种肿瘤病人的预后相关。但其在肝癌病人中的应用价值尚有争论，主要是因为采用的检测方法、标记分子及引物、对象人群和样本采集的部位与时间不同。
CTC的检测与分离技术有多种。根据肿瘤细胞大于血液中有核细胞的原理分离和富集CTC的方法较为敏感、简捷，避免了其它分离过程中引起的细胞丢失，且不破坏细胞形态。本研究中我们采用该方法检测HCC病人外周血中的CTC，并联合单细胞全基因组扩增技术和比较基因组杂交技术(CGH)研究CTC中遗传学异常，并探讨手术对CTC影响及CTC在预测肿瘤术后近期复发中的作用。
肝癌病人外周血循环肿瘤细胞的检测方法的建立及临床应用
目的：建立一种循环肿瘤细胞(CTC)的检测方法，检测肝癌外周血的CTC及探讨手术对肝癌病人外周血中CTC数目的影响。
方法：建立全血滤过富集技术检测外周血中CTC。应用肝癌细胞株HCC97-L经滤过富集后测定肿瘤细胞的检出率以检测该方法的敏感性，采用该方法检测术前75例肝细胞癌(HCC)患者、15例良性病变病人和10例正常健康对照外周血中CTC。其中18例HCC、10例血管瘤和1例局灶性结节状增生病人术中再次取血检测CTC。用细胞角蛋白8／18(CK8／18)行免疫荧光检测结合显微镜下形态学观察，判断并计数肿瘤细胞。
结果：HCC97-L细胞检出率在40％～100％之间，平均为68％；75例HCC病人外周血标本中有43(57.3％)例为CTC阳性，细胞数在1～23之间，其中早期肝癌35例中10例28.6％。对照组为血管瘤例10，局灶性结节状增生1例，肝囊肿4例，术前均未发现CK阳性CTC。18例HCC病人术中检出率为100％，明显高于术前(61％)，且术中CTC数目也明显多于术前(分别为20.1个和1.2个)，二者之间差别有显著意义(P＜0.01)。血管瘤和局灶性结节状增生病例术后可见CK阳性细胞0～1个。
结论：全血滤过富集法能简单、快速、有效的检出肝癌病人外周血中CTC，手术操作明显增加肝癌病人外周血中CTC数目。
循环肿瘤细胞的染色体基因组异常研究
目的：检测HCC病人CTC的染色体基因组的非平衡性改变，探讨采用比较基因组杂交间接证明单个CTC的良恶性的可行性。
方法：采用激光捕获显微切割技术(LCM)分离来自第一部分早期(TNMⅠ-Ⅱ期)HCC病例中14个和晚期HCC病例(TNMⅢ-Ⅳ期)中的16个循环肿瘤细胞，单细胞全基因组扩增技术扩增所有分离的单个细胞的全基因组DNA，采用比较基因组杂交技术(CGH)检测细胞的染色体基因组异常。
结果：激光捕获显微切割30个成功29个，成功率97％；单细胞扩增29个成功27个，成功率93％；CGH结果显示27个单细胞中有22个有不同程度的染色体改变，其中早期病例13个细胞中9个有染色体异常，晚期病例14个中有13个有染色体异常。CTC中常见的扩增位置有1q、6p、8q，常见的缺失有1p、4q、8p、13q、16q、17p。其中9个早期肝癌CTC中有1个存在8p缺失，13个晚期肝癌CTC中有8个存在8p缺失，二者之间的差别有显著统计学意义(P＜0.01)。
结论：单细胞全基因组扩增产物可用于比较基因组杂交。比较基因组杂交技术可以间接证明单个CTC的良恶性，大部分CTC有基因组的改变。肝癌循环肿瘤细胞中最常见1q、6p、8q扩增的和1p、4q、8p、13q、16q、17p的缺失。
肝细胞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的临床意义和预后价值研究
目的：探讨CTC在HCC外周血中的临床意义和预后价值。
方法：采用滤过富集法检测75例HCC患者、15例良性病变病人和10例正常健康对照的外周血中CTC，用细胞角蛋白8／18(CK8／18)行免疫荧光检测结合显微镜下形态学观察，判断并计数肿瘤细胞。
