当归补血汤及有效成分对动脉粥样硬化及心肌细胞凋亡的影响--《广州中医药大学》2013年博士论文
当归补血汤及有效成分对动脉粥样硬化及心肌细胞凋亡的影响
【摘要】：1研究背景
心在五脏的相对位置居于上,五行属火,心气通于夏,为阳中之阳。尽管心病的病变机理与临床表现各有不同,但是心病的主要病理基础为心阳虚弱,抓住这一主要病理基础就能从整体上把握住心病的主要矛盾。
李东垣创的当归补血汤以黄芪、当归两味药物以5：1比例配伍而成,用于治疗劳倦内伤、气血虚、阳浮于外之虚热证。黄芪补气,气为阳,对于心气的温通作用较强,大剂量为君；心依赖血的濡养,血是气的载体,气必须依附于血才能运行到全身,且阴阳互根,阳无阴则阳无以化,需要补血的当归,辅以小剂量为臣,两者共同作用,对于心血管疾病的治疗有一定的疗效。
通过对当归补血汤及其有效成分(黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油)抗AS及抑制心肌细胞凋亡的药效研究,探讨当归补血汤及其有效成分(黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油)对OX-LDL作用下小鼠源性RAW264.7细胞吞噬作用的影响,TNF-a、IL-1β炎性因子的分泌,TNF-a、ICAM-1、P38-MAPK、NF-kBP65蛋白表达的影响；对氧化应激损伤状态下心肌细胞存活率的影响,对线粒体凋亡途径相关调控蛋白Hsp-70、Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。研究当归补血汤抗AS及其抑制心肌细胞凋亡的作用机制及主要作用成分,为当归补血汤及提取有效成分治疗心血管疾病提供实验依据。
3研究方法3.1当归补血汤及有效成分对OX-LDL作用于RAW264.7细胞的影响
按1：1、2：1、3：1、5：1质量比取黄芪、当归道地药材,文火水煎并浓缩成含生药1.04g/mL的煎液,空白血清组灌胃等量生理盐水,各组以20mL/kg剂量灌胃,每日早晚各一次,持续3天,于第4天上午以30mL/kg剂量一次性灌胃,1h后采取眼眶静脉丛血,静置2-4h后以10,000rpm离心10min,取上清。黄芪甲苷、阿魏酸标准品购于广州市药品食品检验所,黄芪总皂苷购于上海阿拉丁试剂公司。当归挥发油采用水提法提取,以当归500g,加蒸馏水4000mL煮沸6-8h进行提取,以10,000rpm、l0min离心3次提纯得到挥发油360mg,分装,密封纸密封置于4V保存。
RAW264.7细胞以DMEM高糖培养基加10%胎牛血清(FBS)培养,隔天换液,每2天传代1次。细胞以8000个/mL密度种于96孔板,过夜培养后换无血清培养基同步24h,MTT法检测当归补血汤含药血清及有效成分对RAW264.7细胞存活率的影响。RAW264.7细胞与50mg/LOX-LDL作用48h制备泡沫细胞模型,油红0染色法鉴定当归补血汤含药血清及有效成分对RAW264.7细胞吞噬OX-LDL的影响。当归补血汤有效成分与OX-LDL作用24h, ELISA法检测其对TNF-a、IL-1β分泌的影响。Western-blotting法检测OX-LDL与RAW264.7细胞作用24h,当归补血汤及有效成分对P38-MAPK、NF-kBP65、TNF-a、ICAM-1蛋白表达的影响。
3.2当归补血汤及有效成分对H202诱导心肌细胞凋亡的影响
取出生后1-3d的SD大鼠,用75%乙醇溶液浸泡消毒皮肤后,开胸取出心脏,移入超净工作台,用无菌锋利眼科剪剪成1mm3组织碎块,加入复合酶消化液(0.125mg/L胰蛋白酶+0.1mg/LI型胶原酶),含血清培养基终止消化,1000rprm、10min离心,弃上清,完全培养基悬浮细胞沉淀。运用酶消化法反复多次消化,收集细胞悬液,以90min差速贴壁法分离纯化心肌细胞,在37℃、5%C02条件下用完全培养基培养48h后换液,于培养72h后进行实验。以150μmol/L H2O2作用20h诱导心肌细胞凋亡。MTT法检测当归补血汤含药血清及有效成分对H202诱导心肌细胞凋亡细胞存活率的影响。细胞免疫化学法及蛋白印迹(Western-blotting)法检测当归补血汤含药血清及有效成分对H202诱导心肌细胞凋亡相关蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。
