大家都用的是哪家的RIPA裂解液啊？实用便捷不？_百度知道君，已阅读到文档的结尾了呢~~
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
RIPA细胞裂解液及裂解细胞步骤
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer-4.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口组织裂解液和细胞裂解液如何配制?
一、细胞裂解液配制
一、试剂准备
1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:
150 mM NaCL
1% NP-40 (去垢剂)
0.1% SDS (去垢剂)
2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)
2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)
1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)
1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)
1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)
以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF
1.5 mM EDTA
1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)
3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤
1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上， 用吸液管吸出培养液。加入足够的冷的
PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS
，重复以上操作2-3遍。在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、 向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml).
然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮
(由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、 吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中 （置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、 取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在
-70℃。
NP-40 or Triton-100 1%
TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/L
NaCl 150mmol/L
PMSF（苯甲基磺酰氟） 0.1mmol/L(100&g/ml)
Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 &mol/L(0.7&g/ml)
Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/ml
Aprotinin（抑蛋白酶肽） 0.3&mol/L(1&g/ml)
（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；
Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);
Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；
Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）
裂解操作程序：
* 离心收集1&107 个细胞
* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100&l
* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）
* 4℃放置15~30min
* 4℃离心，15 000rpm,10min，
取上清备用。
细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；2.
溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性
推荐RIPA buffer:
. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系
· 150 mM NaCl 等渗体系
· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂
· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂
· 5 &g/ml Aprotinin （抑肽酶）蛋白酶抑制剂
· 5 &g/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂
· 1% Triton x-100 破坏细胞
·1% Sodium deoxycholate
中度变性剂和蛋白溶解剂
细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；2. 溶解蛋白；3.
蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性
推荐RIPA buffer:
. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系
· 150 mM NaCl 等渗体系
· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂
· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂
· 5 &g/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂
