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LPS刺激RAW264.7细胞，诱导不出炎症模型，求大神解答下！！！
试过用100ng/ml,300ng/ml,1ug/ml刺激6h,12h,24h.均检测不到细胞培养液上清中IL-6,TNF-a,IL-1b因子变化，后来又降低了培养液中血清的浓度，也试着用我们学院其他实验室的RAW264.7细胞进行实验，均未检测出变化，哪位大神做出来过给指教下，不胜感激！
谢谢，那请问下你用的哪个公司的LPS？能提供下货号么&&谢谢
谢谢哦，你有做过LPS刺激巨噬细胞的实验么？
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随时随地聊科研猪苓多糖对LPS诱导的J774炎症模型的抗炎作用及其机制--《中国实验方剂学杂志》2015年03期
猪苓多糖对LPS诱导的J774炎症模型的抗炎作用及其机制
【摘要】：目的:研究猪苓多糖对脂多糖(LPS)诱导的J774巨噬细胞炎症模型细胞因子的调节作用,并探讨其可能的抗炎作用机制。方法:J774细胞以2×105个/孔接种于6孔培养板,将细胞分为空白组、LPS模型组、LPS加猪苓多糖低剂量组(1 mg·L-1)、LPS加猪苓多糖中剂量组(10 mg·L-1)、LPS加猪苓多糖高剂量组(100 mg·L-1),每组6个复孔。J774给予10 mg·L-1LPS刺激3 h,同时猪苓多糖干预共刺激3 h后收集细胞,实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-10(IL-10),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,Western blotting检测猪苓多糖对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38),细胞外信号调节蛋白激酶42/44(ERK42/44),p65丝裂原活化蛋白激酶(p65)蛋白磷酸化表达的影响。结果:与空白组相比,LPS模型组细胞因子IL-1β,IL-10,TNF-α,IFN-γ和IL-6 mRNA表达量显著升高(P0.01),炎症模型建立成功。给予猪苓多糖干预后,猪苓多糖可降低由LPS诱导导致的炎症因子的升高与LPS导致的p38,ERK42/44,p65磷酸化的表达(P0.01,P0.05)。结论:猪苓多糖可以降低LPS导致的炎症反应,可能是通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路来降低炎症损伤。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R285.5【正文快照】：
猪苓多糖(polyperus polysaccharide,PPS)是中药猪苓水提取物中的主要活性成分之一,是良好的免疫调节剂,中药猪苓提取物具有多种生物学功能,如抗肿瘤,增强免疫和保肝活动等,尤其是对肾脏疾病的治疗中应用更多[1-2]。猪苓多糖在治疗膀胱癌模型大鼠时,可以影响巨噬细胞的免疫分
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在LPS诱导的炎症模型中低功率激光照射对小胶质细胞吞噬功能的影响
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求助，LPS炎症模型建立不出来
本人现开始做抗炎研究，刚起步。最近在建立炎症模型，想着用LPS刺激细胞，根据不同作用时间、作用剂量产生的NO量的不同，以及细胞活力的不同选取适当的刺激条件。但是，最近做的实验结果都不好，NO出不来，实验数据见附件，求助~~
哦，因为我只需要做NO，所以就没有看别的炎症因子，现在就是NO出不来~~
楼上说得对，我是得说说我的实验过程：细胞按2*10∧5/mL的密度100μL接种到96孔板中，孵育12-18个小时，吸去培养基，加100μL LPS（密度分别为10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL）以及对照组（完全培养基）后，分别刺激6h、12h、24h，检测NO，结果发现所有的吸光度值都在0.1左右，即没有产生NO，对照组和处理组都是。
所有的LPS都用完全培养基配制。
1 我用的是小鼠的巨噬细胞Raw264.7细胞；
2 因为一直出不来NO，就一直在提高LPS的浓度；
3 我要测的NO就是iNOS表达后产生的，用的是Griess法，看文献中一般都用这个方法来检测生成的NO。
谢谢你耐心帮我排查问题~~
嗯，这个实验对细胞要求挺高的，要是分化的细胞的话应该是不会出结果的。我后来做的还行，你要不加我QQ
我最近也要建这个模型。我想知道前辈们的成功案例都是怎样的实验流程和加样量。
楼主做出来了吗？细胞分化是什么意思啊？怎么看出来有没有分化啊？我也是新手，在做LPS诱导NO，没做出来
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