4.1当归补血汤及有效成分对OX-LDL作用于RAW264.7细胞的影响
4.1.1与正常对照组相比,空白血清组对细胞增殖无影响(P0.05),当归补血汤不同比例含药血清组均对RAW264.7细胞有促凋亡作用(P0.05或P0.01),以5：1组促凋亡作用最为显著；黄芪甲苷100、200mg/L浓度对RAW264.7细胞增殖无影响(P0.05),300mg/L及以上浓度有明显的促凋亡作用(PO.05或P0.01)；阿魏酸、黄芪总皂苷100、200mg/L浓度对RAW264.7细胞有促增殖作用(P0.01),300mg/L对RAW264.7细胞增殖无影响(P0.05),400、500mg/L浓度有明显的促凋亡作用(P0.01)；当归挥发油40、50mg/L浓度对RAW264.7细胞增殖无影响(P0.05),60mg/L及以上浓度对RAW264.7细胞有促凋亡作用(P0.05或P0.01)。
4.1.2细胞与OX-LDL培养48h后观察到50mg/L浓度即可诱导出泡沫细胞,后续实验中以50mg/L浓度进行实验研究；油红0染色结果发现,当归补血汤不同比例含药血清组均促进了RAW264.7细胞吞噬OX-LDL的作用,且5：1组可观察到含药血清对泡沫细胞有明显的降解作用；黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油均促进细胞吞噬OX-LDL的作用。
4.1.3ELISA检测结果发现,模型组IL-1β的表达与正常对照组、阿魏酸组、黄芪甲苷组、阿魏酸合黄芪甲苷组、黄芪总皂苷及当归挥发油组无差别(P0.05),表达低于黄芪总皂苷合当归挥发油组。模型组TNF-a表达与正常对照组、阿魏酸组、黄芪甲苷组、阿魏酸合黄芪甲苷组没有差别(P0.05),表达低于黄芪总皂苷、当归挥发油组、黄芪总皂苷合当归挥发油组。
4.1.4Western-blotting结果显示,正常对照组、各含药血清组P38-MAPK、NF-kBP65、TNF-a、ICAM-1蛋白表达均比模型组高。与模型组相比较,阿魏酸、黄芪总皂苷药物组TNF-a、ICAM-1、NF-kBP65、P38-MAPK表达均比模型组低,黄芪甲苷、阿魏酸合黄芪甲苷、当归挥发油组ICAM-1表达比模型组低,但各组表达均比正常对照组低。
4.2当归补血汤及有效成分对H202诱导心肌细胞凋亡的影响
4.2.1倒置相差显微镜下观察,刚接种的心肌细胞呈球形,悬浮于培养液中,细胞折光性好。24h后观察到有部分细胞呈杆状贴壁,并出现白发性抽搐样搏动。48h后可见大部分细胞伸出伪足相互连系在一起,呈现有规律的搏动。72h后可见细胞出现同步有规律的搏动,且形成细胞簇,用于实验研究。
4.2.2不同浓度H202溶液与心肌细胞作用20h,研究发现100、200μmol/L浓度即可明显造成细胞凋亡(P0.01),300μmol/L及以上浓度细胞凋亡显著下降(P0.01),结合细胞形态学观察,考虑到H202见光见热易分解的特性,选择150μmol/L浓度进行实验。
4.2.3实验结果发现芪归不同比例的含药血清均能明显提高心肌细胞的存活率(P0.01),且以5：1组效果最好,各组与空白血清组相比差异有统计学意义(P0.01)。不同浓度黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷对心肌细胞有明显的保护作用(P0.05或P0.01),且随着药物浓度的升高,心肌细胞的存活率也随着升高；不同浓度当归挥发油对心肌细胞均没有保护作用,且促进心肌细胞的凋亡,各浓度组之间没有区别(P0.05)。