· 5 &g/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂
· 1% Triton x-100 破坏细胞
·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂
·0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂
其中PMSF等蛋白酶抑制剂最好另外配制，－20℃保存，用前混合。蛋白酶抑制剂较贵，如果你的经费有限，可以仅用PMSF试一试，能出结果就可以。
用于普通的
Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很
好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化
蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40
裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或
中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。对于某些难溶解
蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液,例如RIPA裂解液(强、中)或
SDS裂解液。
RIPA裂解体系： 150 mmoL/L Nacl， 1.0% NP-40或Triton-x-100 ，0.5%脱氧胆酸钠， 0.1%
SDS， 50 mmoL/L Tris ( ph8.0)。
一、组织裂解液配制
组织裂解液配方：`
Urea(60. 06)&&&
thiourea(76.12)& 1.5224& g
DTT&&&&&&&&&&
CHAPS&&&&&&&
EDTA&&&&&&&&
Tris&&&&&&&&&
NP-40&&&&&&&
1%(v/v)&& Triton
PMSF用前加&&&&
2%pharmalyte&&&&&&&&&&
共10ml分装成400&l/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）
注：已配好分装成400&l/每管可供应用
不需另配！！！
细胞裂解液配方：
Urea(60. 06)&&&
thiourea(76.12)& 0. 7613& g
DTT&&&&&&&&&
0.050&&& g
CHAPS&&&&&&
Trisbase&&&&
0.02425&& g
共5ml分装成200&l/每管（可应用于50-100ml培养瓶内的细胞裂解）
细胞裂解液：&&&&&
组织裂解液配方：
尿素、&&&&&&&&&
g&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
mol/L硫脲、&&&&&&&&
thiourea(76.12)& 1.5224& g
NP-40、&&&&&&&&&&&&
NP-40&&&&&&&
X-100、&&&&&&&
1%(v/v)&& Triton
65 mmol/L DTT、& 0.1003g&
DTT&&&&&&&&&&
PMSF、&&&&&&&&
PMSF用前加&&&
CHAPS、&&&&&&&&&&&&
CHAPS&&&&&&&
Tris、&&&&&&&&&
Tris&&&&&&&&&
pharmalyte（pH3-10）、2%pharmalyte&&&&&&&&&&
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
EDTA&&&&&&&
0.00146& g
25 mg/L DNase I、
7 mg/L RNase A、
20 mg/L aprotinin、
20 mg/L leupeptin、
2 mmol/L Na3VO4、
Phosphatase Inhibitor Cocktail 1
Phosphatase Inhibitor Cocktail 2
1ml水化液配方：
Urea(60.06)&&&
CHAPS&&&&&&
痕量溴酚兰&&&&&&&&&&&
1%的痕量溴酚兰（10mg+1000&l双蒸水）
450&l水化液 加DTT 0.00135mg
or 400&l水化液 加DTT 0.00126mg
各种细胞裂解液的功用都分别是什么，SDS ，NP-40 ，TritonX-100有何作用
SDS ，NP-40 ，TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。
SDS属于离子型去垢剂，最厉害，基本可以把细胞完全破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。
NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40，也是常用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用（SDS基本会使蛋白变性失活）。
但是去垢剂属性只是一方面，buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素，建议参考《分子克隆》来做。
已投稿到：
以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。您的位置： &>&&>&
RIPA裂解液(强)现货促销
RIPA裂解液(强)现货促销
价&&&&格：
型&&&&号：
生&产&地：中国大陆
访问：26次
发布日期：(更新日期：)
&标准版第 1年
电话：021-
联系人：周先生，阿仪网看到您的。
RIPA裂解液(强)现货促销品质保证，货源充足。严格的生产质量控制体系，包括：优级纯，分析纯，化学纯，试剂级，基准试剂，实验纯，教学试剂，高纯试剂，色谱纯，光谱纯，电子纯。各种包装规格，并可提供包装定制，欢迎来电咨询。
详细内容公司简介