结果：HCC早期(Ⅰ-Ⅱ期)病人，CTC的阳性率为28.6％；晚期(Ⅲ-Ⅳ期)时，为82.5％。两者差异有统计学意义(P＜0.01)。HBsAg、血清AFP水平、肝硬化、有无包膜和Edmondson分级与CTC数目无关(P＞0.05)；单发肿瘤63例中33例阳性，多发肿瘤12例10例阳性，两组之间差异具有统计学意义(P＜0.05)；大肿瘤组(＞5cm)38例中30例阳性，小肿瘤组(≦5cm)37例中13例阳性，两组之间差异具有统计学意义(P＜0.01)；外周血中检测到CTC与肝癌病人术后一年总体生存率和无瘤生存率的减少有关。
结论：全血滤过富集法检测肝癌外周血CTC发现部分早期肿瘤已有肿瘤细胞的血源性播散；随着肿瘤进展血中肿瘤细胞也增加；外周血中检测到CTC提示病人的近期预后较差。
【关键词】：
【学位授予单位】：复旦大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2007【分类号】：R735.7【目录】：
中文摘要5-9
英文摘要9-14
第一部分 肝癌病人外周血循环肿瘤细胞的检侧方法的建立及临床应用22-35
中文摘要22
材料与方法23-25
参考文献31-35
第二部分 循环肿瘤细胞的染色体基因组异常研究35-60
中文摘要35
材料和方法36-41
参考文献56-60
第三部分 肝细胞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的临床意义和预后价值研究60-74
中文摘要60
材料与方法60-61
参考文献70-74
全文总结74-75
本研究的潜在应用价值75-76
文献综述76-90
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循环肿瘤细胞----与国际医学接轨的“肿瘤全新强大检测工具”
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　　肿瘤转移是一个复杂过程，具有转移潜能的肿瘤细胞可以通过外周血液循环转移到血液、骨髓、淋巴结或其他器官，常规检测手段很难发现这些循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)。日前，天津医科大学肿瘤医院引进了国际最先进的CellSearch循环肿瘤细胞检测与分析系统，并在全国率先将该技术项目应用于临床CTC检测，可随时捕捉并评估循环肿瘤细胞以确定转移性乳腺癌患者的预后，检测可提供客观的肿瘤细胞数量，帮助肿瘤医生为患者提供最佳治疗方案。
　　日，CellSearch全球医学执行官携多名美国CTC研究专家一行8人到我院检验科进行学术交流与临床病例分析。检验科张鹏主任就我院患者的特点和目前在临床开展情况做了系列分析，随后大家进一步对该技术的诊断效能和发展研究前景进行了深入探讨。国际学者们都对检验科的高水平质量平台和检测精度给予了很高评价，认为我院检验科在国内甚至国际上都处于技术领先水平，相信中国CTC检测会与全球医学发展同步，在肿瘤的实时监测和个体化精准医疗中发挥越来越大的作用。
肿瘤 循环 检测 细胞 ctc
天津市肿瘤医院
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服务名称： 外周血循环肿瘤细胞（CTCs）分析与检测技术服务
英文名称：
简介：近年来，国内外对循环肿瘤细胞（CTCs）检测与分析技术的研究越来越多，即使这样，却没有一种解决方案能完美地解决检测与后期培养的问题。为此，佰乐良成科技引进国外多种最先进的技术，打造出一套完全解决方案。
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&&近年来，国内外对循环肿瘤细胞（CTCs）检测与分析技术的研究越来越多，即使这样，无论是临床或科研的研究人员却发现，没有一种解决方案能够完美的解决细胞检测与后期培养分析的所有问题。为此，佰乐良成科技引进国外多种最先进的技术，为用户打造出一套完全解决方案。
一、美国强生（原veridex）CellSearch技术：