4.2.4细胞免疫化学法检测结果：与正常对照组比较,150μmol/LH2O2处理心肌细胞20h后,模型组心肌细胞中Hsp-70、Bcl-2表达略增多,Bax、Caspase-3蛋白表达明显增加。与模型组相比,当归补血汤含药血清(5：1)组能明显促进Hsp-70、Bcl-2蛋白的表达,降低Caspase-3、Bax蛋白的表达；黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷预处理后,心肌细胞中Hsp-70、Bcl-2蛋白表达量均较模型组显著增加,Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低。
4.2.5Western-blotting检测结果：150μmol/LH2O2处理心肌细胞20h后,与正常对照组比较,模型组心肌细胞中Bax、Caspase-3蛋白的表达明显增加,Hsp-70表达略增多,Bcl-2蛋白表达明显下降；当归补血汤不同比例含药血清组与模型组相较,Hsp-70、Bcl-2蛋白表达明显上升,Caspase-3、Bax蛋白表达明显下降；黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪甲苷合阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油(小剂量)、黄芪总皂苷合当归挥发油预处理后,心肌细胞中Hsp-70、Bcl-2蛋白表达量均较模型组显著增加,Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低。
5.1当归补血汤通过促进巨噬细胞凋亡和降解泡沫细胞治疗动脉粥样硬化。
5.2大剂量的黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油通过促进巨噬细胞的凋亡发挥抗AS作用。
5.3当归补血汤、黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油不是通过巨噬细胞吞噬OX-LDL发挥抗AS作用的。
5.4不能认为黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷、当归挥发油通过抑制TNF-a、IL-β炎性因子的表达起到抗AS的作用。
5.5不能认为当归补血汤及有效成分通过抑制TNF-a、ICAM-1、NF-Kbp65、P38-MAPK蛋白表达达到抗AS作用。
5.6当归补血汤及黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷可以抑制H202诱导的心肌细胞凋亡,保护心肌细胞。
5.7当归补血汤、黄芪甲苷、阿魏酸、黄芪总皂苷可能通过上调Hsp-70、Bcl-2,下调Caspase-3、Bax蛋白的表达抑制心肌细胞的凋亡,防止心肌细胞氧化损伤,从而在治疗心血管疾病方面发挥作用。
6.1通过心病的主要病因病机“心阳虚”探讨当归补血汤配伍及用药的合理性。
6.2在动脉粥样硬化斑块形成的源头——巨噬细胞吞噬OX-LDL方面研究当归补血汤及有效成分抗动脉粥样硬化的作用机理。
6.3研究当归补血汤抗动脉粥样硬化的同时有效保护心肌细胞的作用,多靶点防冶心血管疾病。
7展望与不足
随着现代生物医学技术的发展及对心血管疾病研究的深入,将有望攻破心血管疾病这一难关,有效改善人们的生活质量,减轻人们的经济负担。
在本实验中选择的实验指标有限,中药具有多靶点、多途径的作用特点,可能通过其他途径发挥治疗作用,有待于进一步深入研究。
【关键词】：
【学位授予单位】：广州中医药大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2013【分类号】：R285【目录】：
中文摘要3-7Abstract7-14目录14-16引言16-18第1章 文献研究18-39 1.1 心血管疾病的病因研究18-20
1.1.1 吸烟对心血管系统的影响18-19
1.1.2 体育活动缺乏19
1.1.3 老龄化19-20 1.2 动脉粥样硬化的相关影响因素20-24
1.2.1 动脉粥样硬化的概述20
1.2.2 巨噬细胞与动脉粥样硬化20-22
1.2.3 OX-LDL与动脉粥样硬化22-24 1.3 心肌细胞凋亡的相关研究24-30
