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【求助】分子量89kD的蛋白用哪种凝胶层析分离比较好？
我的GST融合蛋白分子量在89kD左右，大概纯化了一下发现有6条分子量在89kD到36kD之间的杂带，改变了很多种洗杂的条件都洗不下来，所以想在亲和纯化之前做一下凝胶层析把那几条杂带去掉。请问我应该用哪种凝胶层析的介质呢？用Sephadex 100可以吗？或者有没有更好的介质呢？谢谢！sephadex 100的分离范围是4kd-120kd，应该能满足楼主的需求，但是这种填料比较古老了，是葡聚糖交联凝胶，刚性不好、流速不快、分辨率也不高，填料受压力和盐影响比较大。建议楼主选用葡聚糖与丙烯基交联的sephacryl系列，如果条件允许最好能选用葡聚糖与琼脂糖混合交联的superdex系列，由它们制成的柱子流速快、刚性好，分辨率也高，应该能更好的满足楼主实验需要。请问Sephadex G100 的蛋白上样是多少呢？我没有查到这方面的资料，是柱子体积的百分之几呢？另外再问一下，25g的Sephadex G100粉末能溶涨出多少毫升来？谢谢！Sephadex 的主要型号是G-10――G-200，后面的数字是凝胶的吸水率（单位是ml / g干胶）乘以10。如Sephadex G-50，表示吸水率是5ml/g干胶。上样体积越小分辨越好，对于高分辨率的分离，推荐0.5-4%Vt的上样（依赖于不同的介质）。对于大多数的应用为了获得最大的分辨率样品体积不要超过2%。如下表：凝胶类型& 推荐上样体积（%Vt）Sephadex& 2-5%Sepharose& 2-5%Sephacryl HR& 1-2%Superdex PG& 1-2%Superose PG& 1-2%Superdex& 0.5%Superose& 0.5%对于利用Sephadex G-10，G25，G-50进行蛋白质脱盐的特殊情形，样品量达到装柱体积的30%，用较高的流速、短柱仍可以保证蛋白与盐分开。非常感谢两位的帮助～初步打算用Sephacryl S-200 HR，有人用过这个吗？说明书上说预装柱150ml的最大上样可以到13ml，不知道这种上样量的情况下分辨率怎样呢？60kD和80kD的蛋白能分开吗？还想问一下，有没有一种染色的标志物在80kD左右的，这样可以帮助我判断从什么时候起开始回收Sephacryl S-200 HR范围太宽,而且60kD和80kD的蛋白还是很近,最好还是先用离子交换等别的方法试试,然后再过凝胶柱也许更好.
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