唯一获得FDA、SFDA认证的循环肿瘤细胞检测系统，全球第一个也是唯一经过FDA批准用于恶性肿瘤疾病管理的检测循环肿瘤细胞（CTC）的商业化产品(2004年获得批准)；2012年获得SFDA批准用于转移性乳腺癌患者的检测。
► 创新性的循环肿瘤细胞富集手段
► 全自动的操作，真正的无人干预
► 专有样本保存技术，室温稳定性达96小小时
► 标准化商业化的产品，可靠的性能
1、样品收集
专用收集管96小时常温保存
2、血样自动预处理
自动处理，高重复性结果
3、样品分析
可视化，快速分析系统
二、法国screencell无标记循环肿瘤进行便捷、快速、高效地分选
ScreenCell&是一项创新、简单、无创的技术，主要用于从全血分离循环稀有细胞或从任何生物液体中分离潜在的非典型细胞。&
► 无需任何仪器设备，节省仪器的采购运行成本；&
► 设计用于标准化的IVD分析平台；&
► 分选过程仅需3分钟；&
► 分选对象：固定化细胞、活细胞、残留液&
►&不依赖与EpCAM
北京佰乐良成科技有限公司　是一家以科技为本的高质素专业仪器设备供应商，致力于为国内生命科学、分子生物学、生物检测、毒理研究、生物工程、实验室仪器设备等领域用户提供先进的进口实验室仪器设备及高质量的服务。公司拥有充满活力的高素质销售队伍和技术全面、经验丰富的售后服务队伍，深受广大用户的好评和信任，在业界具有良好的口碑和影响力；并以用心服务为宗旨，以诚以信相交，以勤以智服务，尽全力做好用户的科研帮手。
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循环肿瘤细胞（CTC）检测
发布时间： 15:15:22　　更新时间： 13:02:04　　浏览次数：418 　　&
产品名称： 循环肿瘤细胞（CTC）检测产品标签：
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招商区域： 全国生产单位： 北京福安华生物科技有限公司批准文号： 1234567&&【】零售价格： 电询
产品用途循环肿瘤细胞（CTC）是指进入到外周血液循环中的肿瘤细胞，部分CTC可以逃离机体免疫系统识别或药物杀伤，在体内发现适合的微环境，形成“种子”，在远端组织器官生长，造成肿瘤的转移或复发。最新研究证实，肿瘤细胞不仅可以从实体瘤原发灶或转移灶脱落入血，也可在形成可见实体瘤病灶之前入血。因此，CTC检测有可能遭遇影像学发现或早于临床。CTC检测常被称作“液体活检”，具有无创、便捷、实时、准确等特点，弥补了现有临床肿瘤诊断方法的不足，可动态监测肿瘤变化、及时评估治疗效果、指导肿瘤实时个体化精准治疗，将肿瘤转变为可控的慢性疾病。产品补充说明循环肿瘤细胞（CTC）是指进入到外周血液循环中的肿瘤细胞，部分CTC可以逃离机体免疫系统识别或药物杀伤，在体内发现适合的微环境，形成“种子”，在远端组织器官生长，造成肿瘤的转移或复发。最新研究证实，肿瘤细胞不仅可以从实体瘤原发灶或转移灶脱落入血，也可在形成可见实体瘤病灶之前入血。因此，CTC检测有可能遭遇影像学发现或早于临床。CTC检测常被称作“液体活检”，具有无创、便捷、实时、准确等特点，弥补了现有临床肿瘤诊断方法的不足，可动态监测肿瘤变化、及时评估治疗效果、指导肿瘤实时个体化精准治疗，将肿瘤转变为可控的慢性疾病。对代理商的要求优先考虑拥有抗肿瘤领域相关产品临床运作经验、拥有相关医院主管领导资源及有运作免疫治疗项目（最好对基因检测领域具备一定认知度）的医药行业同仁。在合作过程中，公司市场部将在提供彩页、培训PPT、宣传视频资料、便携式采样设备等基础性学术支持的同时，将根据客户需求，针对客户自身的业务团队乃至医院科室的培训，配合以市场部产品经理、公司首席科学家乃至301医院相关专家的不同学术级别的培训与交流；在商务政策方面，公司将提供快捷便利的资金平台以利于推广活动的执行；在实验室战略方面，公司将承诺全额投入实验室投放资金，同时也欢迎与各位同仁以股份制形式协同合作。 联系方式
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