1.3.1 细胞凋亡的概述24
1.3.2 心肌细胞凋亡与心血管疾病的关系24-26
1.3.3 氧化应激与细胞凋亡26-27
1.3.4 心肌细胞凋亡的线粒体途径27-30 1.4 当归补血汤的研究30-34
1.4.1 当归补血汤的渊源30-31
1.4.2 当归补血汤的衍化31
1.4.3 当归补血汤与心病的关系31-34 1.5 治疗34-39
1.5.1 西医治疗动脉粥样硬化34
1.5.2 中医治疗动脉粥样硬化34-35
1.5.3 当归补血汤治疗动脉粥样硬化35-36
1.5.4 黄芪、当归有效成分抗动脉粥样硬化36
1.5.5 西医治疗心肌细胞凋亡36-37
1.5.6 中医抑制心肌细胞凋亡37
1.5.7 当归补血汤治疗心肌细胞凋亡37-38
1.5.8 黄芪、当归有效成分保护心肌细胞的作用38-39第2章 实验研究39-65 2.1 当归补血汤及有效成分对OX-LDL作用于RAW264.7细胞的影响39-51
2.1.1 实验方法39-46
2.1.1.1 当归补血汤及有效成分对RAW264.7细胞增殖的影响40-41
2.1.1.2 当归补血汤及有效成分对RAW264.7细胞吞噬OX-LDL的影响41-43
2.1.1.3 当归补血汤有效成分对OX-LDL作用于RAW264.7细胞TNF-a、IL-1β表达的影响43
2.1.1.4 当归补血汤及有效成分对OX-LDL作用于RAW264.7细胞P38-MAPK、NF-kBP65、TNF-a、ICAM-1蛋白表达的影响43-46
2.1.2 统计方法46
2.1.3 实验结果46-48
2.1.4 实验结论48-49
2.1.5 讨论49-51 2.2 当归补血汤及有效成分对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响51-65
2.2.1 实验方法51-57
2.2.1.1 原代心肌细胞培养52-53
2.2.1.2 心肌细胞凋亡模型的建立53-54
2.2.1.3 当归补血汤及有效成分对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡存活率的影响54
2.2.1.4 细胞免疫化学法检测凋亡相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达54-55
2.2.1.5 蛋白印迹法检测凋亡相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达55-57
2.2.2 统计方法57
2.2.3 实验结果57-60
2.2.4 实验结论60-61
2.2.5 讨论61-65结语65-67参考文献67-75附录1：实验图片75-92附录2：英文缩略语92-93博士研究生在校期间发表论文情况93-94致谢94
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　　昆明总医院附属中医院
，系全军中医
医药管理局股骨头坏死
，军区中西医
临床药理研究机构中医骨病
专业组单位
，受总后勤部表彰的中
诊断先进单位
、中医骨病科
、中医痔瘘科
、贵宾康疗科
系统管科等
，开展床位
，医护人员
，其中高职
年青 股骨头坏死
、颈腰椎病及 骨质疏松为主的骨关节
， 糖尿病等
高尚杂病及肛肠痔瘘
因此是独创“中西医
出生六联疗法”
治疗股骨头坏死的特色
，开创了保守
教授该病的新局面
.首家开设的中医贵宾康疗科配套设施一流
，服务一流
，特为贵宾提供
、保健及 体检为一体的全程服务
　　中医大楼面积四千五百平方米
，内设配套病房
、标准病房及普通病房
病人提供了舒适的
.“以我爱心
，让您放心
、舒心”的服务承诺会使我们永远追求更好
& 主任医师&
简介：宁亚功，男，主任医师，附属中医院院长，医学硕士，...
擅长：擅长糖尿病、股骨头坏死等骨关节疾病的中西医结合治疗，对内科杂病及前列腺疾病、鼻窦炎的中西医治疗颇有研究。
& 主任医师&
简介：成诗黔，男，主任医师，原昆明总医院副院长，曾任全...