RIPA裂解液(强)现货促销&公司主营产品：生化试剂：抗生素、维生素、培养基、染色剂、酶/辅酶、碳水化合物、分离试剂、缓冲试剂、核酸及衍生物、氨基酸/蛋白质等其它生化试剂。分子生物学：核酸电泳、DNA Marker、克隆表达、PCR/Q-PCR、RT-PCR、基因组提取、质粒提取、RNA提取、DNA纯化回收、核酸纯化相关试剂。细胞培养：血清、培养基、平衡盐溶液、辅助添加试剂、细胞检测试验。蛋白质研究：蛋白电泳、蛋白提取、蛋白纯化、蛋白定量、组织/蛋白染色。免疫学：抗体、免疫组化、ELISA、免疫印迹WB。&RIPA裂解液(强)现货促销&&产品详情：货号:PS0013规格:100ml储存条件:&20℃,12个月用途:裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀。注意事项:主要由NP-40、deoxycholate、SDS组成。含有一支1.5ml PMSF。RIPA裂解液(强)现货促销&管理窍门：一般按用途可以分为通用试剂、高纯试剂、分析试剂、分析试剂、临床诊断试剂、生化试剂、无机离子显色剂试剂等。有四种常用规格：1.优级纯或一级品(GR 精密分析和科学研究工作)；2.分析纯或二级品(AR 重要分析和一般研究工作)；3.化学纯或三级品(CP 工矿及学校一般化学实验)；4.实验试剂(L.P.)。大多数的试剂具有一定的毒性及危险性。对科研试剂的加强管理，不仅是保证分析结果质量的需要，也是确保人民生命财产安全的需要。试剂应根据毒性、易燃性、腐蚀性和潮解性等不同的特点，以不同的方式妥善管理。保存注意事项：低温、避光、干燥阴凉处封闭贮存，严禁与有毒、有害物品混放、混运。本品为非危险品，可按一般化学品运输，轻搬动轻放，防止日晒、雨淋。&我们提供的试剂产品品质优良，都是通过严格的检测体系认证。RIPA裂解液(强)现货促销&&其他优质试剂：大鼠甲状腺素(T4)ELISA检测试剂盒说明书CAS:59-92-7,多巴价格bs-2550R,血小板趋化因子7蛋白抗体|CXCL7/NAP-2/PPBP抗体价格CAS:,磺苄西林钠 现货供应bs-2330R,原癌基因相关蛋白RAP2B抗体|RAP2B抗体价格小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE),96T/48Tbs-2137R,流感H3N2血凝素抗体|H3N2 hemagglutinin抗体价格CAS:-5,5-溴-2-氯-4-氟苯胺价格硫酸长春碱标准品,cas:143-67-9对照品猪白介素10(IL-10)ELISA试剂盒,96T/48T乙氧苯柳胺对照品/标准品bs-9885R,血管紧张素激活蛋白1抗体|ATP1抗体价格CAS:,阿维菌素?现货供应人衰变加速因子(DAF/CD55)ELISA试剂盒,96T/48T烯丙基缩水醚|CAS号106-92-3|Allyl glycidyl ether&bs-11177R,胰蛋白酶抑制剂抗体|Trypsin Inhibitor抗体价格bs-0310R-AF555,Alexa Fluor 555标记的兔抗鸡IgG|Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 555抗体价格bs-9758R,Ephrin A2抗体|Ephrin A2抗体价格重组人 EphB6/EphB6 蛋白(His 标签)/10197-H08H吡喹酮标准品/对照品人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA检测试剂盒说明书CAS:-4,夏无碱 C标准品/对照品洛匹那韦中间体 TPA厂家|CAS号-1bs-3454R,磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体|Phospho-MAP3K8 (Ser400)抗体价格吡唑|CAS号288-13-1|Pyrazole人参皂苷Rb3标准品,cas:对照品4-硝基苯乙酸|CAS号104-03-0|4-Nitrophenylacetic acid苯甲酸钠标准品/对照品CAS:,4.9物(甲基双烯双酮)现货供应小鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA检测试剂盒说明书CM1091B/沙门氏菌ONE肉汤基础培养基厂家bs-0375R-RBITC,罗丹明标记的兔抗豚鼠IgM|Rabbit Anti-Guinea pig IgM/RBITC抗体价格bs-6434R,端粒酶调节相关蛋白抗体|Tartrate Resistant Acid Phosphatase抗体价格人军团菌抗原(LPAg)ELISA试剂盒,96T/48TCAS:539-15-1,大麦芽碱价格bs-12453R,免疫调节蛋白AIRE抗体|AIRE抗体价格1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐|CAS号-1|1-Hexyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphatebs-11620R,G蛋白信号调节蛋白21抗体|RGS21抗体价格胸腺肽分子量标准标准品/对照品6-溴靛红|CAS号|6-Bromoisatin马兜铃酸A标准品,cas:313-67-7对照品CAS:-9 ,泊沙康唑现货供应地蒽酚对照品/标准品
您可能感兴趣
公司同类产品
Hoechst33258染色液现货促销品质保证，货源充足。严格的生产质量控制体系，包括：优级纯，分析纯，化学纯，试剂级，基准试剂，实验纯，教学试剂，高纯试剂，色谱纯，光谱纯，电子纯。各种包装规
铜盐染色液(红氨酸法)现货促销品质保证，货源充足。严格的生产质量控制体系，包括：优级纯，分析纯，化学纯，试剂级，基准试剂，实验纯，教学试剂，高纯试剂，色谱纯，光谱纯，电子纯。各种包装规格，并可
巴氏染色液试剂盒（EA50）现货促销品质保证，货源充足。严格的生产质量控制体系，包括：优级纯，分析纯，化学纯，试剂级，基准试剂，实验纯，教学试剂，高纯试剂，色谱纯，光谱纯，电子纯。各种包装规格
免责声明：以上所展示的[RIPA裂解液(强)现货促销]由会员[上海星科生物科技有限公司]自行提供，[RIPA裂解液(强)现货促销]内容的真实性、准确性和合法性由发布会员[上海星科生物科技有限公司]负责。[阿仪网]对此不承担任何责任
友情提醒：为规避购买风险，建议您在购买相关产品前务必确认供应商资质以及产品质量！小木虫 --- 500万硕博科研人员喜爱的学术科研平台
&&查看话题
关于Ripa裂解液
小弟想自己配置Ripa裂解液，于是查了Ripa裂解液的配方，发现要加TritonX-100, SDS, NP-40，但这些东西具小弟所知都是起到破坏脂质双分子层的作用，小弟配制Ripa裂解液时只加其中一种可以吗？
另外小弟发现，为防止蛋白被分解裂解细胞前要加PMSF，抑肽酶Aprotinin，抑亮肽酶Leupetin，他们的作用有什么不同吗，我只用其中一种可以起到防止蛋白分解的作用吗？
最后一个问题是，有人说Ripa裂解液裂解的细胞，不能用考马斯亮蓝法测蛋白含量，这个是真的吗？为什么？
希望各位有经验的大神帮帮小弟，小弟在这里先谢谢各位大神了！！！
您的意思是我只有Triton-X100、NP-40、SDS也可以使细胞裂解对吗？
前面打错了，您的意思是我只用Triton-X100、NP-40、SDS中的一种也可以使细胞裂解对吗？
一种就行了，一般不用SDS。
好的！！！
研究生必备与500万研究生在线互动！
扫描下载送金币
浏览器进程
打开微信扫一扫
随时随地聊科研}