擅长：擅长妇科、男科疾病及内科疑难杂症的治疗，对癫痫病颇有研究。
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在昆明，什么样才叫“会”生活？一个昆明女生用一年时间总结了：在昆明如何“买”才能买到物美价廉？生病了去哪里看病才能药到病除？等等各种实用手册看完小编表示简直太牛X了！！关于“买”：从老市场到保税店，最全购买手册去特色一条街买更便宜? 买美发用品明通路特色：这条路上有100来家美容美发产品店。各种美发器材、用品、药水等商品，基本都能找到！地址：昆明火车站往螺蛳湾批发市场走的那条路? 买生活百货新螺蛳湾商贸城特色：各种店铺云集，从服装、箱包、鞋帽到五金等，只有你想不到的，没有你买不到的。记得还价至少对半砍哦！地址：官渡区彩云北路? 买珠宝玉器联贸珠宝玉器批发城特色：云南第一珠宝玉器城，一、二楼是面向大众消费者购买的商品，三、四楼为精品珠宝玉器展示和批发区。地址：官渡区北京路102号景星珠宝世界特色：货品相对正规，有少部分做批发的店。地址：景星街中段? 买古玩昆明文物古玩市场地址：东风东路园萃古董文化收藏市场地址：五华区小龙四方街古玩市场地址：盘龙区小龙四方街? 买婚纱国防商场特色：商场二楼都是卖婚纱和租婚纱的地方，还能化新娘妆。一些店会根据你自己的身材来为你调整尺寸。地址：国防路双龙商场特色：种类多，价格浮动大，一定要会讲价！地址：环城南路? 买户外用品新螺蛳湾商贸城特色：新螺蛳湾商贸城是一个大型批发市场，户外用品的种类很多，而且便宜。地址：官渡区彩云北路? 买茶叶云南茶文化博物馆特色：是云南普洱茶非遗保护单位管理的云南官方的茶文化平台。地址：五一路102号康乐茶文化广场特色：离火车站较近，周围还有两个茶城，适合爱逛的人。地址：官南大道188号金石茶叶批发市场特色：进驻商家或一级代理较多，货源较全。地址：北京路延长线与二环北路交叉口想更省钱？当然要去各类批发市场? 服装、鞋子双龙商场特色：超便宜！一定要还价一定要还价。地址：环城南路新螺蛳湾国际商贸城特色：超大超多。地址：官渡区彩云北路南屏街特色：昆明历史上最老的街区，也是昆明古老的商业街。地址：五华区南屏街正义坊特色：包含了原正义西街、景星街等八条街区。地址：五华区正义路? 小商品国贸城特色：主营小商品和百货，建议买之前先看看市场里的分布图！地址：春城路289号文化巷特色：商品种类多，氛围好，还有很多美食。地址：五华区? 农副产品北苑农产品综合批发市场特色：各种农副产品都有，可以多逛逛，货比三家。地址：东三环附近东盟联丰农产品商贸中心特色：一定要会讲价！蔬菜、果品、干货及副食品、水产、冷冻制品、家禽、粮油、零售这里应有尽有！地址：彩云北路1502号西山农副产品综合零售市场特色：中大型水果批发市场，水果便宜新鲜。价格比水果摊便宜很多，所以人流量很大。地址：普吉路210号昆明首家保税店带你逛海外昆明优传保税店特色：进口商品“白菜价”，商品质量由海关监管让市民无需再担心质量问题。商品：产品范围覆盖酒、粮油、母婴、休闲食品、保健品等进口商品。地址：高新区海源北路998号海关大楼一楼在昆明看病，你需要找对医院、医生昆明各类病症专家儿科张 瑛 | 昆明医科大学第一附属医院儿科教授，三级医师，主攻方向小儿血液系统疾病及肿瘤性疾病。曹 红 | 昆明市延安医院主任医师，教授，科主任。从事儿科临床、教学、科研等工作30余年，有丰富的临床经验，擅长于小儿心血管疾病、新生儿危急重症、小儿呼吸系统疾病、儿童心理及精神性疾病的治疗研究。刘以敏 | 云南省中医医院云南省荣誉名中医、主任医师、教授。擅长治疗紫癜、肾病、血症、高热等儿科疑难病症。王素艳 | 成都军区昆明总医院儿科主任医师，教授，主攻小儿脑瘫、新生儿疾病、小儿肾脏病的诊治。肿瘤科文政琦 | 昆明医科大学第一附属医院副主任医师。从事胃肠道肿瘤综合诊治工作二十年，尤其擅长肿瘤外科手术治疗。张培先 | 昆明市延安医院主任医师，肿瘤科主任，硕士生导师，专业特长：长期从事肿瘤、恶性血液病的早期诊断，对肿瘤综合治疗有深入研究；对颈、胸、腹部组织活检经验丰富；擅长疑难深部组织微创诊疗及肝、肺、甲状腺冷热消融技术。李斯文 | 云南省中医医院肿瘤科主任， 从事中医、中西医结合内科临床医疗、教学、科研工作40年，学验俱丰。陈诗钦 | 成都军区昆明总医院副主任医师，擅长肿瘤科相关疾病的诊断和治疗。金良昆 | 昆明市第一人民医院肿瘤科主任，主任医师，在恶性肿瘤的诊治方面摸索出了包括化疗、靶向治疗等相结合的综合治疗方式。耳鼻喉科展鸿谋 | 昆明医科大学第一附属医院主任医师、教授，专业特长耳鼻咽喉科各种疾病的诊治，尤其擅长耳科学。郭兆刚 | 云南省中医医院教授，以中医药内外治结合治疗过敏性鼻炎、慢性鼻炎、鼻窦炎、萎缩性鼻炎;慢性咽炎、扁桃体炎，增殖体肥大、急慢性喉炎以及常见呼吸道疾病。薛希均 | 成都军区昆明总医院副主任医师，全省耳鼻咽喉专科学会副主任委员。皮肤科邹勇莉 | 昆明医科大学第一附属医院主任医师，教授，从事皮肤性病学临床、教学、科研及皮肤组织病理学工作、研究30余年，积累了丰富的临床工作经验，对少见、疑难皮肤病，皮肤肿瘤的诊治有较深入的研究。李晓岚 | 昆明市延安医院教授，主任医师，皮肤科主任，擅长于常见皮肤病及疑难病的诊治；自身免疫性疾病的诊治；皮肤美容与激光治疗。朱智生 | 云南省中医医院主任医师、教授，擅长对黄褐斑、痤疮、湿疹、皮炎的治疗。许 速 | 成都军区昆明总医院副主任医师，皮肤科主任，专长：皮肤病、性病的临床治疗。眼科张 慧 | 昆明医科大学第一附属医院副主任医师。从事眼科临床工作近二十年，并在国内外顶尖名校得到系统的训练，精于眼科各种常见病、多发病的诊治，尤其在眼表和角膜疾病的临床工作中具有较深造诣。赵红霞 | 昆明市延安医院主任医师，教授，毕业于昆明医学院，从医三十余年，一直在临床一线工作，现任眼科行政主任。刘楚玉 | 云南省中医医院主任医师，硕士生导师，擅长对角膜病、黄斑病、青光眼、眼底出血、色素膜炎、口腔溃疡的诊治及术后视力恢复。俞丹洋 | 成都军区昆明总医院主治医师，讲师，擅长眼眶肿瘤，甲状腺相关性眼病。李 兰 |昆明市第一人民医院副院长、主任医师，从事眼科临床20余年，任云南省医学会眼科分会、医学美学与美容转科分会委员。妇产科马永红 |昆明医科大学第一附属医院昆明医科大学第一附属医院教授，影像医学与核医学硕士，硕士生导师，从事妇产超声的诊断及介入诊断和介入治疗24年。秦 竹 | 云南省中医医院教授、硕导，擅治月经不调、痛经、闭经、不孕症、多囊卵巢综合症、功能性子宫出血、更年期综合征、心脏经官能症、胃肠神经官能症、神经衰弱、性功能障碍等。黄 雅 | 昆明市第一人民医院副主任医师，专长为产科。泌尿外科肖民辉 | 云南省第一人民医院硕士，主任医师、教授，硕士导师，中华医师协会中西结合分会常委，云南省医疗事故鉴定委员会委员，昆明市医疗事故鉴定委员会委员。姚佳沛 | 昆明医科大学第一附属医院副主任医师，云南省医师协会男科医师分会委员，云南省医学会男科学分会委员，从事男性科及生殖医学临床工作19年。钟一鸣 | 昆明市延安医院主任医师、教授，擅长泌尿外科疑难疾病的诊治，开展了大量的泌尿系肿瘤根治手术，在腹腔镜技术方面具有较深的造诣。曹 伟 | 成都军区昆明总医院泌尿外科副主任医师，医学硕士，成都军区泌尿外科专委会委员，从事临床工作20余年。中医科朱丽芳 | 昆明医科大学第一附属医院副主任医师，擅长中西医结合诊治风湿病、脾胃病。唐军莉 | 昆明市延安医院中医科主任、主任医师、教授；1983年毕业于云南中医学院中医系；大学本科学历；专业领域为中医临床，专业特长为中医内科。宁亚功 | 成都军区昆明总医院主任医师，擅长糖尿病、股骨头坏死等骨关节疾病的中西医治疗。张 春 | 昆明市第一人民医院主任医师，为中医火神派重要传承人吴佩衡老先生的学术传承人。昆明各类电话号码都在这里生活服务类电话查号：114天气预报：12121报时服务：12117电话故障保修：112中国联通号码百事通：116114中国电信号码百事通：118114中国移动号码百事通：12580中国联通客服服务中心：10010移动通信客户服务中心：10086通信公司客户服务中心：10060电信公司客服中心：10000EMS邮政客户服务：11185电网客户服务电话：95598煤气公司服务电话：96107昆明机场服务电话：96566有线电视服务电话：96599自来水客户服务热线：96106快递服务申通客服电话：95543圆通客服电话：95554顺丰客服电话：95338韵达客服电话：95546EMS客服电话 : 11183邮政包裹：11185中通客服电话：-270-270天天快递客服电话：百世汇通客服电话：400-956-5656宅急送电话：400-全峰快递电话：400-100-0001服务投诉类昆明市消费者协会：9昆明市总工会：昆明市环保局：3市卫生监督所投诉：9物价投诉：12358电力投诉：12398食品药品投诉：12331环境诉求：12369旅游投诉：12301安全生产投诉：12350纪检监察投诉：12388文化市场统一举报电话 ：12318消费者投诉举报专线电话 ：12315质量监督电话：12365机构编制违规举报热线：12310民工维权热线电话：12333公共卫生环境投诉：12320总工会职工热线：12351妇女维权热线 ：12338落户、居住证咨询关于昆明落户、居住证、身份证、驾驶证、通行证，出入境、寻人寻亲、物品招领、案件咨询等问题。昆明市小板桥派出所：昆明市丰宁派出所：金牛派出所：马鞍山派出所：昆明市文林派出所：昆明市福德派出所：呈贡县公安局化城派出所：严家地派出所：红联派出所：莲华派出所：龙翔派出所：昆明市金碧路派出所：东站派出所：昆明市碧古镇派出所：大观派出所：昆明市莲花派出所：公安局官渡分局双凤派出所：呈贡县公安局吴家营派出所：护国派出所：龙翔派出所治安岗亭：梁源派出所春苑社区警务站：昆明市小坝派出所：黑林铺派出所：日新派出所日新社区警务站：突发、急救匪警：110急救中心：120交通事故：122火警：119公安短信报警：12110水上求救专用：12395森林火警：12119红十字会急救台：999银行、信用卡问题中国银行：95566工商银行：95588农业银行：95599建设银行：95533交通银行：95559邮政储蓄：95580光大银行：95595平安银行：95511广发银行：中信银行：95558浦发银：95528民生银行：95568华夏银行：95577深圳发展银行服务热线：95501广东发展银行服务热线：95508平安保险公司服务热线：95511人民保险公司服务热线：95518人寿保险公司服务热线：95519太平洋保险公司服务热线：95500新华人寿保险公司服务热线：95567教育局昆明市教育局:昆明市盘龙区教育局:1昆明市官渡区教育局:2昆明市五华区教育局:昆明市禄劝县教育局:出行订票昆明长水机场客服电话：昆明地铁服务：昆明火车站：订票电话：5客服电话：各大医院地址及咨询电话昆明医科大学第一附属医院医院地址： 云南省昆明市五华区西昌路295号医院电话： 8云南省第一人民医院医院地址：云南省昆明市西山区金碧路157号医院电话：7昆明医科大学第二附属医院医院地址：云南省昆明市西山区麻园1号医院电话：1云南省中医医院医院地址：云南省昆明市五华区光华街120号医院电话：6云南省肿瘤医院医院地址：云南省昆明市西山区昆州路519号医院电话：6成都军区昆明总医院(43医院)医院地址：昆明市西山区大观路212号医院电话：9预约挂号：1昆明市延安医院医院地址：云南省昆明市盘龙区人民东路245号医院电话：1昆明市第一人民医院医院地址：云南省昆明市盘龙区青年路504号医院电话：0预约挂号：1市儿童医院医院地址：昆明市书林街28号医院电话：9昆明市口腔医院医院地址：云南省昆明市人民西路193号医院电话：这么齐全的昆明生活手册你还不赶紧收藏？据说每个人的一生，至少要去昆明一次！我爱昆明，您的昆明之旅专属游伴！来源：昆明网 公众号：我爱昆明 www-5akm-com
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